ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI ASAM LAKTAT

SERTA PENGUJIAN AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM

α-GLUKOSIDASE DARI DENGKE NANIURA SEBAGAI
MAKANAN HASIL FERMENTASI IKAN MAS (Cyprinus
carpio) ASAL KAWASAN DANAU TOBA

OLEH:
ANDI JOSEP NICOLAS HUTAHAEAN
NIM 167014022
 LATAR BELAKANG

DATA DIABETES
PADA WORLD HEALTH DAY TAHUN 2016 DI GENEVA, WHO
MEMPUBLIKASIKAN LAPORAN JUMLAH PENDERITA DIABETES HINGGA
PADA SAAT TERSEBUT SUDAH MENCAPAI 422 JUTA ORANG DEWASA
DAN PADA UMUMNYA BERADA DI NEGARA BERKEMBANG SEPERTI
INDONESIA
INDONESIA DENGAN JUMLAH PENDUDUK
258 JUTA ORANG MEMILIKI SEKITAR 7%
PENDERITA DIABETES, SERTA
MENYUMBANGKAN 6% DARI TOTAL
KEMATIAN YANG DISEBABKAN OLEH
FACTOR PENYAKIT LAIN.
HARIAN MEDICAL NEWS TODAY YANG
DIPERBAHARUI PADA HALAMAN WEBNYA
TANGGAL 5 JANUARI 2017,
MENYATAKAN BAHWA SEKITAR 90% DARI
KASUS PENDERITA DIABETES ADALAH
DIABETES TIPE 2.
PENELITIAN PROBIOTIK PADA SAAT INI BERKEMBANG DENGAN PESAT, BAHKAN SUDAH ADA
BEBERAPA YANG MENCAPAI TAHAPAN PENGUJIAN KLINIS (MARKOWIAK DAN ŚLIŻEWSKA, 2017).
DEFINISI PROBIOTIK MENURUT FDA DAN WHO, SERTA HINGGA PADA SAAT INI MASIH
DIPERTAHANKAN OLEH INTERNATIONAL SCIENTIFIC ASSOCIATION FOR PROBIOTICS AND
PREBIOTICS ADALAH TURUNAN (STRAIN) HIDUP MIKROORGANISME YANG DIPILIH DENGAN
KETAT YANG MANA, KETIKA DIBERIKAN DALAM JUMLAH YANG MEMADAI, MEMBERIKAN
MANFAAT KESEHATAN BAGI INANGNYA.
NGUYEN, ET AL (2017), SUDAH BERHASIL MEMANFAATKAN PROBIOTIC DENGAN MENGUBAH
SECARA ENZIMATIS BAHAN BUANGAN DARI HASIL LAUT BERUPA TULANG CUMI DAN KULIT
KEPITING ATAU UDANG MENJADI SENYAWA YANG MENGINHIBISI ENZIM α-GLUKOSIDASE YANG
BERASAL DARI TIKUS DAN MENGISOLASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER TERSEBUT. HASIL
ISOLASI METABOLIT YANG DIDAPATKAN BAHKAN MELAMPAUI KEMAMPUAN AKARBOSE SEBAGAI
PEMBANDING.
MAKANAN TRADISIONAL SERING DIJADIKAN ACUAN
DALAM PENCARIAN PANGAN YANG LEBIH BAIK
DIBANDINGKAN MAKANAN MODERN YANG
DIANGGAP TELAH BANYAK DICEMARI OLEH SENYAWA-
SENYAWA KIMIA YANG BERBAHAYA DEMI MENJAGA
KUALITAS PRODUK DALAM JANGKA WAKTU YANG
LAMA. SALAH SATU MAKANAN TRADISIONAL KHAS
BATAK IALAH DENGKE NANIURA, DIMANA IKAN YANG
LEBIH UMUM DIGUNAKAN SEBAGAI BAHAN UTAMA
PEMBUATAN NANIURA ADALAH IKAN MAS (CYPRINUS
CARPIO).

