Penentuan KHM & KBM

Tim Praktikum Mikrobiologi

Poltekkes Bhakti Setya Indonesia
Yogyakarta, 2021
Tujuan Praktikum

• Menentukan KHM & KBM Amoksisilin

Prinsip Kerja

Pembuatan suspensi bakteri (Cocokan kekeruhan dg standar Mc.Farland 0,5)

Penentuan KHM & KBM

Buat seri pengenceran lar. Amoksisilin

Masukkan Lar.Amox ke dlm camp. media & bakteri, inkubasi, amati KHM

Inokulasi ke media padat, inkubasi, amati KBM

Pembuatan McFarland :

4
Pembuatan suspensi bakteri

◦ Suspensi bakteri uji (Staphylococcus aureus) yg telah dibiakan dalam 5 mL

media NB selama semalam (12-16 jam)
◦ disamakan kekeruhannya dengan Mc.Farland 0,5.
◦ Apabila suspensi bakteri lebih keruh, maka diencerkan dengan larutan NaCl
0,9% steril dan dihomogenkan.

• Video membuat suspensi bakteri & menyamakan dg standar Mc Farland:

• https://youtu.be/yjiLk9_ZC1I

5
Cara menggunakan micropipettes

Video Cara
menggunakan
micropipettes:

https://youtu.be
/QGX490kuKjg
Pembuatan Suspensi uji
(dikerjakan dlm kondisi Aseptis)

2,5 mL B 2,5 mL C 2,5 mL D

250 mg 2,5 mL A
serbuk
Amoksisilin

Ad 5 mL Ad 5 mL Ad 5 mL Ad 5 mL
Ad 10 mL
Akuades steril Akuades steril Akuades steril Akuades steril
Akuades steril
Lar. B Lar. C Lar. D Lar. E
Lar. A
(25 mg/mL) (12,5 mg/mL) (6,25 mg/mL) (3,125 mg/mL) (1,56 mg/mL)

1000 L 1000 L 1000 L 1000 L 1000 L

Tiap tabung sudah berisi:

100 L susp.bakteri
+ 900 L Media NB

Suspensi A Suspensi B Suspensi C Suspensi D Suspensi E

(12,5 mg/mL) (6,25 mg/mL) (3,125 mg/mL) (1,56 mg/mL) (0,78 mg/mL) 7
Penentuan KHM & KBM

8
Data yg dicantumkan

• Karena larutan uji yang digunakan 1 mL + 1 mL media berisi bakteri,

maka konsentrasi suspensi uji menjadi ½-nya, maka:

KHM KBM
Konsentrasi
Label Amoksisilin
(mg/mL) Rep 1 Rep 2 Rep 3 Rep 1 Rep 2 Rep 3

A 12,5            
B 6,25            
C 3,125            
D 1,56            
E Jernih diberi
0,78 tanda (-) ; Keruh
  diberi  tanda : (+)       

9
Cara Analisis KHM & KBM

• nilai KHM : kadar antibiotik terendah yang masih menunjukkan

pertumbuhan ketika ditanam dalam media Agar (NA)
• nilai KBM : kadar antibiotik terendah yang sama sekali tidak
menunjukkan pertumbuhan ketika ditanam dalam media Agar (NA)
dengan metode gores.
Contoh:

KBM fraksi etanol infusa

daun Kepel adalah 45% b/v.

10
Data Hasil Pengamatan
(utk Laporan resmi)

KHM
Konsentrasi
A B C D E Label Amoksisilin
(mg/mL) Rep 1 Rep 2 Rep 3

A 12,5 -  -  - 
B 6,25 -  -  - 
C 3,125 -  -  - 
D 1,56 +  +  + 
E diberi0,78
Jernih tanda (-) +  +  + 
Hasil semua replikasi sama Keruh diberi tanda : (+)

Berapa KHM Amoksisilin ?

Data Hasil Pengamatan
(utk Laporan resmi)

A
KBM
Konsentrasi
Label Amoksisilin
(mg/mL) Rep 1 Rep 2 Rep 3
B
E A 12,5 -  -  - 
B 6,25 -  -  - 
C 3,125 +  +  + 
D 1,56 +  +  + 
C D EJernih diberi
0,78
tanda (-) +  +  + 
Keruh diberi tanda : (+)

HasiL semua replikasi sama Berapa KBM Amoksisilin ?

Tugas:
- merangkum diskusi WAG
- analisis data percobaan
- buatlah pembahasan & simpulan dari
analisis data tsb