TELAAH JURNAL TOKSIKOLOGI

“Acute and Sub­Acute Toxicity Evaluation of the Methanolic
Extract of Alstonia scholaris Stem Bark”
Idris Bello1, Abdulmenem Suliman Bakkouri2, Yasser M. Tabana1,
Bassel Al­Hindi1,Majed Ahmed Al­Mansoub1, Roziahanim Mahmud2
dan Mohd. Zaini Asmawi1,*

Oleh:

Mauliana

177014038

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI
 FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

2018

TELAAH JURNAL 

“Acute and Sub­Acute Toxicity Evaluation of the Methanolic Extract of
Alstonia scholaris Stem Bark”

Judul :  Evaluasi  Toksisitas   Akut dan  Subakut  Ekstrak  Metanol

Alstonia scholaris Stem Bark

Penulis : Idris Bello1, Abdulmenem Suliman Bakkouri 2, Yasser M.

Tabana1,   Bassel   Al­Hindi1,Majed   Ahmed   Al­Mansoub1,

Roziahanim Mahmud2 and Mohd. Zaini Asmawi1,*

Publikasi Jurnal : Malaysian Journal of Medical Sciences

Penerbit : Universiti Sains Malaysia

ISSN : 1394195

H­Index Journal : 17

Quartil : Q3 

Impact SJR : 0,285 (2016)

SJR Value : 0,3

Penelaah : Mauliana

Tanggal Telaah : 30 Juni 2018

ABSTRAK
 Alstonia   scholaris  telah   digunakan   oleh   para   praktisi   pengobatan

tradisional   sejak   abad   pertengahan   untuk   pengobatan   penyakit.   Tujuan   dari

penelitian ini adalah untuk mengevaluasi toksisitas akut dan sub­akut dari ekstrak

metanol. Uji toksisitas akut dilakukan menggunakan tikus Sprague Dawley (SD).

Ekstrak metanol kulit batang  Alstonia scholaris  (ASME) diberikan dalam dosis

tunggal   2000   mg/kg   melalui   oral   gavage;   dan   hewan­hewan   diamati   terhadap

perubahan   perilaku   atau   kematian.   Dalam   studi   toksisitas   sub­akut,   tikus   SD

menerima tiga dosis ASME (250, 500 dan 1000 mg / kg) selama 28 hari melalui

gavage oral. 

Selama   perlakuan   28   hari,   tikus   diamati   setiap   minggu   terhadap   gejala

toksisitas.   Setelah   28   hari,   tikus   dikorbankan   untuk   pemeriksaan   hematologi,

biokimia   dan   histopatologi.   Dalam   studi   toksisitas   akut,  Alstonia   scholaris

ditemukan tidak toksik dengan dosis 2000 mg/kg bb. Dalam penelitian toksisitas

sub   akut,   variasi   signifikan   terhadap   parameter   berat   badan,   hematologi   dan

biokimia diamati pada kelompok eksperimen dengan dosis 500 dan 1000 mg/kg

dengan kematian dua tikus betina pada dosis tertinggi (1000 mg/kg bb). Studi

histopatologi   menunjukkan   sedikit   degenerasi   (lesi)   dan   nekrosis   centrilobular

pada   hati,   yang   paling   terlihat   pada   kelompok   dosis   tertinggi.   Hasil   ini

menunjukkan   bahwa   dosis   tunggal   dan   pemberian   oral   ekstrak   kulit   batang

Alstonia scholaris jangka pendek tidak menyebabkan toksisitas hingga dosis 2000

mg/kg bb, efek toksik ditunjukkan dalam pemberian jangka panjang pada dosis

tertinggi   (500   dan   1000   mg/kg).   Efek   toksik   jangka   panjang   ditemukan

berhubungan dengan perubahan komposisi hematologi dan kerusakan organ akhir

hingga hati. Dengan demikian, penggunaan ASME oral dosis tinggi secara terus

menerus harus dicegah dan dosis yang lebih rendah dianjurkan.
Kata   kunci:   akut;  Alstonia   scholaris;   sub­akut;   toksisitas;   herba;   tanaman;

ekstrak.

PENDAHULUAN

Evaluasi farmakologi tanaman obat baru­baru ini telah berkembang pesa

di   antara   para   peneliti   di   seluruh   dunia.   Penelitian   tentang   potensi   terapeutik

tanaman telah meningkat selama bertahun­tahun, dengan jumlah informasi yang

didokumentasikan secara ilmiah menunjukkan potensi yang cukup besar untuk

tanaman obat digunakan dalam pengobatan beberapa penyakit.  Namun, seiring

berkembangnya   studi   farmakologi   yang   telah   dilakukan   untuk   memastikan

penggunaan   tradisional   subjektif   dari   berbagai   tanaman   obat,   sangat   sedikit

tanaman yang telah dievaluasi secara menyeluruh terhadap efek yang merugikan.

