Uji Biokimia Mikroba Metabolisme merupakan reaksi-reaksi kimia yang terjadi pada makhluk hidup.

Prosesmetabolisme dibedakan menjadi dua jenis yaitu anabolisme dan katabolisme. Anabolisme(Biosintesis) yaitu reaksi biokimia yang merakit molekul-molekul sederhana menjadi molekul-molekulyang lebih kompleks. Misalnya pembentukkan protein dari asam amino. Secara umumproses anabolik membutuhkan energi. Sedangkan katabolisme yaitu reaksi biokimia yangmemecah atau menguraikan molekul-molekulkompleks menjadi molekul-molekul yang lebihsederhana. Proses katabolik melepaskan energi yang dibutuhkan oleh sel(Waluyo, 2004). Aktivitas metabolisme tidak terlepas dari adanya enzim. Berdasarkan tempatbekerjanya, bakteri memiliki juga jenis enzim yaitu endoenzim dan eksoenzim. Endoenzim yaituenzim yang berkerja dalam sel. Sistem endoenzim selain bersifat anabolik dapat juga bersifatkatabolik.sedangkan eksoenzim yaitu enzim yang disekresikan ke luar sel dan berdifusi kedalam media. Sebagian besar eksoenzim bersifat hidroliktik, yang berarti bahwa eksoenzimmenguraikan molekul kompleks menjadi molekul yang molekul-molekul yang lebih sederhana.Molekul-molekul yang lebih kecil ini kemudian dapat memasuki sel dan digunakan untukkepentingan sel(Waluyo, 2004). Sifat metabolisme bakteri dalam uji biokimia biasanya dilihat dari interaksi metabolitmetabolit yang dihasilkan dengan reagen-reagen kimia. Selain itu dilihat kemampuannyamenggunakan senyawa tertentu sebagai sumber karbon dan sumber energi (Waluyo, 2004). E. coli adalah suatu bakteri gram negative berbentuk batang, bersifat anaerobic fakultatif, dan mempunyai flagella peritrikat. E. coli dibedakan atas sifat serologinya berdasarkan antigen o (somatic), K (kapsul) dan H (flagella) (Fardiaz,1992) Medium selektif yang dapat digunakan untuk mengisolasiE.coli misalnya DHL(Desoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose) agar atau MacConkey Agar. Koloni E.coli pada DHLdan MacConkey Agar berwarna merah dan dikelilingi oleh areal yang menunjukkanpengendapan bile.E.coli akan menfermentasi laktosa di dalam medium menjadi asam,sehingga mengakibatkan terjadinya pengendapan bile dan penyerapan indikator merahnetral(Fardiaz,1992) Uji-uji biokimia yang dilakukan terhadap E. coli termasuk karakteristikpertumbuhan pada agar TSI (Triple Sugar Iron) dan agar SIM (Sulfite Indole Motility) atau LIM (Lysine Indole Motility).Uji-uji biokimia ditujukan untuk menunjukkan E.coli dan bakteri-bakteri lainnya yang mempunyai sifat-sifat hamper sama, yaituKlebsiella danEnt er obact er (Fardiaz,1992) Berikut beberapa uji Biokimia yang digunakan untuk identifikasi bakteri antara lain : a. Indol Media ini biasanya digunakan dalam indetifikasi yang cepat.Hasil uji indol yangdiperoleh negatif karena tidak terbentuk lapisan (cincin) berwarna merah muda padapermukaan biakan, artinya bakteri initidak membentuk indol dari tryptopan sebagaisumber carbon, yang dapat diketahui dengan menambahkan larutan kovacs. Asamamino triptofan merupakan komponen asam amino yang lazim terdapat pada protein,sehingga asam amino ini dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganisme akibatpenguraian protein(Anonim, 2008) b.MR-VP 1.Uji MR Hasilnya positif, terjadi perubahan warna menjadi merah setelah ditambahkanmethyl red. Artinya, bakteri ini mengahasilkan asam campuran (metilen glikon) dariproses fermentasi glukosa yang terkandungdalam medium MR-VP. Terbentuknyaasam campuran pada media akan menurunkan pH sampai 5,0 atau kurang, oleh karenaitu bila indikator metil ditambahkan pada biakan tersebut dengan pH seredndah itu makaindikator tersebut menjkadi merah. Hal ini menandakan bahwa bakteri ini peragi asamcampuran(Anonim, 2008)

2.Uji VP Hasilnya negatif, karena tidak terbentuk warna merah pada medium setelahditambahkan -napthol dan KOH, artinya hasil akhir fermentasi bakteri ini bukan asetilmetil karbinol (asetolin)(Anonim, 2008) c.SIM Hasil yang diperoleh pada uji ini adalah positif, hal ini terlihat adanya penyebaranyang berwarna putih seperti akar disekitar inokulasi. Hal ini menunjukan adanyapergerakan dari bakteri yang diinokulasikan, yang berarti bahwa bakteri ini memilikiflagella. Dari uji juga terlihat ada warna hitam, yang berarti bakteri ini menghasilkanHidrogen Sulfit (H2S) (Anonim, 2008) d.Simmons Citrate Hasil uji sitrat yang diperoleh negatif, yang ditandai dengan tidak terjadinyaperubahan warna. Artinya bakteri ini tidak mempunyai enzim sitrat permiase yaitu enzimspesifik yang membawa sitrat ke dalam sel(Anonim, 2008) e.TSIA Pada uji TSIA warna media slant berubah menjadi merah karena bakteri bersifatbasa ini menandakan bahwa bakteri ini tidak memfermentasi laktosa dansukrosa(Anonim, 2008) Pembentukan gas positif ini hasil dari fermentasi H2 dan Co2 dapat dilihat daripecahnya dan terangkatnya agar. Pembentukan H2S positif ditandai dengan adanyaendapan berwarna hitam, endapan ini terbentuk karena bakteri mampu mendesulfurasiasam amino dan methion yang akan menghasilkan H2S, dan H2S akan bereaksidengan Fe++ yang terdapat pada media dan menghasilkan endapan hitam(Anonim, 2008) Pada media daerah butt media berubah berwarna kuning ini menandakan bakteri memfermentasi glukosa. Media ini biasanya digunakan untuk membedakan Salmonelladan Shigella dengan bakteri Gram negatif bentuk batang lainnya bedasarkan pola fermentasi penghasil hydrogen sulfide. Untuk pengamatan pola-pola pengunaankarbohidrat. TSIA agar mengadung laktosa dan sukrosa dalam konsentrasi 1%, glukosa0,1% dan phenol red sebagai indicator yang menyebabkan perubahan warna dari merahorange menjadi kuning dalam suasana asam. TSIA juga mengandung natrium trisulfat,yaitu suatu substrat untuk penghasil H2S, ferro sulfat menghasilkan FeS (precipitat),bewarna hitam untuk membedakan bakteri H2S dengan bakteri-bakterinya(Anonim, 2008) f.Uji gula-gula(Glukosa, Laktosa, Sukrosa dan Manitol) Uji ini dilakukan untuk mengindetifikasi bakteri yang mampu memfermentasikankarbohidrat. Pada uji gula-gula hanya terjadi perubahan warna pada media glukosayang berubah menjadi warna kuning, artinya bakteri ini membentuk asam darifermentasi glukosa. Pada media glukosa juga terbentuk gelembung pada tabungdurham yang diletakan terbalik didalam tabung media, artinya hasil fermentasiberbentuk gas(Anonim, 2008)