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
 teknologi pengolahan ikan ini deisebut ensilase
diasamkan tanpa melalui Silase ikan merupakan sebuah bentuk protein
proses pemanasan hidrolitik dengan komponen lain dari ikan dalam
Pengasaman ikan dilakukan keadaan asam, oleh sebab itu bakteri pengurai
dengan menggunakan asam tidak dapat bertahan karena pH 4.
organik dan bumbu dengan Proses ensilase ikan adalah murni biologis,
variasi waktu 3-9 jam sebuah proses tanpa penggunaan bahan kimia.
Metode ini disebut fermentasi.

keadaan asam memungkinkan pertumbuhan hanya

bakteri tahan asam dan mencegah perkembangan
mikroba pembusuk. Dengan memungkinkannya
bakteri tahan asam seperti bakteri asam laktat
untuk bertahan hidup, maka koloni bakteri tersebut
dapat melakukan fermentasi terhadap bahan yang
terdapat pada ikan dan mengubahnya menjadi
berupa metabolit-metabolit yang berguna bagi
orang yang mengkonsumsinya

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
DENGAN KETERBATASAN INFORMASI MENGENAI KEBERADAAN
BAKTERI ASAM LAKTAT DALAM KAITAN PROBIOTIK PADA
MAKANAN TRADISIONAL SUKU BATAK DENGKE NANIURA, MAKA
DALAM PENELITIAN INI DILAKUKAN ISOLASI DAN KARAKTERISASI
BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL) PADA IKAN MAS (CYPRINUS
CARPIO) ASAL KAWASAN DANAU TOBA SERTA PENGUJIANNYA
TERHADAP ENZIM Α-GLUCOSIDASE DENGAN TEKNIK
PENGOLAHAN DENGKE NANIURA.

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
 PERUMUSAN MASALAH

Bagaimana pengaruh pengolahan pada dengke naniura terhadap komposisi bakteri?

Adakah bakteri asam laktat species baru sebagai bakteri penanda pada dengke
naniura dengan ikan mas berasal dari danau Toba?

Dapatkah bakteri asam laktat yang diisolasi memberikan efek penghambatan

terhadap enzim α-glukosidase?

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
 HIPOTESIS

Bakteri asam laktat Isolat bakteri asam

laktat menunjukkan Bakteri asam laktat
mampu bertahan adanya bakteri dapat menghambat
pada olahan dengke penanda pada olahan
naniura. enzim-α-glukosidase.
dengke naniura.

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
 Untuk mengisolasi
bakteri asam laktat
pada dengke
naniura

TUJUAN
PENELITIAN Untuk menguji
Untuk
aktivitas
penghambatan mengidentifikasi
isolat bakteri
enzim α- asam laktat
glukosidase

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
 MANFAAT PENELITIAN

MANFAAT PENELITIAN INI ADALAH UNTUK MEMPEROLEH INFORMASI

TENTANG KARAKTERISTIK BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL) DENGAN
MENGGUNAKAN TEKNIK PENGOLAHAN PANGAN TRADISIONAL
ADAT BATAK DENGKE NANIURA, DAN MANFAAT BAL TERSEBUT
TERHADAP PENYEMBUHAN PENYAKIT DIABETES.

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
 1.6 KERANGKA PIKIR PENELITIAN
VARIABEL BEBAS VARIABEL TERIKAT PARAMETER

Karakterisasi BAL Karakter BAL

Ikan Olahan Dengke Identifikasi BAL DNA Spesifik dari

Isolat BAL
Naniura dengan PCR Spesies BAL

Uji Penghambatan
Nilai IC 50
α-glukosidase

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
 METODE PENELITIAN
Alat-alat yang digunakan yaitu :

ALAT-ALAT GELAS DNA EXTRACTION KIT LAMINARY AIR FLOW

PISAU BEDAH GEL MONITORING NERACA KASAR
MIKROPIPET APPARATUS NERACA ANALITIS
JARUM OSE DNA THERMAL CYCLER VORTEX
AUTOKLAF MICROPLATE READER

