A. Komponen Media
Komposisi media tanam kultur jaringan terdiri dari sejumlah unsur yang
diperlukan untuk pertumbuhan eksplan dalam lingkungan buatan, unsusr-
unsur ini umumnya terdapat di tanah. Komponen media kultur jaringan dapat
dikelompokkan kedalam :
1. Unsur makro, terdiri dari unsur-unsur: nitrogen (N), fosfor (P), kalium
(K), kalsium (Ca), magnesium (Mg), dan sulfur (S)
2. Unsur mikro, terdiri dari: boron (B), cobalt (Co), tembaga (Cu), Iodium
(I), besi(Fe), mangan (Mn), molybdenum (Mo), dan seng (Zn)
3. Vitamin (vitamin B1) dan Myo-inositol, pada beberapa formula media
ditambahkan niasin dan piridoksin (B6)
4. Gula, sebagai sumber energi
5. Zat pengatur tumbuh, untuk merangsang dan mengontrol pertumbuhan
6. Agar, sebagai pemadat media
7. Arang aktif, sebagai penyerap senyawa racun
8. Air, sebagai pelarut
Terdapat banyak formula media tanam kultur jaringan yang pada umumnya
diberi nama sesuai dengan nama penemunya, antara lain:
1. Murashige dan Skoog (MS), memiliki kisaran pemakaian yang paling
luas
2. Gamborg atau B-5, cocok untuk kultur suspensi sel kedele dan legum
3. Vacin Went (VW), digunakan untuk media anggrek
4. Nitsch dan Nitsch, digunakan untuk kultur tepung sari dan kultur sel
5. Schenk dan Hildebrandt (SH) digunakan untuk media tanam dikotil
6. Woody Plant Medium (WPM) digunakan untuk media tanaman berkayu
1. MnSo4.4H2O
2. ZnSO4.7H2O
3. H3BO3
4. KI
5. Na2MoO4.2H2O
6. CoCl2.6H2O
7. CuSO4.5H2O
A. Menyatakan Konsentrasi
Konsentrasi bahan dalam media atau larutan stok dapat dinyatakan dalam:
a. ppm (part per million) atau sepersejuta
b. mg/l
c. M (molaritas) = mol/l = bobot molekul (g/l)
Dimana: 1 ppm = 1 mg/l
1 M = 103 mM = 106 M
1 M = bobot molekul x1000 mg/l
B. Contoh Perhitungan
Soal 1
Terdapat larutan stok NH4NO3 dengan konsentrasi 10 kali konsentrasi media.
Jika kita akan membuat 2 liter media, berapakah volume larutan stok
NH4NO3 yang diambil?
Jawaban:
Vs x Cs = Vm x Cm
Vs x 10 Cm = 2000 ml x Cm
Vs = 2000 ml/10 = 200 ml
Soal-2
Berapakah banyaknya bahan kimia ZPT Benzil Adenin (BA) yang harus
ditimbang untuk membuat 200 ml larutan stok BA yang berkonsentrasi 1 mM
(BM BA= 225)?
Jawaban:
Soal-3
Jawaban
LEMBAR LATIHAN
1. Apakah yang dimaksud dengan larutan stok dan apakah tujuan pembuatan
larutan stok?
2. Sebutkanlah komponen-komponen media kultur jaringan dan jelaskan
fungsi tiap-tiap komponennya!
3. Mengapakah bahan-bahan kimia dilarutkan secara terpisah ada yang
individual, ada pula yang kelompok?
4. Bila kita hendak membuat media dalam kurun waktu 2 bulan sebanyak 20
liter media MS dan bila setiap kali media yang dibuat sebanyak 2 liter,
berapakah kebutuhan bahan NH4NO3 yang harus dibuat stok untuk
memenuhi kebutuhan media tersebut? (konsentrasi NH4NO3 dalam media
MS = 1650 mg/l)
5. Berapakah berat CuSO4.5H2O yang harus ditimbang untuk membuat
larutan stok CuSO4.5H2O 100 ml yang berkonsentrasi 2,5 mg/l
(konsentrasi CuSO4.5H2O dalam media = 0,025 mg/l)?
6. Jelaskanlah cara menimbang bahan kimia menggunakan timbangan
elektrik/sartorius yang Anda ketahui!
7. Jelaskanlah cara melarutkan bahan kimia dengan magnetic hot plate stirer!
8. Jelaskanlah cara membuat larutan stok NH4NO3 yang bervolume 500 ml
dan konsentrasimya 20 kali konsentarsi media MS!
9. Jelaskanlah cara menyimpan larutan stok!
10. Jelaskanlah hal-hal apa saja yang harus diperhatikan dalam penyimpanan
media!
LEMBAR KERJA
A. Tujuan
C. Langkah Kerja
A. Tujuan
1. Kalkulator
2. Alat tulis
3. Komposisi larutan-larutan stok pada media MS
C. Langkah Kerja
1. Tentukanlah konsentrasi masing-masing stok yang akan dibuat:
a. Stok makro (A, B, C, D, E) = 10 kali konsentrasi dalam media
b. Stok mikro (F) dan Fe (G) = 100 kali konsentrasi dalam media
c. Stok vitamin (H) = 10 kali konsentrasi dalam media
2. Isilah tabel perhitungan kebutuhan bahan untuk pembuatan larutan stok
di bawah ini
A. Tujuan
C. Langkah Kerja
A. Tujuan
C. Langkah Kerja
LEMBAR EVALUASI
SUB PEROLEHAN
NO KRITERIA UNJUK KERJA
KOMPETENSI YA TIDAK
DAFTAR PUSTAKA
Livy W.G. 1995. Teknik Kultur In Vitro dalam Hortikultura. Jakarta. Penebar
Swadaya
Trigiano RN dan Denis J Gray. 1996. Plant Tissue Culture Concepts and
Laboratory Excercises. CRC Press, Inc., 2000 Coorporae Blvd., Boca