Sejauh ini, laporan efikasi suatu tanaman lebih banyak dilakukan dari pada studi

toksisitasnya. Oleh karena itu, diperlukan urgensi untuk melanjutkan penyelidikan

obat herbal dan fitokimia terhadap toksisitas jangka pendek dan jangka panjang

dan untuk memastikan komunikasi terbuka yang efektif dari temuan tersebut.

Alstonia   scholaris,   spesies   dari   Famili  Apocyanaceae,   telah   dipelajari

secara luas karena sifat farmakologinya yang banyak. Tanaman ini berasal dari

benua   India  dan   Asia   Tenggara.  A.  scholaris  telah  diteliti   memiliki   efek  anti­

inflamasi,   analgesik,   antidiabetik,   antihyperlipidemik,   anti­malaria,   dan   anti­

mikroba,   di   samping   potensi   terapeutik   terhadap   penyakit   lainnya.   Rebusan­

rebusan ramuan ini telah dilaporkan dapat mengobati beberapa penyakit, seperti

asma, hipertensi, kanker paru­paru dan pneumonia; dan juga sebagai obat demam.

Penelitian ini mengevaluasi toksisitas akut dan subakut oral dari ekstrak metanol

Alstonia scholaris pada hewan percobaan.

1. Bagian Eksperimental
1.1 Hewan Percobaan

Tikus Sprague Dawley (SD), dengan berat 160­180 g, diperoleh dari Pusat

Penelitian   dan   Layanan   Hewan   (ARSC)   di   Universiti   Sains   Malaysia   (USM),

Penang,   Malaysia.   Tikus­tikus   tersebut   disimpan   di   Ruang   Transit   Hewan   di

School of Pharmaceutical Sciences, Universiti Sains Malaysia, di mana mereka

telah diaklimatisasi dengan kondisi standar laboratorium selama 7 hari. Hewan

diberi   makan   standar   dan   dibolehkan   minum   air.   Persetujuan   diperoleh   dari

Komite Etika Hewan, Universiti Sains Malaysia, Penang, Malaysia. Panduan etika

hewan institusional secara ketat diamati.

1.2 Penyiapan Tanaman/Ekstrak

Kulit dan daun  Alstonia scholaris  (AS) diperoleh dari hutan di Penang,

Malaysia,   pada   koordinat   berikut  (5.42460N,   100.26890E).   Daun   disimpan   di

Herbarium   USM   untuk   otentikasi   (Pendaftaran   voucher   spesimen   No.   11479).

Selanjutnya, sekitar 2,5 kg batang kering dari Alstonia scholaris (AS) dihilangkan

lemaknya dengan petroleum eter (60–80 0C) untuk menghilangkan lemak, lateks

dan   senyawa   non­polar   dengan   berat   molekul   tinggi.   Residu   tanaman   yang

dihilangkan lemaknya diekstraksi dengan maserasi dalam metanol selama 24 jam,

dengan pengadukan intermiten pada 450C, untuk mendapatkan ekstrak metanol

(ASME).   Pelarut   secara   teratur   diganti   sampai   tidak   ada   warna   yang   diamati.

Ekstrak   yang   dikumpulkan   disaring   melalui   kertas   saring   Whatman   (No.   1).

Terakhir, filtrat dipekatkan dalam  vakum menggunakan rotary  evaporator; dan

ekstrak pekat dikeringkan menggunakan pengering beku diikuti dengan inkubasi

dalam oven (450C).

1.3 Studi Toksisitas Akut Oral: Desain Eksperimental
 Penelitian   toksisitas   akut   oral   disetujui   untuk   dilakukan   sesuai   dengan

pedoman OECD 423, yang menetapkan penggunaan hanya tiga hewan (OECD

423, Paragraph 23). Tiga dari hewan uji itu berpuasa semalam (~12 jam) dan

ditimbang.   Tes   dosis   ekstrak   metanol  Alstonia   scholaris  (ASME)   dihitung

berdasarkan   berat   badan   setiap   hewan   yang   berpuasa;   dan   diberikan   melalui

gavage oral pada 2000 mg/kg (Gambar 1). Hewan­hewan tersebut diamati secara

teratur   dan   individual     terhadap   perubahan   perilaku   dan   tanda­tanda   toksisitas

umum setelah pemberian dosis selama 24 jam pertama, dengan perhatian khusus

diberikan selama 4 jam pertama. Setelah itu, pengamatan dilanjutkan setiap hari

selama total 14 hari.

1.4 Studi Toksisitas Sub­Akut Oral (28 Hari)

1.4.1 Prosedur

Penelitian ini dilakukan sesuai dengan pedoman OECD No. 407. Hewan

percobaan dibagi menjadi empat kelompok masing­masing terdiri dari 10 tikus.

