Presented by Kelompok 4
Our Team
a. Pembuatan
b. Pembuatan c. Pengujian LNC
2. Pembuatan LNC skala besar LNC dengan
LNC steril pada untuk kemurnian
proses batch dan
skala 1L mikroba
kontinyu Metode
inversi fase
3. Analisis Statistik
Produk dipasaran
Kinetika pelepasan CPT dari nanokapsul OEG-DiCPT (a) dan DOX·Kinetika pelepasan HCl pada PBS pada pH 7,4 dan 37°C dan
DOX·Nanokapsul yang mengandung HCl (konsentrasi esterase, 30 U) (b).
Karakteristik sediaan
1. karakteristik Fisika - Kimia
Ukuran partikel dan pengukuran potensial zeta.Ukuran partikel, distribusi ukuran dan potensi zeta dari LNC
yang disiapkan diukur dengan Malvern Zetasizer ZS (Malvern Instruments, UK). Pengukuran ukuran dilakukan
◦
dengan hamburan cahaya dinamis (DLS) dengan sudut deteksi 173 . Zetapotensial LNC dihitung dengan
menentukan mobilitas elektroforesis. Pengukuran ukuran dan potensi zeta dilakukan pada 25 C◦
Pelepasan DiO dari LNC.Eksperimen pelepasan pada LNC yang memuat DiO dilakukan dalam buffer fosfat
menggunakan pengaturan dialisis. 1 mL DiO-LNC ditempatkan dalam perangkat Float-A-lyzer dengan
membran MWCO 50kD dan disimpan dalam 18 mL buffer fosfat. Sebelum percobaan, perangkat dialisis telah
◦
diolah terlebih dahulu sesuai instruksi standar pemasok. Eksperimen dilakukan pada 37 C dan pengadukan
dipertahankan dalam buffer pelepasan. Pada interval waktu yang telah ditentukan, sampel dikumpulkan untuk
dianalisis dan seluruh buffer diganti dengan buffer fosfat segar. DiO yang dilepaskan ke dalam buffer fosfat
diukur dengan mengukur intensitas fluoresensi menggunakan Varioskan™ Pembaca pelat mikro multimode
LUX (ThermoFisher Scientific).
Karakteristik sediaan
2. Karakterisasi ex vivo dan in vitro
Penetrasi obat bebas dan LNC yang mengandung obat dalam sel difusi tipe Franz.Mata babi segar diperoleh dari rumah jagal
setempat dan dibekukan pada suhu -80 ◦ C dalam waktu 2 jam setelah pengumpulan sampai digunakan[21]. Sebelum
pengambilan jaringan, mata yang beku dibawa ke pencairan sempurna dengan menyimpannya di PBS. Setelah pencairan,
sayatan kecil dibuat dengan pisau bedah di bagian limbus dan kornea dibedah dari bola mata. Kornea dengan ketebalan
penuh dan kompleks konjungtivasklera-koroid-retina diisolasi, dan studi permeabilitas dilakukan menggunakan sel difusi Franz
(PermeGear Inc., Pennsylvania, USA) menggunakan proses serupa yang dijelaskan oleh Pescinadkk. [22,23] dengan beberapa
modifikasi. Jaringan yang dibedah disimpan di antara kompartemen donor dan reseptor dengan sisi endotel menghadap
kompartemen penerima. Kompartemen donor diisi dengan 1 mL obat bebas atau LNC yang mengandung obat (LNC/CN03)
pada konsentrasi 2 mg/mL, dan buffer fosfat (5 mL) digunakan dalam kompartemen reseptor. Eksperimen dilakukan hingga 6
◦
jam pada 37 ±0,2 C dengan pengadukan konstan dalam buffer reseptor untuk menghindari efek lapisan batas. Pada interval
waktu yang telah ditentukan, 0,2 mL sampel dikumpulkan dari kompartemen reseptor dan diganti dengan buffer segar dengan
volume yang sama. Konsentrasi obat diukur menggunakan microplate reader yang dilengkapi dengan detektor
spektrofotometri UV-Vis (SpectraMax, Molecular Devices, San Jose, CA) dan koefisien permeabilitas dihitung menggunakan
algoritma yang dijelaskan oleh Niedorfdkk.[24]. Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga menggunakan bola mata
berbeda dari hewan berbeda.
Karakteristik sediaan
2. Karakterisasi ex vivo dan in vitro
Penetrasi obat bebas dan LNC yang mengandung obat dalam sel difusi tipe Franz.Mata babi segar diperoleh dari
◦
rumah jagal setempat dan dibekukan pada suhu -80 C dalam waktu 2 jam setelah pengumpulan sampai
digunakan
Biodistribusi intraokular pada mata babi ex vivo.Mata babi diperoleh dari rumah potong hewan setempat pada
pagi hari pada hari Liposom disiapkan menggunakan protokol yang sudah ada[20]. Itu penyembelihan. Mata
dicuci sebentar dengan etanol 70% dan PBS steril.
Profil toksisitas retina.Tikus dikorbankan pada hari pascakelahiran (P) 9 karena dislokasi serviks. Mata
dikumpulkan, dan kultur eksplan retina organotipik disiapkan menggunakan protokol yang telah ditetapkan
Karakteristik sediaan
2. Karakterisasi ex vivo dan in vitro
Kemanjuran pengobatan CN03 yang dienkapsulasi.Degenerasi retina rd1model tikus digunakan untuk
menghasilkan kultur eksplan retina organotipik di P5
Mikroskop fluoresen.Bagian dari mata babi atau kultur eksplan retina organotipik adalah gambar menggunakan
mikroskop fluoresensi (Axio Imager Z2 dengan fungsi ApoTome, Zeiss, Oberkochen, Jerman)