MIKOLOGI - 2

MYCOSIS DERMATOMYCOSIS

DERMATOFITOSIS
NON-DERMATOFITOSIS

Jamur kulit digunakan untuk kelompok tiga jenis jamur yang sering menyebabkan penyakit kulit pada manusia, hewan : Mycrosporum, Epidermophyton dan Trichophyton. Dijumpai sekitar 40 spesies
3

 Biakan koloni Trichophyton mentagrophytes berkisar dari granuler sampai serbuk, mikrokonidia Hifa yang menyerupai kumparan pada T. rubrum

 Konidia yang paling banyak , besar, berdinding kasar, multiseluler, dan berbentuk kumparan pada ujung-ujung hifa. Spesies Microsporum biasanya menyebabkan infeksi kulit dan rambut M. canis banyak makrokonidia 8-15 sel, berdinding tebal M. gypseum banyak makrokonidia tdd 4-6 sel

 Monotipik , makrokonidia berbentuk tongkat, hanya tdd 1-5 sel, pada koloni yang berwarna kuning kehijau-hijauan, -- mudah bermutasi menjadi btk pertumbuhan berwarna putih . Menyerang kulit dan kuku, tidak menyerang rambut.

 Trikhofitin, suatu ekstrak kasar dari dermatofita Peptida galaktomannan merupakan komponen reaktif. Karbohidrat dihubungkanrespon segera, sedangkan peptida respon lambat
7

 Dermatofitosis Non-dermatofitosis tinea vesicolorr candidiasis

 Beberapa gambaran klinik infeksi dermatofita : Tinea corporis Tinea pedis (athletes foot) Tinea cruris (jock itch) Tinea capitis Tinea barbae Tinea unguium Dermatofitid (reaksi id) 9

 Tinea Versikolor Lesi-lesi terutama daerah dada, punggung, leher, dan lengan atas. Lesi-lesi berkisar dari depigmentasi sampai merah kecoklatan dan hanya mempunyai nilai kosmetik.
10

Tinea Capitis

Cara: Woods Lamp didekatkan pada lesi, maka akan timbul warna kehijauan.

Dilakukan didalam ruangan kedap cahaya

Tinea Cruris

Tinea unguium

Candidiasuis Cutis

Pytiriasis Versicolor

PERIKSAAN PENUNJANG

Letakkan spesimen di gelas objek

Kerokan kulit
Tutup dengan cover glass

Tambahkan KOH 10%20% 1-2 tetes

positif ada hifa dan atau spora negatif Tidak ditemuka n hifa atau spora Amati di bawah mikroskop tanpa minyak immersi. Pertama dengan pembesaran 10x kemudian 40x

Tunggu 1015 menit

CFW yeast form of Blastomyces KOH Pityriasis meatball-spaghetty

KOH Microsposum sp

KOH+ Tinta Parker Cryptococcus

 Gram staining
Letakkan spesimen pada gelas objek Pulas dg lar. karbolgentaviolet 60 detik, cuci denga air suling

Pulas dengan lar. Iodium 30 detik, cuci dengan aquades

Jamur adalah gram positif

Tambahkan alkohol 95% hingga tidak ada warna violet, cuci dengan air suling

Pulas dengan safranin selama 10 detik, cuci dengan aquades dan biarkan sampai kering

Periksa dengan mikroskop dengan pembesaran 10x, 20x, 40x

Kultur Jamur Sabouraud Dextrose Agar (SDA)

dapat mengisolasi semua jenis jamur

Modifikasi agar Sabouraud

Mengandung antibiotik (kloramfenikol/gentamisin) dan sikloheksamid mengisolasi dermatofita Modifikasi dengan antibiotik selektif untuk kandida

Dermatophyte test medium (DTM)

Mengandung indikator pH merah fenol yang menyisakan warna kuning dengan pertumbuhan saprofit yang banyak