Setiap   kelompok   terdiri   dari   lima   tikus   betina   berusia   9­11   minggu   dan   tikus

nulipara  (160–180 g  bb);  dan  5 tikus   jantan  (180­200 g  bb) di  kandang  yang

terpisah. Kelompok diobati setiap hari dengan tiga dosis ASME (250, 500 dan

1000 mg/kg bb) selama 28 hari. Semua prosedur diberikan melalui gavage oral.
 Gambar 1. Aliran grafik toksisitas akut

1.4.2 Pengamatan

Tanda­tanda   klinis   diamati   setidaknya   dua   kali   sehari   selama   periode

pengobatan 28 hari. Bobot tubuh diukur seminggu sekali. Pada hari ke 29, hewan­

hewan   tersebut   dipuasakan   semalam   dan   sampel   darah   dikumpulkan   melalui

tusukan   jantung.   Organ   tubuh   vital   dibedah,   dibersihkan   dari   jaringan   yang

menempel dan dibilas dengan normal salin sebelum beratnya diukur. Ginjal dan

hati   segera   disimpan   dalam   10%   parafin   untuk   pemeriksaan   histologi.   Bagian

parafin   dibuat   dan   diwarnai   dengan   hematoxylin   dan   eosin   untuk   studi

histopatologi menyeluruh. 

Analisis   hematologi   dari   sampel   darah   dilakukan   menggunakan

penganalisis hematologi otomatis. Parameter yang dievaluasi termasuk: sel darah

merah   (RBC);   hemoglobin   (Hb);  mean   corpuscular   volume  (MCV);  mean

corpuscular   hemoglobin  (MCH);  mean   corpuscular   hemoglobin   concentration

(MCHC);  trombosit (PLT); jumlah leukosit (WBC); neutrofil, eosinofil, basofil,

limfosit,   dan   monosit.   Untuk   keperluan   analisis   biokimia,   sampel   darah

disentrifugasi pada 3000 rpm selama 15 menit. Kit diagnostik digunakan untuk

mengevaluasi parameter ini, termasuk tingkat serum total protein (TP), bilirubin,

alanin transaminase  (ALT), aspartat transaminase  (AST), alkalin  fosfat (ALP),

kreatinin,   dan   albumin   (ALB);   serta   profil   lipid   tikus,   yaitu   level   lipoprotein

densitas tinggi (HDL), lipoprotein densitas rendah (LDL), kolesterol total (TC),

dan total gliserol (TG). Pemeriksaan histopatologi juga dilakukan pada hati dari

kelompok kontrol yang diobati. 

Rentang referensi untuk perbandingan bergantung pada metode analisis,

spesies   hewan   yang   digunakan   dan   faktor   eksperimental   lainnya.   Dengan

demikian, dalam penelitian ini, nilai­nilai yang diperoleh untuk kelompok kontrol

dianggap   sebagai   nilai   referensi;   dan   analisis   statistik   dilakukan   terhadap

kelompok kontrol.

1.4.3 Analisis Statistik

Hasilnya dinyatakan sebagai mean ± S.E.M. Analisis statistik dilakukan

menggunakan versi 21 dari program statistik IBM­SPSS (IBM Corp, Armonk,

NY, USA).  One­way  ANOVA   digunakan  diikuti  dengan  Dunnett's  Test  untuk

beberapa   perbandingan   parametrik   antara   kontrol   dan   kelompok   perlakuan.

Perbedaan dianggap signifikan ketika nilai p kurang dari 0,05 (p <0,05).

2. Hasil 

2.1 Efek Toksisitas Akut Oral dari  Alstonia scholaris  pada Tikus Betina

SD

Tidak ada kematian hewan pada tahap pertama dari tiga tikus betina yang

menerima 2000 mg/kg ekstrak metanol Alstonia scholaris. Tidak ada tanda­tanda

toksisitas yang diamati pada parameter kesehatan selama periode observasi 14

hari. Pengamatan serupa dilakukan pada kelompok tikus betina tahap kedua yang

diberi ekstrak 2000 mg/kg. Oleh karena itu, perkiraan dosis letal akut (LD50) dari

ekstrak  Alstonia scholaris  pada tikus betina diperkirakan lebih tinggi dari 2000

mg/kg bb.

2.2 Efek Toksisitas Oral Sub­Akut (28 Hari) dari Alstonia scholaris pada

Tikus Jantan dan Betina SD 

2.2.1 Pengaruh   Pemberian   Oral   Ekstrak  Alstonia   scholaris  Terhadap

Perilaku Umum

Pada penelitian toksisitas sub akut, tikus jantan dan betina yang diberikan

dosis   250   mg/kg   bb   ekstrak  A.   scholaris  tidak   menunjukkan   gejala   toksisitas.

Namun,   tikus   jantan   yang  menerima   1000  mg/kg   ekstrak   menunjukkan   tanda­
tanda  kelesuan,  dan  kelemahan  sert  aktivitas   motorik  dan  refleks   yang  lambat

secara abnormal. Gejala toksisitas mulai ditunjukkan sekitar hari ke­19 s/d 21 dan

hari ke­25 s/d 26, masing­masing, pada kelompok yang diobati dengan dosis 1000

dan 500 mg/kg. Mortalitas dan perubahan pada ritme pernapasan dan pola bulu

tidak diamati selama periode eksperimen 28 hari pada kelompok yang disebutkan

sebelumnya.

