BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Sputum
Pewarnaan diferensial adalah proses penerapan lebih dari satu jenis
pewarna pada sampel, seperti pewarnaan gram dan pewarnaan tahan asam dan
Pewarnaan khusus, di sisi lain, mengacu pada pewarnaan sel tertentu atau daerah
bakteri yang sulit diwarnai dengan pewarnaan biasa. Bagian tertentu dari germinal
atau sel germinal yang sulit diwarnai diwarnai dengan menggunakan pewarna
khusus (Noverita, 2009).
Bakteri tahan asam memiliki kandungan lipid yang sangat besar, sehingga
tidak mungkin diwarnai menggunakan proses pewarnaan standar. sebagai
gantinya, noda tahan asam harus digunakan. Spesies bakteri khusus ini dikenal
sebagai bakteri tahan asam (BTA) karena dapat mempertahankan warna awal
bahkan setelah dibersihkan dengan pemutih. Sebagian besar anggota genus bakteri
ini berbahaya bagi manusia, seperti Mycobacterium tuberculosis. Penderita TB
dapat mengisolasi bakteri Mycobacterium tuberculosis dari dahaknya. Jika
pewarnaan menghasilkan bakteri TBC, ia akan bereaksi dengan warna kemerahan.
Itu tidak hanya menyerang manusia tetapi juga hewan lain seperti marmut dan
monyet. Udara yang masuk ke saluran pernafasan dapat menjadi sumber
penularan (Pelczar dan Chan, 1988).
Bakteri tahan asam adalah bentuk bakteri yang hanya bisa diwarnai dengan
fenol dan panas daripada dengan noda anilin biasa. Bakteri ini hanya dapat
diwarnai dengan BTA (Acid-Fast Stain) karena memiliki dinding sel seperti lilin
karena banyaknya bahan lipoid yang dikandungnya. Anti air dan tidak dapat
ditembus noda dan zat lain dalam cairan atau larutan air, dinding sel bersifat
hidrofobik. Bakteri ini dikenal sebagai bakteri tahan asam karena dapat menahan
dekolorisasi asam selama prosedur pewarnaan (Ball, 1997).
Mycobacterium tuberculosis Gram-positif berbentuk batang panjang atau
pendek, tidak memiliki spora dan enkapsulasi, berkembang lambat (2-8 minggu),
dan lebih menyukai kisaran suhu antara 37 hingga 38 °C, yang khas untuk orang
dewasa. Nutrisi ekstra dibutuhkan untuk pertumbuhan, seperti darah, kuning telur,
serum, dan senyawa tertentu. Basil tuberkel dalam jaringan bakteri berbentuk
batang lurus dengan ukuran berkisar antara 0,4 hingga 3 m. Morfologi coccoid
dan filamen pada media sintetik tampaknya berbeda antar spesies. Terlepas dari
perawatan yodium, mereka tidak dapat segera dihilangkan warnanya dengan
alkohol setelah diwarnai dengan pewarna dasar. Pewarnaan Ziehl-Neelsen dapat
digunakan untuk mewarnai tuberkel secara umum. Media non-selektif dan selektif
dapat digunakan untuk menumbuhkan mikobakteri. Antibiotik hadir dalam media
selektif untuk menghentikan kontaminan bakteri dan jamur agar tidak tumbuh
terlalu cepat. Media agar semisintetik (7H10 dan 7H11), media telur berinsulasi
(Lowenstein-Jensen), dan media kaldu (broth media) adalah tiga formulasi
generik yang masing-masing dapat digunakan untuk media nonselektif dan
selektif (Jawetz et al., 2001).
Menggunakan metode pewarnaan Ziehl Neelson, Kinyoun Gabber, dan
fluorochrome, bakteri tahan asam dapat terlihat. Dimungkinkan untuk
mengumpulkan dahak (sekresi paru-paru atau air liur) kapan saja untuk analisis
TB. Ada tiga bentuk dahak yang berbeda:
 Sputum pagi adalah sputum yang dikeluarkan oleh pasien segera setelah ia
bangun di pagi hari.
 Spot sputum adalah sputum yang dihasilkan saat itu.
 Collection sputum: sputum yang dikeluarkan dan disimpan selama 24 jam.
Setelah dikumpulkan, dahak dapat disimpan di lemari es selama seminggu.
Memanfaatkan 0,3% karbol fuchsin, 3% asam alkohol, dan 0,3% metilen
biru merupakan metode pewarnaan Ziehl-Neelsen. AFB adalah
mempertahankannya dalam aplikasi warna awal, yaitu carbol fuchsin. Fuxin dasar
yang disebut carbol fuchsin dilarutkan dalam larutan fenol 5%, Sediaan dahak
berwarna merah tua dari larutan ini. Selama proses pemanasan, fenol digunakan
sebagai pelarut untuk membantu menyaring pewarna ke dalam sel bakteri.