SENTRIFUGATOR INVERTED MICROSCOPE

Bahan-bahan yang digunakan yaitu :
• IKAN MAS HIDUP DENGAN BERAT MASING-MASING LEBIH KURANG 1 KG DIPEROLEH DARI
KAWASAN DANAU TOBA DI DAERAH HARANGGAOL. IKAN MAS HIDUP DIBAWA KE LABORATORIUM
DENGAN MENGGUNAKAN WADAH TERTUTUP YANG DIISI DENGAN AIR DAN DIBERI OKSIGEN.
• BAHAN UNTUK PERENDAMAN ADALAH SARI ASAM JUNGGA (Citrus jambhiri Lush) SEGAR. BUMBU
NANIURA YAITU ANDALIMAN, CABAI RAWIT, BAWANG MERAH, BAWANG PUTIH, JAHE, KUNYIT,
KEMIRI, KENCUR, RIAS DAN GARAM DIPEROLEH DARI PASAR TRADISIONAL.
• BAHAN KIMIA YANG DIGUNAKAN ADALAH KATALIS (SELENIUM MIX), H2SO4 (p), NAOH, ASAM
BORAT, INDIKATOR METILEN MERAH DAN BIRU, HCL, AKUADES, N-HEKSAN, NA2SO4 ANHIDRAT, KOH,
ETANOL, BHT, KARBON AKTIF, DAPAR SALIN FOSFAT, ORTHOPHTALDEHIDA (OPA),
MERCAPTOETANOL, LARUTAN BRIJ DENGAN KUALITAS PRO ANALIS, KLOROFORM, METANOL, NACL
MEDIA PLATE COUNT AGAR (OXOID), MEDIA NUTRIENT AGAR (OXOID), MEDIA DE MAN ROGOSA
DAN SHARPE (MRS) BROTH, MRS AGAR (MERCK), MEDIA SULFIT INDOL MOTILITY (SIM), PDF, CACO3,
GENTIAN VIOLET, LARUTAN LUGOL, LARUTN SFRANIN, MINYAK IMERSI, H2O2, GARAM EMPEDU DAN
SUSU SKIM, UNIVERSAL PRIMER.

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
PEMBUATAN
DENGKE
NANIURA
ISOLASI BAL
DARI IKAN MAS
KAWASAN
DANAU TOBA
ISOLASI BAL DARI
IKAN MAS KAWASAN
DANAU TOBA
KARAKTERISASI BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL)
Karakteristik koloni bakteri asam laktat (BAL) pada cawan petri dilakukan dengan cara:

1. Pengamatan secara morfologi meliputi: bentuk koloni, elevasi, bentuk tepi, pertumbuhan pada

media miring dan setelah pengecatan gram secara mikroskopis meliputi: warna, bentuk sel dan

susunan sel dengan menggunakan mikroskop pada perbesaran 1000x.

2. Pengamatan secara biokimia dilakukan dengan uji katalase, uji motilitas, uji merah metil, uji
Voges Proskauser (VP), uji triple sugar iron agar (TSIA), serta uji ketahanan terhadap suhu dan uji

tipe fermentasi.
PEMERIKSAAN JENIS BAKTERI DENGAN
PENGECATAN GRAM
UJI KATALASE
UJI MOTILITAS
UJI MERAH METIL
UJI VOGES
PROSKAUSER
UJI TRIPLE SUGAR IRON AGAR
UJI KETAHANAN TERHADAP SUHU
UJI TIPE FERMENTASI
 PENGUJIAN SIFAT BAKTERI
PROBIOTIK

Pengujian sifat-sifat probiotik dari solat BAL, maka dilakukan tiga pengujian

utama yaitu

1. uji ketahanan hidup dalam pH rendah

2. uji toleransi terhadap asam empedu

3. uji aktivitas antimikroba

UJI DAYA TAHAN HIDUP DALAM PH RENDAH
UJI DAYA TAHAN HIDUP DALAM GARAM EMPEDU
UJI AKTIVITAS
ANTIMIKROBA
IDENTIFIKASI BAL DENGAN PCR
 PENGUJIAN AKTIVITAS ANTIDIABETIK
• EKSTRAKSI DAN PERSIAPAN SAMPEL UJI
PENENTUAN AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM Α-GLUKOSIDASE
Ekstrak Koloni BAL

Diambil 50 µL dan dicampurkan dengan 50 µL larutan enzim α-glukosidase dalam

larutan dapar kalium fosfat 100 µL

Disimpan pada suhu 37oC selama 20 menit

Ditambahkan dengan 50 µL para-Nitrofenil-piranosida (pNPG)

Dipertahankan pada suhu 37oC selama 40 menit

Ditambahkan 100 µL larutan Na2CO3 1 M

Hasil (% inhibisi)