Induksi Apoptosis Senyawa Isolat VFB-DB 1.

1 Kulit Batang Tumbuhan

Tampa Badak (Voacanga Foetida (Bluem) Rolfe) Terhadap Sel Kanker
Payudara T47D Dengan Metode Double Staining

Ratih Sri Rezeki

NIM : 1901068

Pembimbing 1 Pembimbing 2
Dr. apt. Adriani Susanty, M. Farm Dr. Neni Frimayanti,M. Sc
NIDN : 1024047301 NIDN : 1013068001

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI
RIAU
YAYASAN UNIV RIAU
PEKANBARU
2023

Kanker payudara adalah salah satu
kanker yang paling umum dan
sering terjadi pada wanita. Kanker
payudara terjadi karena
terganggunya sistem pertumbuhan
sel di dalam jaringan payudara.
Kanker payudara merupakan
penyakit genetik akibat akumulasi
kelainan genetik dalam jaringan.
Pada penderita kanker payudara
yang baru terdiagnosa dapat
ditemukan adanya mutasi.
Latar Belakang
Pada tahun 2019-2021 di Indonesia
telah ditemukan 27.837 Insoesi Visual
Asam (IVA) positif, 18.150 benjolan
payudara, sebanyak 3.894 kanker leher
Rahim dan 3.040 kanker payudara
(Kemenkes RI, 2021). Kota
Pekanbaru, terdapat 145 perempuan
usia 30-50 tahun menjalani
pemeriksaan leher rahim dan payudara
dengan persentase kanker sebesar
0,1% (Dinkes Prov. Riau, 2021).
Selain metode terapi kanker masih tergolong
mahal, penggunaan tumbuhan alami untuk
keperluan pengobatan, hingga saat ini
masih diminati sebagian besar penduduk
di Indonesia sebagai pilihan pengobatan
alternatif. Usaha untuk menemukan obat
kanker yang ideal terus dilakukan salah
satunya dengan pengobatan dari bahan alam.
Adapun salah satu contoh tumbuhan yang
memiliki potensi sebagai antikanker yaitu
tumbuhan tampa badak (Voacanga foetida
(Blume) Rolfe) dari famili Apocynaceae
(Susanty et al., 2020b).
 Kandungan Kimia
Voacanga foetida (Blume) Rolfe
Berdasarkan hasil penelitian
sebelumnya kandungan senyawa Hasil skrining fitokimia kulit
kimia pada tumbuhan Voacanga
foetida (Blume) Rolfe) adalah : batang tampa badak mengandung
Lombin, Voacangine (Hadi, 2008; senyawa alkaloid, saponin,
Susanty et al., 2021); Vobtusin fenolik, steroid dan terpenoid
(Susanty et al., 2020ᵇ ) dan Vobtusin
Lakton (Susanty et al., 2021) (Putri, 2020)

Susanty et.al (2020)
Senyawa Vobtusine yang
diisolasi dari fraksi basa alkaloid
DCM kulit batang Voacanga
foetida (Blume) Rolfe dapat
menginduksi apoptosis melalui
jalur mitokondria, melalui
caspase-9, caspase-3, aktivasi
Bid dan downregulation Bcl-xL
pada sel HL-60.
Penelitian Terkait
Susanty et.al (2021)
Melakukan uji aktivitas sitotoksik dengan
metode perhitungan sel langsung
(haemocytometer) dari daun tumbuhan tampa
badak (Voacanga foetida (Blume) Rolfe)
terhadap sel kanker leukemia L1210 pada
ekstrak metanol, fraksi butanol, fraksi etil
asetat dan fraksi n-heksana memiliki nilai
IC₅₀ berturut-turut adalah 4,4 µg/mL; 9
µg/mL; 8,4 µg/mL; dan 16,8 µg/mL, serta
senyawa isolat Tb1 dari fraksi n-heksana,
Tb2 dari fraksi etil asetat dan Tb3 dari fraksi
butanol memiliki nilai IC₅₀ berturut-turut
adalah 0,9 µg/mL; 1,8 µg/mL; dan 1,1
µg/mL.
Susanty et.al (2021)
Melakukan isolasi dan uji
aktivitas sitotoksik kulit batang
tumbuhan tampa badak
(Voacanga foetida (Blume)
Rolfe) menggunakan metode
BSLT didapatkan senyawa
alkaloid VFB-DB 1.1, VFB-DB
2.1 dan VFB-DB 2.2 yang
memiliki efek sangat toksik
dengan nilai LC₅₀ berturut-turut
yaitu 8,997 µg/mL, 15,29 µg/mL
dan 3,532 µg/mL.
 Penelitian Terkait
Susanty et.al (2023)
Hasil penelitian Susanty et al., (2023)
Menyatakan bahwa ekstrak etil asetat daun
tampa badak (Voacanga foetida (Blume)
Rolfe) memiliki aktivitas sitotoksik dengan
kategori sangat toksik terhadap Arthemia
Saline Leach (metode BSLT) dengan nilai
LC₅₀ 8,61 µg/mL dan sangat sitotoksik
terhadap sel kanker payudara T47D (metode
MTT Assay) dengan nilai IC₅₀ 0,87 µg/mL;
0,66 µg/mL; dan 0,95 µg/mL pada waktu
inkubasi masing-masing 24; 48; dan 72 jam
Susanty et.al (2023)
Susanty et al.,(2023ᵇ)
Juga melakukan penelitian uji aktivitas
sitotoksik dengan metode BSLT dan MTT
Assay terhadap senyawa alkaloid yang
diisolasi dari kulit batang tampa badak
(Voacanga foetida (Blume) Rolfe) yaitu
senyawa isolat VFB-DB 1.1, VFB-DB 2.1 dan
VFB-DB 2.2 diperoleh hasil bahwa senyawa
tersebut memiliki aktivitas sitotoksik yang
sangat kuat pada larva udang Arthemia Saline
Leach dan sel kanker T47D dengan nilai LC₅₀
berturut-turut 15,8 µg/mL; 47,4 µg/mL; 66,6
µg/mL dan nilai IC₅₀ berturut-turut 8,9 µg/mL;
15,3 µg/mL dan 3,5 µg/mL.
Berdasarkan latar belakang tersebut, peneliti tertarik untuk melakukan
penelitian mengenai induksi apoptosis dari senyawa hasil isolasi kulit batang
tumbuhan tampa badak (Voacanga foetida (Blume) Rolfe) yaitu senyawa VFB-
DB 1.1 dengan metode Double Staining