Pemanasan bertujuan untuk memperbesar pori-pori pada lemak BTA sehingga
carbol fuchsin dapat masuk saat BTA dicuci dengan larutan pemutih asam alkohol
sehingga zat warna awal tidak mudah hilang. Pori-pori kemudian ditutup dan
blansing dihentikan dengan mencuci bakteri di bawah air mengalir. Sedangkan
bakteri yang tidak tahan asam segera melarutkan carbol fuchsin, meninggalkan sel
bakteri tidak berwarna, BTA akan terlihat merah. Bakteri yang tidak tahan asam
akan menjadi biru ketika pewarna kedua metilen biru, telah ditambahkan (Lay,
1994).
Karena teknik Ziehl-Neelsen bersifat langsung dan memiliki sensitivitas
dan spesifisitas yang tinggi, teknik ini sering digunakan. Spesifisitas dan
sensitivitas teknik fluorochrome cukup tinggi. Bakteri yang diwarnai
menunjukkan warna yang kontras dengan lingkungannya dan tidak memerlukan
lensa pembesar dengan perbesaran hingga 1000 kali (Kurniawati et al., 2005).
Setiap larutan kimia asam alkohol 3%, karbol fuchsin 0,3%, dan biru
metilen 0,3% memiliki tujuan tertentu. Misalnya, asam alkohol dapat digunakan
sebagai pencahar. Carbol fuchsin membuka lapisan lilin dan membuatnya lentur,
memungkinkan cat menembus ke dalam sel bakteri M. tuberculosis. Ketika
bakteri terpapar metilen biru, yang bertindak sebagai cat yang berlawanan, bakteri
mempertahankan warna merahnya dengan latar belakang biru atau hijau (Jutono et
al., 1980).

B. Semen / Sel Sperma

Sel sperma pria yang disebut spermatozoa memiliki peran dalam
pembuahan. Sel sperma dapat bergerak dengan bebas karena terdiri dari kepala
sperma dan ekor sperma, tidak seperti kebanyakan sel yang membentuk makhluk
multisel. Sperma memiliki sitoplasma minimal dan penuh dengan kromosom di
kepala. seperti dengan sel7, Sel sperma dari jenis kelamin lain bersifat haploid dan
memiliki separuh kromosom yang unik untuk spesiesnya (Chu, 2013).
Kepala sperma dan ekor sperma (flagellum) membentuk struktur dasar
sperma. Selaput plasma sperma yang menutupi kepala dan ekor sperma berfungsi
untuk melindungi sel sperma dari pengaruh luar. Protamin yang diproduksi
selama spermatogenesis menggantikan histon yang bergabung dengan inti sperma,
yang ditemukan di kepala sperma. Inti ini terbuat dari DNA (asam
deoksiribonukleat) sebagai intinya yaitu Cells Nuclear Envelope (NE), yang
terdiri dari Nuclear Pore Complex (NPC)untuk menutupi nucleus yang
disekresikan selama proses spermatogenesis. Lapisan berikutnya, teka
perinuklear, juga dikenal sebagai matriks perinuklear, penting untuk melindungi
nukleus. Keterkaitan disulfida, yang secara struktural stabil dan terhubung ke
protein dengan banyak molekul protein lainnya, membentuk selubung keras yang
membentuk matriks perinuklear. Selain menjaga kepala sel sperma, matriks
perinuklear dapat dipisahkan menjadi tiga bagian yang masing-masing
memainkan peran khusus dalam pembuahan (Jonge, 2006).
Suhu, konsentrasi semen, fosfat anorganik, pH, kation dan anion, hormon
tekanan osmosis, agen antibakteri, dan gas adalah beberapa variabel yang
mempengaruhi metabolisme spermatozoa. Spermatozoa yang telah didinginkan di
bawah suhu tubuh menunjukkan motilitas yang berkurang, yang akhirnya berhenti
sama sekali ketika suhu beberapa derajat di atas titik beku. Meskipun motilitas
sperma berhenti total, metabolisme perlahan berlanjut (Susilawati, 2011).
Karena konsentrasi sel tidak berpengaruh pada respirasi dan glikolisis,
dampak kepadatan sel tidak dapat diprediksi. Konsentrasi ion kalium yang lebih
besar, penghambat alami dan komponen pengatur metabolisme, menyebabkan
pengaruh konsentrasi sel pada konsumsi oksigen daripada pasokan oksigen yang
terbatas dalam konsentrasi yang lebih padat (Susilawati, 2011).
a) Pemeriksaaan Sperma
Kualitas sperma seseorang harus ditentukan agar dapat melakukan
pembuahan, oleh karena itu analisis sperma merupakan langkah yang krusial. Dari
makroskopik ke mikroskopis hingga pemeriksaan kimiawi, sperma diperiksa.