Namun, pada tikus betina, manifestasi fisik gejala toksisitas terjadi pada

hari ke 20, 21 dan hari 14–16, masing­masing pada kelompok dosis 500 dan 1000

mg/kg   bb.   dari   ekstrak.   Gejala­gejala   toksik   yang   diamati   termasuk   kelesuan,

mengasingkan diri, nafas berat, perubahan pola bulu, dan aktivitas motorik serta

refleks yang sangat lambat. Secara keseluruhan, gejala toksik paling jelas pada

kelompok   wanita   yang   diberikan   dosis   tertinggi;   dan   sementara   tidak   ada

kematian   yang   tercatat   pada   kelompok   laki­laki   manapun   selama   28   hari

pengobatan, dua dari tikus betina dalam kelompok 1000 mg/kg meninggal pada

hari ke­24 dan 25.

2.2.2 Pengaruh   Pemberian   Oral   Ekstrak  Alstonia   scholaris  pada   Berat

Tubuh dan Berat 

Bobot tubuh baik tikus betina maupun jantan yang diberi ASME dengan

dosis (250, 500 dan 1000 mg/kg bb) disajikan pada Gambar 2. Penurunan berat

badan secara signifikan ditunjukkan pada kelompok tikus betina (dibandingakan

dengan   kelompok   kontrol)   yang   menerima   ekstrak   ASME   dengan   dosis   1000

mg/kg bb dimulai dari minggu ke­2 (p <0,05) sampai akhir periode eksperimen (p

<0,01). Selain itu, setelah 28 hari pengobatan, tikus betina yang menerima 1000

mg/kg   menunjukkan   berat   badan   rata­rata   lebih   rendah   dibandingkan   dengan

bobot   awal   tikus.   Tikus   jantan   juga   menunjukkan   penurunan   berat   badan

dibandingkan dengan kontrol, namun tidak signifikan.
 Gambar 2. Pengukuran berat badan awal dan mingguan (g) tikus jantan

(A) dan betina (B) dalam penelitian toksisitas sub akut dari ekstrak metanol

Alstonia scholaris. Hasilnya dinyatakan sebagai mean ±S.E.M. dari 5 tikus.

(Berbeda signikan dari kontrol; * p <0,05; ** p <0,01).

Bobot organ tikus betina diperlihatkan pada Tabel 1. Tikus yang diberi

ekstrak   pada   dosis   500   dan   1000   mg/kg   bb   memiliki   berat   paru­paru   secara

signifikan (p <0,05) lebih rendah daripada kontrol. Selanjutnya, terjadi penurunan

berat pankreas dan jantung secara signifikan diamati pada kelompok dosis 500

dan 100 mg/kg ASME dibandingkan dengan kelompok kontrol (p <0,05). Seperti

yang ditunjukkan Tabel 2, tikus jantan yang diberi dosis 500 dan 1000 mg/kg bb

ekstrak menunjukkan penurunan yang signifikan terhadap bobot paru­paru juga (p

<0,05). Berat organ rata­rata dari limpa juga terbukti menurun pada kelompok 500

mg/kg, namun tidak signifikan. Tidak ada perbedaan signifikan yang diamati pada

bobot organ lain dibandingkan dengan pengukuran kontrol.
 Tabel 1. Berat organ (g) tikus betina dalam penelitian toksisitas sub akut
dari ekstrak metanol Alstonia scholaris. Hasil dinyatakan sebagai mean ± S.E.M.
dari 5 tikus.

Dinyatakan berbeda secara signifikan jika nilai p <0,05.

Tabel 2. Berat organ (g) tikus jantan dalam penelitian toksisitas sub akut
dari ekstrak metanol kulit batang Alstonia scholaris. Hasil dinyatakan sebagai
mean ± S.E.M. dari 5 tikus.

Dinyatakan berbeda secara signifikan jika nilai p <0,05.

2.2.3 Pengaruh Pemberian Oral Ekstrak Alstonia scholaris Terhadap 

Tingkat Serum Elektrolit

Pemeriksaan   elektrolit   serum   tidak   menunjukkan   banyak   variasi   antara

kelompok  betina  yang  diobati  (Tabel  3) atau     kelompok  jantan  (Tabel  4) dan

kelompok   kontrol   terhadap   kadar:   natrium,   kalium,   klorida,   urea,   asam   urat,

konsentrasi kalsium dan fosfat dalam kelompok yang diobati adalah tidak berbeda

secara signifikan dengan kelompok kontrol.
 Tabel 3. Nilai elektrolit plasma pada tikus betina dalam penelitian
toksisitas sub akut dari ekstrak metanol kulit batang Alstonia scholaris. Hasil
dinyatakan sebagai mean ± S.E.M. dari 5 tikus.

Dinyatakan berbeda secara signifikan jika nilai p <0,05.