Tujuan Penelitian

Untuk mengetahui apakah senyawa hasil isolasi tersebut memiliki sifat induksi
apoptosis, sehingga dapat menjadi agen antikanker yang potensialuntuk
menghambat pertumbuhan sel kanker payudara T47D
1. Waktu
Metodologi
September 2022 -Juni 2023 Penelitian
2. Tempat

Laboratorium Kultur Sel

Fakultas Farmasi
Universitas Andalas Padang
 Alat
• Gelas beaker 1000 mL Alat dan Bahan
• Pipet tetes
• Tabung eppendrof
• Rak tabung kecil Bahan
• Filter 0,2 mikron
• Tabung sentrifus 5415D • Aquabidest
• Botol duran 1000 mL dan 100 mL • Senyawa hasil isolasi VFB-DB 1.1
• Pipet mikro 1000μl, 200 μl, 20 μl dan 10 μl • Aquadest
• Cryo tube • Cell line T47D
• Conical tube • NaHCO3
• Mikroskop cahaya/inverted • HCl/NaOH
• Hemositometer • RPMI 1640 (Rosewell Park Memorial Institute)
• Counter • Tripsin-EDTA (­Trypsin-Ethylendiamintetraaseti
• Vortex Acid)
• Penangas air (37ᵒC) • PBS (Phosphate-Bufferd Saline)
• Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) • PI (Propidium Iodida)
• Inkubator CO₂ • Akridin Orange
• Tangki nitrogen cair
• Flask T
• Centrifuge 5415 D
 Tahapan Penelitian
Pembuatan Media RPMI
1640
Penumbuhan Sel T47D

Penggantian Media RPMI

1640

Panen Sel T47D

Perhitungan Sel T47D

Perlakuan Sampel

Perlakuan Sel T47D

Induksi Apoptosis dengan Etidium
bromida-Akridin oranye

Analisis Hasil Uji Double

Staining
Skema Pembuatan
Media RPMI 1640

LAFC

Botol Duran
 Skema Kerja Pertumbuhan Sel dan
Penggantian Media

Tangki Nitrogen

Conical tube

Cryo tube Flask T

 Skema Kerja Panen Sel, Perhitungan
Sel dan Perlakuan

Mikroskop Inverted
Inkubator CO2
Skema Kerja Pengujian Apoptosis

Well plate

Tabung Effendorf
Perhitungan Konsentrasi Larutan Induk
Perhitungan Konsentrasi Larutan Uji Apotosis
Perhitungan Konsentrasi Kontrol (Doksorubisin)
 Hasil Penelitian
Hasil uji fitokimia senyawa
Senyawa isolat VFB-DB isolat VFB-DB 1.1 yang
1.1 diperoleh dari peneliti diperoleh dari peneliti
sebelumnya yaitu (Putri, sebelumnya (Putri, 2020)
2020) adalah senyawa golongan
alkaloid.
Hasil pemeriksaan
organoleptis dan
pemeriksaan fisika senyawa
isolat VFB-DB 1.1 peneliti
sebelumnya berbentuk
kristal bewarna putih dan
larut dalam kloroform
Hasil uji sitotoksik
(Susanty et al., 2023b )
dari senyawa VFB-DB
1.1 yaitu dengan nilai
IC50 8,9 µg/mL

