Isolation and Purification of L-amino Acid Oxidase from Indian Cobra Naja naja

Click to edit Master subtitle style

Sandy Akbar 260110100040

5/27/12

Introduction

Enzim L-asam amino oksidase(LAOs, EC1.4.3.2) adalah salah satu komponenutama darivenomsular, yang memilikifungsibiologi yang banyakdan juga memberikan kontribusi terhadap toksisitasracun ular

5/27/12

 Efek

dari LAAO sendiri yaitu sebagai katalis deaminasioksidatifL-asam aminountuk membentuk suatu ikatan antara L-ketoasam danamoniakdisertai dengan penguranganFAD. bersamaan, hidrogen peroksidadibebaskanyang telah menjadikontributor utama dalam efek toksik dari LAAO

Secara

5/27/12

 Selama

oksidasi , H202 yg dihasilkan dalam jumlah sedikit diyakini berperan dalam aktifasi transkripsi beberapa gen yang mana berhubungan dengan kematian sel peningkatan konsentrasinya menyebabkan tingkat kematian sel bertambah cepat

Namun

5/27/12

Method
Kromatografi

pertukaran kation

5/27/12

Isolation Procedure
Bisa

ular dilarutkan dalam 1ml buffer asetat dan di sentrifugasi selama 5 menit, supernatan yang di dapat kemudian di identifikasi dengan kromatografi kolom spandex, protein yg didapat di monitor pada panjang gelombang 280 nm dengan menggunakan double beam spctrofotometer ,fraksi ICN-LAAO kemudian disaring denan amicon ultra filtrasi

5/27/12

Purification Procedure
Hampir

sama dengan isolasi, bedanya Tujuh miligram terkonsentrasi ICN-LAAO dari C M Sephadex C-25 dimuat ke CM-52 selulosa kolom

5/27/12

Kromatografi filtrasi gel Sephadex G-100

Aktif LAAO sebesar 6,6 mg dalam konsentrasi, diperoleh dari CM sephadex C-52 kolom dilarutkan dalam 1 mL 50 mM natrium buffer asetat pada pH 5,8 dan itu diterapkan pada gel filtrasi sephadex G-100 kolom (6x1.8 cm 2) dalam 0,2 M amonium asetat buffer.Elusi dilakukan pada laju alir 1 mL/1min.

5/27/12

5/27/12

Result
Satumikrogram

LAAOyang dimurnikan menghasilkan1,522:gH2O2/minsetelah oksidasiL-Lucien.Berat molekul ditentukan sebagai61,96k Da

5/27/12

Conclusion
Secara

keseluruhanpenelitian inimelaporkanisolasidan pemurnianproseduruntukLAAOenzim dariIndia kobrauntuk pertama kalinyadan selanjutnyadinobatkan sebagai ICNLAAO(IndiakobraNajanaja L-asam amino oksidase).selanjutnya penelitian ini diharapkan memberikan informasi teurapetik mengenai ICN-LAAO dan mekanisme anti racun

5/27/12

Terima Kasih

5/27/12