TOKSIKOLOGI

EKSPERIMENTAL
“Acute and Sub Cronic Toxicity of Tridax
Procumbens in Experimental Animals”
Farmakologi (P) Kelompok 7
ANGGOTA KELOMPOK 7
1. DEPRI ARJUNA WICAKSONO
(1948401002)
2. SASI AYU NINGSIH (1948401009)
3. DINI FITRI KAMILA (1948401019)
4. SITI SUMARNI (1948401020)
5. AMMAR SURI DHARMAWAN
(1948401023)
Metode Uji Toksisitas Akut
dan Sub Kronik
Pra
Persiapan Persiapan
01 Hewan 02 Perlakua 03 bahan uji
n Hewan
(tanaman beserta dosis)

Cara perlakuan hewan

Parameter/has
04 uji untuk uji tosisitas 05 il uji toksisitas
akut dan sub kronik
(termasuk pembagian kelompok
hewan uji, lama pemejanan,
frekuensi pembagian zat)
 TRIDAX
PROCUMBEN
● S ?
Tridax procumbens atau Gletang dikenal dengan beberapa aktivitas
terapeutik potensial seperti antivirus, antibiotic

● Khasiat; aktivitas penyembuhan luka, aktivitas insektisida dan anti-

inflamasi (Suseela et al., 2002). Tanaman ini telah banyak digunakan
dalam sistem pengobatan Ayurvadic untuk berbagai penyakit dan
terbukti dimiliki sifat anti inflamasi, hepato-pelindung, penyembuhan
luka dan antimikroba yang signifikan ( Diwan et al1989; Pathak et
al., 1991; Saraf dkk., 1991; Udupa dkk., 1991; Perumal et
al., 1999; dan Taddei dan Rosas 2000).

 
1. Persiapan Hewan
Hewan uji coba yang digunakan dalam penelitian ini
adalah mencit Swiss albino. Kedua jenis kelamin
masing-masing dengan berat 20-30g dan tikus albino
dengan berat 50-80g.
2. Pra Perlakuan Hewan

Mencit Swiss Albino didistribusikan secara acak ke

dalam kandang dengan dilengkapi air dan makanan
kecuali untuk periode puasa singkat sebelum
pemberian oral dosis ekstrak.

 Dipelihara pada siklus terang / gelap 12 jam, pada

suhu dan kelembaban konstan.
3. Persiapan Bahan
(tanaman beserta dosis)
Uji
A. Bahan Tanaman

● Tridax procumbens dikumpulkan pada bulan Mei dan Juni di dalam

dan sekitar Kaduna Vom, Plateau State dan Federal University of
Technology Minna, kampus Bosso, Niger State, Nigeria. Disimpan di
herbarium Lembaga Farmasi Nasional Penelitian dan Pengembangan,
Idu, Abuja, Nigeria. 

● Sekitar 1 kg setiap Tridax procumbens segar diperoleh, dicuci dengan

air leding mengalir dan dikeringkan pada suhu kamar sampai berat
konstan. Tanaman kering sampel digiling menjadi bubuk
menggunakan lesung dan alu dan sampel bubuk disimpan dalam
keadaan bersih kantong plastik sampai dibutuhkan untuk digunakan.
B. Persiapan Ekstrak Mentah

● Ekstrak disiapkan dengan menggunakan metode yang dijelaskan

oleh Ogbadoyi et al ., (2007). Dalam metode ini, lima puluh gram
(50g) sampel bubuk kering Tridax procumbens pertama
dihilangkan lemaknya dalam heksana dan kemudian diekstraksi
dengan refluks dengan 400ml etil asetat selama 2 jam. 
● Ekstrak disaring panas menggunakan kain muslin dan
terkonsentrasi menggunakan rotatory evaporator. Kemudian
dikeringkan dalam penangas uap dan dipindahkan ke steril botol
sampel untuk disimpan pada suhu lemari es sampai saat dibutuhkan
untuk digunakan.
 4. Cara perlakuan hewan uji untuk uji toksisitas
akut dan sub kronik

