TAHAP-TAHAP KULTUR JARINGAN

PERSIAPAN
Pemilihan dan sterilisasi eksplan Pembuatan dan sterilisasi media

PENANAMAN EKSPLAN

INKUBASI

SUB-KULTUR

INKUBASI

DST
 MEMBUAT MEDIA

MEMBUAT LARUTAN STOK

MERACIK MEDIA DARI LARUTAN STOK

 FORMULASI MEDIA MS-1962

Nama stok Senyawa dalam Konsentrasi Konsentrasi Vol. lart .stok /

lart. stok dalam media dalam lart. stok liter media (ml)
MS (mg/l) (mg/l)

A NH4NO3 1.650 16.500 100

B KNO3 1.900 19.000 100
C CaCl2. 2H2O 440 44.000 10
D KH2PO4 170 1.700 100
E H3BO3 6,2 6.200 1
Na2MoO4.7H2O 0,25 250
CoCl2.6H2O 0,025 25
KI 0,83 830
Nama stok Senyawa dalam Konsentrasi Konsentrasi Vol. lart .stok /
lart. stok dalam media dalam lart. stok liter media (ml)
MS (mg/l) (mg/l)
F MnSO4.7H2O 16,9 3.380 5
ZnSO4.7H2O 8,6 1.720
MgSO4.7H2O 370 74.000
CuSO4.7H2O 0,025 5
G FeSO4.7H2O 27,8 2.780 10
Na2EDTA 37,3 3.730
Vitamin Thiamin-HCl 0,1 100 1
Piridoksin-HCl 0,5 500
Asam nikotinal 0,5 500
(Glisin) 2,0 2.000
Mioinositol Mioinositol 100 5.000 20

SUKROSA 30.000
AGAR 7.000 – 8.000
 MEMBUAT LARUTAN STOK

Menyiapkan beaker-glass ukuran 1 liter

Isi dengan 500 ml akuades
Timbang dan masukkan kompenen bahan satu per satu agar tidak mengendap
Tambahkan air sampai volume 1 liter
KHUSUS UNTUK STOK G :
FeSO4 dilarutkan dalam 400 ml akuades
Na2EDTA dilarutkan dalam 400 ml akuades , dipanaskan
Setelah homogen, dicampur, tambah akuades sampai 1 l
MERACIK MEDIA DARI LARUTAN
STOK
Larutan stok diukur, dimasukkan satu per
satu.

Masukkan gula, diaduk dengan stirer

Diukur pH, sampai 5,8

Jika diperlukan ditambahkan ZPT atau

bahan lain

Tambahkan agar, diaduk sambil

dipanaskan sampai mendidih
Dimasukkan dalam botol yang telah
disterilkan

Ditutup dengan alfo atau plastik tahan

panas, diberi penguat karet gelang
disterilisasi dalam autoklaf dengan suhu
120 Oc, tekanan 1,1 – 1,3 kg/cm2, 20
menit
setelah dingin , disimpan dalam ruang ber-
AC (24 – 26 oC) selama 3 – 4 hari

Bila tidak kontam dapat digunakan

STERILISASI
STERILISASI ALAT & AKUADES
1. Alat gelas, alat logam, alfo : dengan udara
kering dan panas , dimasukkan oven 130 –
170oC, 2 – 4 jam
2. Alat logam : Direndam dalam etil-alkohol 95%,
kemudian dipanaskan dalam api
3. Botol kultur, tutup botol, pipet, akuades :
dengan autoklaf 10~15 min. at 121 ℃, 15psi (or
1.06 kg cm-2)
 STERILISASI MEDIA TANAM

autoklaf

filter

mikrowave
 STERILISASI MEDIA DENGAN
AUTOKLAF

Media dimasukkan dalam gelas, ditutup dengan

kapas, alfo atau plastik tahan panas
15 psi, 121℃, dalam waktu 15 – 25 menit
sesuai kebutuhan
Tekanan dan temperatur tinggi dapat akibatkan
penguraian karbohidrat dan senyawa termolabil
lain
 STERILISASI DENGAN FILTER

Untuk komponen termolabil(karbohydrat,

protein, amino acid, ekstrak tanaman, hormon)
Menggunakan filter millipore (porositas< 0.2
μm)
Tempat zat harus disterilisasi lebih dahulu
dalam autoklaf
 STERILISASI DENGAN
MIKROWAVE

Dengan daya 700W

Waktu untuk medium cair 5 menit untuk 100ml, 10 menit untuk 250 – 500
ml, 15 menit untuk 1000mL, 30 menit untuk 2000mL, 50 menit untuk
3000mL
Menghasilkan panas yang lebih rendah, membutuhkan energi yang lebih
sedikit,
Lebih murah dan mudah digunakan
 STERILISASI EKSPLAN

Tidak menggunakan panas dan tekanan yang

ekstrem
Menggunakan larutan sterilan (disinfektan) :
yang paling umum 1% (v/v) NaOCl, 70%
Etanol, or 10% H2O2 + Tween 20; atau
dapat menggunakan pemutih komersial 20 –
100%
Dapat dengan mencuci menggunakan
detergen lembut (khususnya organ berkayu
atau umbi), digojok selama 3 – 10,
direndam dalam larutan sterilan pada
lingkungan steril, kemudian dibilas dengan
akuades steril minimal 3 kali
 STERILISASI LINGKUNGAN

Sumber kontaminan : debu, rambutm tangan, pakaian, pernafasan (bicara,

bersin)
Cuci tangan dengan air dan alkohol
Jangan menyentuh langsung bagian-bagian di dalam LAF
Disinari UV sebelum LAF dan ruang tanam digunakan
Menggunakan blower udara dalam LAF
Silahkan baca tahapan kultur jaringan pada pisa
ng di web berikut ini :
https://www.slideshare.net/sathes32/tissue-culture-techniques-of-banana