Tabel 4. Nilai elektrolit plasma pada tikus betina dalam penelitian
toksisitas sub akut dari ekstrak metanol kulit batang Alstonia scholaris. Hasil
dinyatakan sebagai mean ± S.E.M. dari 5 tikus.

Dinyatakan berbeda secara signifikan jika nilai p <0,05.

2.2.4 Pengaruh   Pemberian   Oral   Ekstrak  Alstonia   scholaris  Terhadap

Parameter Serum Biokimia 

Alkalin   fosfatase   meningkat   secara   signifikan   pada   semua   kelompok

betina   yang   diobati   (Tabel   5).   Peningkatan   yang   signifikan   pada   tingkat
transaminase aspartat   (500 dan 1000 mg/kg) dan alanin transaminase (250 dan

1000 mg/kg) juga diamati (p <0,01). 

Selain itu, terjadi peningkatan sedang terhadap kadar bilirubin pada tikus

yang diobati dengan 1000 mg/kg. Pada tikus jantan yang diberi perlakuan, kadar

ALT secara signifikan (p <0,05) meningkat pada semua kelompok yang diberi

perlakuan   (Tabel   6).   Peningkatan   kadar   AST   dan   ALP   juga   diamati   pada

kelompok   dengan   dosis   500   dan   1000   mg/kg   dibandingkan   dengan   kelompok

kontrol (p <0,05). 

Tabel 5. Parameter biokimia terhadap serum tikus betina yang diberi

ekstrak metanol kulit batang Alstonia scholaris secara oral. Hasil dinyatakan

sebagai mean ± S.E.M. dari 5 tikus.

Dinyatakan berbeda secara signifikan jika nilai p <0,05.
 Tabel 6. Parameter biokimia terhadap serum tikus betina yang diberi

ekstrak metanol kulit batang Alstonia scholaris secara oral. Hasil dinyatakan

sebagai mean ± S.E.M. dari 5 tikus.

Dinyatakan berbeda secara signifikan jika nilai p <0,05.

2.2.5 Pengaruh   Pemberian   Oral   Ekstrak  Alstonia   scholaris  pada   Profil

Serum Lipid

Peningkatan kadar lipoprotein densitas tinggi (HDL) diamati pada tikus

betina (Tabel 7) dan tikus jantan (Tabel 8) yang diberi dosis 500 dan 1000 mg/kg

bb ASME dibandingkan dengan kelompok kontrol. Namun, kadar kolesterol total

(TC), trigliserida (TG), lipoprotein densitas  rendah (LDL) dan glukosa plasma

tidak berbeda secara signifikan dari kelompok kontrol. 

Tabel 7. Pengaruh 28 hari pemberian oral ekstrak metanol kulit kayu
Alstonia scholaris pada kadar glukosa plasma dan profil lipid tikus betina. Hasil
dinyatakan sebagai mean ± S.E.M. dari 5 tikus.
 Tabel 8. Pengaruh 28 hari pemberian oral ekstrak metanol kulit kayu
Alstonia scholaris pada kadar glukosa plasma dan profil lipid tikus jantan. Hasil
dinyatakan sebagai mean ± S.E.M. dari 5 tikus.

2.2.6 Pengaruh Pemberian Oral Ekstrak Alstonia scholaris Terhadap 

Parameter Hematologi Plasma

Parameter   hematologi   tikus   betina  dan  jantan  diperiksa,  masing­masing

seperti ditunjukkan pada Tabel 9 dan 10. Penurunan secara signifikan tergantung

dosis diamati pada tingkat plasma hemoglobin (Hb; p <0,05) dan jumlah sel darah

merah   (RBC;   p   <0,001)   pada   hewan   betina   yang   diobati   dengan   ASME

dibandingkan   dengan   kontrol,   dengan   signifikansi   statistik   terbatas   pada

kelompok yang diberi dosis 500 dan 1000 mg/kg bb. Penurunan yang signifikan

terhadap sel darah putih (WBC), neutrofil (NTP) dan jumlah limfosit juga diamati

pada kedua kelompok ini. Demikian pula, nilai trombosit secara signifikan lebih

rendah   di   semua   kelompok   perlakuan   dibandingkan   dengan   kontrol   (0,01   <p

<0,05); sedangkan konsentrasi hemoglobin corpuscular (MCHC, p <0,05) secara

signifikan   lebih   rendah   pada   kelompok   dosis   250   dan   1000   mg/kg   bb   ASME

dibandingkan dengan kelompok kontrol. Pada tikus  jantan, nilai Hb, trombosit
dan WBC berkurang secara signifikan pada tikus yang diobati dengan 1000 mg/kg

dibandingkan   dengan   kontrol   (p   <0,05).   Parameter   hematologi   lainnya   yang

diukur   tidak   menunjukkan   perbedaan   yang   signifikan   secara   statistik

dibandingkan dengan kelompok kontrol.

Tabel 9. Nilai hematologi serum yang diberi ekstrak metanol kulit batang
Alstonia scholaris secara oral pada tikus betina. Hasil dinyatakan sebagai mean ±
S.E.M., n = 5.