Pertama, instruksi tentang cara mengumpulkan sampel diberikan kepada individu
sebelum melakukan tes sperma. Subyek harus berpuasa selama 3-7 hari untuk
mengeluarkan sperma. Masturbasi digunakan untuk sampel. Koitus interruptus,
penghentian tindakan seksual, tidak disarankan karena dapat mempengaruhi
hasilnya. Wadah pot kaca bersih dengan bukaan berulir lebar harus digunakan
untuk penyimpanan sampel. Sampel harus diperiksa jika disertakan Setelah
penundaan, sampel hanya stabil selama 1 jam setelah pencairan (Cheesbrough,
2006).
Karena sampel sperma memiliki risiko yang sangat tinggi terhadap
organisme patogen berbahaya seperti Human Immunodeficiency Virus (HIV),
Virus Hepatitis, dan Herpes Simplex Virus (HSV), maka harus ditangani dengan
benar dan hati-hati (WHO, 2010) dan juga menjadi kriteria pengujian sperma
secara khusus (Gandosoebrata, 2007).
1. Makroskopis Semen
a. Warna
Sperma normal berwarna putih keruh, mirip dengan cairan kanji. Ada
leukosit dalam sampel atau terlalu banyak sel sperma yang terkonsentrasi pada
rona putih. Rona kekuningan menunjukkan adanya infeksi. Jika cairan sperma
berwarna merah kecoklatan, ada pendarahan atau luka (hemospermia).
b. Kekentalan
Untuk menentukan jumlah waktu yang dibutuhkan sperma untuk
mencapai fase pergerakan yang ideal atau viskositas dinilai. Uji kekentalan
sperma yaitu dengan ukur panjang tetesan yang terbentuk menggunakan pipet
dan Setelah sampel sperma dicairkan adalah waktu yang tepat untuk viskositas
sperma diukur.
c. Volume sperma
Pengukuran volume sperma mencoba untuk menentukan apakah jumlah
ejakulasi masih dalam batas normal atau tidak; biasanya, volume sperma
normal berkisar antara 3 hingga 5 ml. Volume sperma diukur dengan
menggunakan Volume sampel sperma harus diukur dengan menuangkannya ke
dalam gelas ukur baru (Nieschlag, 2010).
d. Pengukuran pH
Cukup menggunakan kertas indikator pH untuk menentukan pH
sperma. Sperma biasanya memiliki nilai pH antara 6,0 dan 7,0. Jika nilai pH
yang terdeteksi lebih dari 8,0, kemungkinan terjadi infeksi atau sperma kotor
pada wadah penyimpanan. Pastikan sampel hanya mencakup sekresi prostat
atau azoospermia jika nilai pH sperma di bawah 6,0. Menurut kejadian ini
sering terjadi ketika epididimis tersumbat atau ada penyakit duktus yang
mempengaruhi derefen, fesikula seminalis, atau saluran ejakulasi (Nieschlag,
2010).
2. Mikroskopis Semen
a. Motilitas
Pengujian motilitas sperma mencoba mengukur proporsi sperma yang
bermigrasi tanpa hambatan setelah pencairan sampel. Teteskan 10–50 untuk
uji motilitas sperma, lalu tutup dengan kaca penutup 20 x 20 mm. Kemudian
diperiksa dengan mikroskop objektif 10x untuk memastikan apakah sperma
terdistribusi merata pada sediaan. terus mengevaluasi motilitas sperma pada
perbesaran objektif 40x (Cheesbrough, 2006). Menurut Nieschlag (2010),
motilitas sperma dapat dibagi menjadi:
1) PR adalah Progresif, yang menunjukkan bahwa sel sperma bermigrasi
dengan kecepatan tetap dan dalam jalur yang lurus dan teratur dengan
lebar yang sama sepanjang waktu.
2) NP adalah singkatan dari non-progresif, yang menunjukkan bahwa sperma
bergerak tidak teratur dan dalam arah yang terbatas (tetap diam).
3) IM adalah singkatan dari immotile, yang menunjukkan bahwa ada
kemungkinan flagel sel sperma akan berkembang menjadi cacat atau mati.
Gangguan motilitas dapat disebabkan oleh beberapa hal, antara lain
kurangnya energi yang dihasilkan oleh mitokondria, jumlah agen koagulasi
yang berlebihan dalam semen, yang menghambat pergerakan spermatozoa, dan
kerusakan struktur, terutama pada bagian ekor (flagel), yang merupakan satu-
satunya alat gerak spermatozoa. kerusakan pada ekor yang dimaksud dapat
berupa kerusakan tingkat ultrastruktural, seperti kerusakan membran
pembungkus ekor spermatozoa atau kerusakan aksonema (Nilani,
Eswaramohan and Balasubramaniam, 2012).
b. Viatilitas sperma
Untuk menyelesaikan studi motilitas sperma, tes vitalitas sperma
dilakukan. Pengujian vitalitas sperma untuk menentukan proporsi sel sperma
hidup dan mati memberikan bukti adanya sel sperma yang tidak bergerak.