Uji apoptosis dari senyawa isolat

Konsentrasi larutan stok
yang digunakan adalah
100.000 µg/mL.
Konsentrasi larutan uji yang
digunakan adalah 4,45; 8,9;
dan 17,8 µg/mL.
Konsentrasi kontrol positif
Doksorubisin yang
digunakan adalah 0,0625;
0,125; dan 0,25 µg/mL
VFB-DB 1.1 terhadap sel T47D
menggunakan Metode Double
staining dengan seri konsentrasi
4,45; 8,9; dan 17,8 µg/mL
didapatkan rata-rata persentase
apoptosis berturut?turut yaitu
71.38 %, 77.78 %, 81
 Hasil Perhitungan Jumlah Sel T47D
Rumus :

●Kamar A : 49
●Kamar B : 76
●Kamar C : 69
●Kamar D : 52
Jumlah sel tehitung/mL x 104
x 104
sel/mL
Jumlah sel yang dibutuhkan = 50.000 sel/mL  untuk dimasukan ke dalam sumuran
Tiap sumuran diperlukan 1 mL x 6 sumuran = 6 mL, dibuat lebih menjadi 8 mL
Volume panen yang ditransfer x volume well
8 mL
0,65 mL
Volume sel yang diambil yaitu 0,65 mL kemudian ditambahkan media hingga 8 mL
Cara perhitungan Persentase Viabel, Apoptosisdan Nekrosis
Hasil Pengamatan Apoptosis Kontrol Doksorubisin

Konsentrasi 0,0625 µg/mL Konsentrasi 0,125 µg/mL Konsentrasi

0,25 µg/mL
Hasil Perhitungan dan Pengamatan Sel T47D dengan Kontrol Doksorubisin

Jumlah sel pada perlakuan doksorubusin Persentase jumlah sel pada perlakuan doksorubusin.
Hasil Pengamatan Apoptosis Senyawa Isolat VFB-DB 1.1

Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi

4,45 µg/ml 8.9 µg/mL 17.8 µg/mL
Hasil Perhitungan dan Pengamatan Sel T47D dengan Perlakuan Sampel VFB-DB 1.1

Jumlah sel pada perlakuan Sampel VFB-DB. 1 1 Persentase jumlah sel pada perlakuan Sampel VFB-DB. 1 1
 Grafik Perbandingan Hasil Perlakuan Terhadap doksorubisin dengan perlakuan
terhadap sampel VFB-DB1.1

80 90
71.38
80 77.78
70

70
60
52.06 90
60 81.84
50 80
50 47.94
42.58 70
40 36.43
40 60
30 50 45.48
30
40.54
19.13 40
20
20
11.31 9.49 11.24 30
10 9.45
10 5.85 20 14.2
10.47
0 0 10 7.69
Doksorubisin VFDB-1.1 Doksorubisin VFDB-1.1
0
Doksorubisin VFDB-1.1
Viabel Apoptosis Nekrosis Viabel Apoptosis Nekrosis Viabel Apoptosis Nekrosis

Konsentrasi 0,06 µg/mL dan Perlakuan Konsentrasi 0,125 µg/mL dan Perlakuan Konsentrasi 0,25 µg/mL dan Perlakuan
Sampel VFB-DB 1.1 Konsentrasi 4,45 Sampel VFB-DB 1.1 Konsentrasi 8,9 µg/mL Sampel VFB-DB 1.1 Konsentrasi 17,8 µg/mL
µg/mL
 Kesimpulan
• senyawa isolat VFB-DB 1.1 dengan nilai IC50 8,9 yang berasal dari kulit
batang tumbuhan Voacanga foetida (Blume) Rolfe dapat memicu kematian
sel kanker payudara T47D melalui mekanisme kematian sel secara apoptosis.
• Terjadi perbedaan nilai rata-rata persentase yang signifikan antara sel viabel,
apoptosis, dan nekrosis pada variabel kontrol dengan variabel yang diberi
perlakuan fraksi kulit batang tumbuhan Voacanga foetida (Blume) Rolfe
dengan hasil persentase
• senyawa isolat VFB-DB 1.1 ini sangat berpotensi sebagai obat kanker
payudara T47D.
Saran
Diharapkan kepada peneliti selanjutnya untuk melakukan penelitian mengenai
Voacanga foetida (Blume) Rolfe.VFB-DB 1.1. dengan menggunakan metode Flow
cytometry (FCM) dan metode lainnya untuk memperluas khasanah ilmu dan
pengetahuan
 Prosedur Kerja

Skema Kerja Fraksinasi

Ekstrak cair Metanol
Kulit Batang Tumbuhan
Tampa Badak
 Skema Kerja Isolasi dan
Pemurnian Alkaloid Fraksi
Diklorometana Basa Kulit
Batang Tumbuhan Tampa
Badak
Terima Kasih