A. Studi Toksisitas Akut dari Ekstrak Mentah Etil Asetat

● Pada tahap pertama, sembilan ekor tikus dibagi secara acak menjadi tiga kelompok tiga ekor mencit per
kelompok dan masing-masing diberi ekstrak 10, 100 dan 1000 mg / kg berat badan masing-masing
secara intraperitoneal. 
● Pada tahap kedua penelitian, prosedur diulangi menggunakan satu set. Sembilan tikus dibagi secara acak
menjadi tiga kelompok yang masing-masing terdiri dari tiga tikus, diberi ekstrak 1600, 2900 dan 5000
mg / kg berat badan masing-masing.
● Semua ekstrak dilarutkan dalam Dimetil sulfoksida (DMSO) dan fisiologiskombinasi garam sebelum
pemberian. Tiga ekor tikus segar lainnya diberi DMSO secara fisiologissaline sebagai kontrol dan
semua mencit disimpan dalam kondisi yang sama dan diamati untuk kritis pertama 4 jam, selanjutnya
selama 72 jam dan selanjutnya selama 14 hari.
● Tanda-tanda keracunan seperti aktivitas fisik dan umum penampilan, menjilati kaki, mengeluarkan air
liur, meregang, Tanda Gastrointestinal: Menurun (Feses), menggosok hidung lantai dan dinding
kandang, sedasi, koma, kejang dan kematian.
B. Studi Toksisitas Jangka Pendek Tridax procumbens
● Enam kelompok, (A - F), yang masing-masing terdiri dari lima tikus, dibentuk kelompok A – E.
Diberikan secara intraperitoneal dengan dosis 50, 100, 200, 400 dan 800 mg / kg per hari selama
14 kali berturut-turut. Tikus kelompok F sebagai kontrol diberikan DMSO dalam larutan garam
fisiologis selama 14 kali berturut-turut. Semua hewan dimonitor lebih lanjut selama dua minggu
setelah pemberian terakhir
● Pada akhir masa percobaan, hewan dikorbankan dengan cara dipenggal dan diambil sampel
darahnya dikumpulkan tanpa antikoagulan. Serum yang diperoleh digunakan untuk analisis
biokimia amino Aspartate transaminase (AST), Alanine amino transaminase (ALT), Alkaline
phosphatase (ALP), Glukosa, protein total, urea, natrium dan kalium, menggunakan kit standar.
● Sampel darah lain dikumpulkan ke EDTA wadah untuk analisis Packed Cell Volume (PCV)
dengan metode mikrohaematokrit, hemoglobin konsentrasi dengan metode
cyanomethaemoglobin, hitung sel darah merah (RBC), jumlah leukosit total dan diferensial
(WBC) dihitung dengan metode haemositometer (Schalm et al., 1975).
5. Parameter/Hasil Uji Toksisitas
1. Studi Toksisitas Akut

● Pada fase pertama studi toksisitas akut,

tidak ada tanda-tanda toksisitas yang luar
biasa yang diamati pada dosis 10 mg/kg,
sedangkan pada dosis 100 dan 1000 mg,
ada air liur, gesekan di hidung dan mulut
di lantai kandang dan kegelisahan.

● Pada studi fase kedua, tanda-tanda

toksisitas yang diamati sama dan lebih
parah daripada yang diamati pada fase Tabel 1: Uji Toksisitas akut menggunakan tikus
satu. Namun, pada dosis 2900 dan 5000
mg / kg, semua hewan mati 2 jam setelah
pemberian ekstrak dan semua bertahan
pada dosis 1600 mg / kg.
2. Perubahan Rasio Total dan
Persen Organ / Berat Badan
pada toksisitas akut T.
procumbens.
 
● Selama periode pengamatan terjadi
peningkatan berat badan total yang
signifikan dengan peningkatan tertinggi
terdapat pada kelompok yang mendapat
dosis terendah 50 mg / kg BB dan
kenaikan terendah pada 1600 mg / kg
bila dibandingkan dengan data baseline
(P <0,05) badan. Gambar 1: Perubahan Berat Badan Tikus yang
● Terdapat peningkatan yang signifikan Diobati Secara Akut dengan T. Procumbens
pada berat badan kontrol dibandingkan
dengan kelompok yang diberi ekstrak
pada 100, 1000 dan 1600 mg / kg berat
● Liver tercatat peningkatan umum dalam
rasio persen organ / berat badan dengan
peningkatan tertinggi sebesar 42%
ditemukan pada 1000 mg / kg kelompok
perlakuan. Baik hati dan paru-paru
mencatat rasio % organ / berat badan
tertinggi masing-masing 12,3% dan Gambar 2: Perubahan Berat Organ (g) Tikus yang Diobati
Secara Akut dengan T. Procumbens
18,1% bila dibandingkan dengan kontrol
pada 100 mg / kg berat badan (Gambar
3). Jantung menurun pada semua tingkat
dosis sedangkan ginjal membesar pada
10 dan 1.600 mg / kg berat badan.

Gambar 3: Perubahan Persen Organ / Rasio Berat Badan Tikus yang

Diobati Secara Akut dengan T. Procumbens
3. Studi Toksisitas Jangka Pendek
A. Perubahan Rasio Total dan Persen Organ
/ Berat Badan