Anda dapat memeriksa kesehatan sperma Anda dengan menyiapkan sediaan
yang lembab. Persiapan yaitu Memipet 50 µl sampel sperma dan
menambahkan 50 µl eosin 0,5% dibuat basah. Eosin digunakan untuk
mewarnai sel sperma secara supravital. Di bawah pembesaran 40x, preparat
yang telah selesai dilihat di bawah mikroskop. Sel yang tidak diwarnai dengan
eosin 0,5% akan menunjukkan sel sperma yang hidup, sedangkan sel yang
diwarnai dengan eosin akan menunjukkan sel sperma yang mati (Cheesbrough,
2006).
c. Hitung jumlah sperma
Analisis jumlah sperma digunakan sebagai prognosis karena
menunjukkan jika pembuahan berhasil saat berhubungan seks dengan
pasangan. Selain itu, jumlah sperma dapat digunakan sebagai cerminan dari
sistem epididimis dan duktus, yang keduanya memiliki persediaan sperma yang
sehat. Perhitungan jumlah sperma sangat penting karena menunjukkan
seberapa banyak sel sperma yang dikeluarkan dari epididimis melalui uretra
setelah ejakulasi diencerkan oleh cairan kelenjar aksesori. Jumlah total sperma
dalam ejakulasi dihitung dengan menggunakan jumlah sperma, yang dihitung
dengan mengalikan konsentrasi sperma dengan jumlah semen (Nieschlag,
2010).
Ruang hitung digunakan untuk menghitung jumlah sperma. Kamar
hitung Neubauer yang Disempurnakan biasanya yang digunakan. Sperma
diencerkan terlebih dahulu dengan menggunakan pereaksi hitungan sperma
atau alternatif lain dapat menggunakan air suling, dengan pengenceran yang
signifikan sebanyak 20x, sebelum perhitungan selesai. Selain itu, sperma yang
telah diencerkan dimasukkan ke dalam ruang hitung dan diperiksa di bawah
mikroskop dengan lensa objektif 40x (Nieschlag, 2010).
d. Pemeriksaan Morfologi Sperma
Untuk memeriksa struktur sel utama sperma yang mungkin dihasilkan
oleh testis, dilakukan analisis morfologi sperma. Tes ini mengevaluasi kepala
dan ekor sel sperma untuk menentukan kesehatannya. Sampel sperma dari
individu yang sehat akan menunjukkan perkembangan sel sperma yang sehat.
Membuat apusan sperma yaitu mengecatnya dengan cat Giemsa, dan
melihatnya di bawah mikroskop dengan pembesaran objektif 100x merupakan
metode yang digunakan untuk melakukan pemeriksaan ini (Cheesbrough,
2006).
 Daftar Pustaka
Cheesbrough,M. 2006. Laboratory Practice in Tropical Countries. Cambridge:
Cambridge University Press.
Chu, D.S , and Shakes D.C. 2013, “Spermatogenesis”. Adv. Exp. Med. Biol.
757:171-203.
Gandasoebrata. 2007. Penuntun Laboratorium. Jakarta : Dian Rakyat.
Jawetz, E., Melnick, J. L., Adelberg, E. A., 2001, Mikrobiologi Kedokteran, Edisi
XXII, diterjemahkan oleh Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran
Universitas Airlangga, 205-209, Penerbit Salemba Medika, Jakarta.
Kurniawati A, Risdiani E, Nilawati S, Prawoto, Raswana Y, Alisyabana B, et al.
Perbandingan Tan Thian Hok, Ziehl Neelsen dan Flurookom sebagai
metode Pewarnaan Hasil Tahan Asam untuk Pemeriksaan Mikroskopik
Sputum. Makara, kesehatan. 2005;29-33
Nieschlag E, Hermann B, Nieschlag S (eds) (2010). Andrology: male
reproductive health and dysfunction. Berlin: Springer.
Noverita, (2009), Identifikasi Kapang dan Khamir Penyebab Penyakit Manusia
pada Sumber Air Minum Penduduk pada Sungai Ciliwung dan Sumber Air
Sekitarnya. Vis Vitalis.
Pelczar, M. J., Chan, E. C. S., 1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta:
Universitas Indonesia Press.
Susilawati, T. 2011ᵇ. Spermatology. Universitas Brawijaya (UB) Press Malang,
ISBN: 978-602-8960-04-5.
..