Penentuan kadar urea dalam krim urea dengan kromatograf

partisi sentrifugal
Abstrak
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk membangun sebuah metode
kromatografi partisi sentrifugal (BPK) untuk penentuan bahan urea
dalam krim urea. Mekanisme metode ini adalah bahwa urea
ditentukan oleh detektor UV pada 430 nm setelah diekstrak dari
krim dan diderivatisasi on line melalui reaksi Ehrlich di rotor dari
BPK, di mana produk-produk reaksi larut dalam fase gerak dan
matriks krim tetap di fase diam. Pelarut campuran yang terdiri dari
n-heksana, metanol, asam klorida dan
pdimethylaminobenzaldehyde dengan rasio 1000 mL: 1000 mL: 18
mL: 2.0 g digunakan untuk sistem pelarut BPK. Metode BPK
diusulkan menawarkan presisi yang baik dan kenyamanan tanpa
proses sampel pretreatment kompleks.
metode
Aparat
BPK 240 (Sanki Teknik, Kyoto, Jepang) dilengkapi dengan Waters
2707 autosampler, detektor UV Waters 2489, dan aWaters 1515
pompa (Waters, Milford, MA, USA). Rotor dari BPK 240 terdiri dari 12
disk, dengan setiap disk yang terdiri dari 178 sel partisi. Setiap sel
partisi terdiri dari saluran dan saluran, dan volume total untuk 12
disk adalah ~ 240 mL, 85% dari yang untuk saluran dan 15% untuk
saluran.
Bahan dan reagen
Substansi referensi urea dan PDAB disediakan oleh Institut Nasional
untuk Pengawasan Obat dan Makanan. Sampel urea krim (yang
mengandung urea 0,1 g $ g? 1) dibeli dari Shanghai General
Pharmaceutical Co, Ltd, Shanghai. n-Hexane
(Kelas analitis) dan asam klorida (reagen analitis: ~ 36% sampai
38%) diperoleh dari Fuyu Fine Chemical Co, Ltd, Tianjin, China.

Metanol (-kromatografi cair kinerja tinggi grade) dibeli dari Concord

Technology Co, Ltd, Tianjin, China. air ultra murni dibuat oleh Merck
Millipore sistem MILLI-Q (EMD Millipore; Billerica, MA, USA).
hasil
Pengembangan dan optimalisasi metode BPK
3.1.1 Pemilihan sistem pelarut dan panjang gelombang
BPK sistem pelarut dioptimalkan dengan mengukur nilai retensi fase
diam, UV dasar kebisingan, dan waktu retensi dari bahan aktif.
Dalam rangka menjaga matriks lipofilik dari krim urea dalam fase
stasioner, n-heksana (fase atas) terpilih sebagai fase diam. Solusi
metanol yang mengandung asam klorida dan PDAB (fase yang lebih
rendah) digunakan sebagai fase gerak. Viskositas rendah dari sistem
pelarut ini memberikan kontribusi terhadap pembentukan pelarut
biphase tanpa emulsifikasi. Dengan demikian, sistem pelarut yang
dipilih diproduksi kehilangan rendah dari fase diam, dasar yang
stabil, dan rasio tinggi signal-to-noise (Tabel 1). Ara. 2 menunjukkan
spektrum UV-terlihat dari fase gerak (Mengandung 100 mg $ L? 1
PDAB) dan larutan reaksi urea dan PDAB di fase gerak. Pada 430 nm
dalam spektrum, fase gerak menunjukkan hampir tidak ada
penyerapan, sedangkan larutan reaksi menunjukkan serap yang
baik. Oleh karena itu, 430 nm terpilih sebagai panjang gelombang
untuk mendeteksi produk urea derivatisasi.
3.1.2. laju alir dan PDAB dosis
Sebagai BPK fase mobile dan stasioner keduanya cair, sejumlah kecil
fase diam dapat dicuci dengan fase gerak, yang membuat baseline
tidak stabil. Ara. 3A menggambarkan hubungan antara daerah
puncak urea derivatisasi produk dan laju alir BPK, dan menunjukkan
bahwa kawasan puncak tetap stabil dengan laju alir 1E5 mL $ min?
1, dan menurun dengan meningkatnya laju aliran. Umumnya,
semakin lambat fase gerak mengalir, semakin banyak volume fase
diam dicuci bersih. Mengingat dua faktor ini, laju aliran akhirnya