 Temperatur yang digunakan

Majority of fungi 37C Superficial mycosis 30C

Waktu inkubasi
Minimal 4 minggu Biasanya kultur positif didapatkan dalam 7-10 hari Candida & Aspergillus - 24 sampai 72 jam

mikroskoppik
E. floccoum M. audouinii

Koloni seperti bulu ayam dengan lipatan di tengah pigmen kuning hingga abuabu pudar-hijau. Perubahan pigmen kuning hingga coklat

Tanpa mikrokonidia. banyak yang tipis dan berdinding tipis. makrokonidia berbentuk seperti pentungan

M. canis

Lipatan dan putih hingga abu-abu luas dengan jarak alur yang radial. Pigmen coklat hingga merah muda kekuningkuningan. Kuning pada PDA. Tidak ada pertumbuhan pada polished rice.

Beberapa microconidia. kebanyakan berdinding tipis dan echinulate macroconidia dengan tombol di ujung.

M. gypseum

Datar, putih hinggu kuning terang, seperti ram but yang kasar, dengan alur pertumbuhan radial yang dekat. Perubahan pigmen dari kuning ke orange. Kuning pada PDA. Tumbuh pada polished rice

Beberapa mikrokonidia, kebanyakan macroconidia berdinding tipis tampa tombol di ujung.

Berkelompok disekitar mikrokonidia, makrokonidia jarang berbentuk seperti cerutu, biasanya hyfa spiral. Perforasi rambut positif

T.mentagropytes

 Pembiakan spesies Malassezia

a. Isolasi awal jamur Mlz media teeming Notman (LN) b. Pembiakan sel tunggal jamur Mlz Mc.Farland

c. Identifikasi spesies Mlz -- gambaran morfologi pada agar LN & KOH 20% & tinta Parker blue/black mengacu pd tabel Ashbee dkk
d. Pada agar Sabouraud dekstrosa media ASD dapat dilakukan utk semua jenis jamur

e. Reaksi Katalase

Larutan hidrogen peroksida 3% diteteskan sebanyak 2-3 tetes pada spesimen.

f. Pembiakan isolat jamur pada ASD & Cremophor EL

g. Pembiakan isolat jamur pada media Esculin h. Pembiakan isolat jamur pada media Dixon i. Dermatophyte test medium (DTM) Jumlah koloni dihitung dalam satuan koloni dg perkiraan luas koloni: Diameter koloni 1 mm = 1 satuan koloni. Diameter koloni 2 mm - 4 satuan koloni. Diameter koloni 3 mm = 9 satuan koloni. Diameter koloni 4 mm = 16 satuan koloni.

DTM

SDA

Pemeriksaan Serologi

(Aglutinasi, imunodifusi, CIEP,ELISA, RIA, delayed hypersensitivity reaction) Pemeriksaan dengan

Immunoelektroforesis dan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) mempelajari perbedaan morfologis, dan menemukan beberapa antigen spesifik untuk spesies yang berbeda.

Pemeriksaan Molekuler

PCR Polymerase Chain Reaction

teknik in vitro perbanyakan deoxy nucleid acid (DNA)

Real Time PCR DNA Sequencing

PCR
Amplifikasi region DNA , hanya dlm tabung reaksi, tanpa dimasukkan ke sel (in vivo).
Primer dan DNA Strand denaturation and primer annealing Primer extension
Denaturation 95C

Cycling Exponential amplification of PCR products

~ 2Kb : 1min

Annealing 50-60C

Extension 72C

> 2kb : 1min+(2.5sec/100bp) DNA templete & DNA Polymerase

Double helix 2 buah pita berpsangan dg ikatan hidrogen

dsDNA ssDNA---ikatan hidrogen putus ok 0c

 Polymerase chain reaction (PCR) Mendeteksi jamur dermatomikosis secara tepat Mampu mengamplifikasi asam nukleat dalam jumlah yang sangat kecil Langsung diekstraksi dari spesimen klinis

Hasil Pemeriksaan KOH, Kultur dan Anilisis PCR Onychomicosis11

Real time PCR (RT-PCR)