Tabel 9. Nilai hematologi serum yang diberi ekstrak metanol kulit batang
Alstonia scholaris secara oral pada tikus jantan. Hasil dinyatakan sebagai mean ±
S.E.M., n = 5.
2.2.7 Pemeriksaan Histopatologi

Pemeriksaan histopatologi dilakukan pada hati untuk menilai apakah organ

atau   jaringan   telah   rusak.   Hati   tampak   normal   dengan   arsitektur   hati   yang

diawetkan. Namun, pada kelompok perlakukan tikus betina (Gambar 3) dan laki­

laki (Gambar 4), terjadi sedikit degenerasi (lesi) dan nekrosis centrilobular pada

hati,   yang  paling   banyak   ditunjukkan   pada   kelompok   dosis   tertinggi.   Evaluasi

histologis   juga   menunjukkan   perubahan   kecil   pada   warna   lobulus   hati   pada

kelompok perlakuan dibandingkan dengan kontrol.

Gambar 3. Bagian hati diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H & E
bernoda di bawah Pembesaran 40x) menunjukkan efek ekstrak metanol Alstonia
 scholaris (ASME) dalam studi toksisitas sub­akut selama 28 hari pada tikus
betina: (A) Kelompok kontrol; (B) 250 mg/kg; (C) 500 mg/kg dan (D) 1000
mg/kg. Indikator: Portal Triad (PT); Central Vein (CV); Nekrosis Centrilobular
(NC).

Gambar 3. Bagian hati diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H & E
bernoda di bawah Pembesaran 40x) menunjukkan efek ekstrak metanol Alstonia
scholaris (ASME) dalam studi toksisitas sub­akut selama 28 hari pada tikus
jantan: (A) Kelompok kontrol; (B) 250 mg/kg; (C) 500 mg/kg dan (D) 1000
mg/kg. Indikator: Portal Triad (PT); Central Vein (CV); Nekrosis Centrilobular
(NC).

2.2.8 Pembahasan
Mempertimbangkan berbagai potensi terapeutik Alstonia scholaris sebagai

obat alternatif yang efektif untuk berbagai macam penyakit dan infeksi, seperti

yang dilaporkan dalam sejumlah makalah ilmiah   yang relevan terhadap profil

keamanan tanaman ditetapkan sebagai panduan untuk pengelolaan aplikasi dan

penggunaannya   dalam   persiapan   herbal.   Hal   ini   berguna   dalam   mencegah

manusia terhadap potensi risiko kesehatan terkait toksisitas saat menggunakan A.

scholaris. Studi toksisitas pada model hewan yang sesuai umumnya digunakan
untuk   menilai   potensi   risiko   kesehatan   pada   manusia.   Studi   toksisitas   tersebut

menilai bahaya dan menentukan tingkat risiko paparan terhadap bahaya tertentu

pada dosis atau konsentrasi tertentu.

Dalam   penelitian   ini,   pemberian   ASME   oral   dosis   tunggal   pada   tikus

betina pada 2000 mg/kg bb tidak menunjukkan tanda kematian dengan memeriksa

tanda­tanda  klinis,  berat badan  atau  pengamatan keseluruhan. Oleh karena itu,

tidak   ditemukan   toksisitas   akut   pada   tikus   yang   diobati   dengan   ASME   dan

perkiraan   dosis   mematikan   adalah   lebih   tinggi   dari   2000   mg/kg.   Namun,

kurangnya manifestasi toksisitas­indikatif pada pemberian ASME akut oral dapat

dikaitkan   dengan   penyerapan   sub­cukup   ekstrak   di   saluran   pencernaan,   atau

dikarenakan   tingkat  first­pass  metabolisme  di   hati   tinggi   sehingga   komponen

beracun akan dikonversi ke derivatif yang tidak berbahaya. Meskipun demikian,

hasil dari studi toksisitas akut tersebut berguna untuk memilih dosis uji ekstrak A.

scholaris  yang   tepat   untuk   dilanjutkan   studi   toksisitas   kronis   atau   sub­kronis

untuk melaporkan hasil relevansi klinis yang lebih besar­seperti yang dilakukan

dalam penelitian ini.

Penelitian   toksisitas   sub­akut,   yang   melibatkan   tikus   yang   diberikan

ASME   secara   oral   pada   dosis   250,   500   dan   1000   mg/kg   bb,   menunjukkan

perubahan  signifikan   dalam  perilaku  hewan  serta   penurunan  berat  badan   yang

signifikan pada tikus jantan dan betina pada dosis tinggi (500 dan 1000 mg/kg

bb). Namun tidak ada perbedaan signifikan yang ditemukan pada berat organ paru

tikus   yang   diberi   perlakuan   dibandingkan   dengan   kelompok   kontrol.   Hati   dan

ginjal adalah organ target untuk bahan kimia toksik karena fungsi esensialnya

dalam   proses   detoksifikasi   dan   ekskresi   pada   tubuh   sehingga   dianggap   sangat

berguna dalam studi toksisitas karena kepekaannya terhadap senyawa berbahaya

dan potensinya untuk memprediksi toksisitas. Perubahan terkait toksisitas pada

bobot organ vital ini sering disertai dengan temuan histopatologis yang sesuai.
Perubahan berat paru­paru memiliki implikasi toksisitas yang lebih rendah karena

peran paru­paru terbatas dalam menghilangkan zat berbahaya dari tubuh. Oleh

karena  itu,   dapat   dengan  aman   diklaim  bahwa   hati   dan  ginjal  dapat   berfungsi

sebagai organ target utama dalam penelitian yang berkaitan dengan toksisitas oral

sub akut dari ekstrak herbal.

