MEDIUM KULTUR JARINGAN

Tumbuhan

Ari Indrianto
Endang Semiarti

Laboratrium Bioteknologi
Fakultas Biologi UGM
2020
 MEDIUM KULTUR JARINGAN
secara umum medium kultur jaringan harus mengandung unsur-unsur sebagai berikut

Garam-garam anorganik:
Unsur makro: C, H, O, N, S, P, K, Ca dan Mg
Unsur Mikro: Cl, B, Mo, Zn, Cu, Fe dan Co
Zat-zat organik
Gula Myo-Inositol
Vitamin Asam-asam amino
Zat pengatur tumbuh
Substansi organik komplek:
Air kelapa Ekstrak buah-buahan
Ekstrak yeast Pepton
Tripton Hydrolisat kasein, dll
Bahan pemadat
Agar-agar Gelrite
Phytagel Sea Plaque Agarose, dll
pH: 5,2-6,3
Bahan tambahan lain misalnya arang aktip.
Zat pengatur tumbuh yang umum digunakan pada kultur jaringan

Zat pengatur tumbuh Singkatan B M

Abscisic acid ABA 264,3
Indole-3-acetic acid IAA 175,2
Naphthaleneacetic acid NAA 186,2
2,4-Dichlorophenoxyacetic acid 2,4-D 221,04
Indole-3-butyric acid IBA 203,2
6-Furfurylaminopurine Kinetin 215,2
6-Benzyl-aminopurine BA 225,2
N6(∆2-isopentenyl)-adenine 2iP 203,3
Trans-6-(4-hydroxy-3-methyl-2- Zeatin 219,2
butenyl)amino purine
Gibberelic acid GA3 346,4
AUXIN
Pembentukan akar pada cutting

Embryogenesis

Pembentukan akar adventiv

pada kalus

Inisiasi kalus pada dikotil

Pembentukan tunas adventiv

Proliferasi tunas aksiler

CYTOKININ

Efek auxin + sitokinin

MEDIUM KULTUR IN VITRO

MURASHIGE & SKOOG (MS)

Tim Dosen Pengampu MK TKIV F.Biologi UGM

2021
Mengapa perlu Kultur In Vitro?
◼ Kebutuhan manusia akan tanaman budidaya
◼ Teknologi perbanyakan tanaman secara konvesional tidak
efesien
◼ Kebutuhan nutrisi tanaman telah diketahui dan secara
umum hampir sama, medium buatan dapat dibuat
◼ Medium yang tepat akan meningkatkan budidaya
tanaman, kultur in vitro menjadi lebih efesien dan efektif
◼ Berbagai komposisi medium untuk tanaman berbeda;
medium MS, NP, VW untuk tanaman kecil/herbaseus
(anggrek, tembakau, umbi-umbian, rimpang), untuk
tanaman berkayu misal DKW Basal Salt Mixture, Lloyd
& McCown’s Woody Plant Basal Salt Mixture, DCR
Basal Salt Mixture (jati, bambu, mawar).
Tim Dosen Pengampu MK TKIV
F.Biologi UGM 2021
 Resep Medium Murashige & Skoog
(MS, 1962)

BAHAN STOK UNTUK 1 L

Makronutrien jumlah (mg/L)
Amonium nitrat NH4NO3 1.650
Potassium nitrate KNO3 1.900
Calsium Chloride CaCl2.2H2O 440
Magnesium sulfate MgSO4.7H2O 370
Kalium Phosphat KH2PO4 170

Besi mg/200 mL (40X) ambil 5 mL stok

Na2EDTA 1.492 (37,3)
FeSO4.7H2O 1.112 (27,8)

Mikronutrien mg/100 mL (100X) ambil 5 mL stok

Manganese sulfate MnSO4.H2O 2.230 (22,3)
Zink Sulfate ZnSO4.4H2O 860 (8,6)
Borat Acid H3BO3 620 (6,2)
Potassium Iodida KI 83 (0,83)
Tim Dosen Pengampu MK TKIV F.Biologi UGM 2021
◼ MEDIUM MS (Lanjutan)
Mikronutrien mg/100 mL (100X) ambil 5 mL stok
Natrium Molibdat NaMoO4.2H2O 25 (0,25)
Cuprum sulfate CuSO4.5H2O 2,5 (0,025)
Cobalt Chloride CoCl2.6H2O 2,5 (0,025)