ditetapkan pada 5 mL $ min? 1 gambar. 3B menggambarkan

hubungan antara daerah puncak produk urea derivatisasi di BPK
pada 430 nm dan PDAB dosis, menunjukkan bahwa kawasan puncak
tetap stabil dalam dosis PDAB dari ~ 2e12 g, dan naik sedikit
dengan peningkatan dosis PDAB. Oleh karena itu, mengingat dasar
kebisingan dan derivatisasi reaksi, PDAB dosis PDAB akhirnya dipilih
untuk menjadi 2 g.
3.1.3. Pemilihan reagen asam dan konsentrasi
Dengan kondisi lain tidak berubah, urea bereaksi dengan asam
klorida dan asam sulfat dalam bak 40C air selama 10 menit, dan
produk dipertahankan absorbansi UV yang sama. Menimbang bahwa
asam sulfat dapat menyebabkan korosi dari rotor BPK dan
meningkatkan suara awal, kami memilih asam klorida sebagai
pereaksi asam. Ara. 4 menunjukkan bahwa daerah puncak produk
urea derivatisasi tetap stabil dalam konsentrasi asam klorida pada ~
0.2e1.2 mol $ L? 1. Untuk menurunkan peralatan korosi, konsentrasi
asam klorida dalam fase gerak yang ditetapkan sebesar 0,2 mol $ L?
1.
3.2. Validasi metode analisis
3.2.1. Linearitas dan pemulihan tingkat
Memplot daerah puncak produk derivatisasi di BPK versus
konsentrasi larutan standar urea menghasilkan kurva analisis regresi
linear (Tabel 2). Hasil penelitian menunjukkan bahwa linearitas baikbaik saja, dan metode BPK memenuhi syarat untuk analisis
kuantitatif dalam kisaran konsentrasi yang dibutuhkan.
Data dari percobaan pemulihan untuk urea disajikan pada Tabel 3,
dan hasilnya menunjukkan bahwa pemulihan urea adalah> 98%,
yang cukup untuk memenuhi kebutuhan penentuan konten.
3.2.2. Presisi, pengulangan, dan stabilitas
RSD penentuan konten urea dihitung sebesar 1,2%, dan
pengulangan rata determinasi konten urea adalah 98,5%, dengan

RSD sebesar 0,7%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ketepatan

aparat dan pengulangan metode berdua memadai, dan bahwa
larutan uji bisa tetap stabil sampai 24 jam di bawah kondisi
pengujian.
3.3. Perbandingan antara metode BPK dan kolorimetri untuk
penentuan urea
3.3.1. Perbandingan dari dua mode derivatisasi
Penelitian ini dilakukan urea derivatisasi dalam dua mode: dalam
dan di luar rotor. Urea cream dilarutkan dalam larutan air dan
ditentukan dengan metode CPC dengan dua mode derivatisasi
(Tabel 4), dengan hasil yang menunjukkan hampir tidak ada
perbedaan antara dua mode derivatisasi.
3.3.2. Perbandingan metode BPK dan kolorimetri
Kandungan urea dalam krim urea menggunakan metode kolorimetri
dianalisis menurut literatur [14] (Tabel 4). Hasil penelitian
menunjukkan bahwa nilai-nilai kandungan urea yang diperoleh
dengan menggunakan metode kolorimetri lebih rendah
dibandingkan mereka yang menggunakan metode BPK, yang
mungkin dikaitkan dengan hilangnya urea selama proses
pretreatment rumit. Dalam metode BPK, bagaimanapun, fase diam
yang mengandung n-heksana terlarut matriks krim, sementara urea
dan produk derivatisasi yang tidak bisa larut dalam fase diam dan
diekstraksi sepenuhnya oleh fase gerak.
4. Diskusi
Dalam studi ini, urea dalam krim urea ditentukan dengan
menggunakan BPK dengan sistem pelarut biphasic dari n-heksana
dan metanol yang mengandung asam klorida dan PDAB. Sistem
pelarut, panjang gelombang deteksi, laju alir, dan metode
derivatisasi dipelajari, dengan hasil yang menunjukkan bahwa
metode CPC adalah pilihan yang baik untuk penentuan isi krim urea
dengan memamerkan hasil validasi dapat diterima. Dibandingkan

dengan spektrofotometri dan urease metode, metode BPK memiliki

kelebihan dalam sampel pretreatment, sejak sampel emulsi stabil
dan seragam bisa langsung disuntikkan ke aparat tanpa
pretreatment. Selanjutnya, in situ derivatisasi menyederhanakan
prosedur analitis, sehingga meminimalkan kesalahan sistematik.
Oleh karena itu, penentuan isi krim atau salep produk menggunakan
metode CPC memiliki keunggulan metodologis tertentu atas metode
analisis kuantitatif tradisional. Singkatnya, analisis BPK disarankan
dalam makalah ini adalah metode yang tepat, handal, dan userfriendly untuk analisis krim, dan lebih menguntungkan daripada
metode lain berdasarkan kesederhanaan dan biaya rendah,
mengingat bahwa itu adalah bebas dari sampel pretreatment.