Gambaran histologis hati dalam penelitian ini ditampilkan pada Gambar 3

dan 4 untuk tikus betina dan tikus jantan. Morfologi sel hati baik pada kelompok

kontrol   laki­laki   maupun   perempuan   adalah   normal.   Namun,   pada   kelompok

perlakuan ekstrak,  terlihat perubahan morfologi struktur yang parah, yang paling

diekspresikan   pada   kelompok   dosis   tertinggi.   Selanjutnya,   evaluasi   histologis

menunjukkan adanya sedikit nekrosis centrilobular. Selain itu, diamati pula terjadi

pembesaran pada vena sentral kelompok yang diterapi dengan ASME yang dapat

mengarah ke hepatopati kongestif.

Analisis parameter darah dalam studi toksisitas hewan penting dilakukan

untuk melihat adanya perubahan pada parameter tersebut dan mengevaluasi risiko

relatif terhadap sistem hematopoietik saat mengekstrapolasi temuan tersebut ke

manusia. Menentukan parameter biokimia darah dan menyelidiki efek toksik pada

jaringan  tertentu,  khususnya  ginjal  dan  hati  dapat  memberikan  informasi  yang

bermanfaat   terhadap   mekanisme   toksisitas   dari   agen   terapeutik   yang   aman.

Peningkatan signifikan pada beberapa parameter biokimia, khususnya ALP dan

AST,   diamati   pada   tikus   jantan   dan   betina   yang   diberi   ekstrak   ASME,

dibandingkan dengan kelompok kontrol. Kadar ALT lebih rendah pada tikus yang

diberi dosis 500 mg/kg bb, namun  meningkat secara signifikan  pada tikus jantan

yang menerima dosis 250 dan 1000 mg/kg bb. Karena kelimpahannya yang khas

di   sitoplasma   sel   hati,   ALT   telah   umum   digunakan   sebagai   penanda   untuk

mengukur   adanya   kerusakan  sel  hati.  AST  ditemukan  di   jantung,   otot  rangka,

ginjal,   otak,   pankreas   dan   sel   darah.   Pengamatan   lainnya   yaitu   adanya   sedikit
peningkatan   serum   albumin,   protein   total,   globulin   dan   bilirubin   namun   tidak

signifikan secara statistik diamati pada kelompok perlakuan jantan dibandingkan

dengan kelompok perlakuan betina pada kelompok dosis tertinggi. Temuan ini

dapat   menandakan   degenerasi   ringan   dan   adanya   lesi,   yang   dikonfirmasi   oleh

pemeriksaan histopatologi hati dari hewan dalam kelompok dosis tertinggi. Hasil

ini   menunjukkan   bahwa   ASME   telah   mengubah   beberapa   fungsi   hati   dan

menunjukkan   bahwa   hati   tikus   pada   kelompok   dosis   tinggi   terjadi   lesi   pada

pemberian sub­akut.

Kadar kreatinin serum, asam urat, dan urea yang tinggi secara abnormal

merupakan biomarker malfungsi ginjal. Dalam penelitian ini, kadar ureum dan

kreatinin sedikit menurun pada tikus jantan maupun betina dibandingkan dengan

kontrol. Namun demikian, nilai­nilai ini berada dalam rentang normal sehingga

mengesampingkan kemungkinan adanya kelainan. Dengan demikian, temuan ini

menunjukkan bahwa ASME tidak mempengaruhi fungsi ginjal normal. 

Sehubungan dengan nilai hematologi yang diamati, sebagian besar nilai

yang   ditunjukkan   pada   kelompok   perlakuan   normal   dibandingkan   dengan

kelompok   kontrol.   Namun,   beberapa   nilai   secara   signifikan   berbeda   dari

kelompok   kontrol,   seperti   nilai   hemoglobin,   RBC,   MCV   dan   MCHC.