Vitamin mg/200 mL (50X) ambil 5 mL stok

Glycine 100 (2)
Nicotinic Acid 25 (0,5)
Pyridoxine-HCl 25 (0,5)
Thiamine-HCl 5 (0,1)

Zat Pengatur Tumbuh

2-ip (1 – 5) µM
NAA (1 – 5) µM
2,4-D (1 – 10) ppm

Myo-Inositol 100 mg
Sukrosa 30.000 mg
Agar 8.000 – 10.000 mg
pH Tim Dosen Pengampu MK TKIV 5,6 – 6,3
F.Biologi UGM 2021
 BAHAN

BAHAN KIMIA LARUTAN STOK BESI,

MAKRONUTRIEN, MYO- VITAMIN, MIKRONUTRIEN,
INOSITOL, SUKROSA, DAN DAN ZAT PENGATUR
AGAR TUMBUH

Tim Dosen Pengampu MK TKIV

F.Biologi UGM 2021
 PEMBUATAN MEDIUM

-Makronutrien
-Stok : DILARUTKAN
-Mikronutrien
-Vitamin
-Besi akuades
-Myo-Inositol PENGUKURAN pH
-Sukrosa/Sumber C
DIPANASKAN &
AGAR DILARUTKAN
-MEDIUM 0 (TANPA ZPT) DENGAN BAIK
-MEDIUM + ZPT:
-ZPT TUNGGAL; 2,4-D
-KOMBINASI ZPT;
2-ip + NAA, BAP + GA, dll
-ZAT ADIFTIF LAINNYA BOTOL-BOTOL
MEDIUM

LAF
STERILISASI
BOTOL-BOTOL
MEDIUM STERIL
DISIMPAN BAIK

DISIMPAN BAIK Tim Dosen Pengampu MK TKIV

F.Biologi UGM 2021
 Cara Kerja

MAKRONUTRIEN MASUKKAN KE DALAM

DITIMBANG ERLENMEYER
LARUTKAN SATU PERSATU
DALAM 500 mL AKUADES

Tim Dosen Pengampu MK TKIV

F.Biologi UGM 2021
 KEMUDIAN DIMASUKKAN KE
MASING-MASING LARUTAN STOK MEDIUM SATU PER SATU
DIAMBIL DENGAN SRYNGE

DILARUTKAN

Tim Dosen Pengampu MK TKIV

F.Biologi UGM 2021
 TIMBANG
MYO-INOSITOL TIMBANG SUKROSA

MASUKKAN KE MEDIUM
DAN LARUTKAN SATU
PER SATU
Tim Dosen Pengampu MK TKIV
F.Biologi UGM 2021
UNTUK PEMBUATAN MEDIUM
MS + ZPT

KEMUDIAN DILARUTKAN LARUTAN STOK ZPT (MISAL :

DALAM MEDIUM MS 2,4-D) DIAMBIL DENGAN
SRYNGE SESUAI DENGAN
KONSENTRASI YANG
DIINGINKAN

Tim Dosen Pengampu MK TKIV F.Biologi UGM 2021

PENGUKURAN pH

UKUR pH 5,6 – 6,3

pH INDIKATOR UNIVERSAL

pH METER (AKURASI TINGGI)

Tim Dosen Pengampu MK TKIV

F.Biologi UGM 2021
 Penambahan Agar

MASUKKAN KE DALAM ERLENMEYER

TIMBANG AGAR

PELARUTAN SAMBIL
DIPANASKAN DAN DIADUK

Tim Dosen Pengampu MK TKIV F.Biologi UGM 2021

 PEMINDAHAN MEDIUM KE BOTOL
KULTUR

DITUTUP RAPAT DENGAN

DITUANG SECARA BERHATI-HATI ALUMUNIUM FOIL

Tim Dosen Pengampu MK TKIV

F.Biologi UGM 2021
 STERILISASI MEDIUM
MASUKKAN KERANJANG BERISI BOTOL
KE DALAM AUTOCLAVE LALU TUTUP
RAPAT AUTOCLAVE. KEMUDIAN
STERILISASI.

TEMPATKAN
BOTOL-BOTOL
BERISI MEDIUM
DALAM
KERANJANG
AUTOCLAVE

Tim Dosen Pengampu MK TKIV

F.Biologi UGM 2021
AUTOCLAVE (STERILISASI MEDIUM)

MEDIUM DISTERILISASI DENGAN AUTOCLAVE

PADA SUHU 121℃, 15 lb, SELAMA 15 MENIT

Tim Dosen Pengampu MK TKIV F.Biologi UGM 2021