LAMPIRAN I a. Komposisi Medium (MS) Murashige and Skoog Tabel 2 Komponen Makronutrien: NH4NO3 KNO3 CaCl2. 2H2O MgSO4.

7H2O KH2PO4 Mikronutrien: KI H3BO3 MnSO4.H2O ZnSO4. 7H2O Na2MoO4. 2H2O CuSO4. 5H2O CoCl2. 6H2O Na2EDTA FeSO4. 7H2O Vitamin dan asam amino Thiamin HCL Asam nikotinic Pyridoxin HCL Glycine Myo-inositol Sukrosa Agar Komposisi (mg/l) 1.650 1.900 332,2 370 170

0,83 6, 2 16,9 8,6 0,25 0,025 0,025 37,3 27,8

0,1 0,5 0,5 2,0 100 30 7 gr/l

(Hendaryono, 1994)

51

52
Pembuatan Larutan Stok Stok Makronutrien ditimbang garam makro (mg) NH4NO3 412,5 83,05 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O 92,5 KNO3 475 KH2PO4 42,5

ditambahkan 400 ml aquades steril ke dalam erlenmeyer berukuran 1 L

dimasukkan satu per satu garam makro yang telah ditimbang sambil diaduk di atas magnetic stirrer

ditambahkan aquades steril hingga volume menjadi 1 L

ditutup dengan alumunium foil dan diberi label 100 ml/L

disimpan dalam refrigerator

Stok makronutrien

53
Stok Mikronutrien ditimbang garam mikro (mg) H3BO3 CoCl2.6H2O CuSO4.5H2O MnSO4.H2O KI Na2MoO4.2H2O ZnSO4.7H2O 1,55 0,00625 0,00625 4,225 0,2075 0,0625 2,15

ditambahkan 400 ml aquades steril ke dalam erlenmeyer berukuran 1 L

dimasukkan satu per satu garam mikro yang telah ditimbang sambil diaduk di atas magnetic stirrer

ditambahkan aquades hingga volume menjadi 500 ml

ditutup dengan alumunium foil dan diberi label 10 ml/L

disimpan dalam refrigerator

Stok mikronutrien

54
Stok Zat Besi ditimbang senyawa besi (mg) Na2EDTA 9,325 6,95 FeSO4.7H2O

dilarutkan ke dalam 75 ml aquades steril diatas magnetic stirrer

ditekan tombol panas untuk memudahkan pelarutan

ditambahkan aquades steril hingga volume 100 ml

ditutup dengan alumunium foil dan diberi label 5 ml/L

disimpan dalam refrigerator

Stok Zat Besi

55

Stok Vitamin

ditimbang senyawa organik (mg) dengan massa dari massa MS penuh: Glycine 0,5 Asam nikotin 0,125 Pyridoksin HCl 0,125 Tiamin HCl 0,025 Mio inositol 2,5

ditambahkan 50 ml aquades steril ke dalam erlenmeyer berukuran 100 ml

dimasukkan satu per satu senyawa organik yang telah ditimbang sambil diaduk di atas magnetic stirer

ditambahkan aquades steril hingga volume 100 ml ditutup dengan alumunium foil dan diberi label 1 ml/L disimpan dalam refrigerator

Stok Vitamin

56

Stok Zat Pengatur Tumbuh IAA

10 mg hormon IAA

10 mg hormon BAP

ditambahkan 50 ml aquades steril ke dalam erlenmeyer berukuran 100 ml ditambahkan 5 tetes NaOH sambil diaduk di atas magnetic stirer

ditambahkan aquades steril hingga volume 100 ml ditutup dengan alumunium foil dan diberi label 100 ppm disimpan dalam refrigerator

Stok IAA

Stok BAP

57

Pembuatan Medium MS

500 ml aquades steril dituang ke dalam erlenmeyer berukuran 1 L ditambah larutan stok yang telah dibuat 100 ml stok makronutrien 10 ml stok mikronutrien 5 ml stok besi 1ml stok vitamin IAA sesuai konsentrasi

ditambahkan larutan 30 gr gula diukur pH larutan 5,7-5,8 ditambahkan aquades steril hingga volume 1 L diaduk diatas magnetic stirer dipindahkan ke dalam panci ditambahkan 7 gr agar-agar

58

dididihkan sambil diaduk sampai agar-agar larut dituangkan media sekitar 15 ml/botol ke dalam botol kultur dalam keadaan masih cair ditutup rapat dengan penutup plastik diautoklaf pada suhu 121oC, tekanan 1,5 atm selama 15 menit diberi label sesuai perlakuan dan disimpan di dalam ruang steril Medium MS