Pengurangan dalam nilai ini menunjukkan bahwa ekstrak mengganggu produksi

normal   Hb   dan   konsentrasinya   dalam   sel   darah   merah.   Dengan   demikian,

disimpulkan bahwa ASME memiliki potensi untuk menginduksi anemia. Selain

itu,   pengurangan   yang   diamati   dalam   WBC,   termasuk   limfosit,   monosit,   dan

eosinofil, dan jumlah trombosit menunjukkan penurunan fungsi sistem kekebalan

tubuh.   Oleh   karena   itu,   hasil   ini   menunjukkan   bahwa   ekstrak   memiliki

kecenderungan   untuk   menyebabkan   anemia   dan   defek   imunologi   pada   tikus,

sehingga   hewan   lebih   rentan   terhadap   infeksi.   Nilai   hematologi   lebih   banyak

berubah pada tikus betina daripada tikus jantan yang diberi perlakuan.
 Profil lipid pada tikus  yang diberi perlakuan menunjukkan peningkatan

kadar HDL secara signifikan, yang berhubungan dengan penurunan ringan pada

tingkat   LDL.   HDL   dikenal   sebagai   kolesterol   baik   dalam   tubuh   karena

memfasilitasi   pencegahan   faktor   risiko   kardiovaskular.   Oleh   karena   itu,

pengamatan   di   sini   lebih   lanjut   mengkonfirmasikan   aktivitas   antidiabetes   dan

antihiperlipidemik yang dilaporkan dari  Alstonia scholaris, meskipun kadar TC,

TG dan glukosa tidak berubah secara signifikan pada hewan yang diobati dengan

ASME dalam penelitian ini jika dibandingkan dengan kelompok kontrol.

Kematian   dua   tikus   betina   menunjukkan   sensitivitas   jenis   kelamin

terhadap efek toksik. Namun, ini bertentangan dengan temuan sebelumnya oleh

Baliga et al. dimana tikus jantan dilaporkan lebih rentan terhadap efek toksik dari

ekstrak. Perbedaan lainnya adalah variasi dalam dosis yang mematikan (LD50);

sementara studi sebelumnya, penelitian toksisitas sub­kronis, menunjukkan bahwa

dosis   oral   240   mg/kg   ekstrak   etanol   kulit   batang  Alstonia   scholaris  yang

dikumpulkan pada musim hujan di India sangat beracun, dalam penelitian ini, 250

mg/kg ekstrak metanol ditemukan tidak toksik untuk pemberian oral selama 28

hari. Faktor ekologi dan lingkungan seperti variasi musiman dalam curah hujan

dan   proses   ekstraksi   yang   digunakan   pada   sampel   tanaman   diketahui

mempengaruhi  phytoconstituents  pada spesies tertentu sebanyak faktor biologis.

Dengan demikian, dapat disimpulkan efek toksik terjadi karena perbedaan lokasi

geografis, waktu pengumpulan sampel tanaman dan prosedur ekstraksi. Terbukti,

ekstrak   kulit   kayu  Alstonia  dikumpulkan   selama   periode   musim   panas

memberikan efek yang kurang toksik.

Faktor pembatas dalam penelitian ini adalah kurangnya kepastian apakah

sampel   tanaman   yang   digunakan   dapat   berfungsi   sebagai   prototipe   spesies

Alstonia   scholaris.   Identifikasi   tumbuhan   didasarkan   pada   ciri   morfologi;   data

taksonomi dan informasi farmakope regional lainnya digunakan untuk validasi di
Unit   Herbarium   USM.   Kedua,   karakterisasi   kimia   dari   bahan   tanaman   tidak

dilakukan. Meskipun demikian, racun dari  Alstonia scholaris  sebelumnya telah

dikaitkan dengan  echitamine  yang telah dilaporkan mengerahkan efek sitotoksik

pada garis sel. Oleh karena itu, meskipun pekerjaan ini dapat berfungsi sebagai

template untuk penelitian hewan di masa depan, dan memberikan pedoman yang

berkaitan   dengan   penggunaan  Alstonia   scholaris  provinsi   oleh   pasien   Asia,

mengingat   kurangnya   karakterisasi   kimia,   hasil   ini   mungkin   tidak   sebanding

dengan studi masa depan yang menggunakan spesies tumbuhan yang sama ini.

KESIMPULAN

Penelitian   ini   memvalidasi   efek   toksik   ekstrak   kulit   batang  Alstonia

scholaris  pada   dosis  500  dan   1000  mg/kg  dalam   penggunaan  jangka  panjang.

Efek toksik dilihat dari adanya perubahan hematologi dengan kerusakan organ

akhir ke hati, yang menyebabkan perubahan dalam fungsi fisiologis normal dan

melemahnya sistem kekebalan tubuh hewan. Baik kelompok jantan dan betina

yang   diobati   dengan   250   mg/kg   tidak   menunjukkan   tanda­tanda   toksisitas.

Kematian   dua   tikus   betina   dalam   kelompok   dosis   tinggi   dapat   menunjukkan

bahwa   tikus   betina   lebih   sensitif   terhadap   efek   toksik   ASME   daripada   tikus

jantan.   Oleh   karena   itu,   tindakan   pencegahan   dan   keamanan   harus   dilakukan

sebelum mengkonsumsi oral Alstonia scholaris untuk tujuan terapeutik atau untuk

penggunaan   lain;   dan   penggunaan   jangka   panjang   harus   berhati­hati   dan

menggunakan dosis rendah.