Menggabungkan amplifikasi DNA PCR dan deteksi neon probe Lebih unggul dibandingkan PCR konvensional Sensitifitas dan spesifisitas setara dengan PCR konvensional dan lebih sensitif dari kultur Mengurangi waktu turnarround dibandingkan dengan tes PCR konvensional dengan menghilangkan proses post amplification Mengurangi kontaminasi dengan jamur lain

DNA Sequencing
Genomic DNA extraction Universal (specific) primer design
NCBI, RDP, ERRD

PCR reaction
PCR product purification Directed sequencing (Full length SEQ)
SEQ data edit

Data analysis

BLASTN/ X Multiple alignment Phylogenetic tree

Proses sequencing

Struktur ribosom jamur

 Arahan ke depan pemeriksaan jamur secara molekuler

Masih banyak jenis jamur yang memerlukan kultur untuk identifikasi diperlukan gebrakan lebih lanjut di bidang molekuler Studi ke depan mengarahkan pada liqui bead dan microarray meningkatkan kecepatan dan akurasi pengujian diagnostik jamur Microarray menunjukkan ketelitian 100% namun teknik ini masih berpotensi crosscontamination dan hasil positif palsu

Deteksi Antibodi IgE Anti-Malassezia. Antibody IgE spesifik pada serum pasien DA dan kontrol yaitu individu yang sehat di uji dengan mengandung AlasSTAT (Nippon DPC, Tokyo, Japan) Reaktivitas ditentukan dalam hal titer antibody, yaitu positif (lebih dari 0,35 iu/ml) atau negatif (koreaksi dari 0,35 iu/ml).4,10,11

Lawrence Khoo
Fungal Skin Infection (Ringworm) Antifungals for Skin Infections (Topical and Oral) to treat skin problems caused by fungi or yeast.

Topical antifungals are usually applied to the affected area twice a day. Youll probably need to take your medication for 1-2 weeks after the rash has healed.

Topical antifungals : Lamisil (terbinafine) Lotrimin (clotrimazole) Miconazole (Micatin, ZeaSORB) Tinactin (tolnaftate) Loprox (ciclopirox) Naftin (naftifine) Oxistat (oxiconazole) Oral antifungals Onychomycosis (fungal nail infection) Tinea capitis (ringworm in the scalp) Commonly used oral antifungals include: Griseofulvin (Grifulvin) Lamisil (terbinafine) Sporanox (itraconazole)

 50-an : Griseofulvin bulan resisten 76

1x500mg 3 mggu s/d 3

: Ketokonazole 1x200mg 3-4 hepatoxic Itrakonazole Flukonazole Triazole terbinafine

80-an :

Kerjanya:

Topikal: dari yg non specifik spt: whitfield, castellanis Paint, gentian Violet,dll ------> Terbaru

menghambat biosintesa ergostrerol

Daftar Pustaka: Rippon JW. Medical Mycology : The Patoghenic Fungi. edisi ke-3. Tokyo ; WB. Saunders co.1988: 154-159 Kwon-Chung KJ. Medical Mycology: The Fungi. Chapter 1st..1992: 3-34 Roth RR. James WD. Microbiology of the skin. Resident flora, Ecology, Infection. J Am Acad Dermatol.1989.20: 367-390. Ignatov A, Elizabeth J K. .Molecular cell biology and molecular genetics of Histoplasma capsulatum. International Journal of Medical Microbiology.2002. 5/6: 349 Adams. DJ..(2004). Fungal cell wall chitinases and glucanases. Microbiology, Britain. 150: 20292035 Herrera. JR. Claudia G. L.et all..Yeast-mycelial dimorphism of haploid and diploid strains of Ustiago maydis. 1999.141: 695-703. F. Marxa U. B. Leiterb and I. P.csib. .The Penicillium chrysogenum antifungal.A promising tool for the development of new antifungal therapies and fungal cell biology studies.Cell. Mol. Life Sci. 65. 2008:445 454

THANK YOU
for Your Attention

Read more, and eat more

46