Hasilnya terdapat peningkatan yang signifikan

pada total berat badan dibandingkan dengan
data sebelum perawatan (P <0,05). Di antara
kelompok perlakuan, peningkatan berat badan
tertinggi diamati pada kelompok perlakuan Gambar 4: Perubahan Bobot Tubuh Tikus yang Diobati
dengan Ekstrak Etil asetat T. procumbens Jangka Pendek
800mg / kg/ dimana berat badan meningkat Studi Toksisitas
47,5% dari nilai sebelum pengobatan (Gambar
4).
● Demikian pula terjadi peningkatan
persen rasio organ / bobot tubuh hati
dan limpa dengan pola ketergantungan
dosis, dengan peningkatan hati
tertinggi terdapat pada kelompok yang
mendapat dosis terendah (P <0,05).
Namun, ginjal, jantung dan paru-paru
Gambar 5: Perubahan Berat Organ Tikus yang Diobati
tidak terpengaruh secara signifikan jika dengan T. procumbens pada Studi Toksisitas Jangka Pendek
dibandingkan dengan kelompok
kontrol yang tidak diobati (P> 0,05).
Pada 50 mg / kg berat badan, rasio%
organ / berat badan hati tercatat 17%
sedangkan limpa meningkat 61%
dibandingkan dengan kontrol yang
tidak diobati. Pengamatan ini sama
dengan perubahan berat organ (Gambar
5 dan 6).
Gambar 6: Persen Rasio Berat Organ / Tubuh Tikus yang Diobati
dengan T. procumbens pada Toksisitas Jangka Pendek Studi
B. Perubahan Hematologi pada Tikus

Jumlah Packed Cell Volume (PCV), limfosit

dan RBC meningkat terutama dengan
kelompok yang diobati pada 400 dan 800
mg / kg berat badan (P> 0,05).

Gambar 7: Perubahan Hematologi Tikus yang Diobati dengan

T. procumbens
C. Perubahan Biokimia pada Tikus

Dengan pengecualian dosis terendah

yang diberikan, semua dosis lain
menghasilkan penurunan kadar
glukosa yang signifikan (P <0,05).
Demikian pula ada peningkatan ALT
yang signifikan dan penurunan AST
dengan 800mg / kg menghasilkan efek
tertinggi (P <0,05). Namun kadar urea
dan elektrolit sedikit meningkat (P>
0,05) pada semua kadar dosis (Tabel
2).
D. Studi Histopatologi Hati dan Ginjal Tikus

● Ada pengendapan umum haemosiderin di

hati hewan diobati yang bergantung dosis.
Deposisi haemosiderin tertinggi pada
800mg/kg berat badan dan terendah pada
dosis 50 mg / kg (Lembaran II). Bagian
kontrol menunjukkan jaringan hati normal
yang luar biasa dengan bentuk hati yang
terjaga dengan baik (Lembaran I).
● Hati tikus yang diberi perlakuan 50mg / kg
menunjukkan infilterasi sporatik dari sel
parenkim hati dan tidak ada haemosiderin.
Selain itu, perubahan jaringan hati tidak
terlihat (Lembaran II).
● Pada 100mg / kg berat badan, terdapat
infiltrasi ringan sel inflamasi (WBC) dan
deposisi hemosiderin yang tidak signifikan.
Terdapat inflamasi dan infiltrasi hepar
(inflamasi perikortal), yang dibuktikan
Plate III: Micrograph of rat liver treated at 200mg/kg with
dengan banyaknya leukosit numerous polymorphonuclear (A) leucocyte and fewer
polimorfonuklear, sedangkan deposisi haemosiderin (B)
haemosiderin juga lebih sedikit pada hepar
tikus yang diberi perlakuan dosis 200mg /
kg (Lembaran III).
● Demikian pula, bagian hati tikus yang
diobati dengan dosis 400 dan 800mg / kg
menunjukkan perdarahan lama yang
ditunjukkan oleh deposit haemosiderin di
seluruh parenkim hati. Aparatus
glomerulus dan tubulus ginjal tikus kontrol
terlihat (Lembaran IV).
● Pada 50 mg / kg berat badan terdapat
deposisi hemosiderin interstitial ringan
dan perdarahan intra-glomeruli
(Lembaran V). Selain pengendapan
hemosiderin interstisial terdapat
perdarahan foci glomeruli pada ginjal
tikus yang dirawat pada dosis 100mg/kg.
● Pada dosis 200mg / kg, perdarahan
interstisial yang dibuktikan dengan
kumpulan makrofag yang sarat
haemosiderin (Lembaran VI). Deposisi
hemosiderin interstisial serupa yang
menandakan perdarahan interstisial
dengan ekstravasasi glomerulus dari
RBC juga terlihat pada ginjal lain
dengan dosis 400 dan 800mg / kg tikus
yang diobati.
Kesimpulan

Hasil studi histopatologi menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat memiliki toksisitas endotel
pada tingkat dosis tinggi menghancurkan pembuluh darah yang menyebabkan perdarahan
seperti yang ditunjukkan oleh pengendapan haemosiderin di seluruh parenkim ginjal dan
hati. Disimpulkan bahwa ekstrak pada dosis yang lebih tinggi memiliki beberapa toksik
spesifik efek yang diperkuat oleh hasil histopatologi dimana terdapat pengendapan
hemosiderin

Pemberian Tridax procumbens cukup toksik pada 2100 mg / kg. Memiliki kemampuan
untuk merangsang produksi makrofag dalam jumlah tinggi dan mungkin berguna pada
infeksi di mana sistem kekebalanmungkin kompromi. Studi semacam ini selalu diperlukan
sebelum agen fitoterapi dapat digunakan secara umum diperkenalkan.
Thankyou