Kode:

Laboratorium : Prosedur Tetap No. Versi:

Alamat : Tanggal berlaku
GeneXpert MTB/RIF Hal 1 dari 6
Penanggung Jawab :

Isi

Ruang Lingkup

Definisi dan singkatan

Prosedur

Prinsip

Contoh uji

Alat dan bahan

Instruksi kerja

Pembacaan, pencatatan dan pelaporan hasil

Pemantapan Mutu Internal

Pengelolaan limbah

Referensi

Dokumen versi
Penyusun Supervisor Manajer teknik Dokumen lama
baru
Nama Code: Code:
Tanggal
Tanda tangan
dan Nama Jelas

Laboratorium TB
 Kode:
Laboratorium : Prosedur Tetap No. Versi:
Alamat : Tanggal berlaku
GeneXpert MTB/RIF Hal 2 dari 6
Penanggung Jawab :

1. Ruang Lingkup
Prosedur tetap ini menguraikan prosedur untuk mendeteksi Mycobacterium tuberculosis dan
kepekaannya terhadap rifampicin dengan menggunakan system GeneXpert MTB/RIF.

2. Definisi dan Singkatan

MDR-TB Multidrug-resistant TB

MTB Mycobacterium tuberculosis

PCR Polymerase chain reaction

QC Quality control

RIF Rifampicin

3. Prosedur
Prinsip
System GeneXpert MTB/RIF adalah sistem real-time PCR otomatis yang mendeteksi DNA
kompleks MTB pada sputum dengan hasil mikroskopis BTA positif dan negatif. Secara
bersamaan mengidentifikasi mutasi pada gen rpoB yang berhubungan dengan resistensi
terhadap rifampicin (1,2)

Sistem GeneXpert MTB/RIF system terdiri dari mesin geneXpert, komputer, barcode
scanner dan memakai cartridge Xpert MTB/RIF tunggal, sekali pakai yang berisi reagen (2).

Setelah melalui 3 tahap penyiapan contoh uji, specimen dipindahkan ke dalam

Catridge MTB/RIF dan dimasukkan ke dalam mesin GeneXpert yang didukung oleh
perangkat lunak secara otomatis pada seluruh tahapan termasuk pengolahan contoh uji,
amplifikasi asam nukleat, deteksi target sekuen dan interpretasi hasil (1).

Primer dalam assai Xpert MTB/RIF memperbanyak bagian dari gen rpoB yang mengandung
81 pasangan basa core. Probes dapat membedakan conserved wild-type sequence dan
mutasi pada core yang berhubungan dengan resistensi terhadap RIF. Setiap uji tela

Mengikutsertakan sample processing control (SPC) untuk menjamin proses deteksi DNA
yang adekuat dan memantau adanya factor penghambat reaksi PCR. Probe Check Control
(PCC) memverifikasi reagent rehydration, pengisian tabung PCR dalam catridge, integritas
probe dan stabilitas pewarna (1,2).

Contoh Uji
 Kode:
Laboratorium : Prosedur Tetap No. Versi:
Alamat : Tanggal berlaku
GeneXpert MTB/RIF Hal 3 dari 6
Penanggung Jawab :

! Catatan : Setiap contoh uji harus diberi identitas dengan benar. Identitas ini harus dicatat
pada formulir permintaan dan register laboratorium terkait.

Kriteria contoh uji

o Sputum : Volume minimal 1 ml. Tolak contoh uji yang mengandung makanan atau
partikel padat yang lain.
o GeneXpert MTB/RIF hanya dikhususkan untuk contoh uji sputum. Contoh uji lain
tidak dapat digunakan

Penyimpanan contoh uji

o Contoh uji disimpan pada suhu 28C sebelum diproses. Bila proses uji tidak
dapat segera dilakukan, contoh uji dapat disimpan pada suhu maksimum 35C
selama 3 hari atau pada 4C selama 4-10 hari .

Alat dan Bahan

Xpert MTB/RIF assay kit, terdiri dari

o Cartridge MTB/RIF (10 buah)

o Pipet steril disposable (12 buah)

o Reagen (10 buah @ 8 ml )

Bahan yang harus disediakan di laboratorium (tidak tersedia dalam kemasan)

o Tabung dahak standar, steril

o Sarung tangan disposable

o (Biosafety cabinet or N95 respirator)

o Wadah limbah infeksius dan non infeksius

o Pencatat waktu

o Larutan desinfektan solution

o Label atau spidol permanen

o Tambahan : pipet steril untuk pengolahan sputum

Penyimpanan dan perlakuan terhadap alat dan bahan

o Simpan cartridge dan reagent pada suhu 228 o C.

o Jangan gunakan reagent atau cartridge yang kadaluarsa.

 Kode:
Laboratorium : Prosedur Tetap No. Versi:
Alamat : Tanggal berlaku
GeneXpert MTB/RIF Hal 4 dari 6
Penanggung Jawab :

o Cartridge stabil sampai 7 hari setelah kemasan dibuka.

Instruksi Kerja
Hidupkan alat GeneXpert

! Catatan : Sebelum pemrosesan contoh uji dimulai, pastikan bahwa alat GeneXpert
berfungsi baik dan modul sudah siap.

1. Hidupkan komputer
2. Hidupkan alat GeneXpert
3. Pada tampilan computer, klik 2 kali icon shortcut GeneXpert Dx
4. Log in ke system perangkat lunak GeneXpert dengan menggunakan nama pengguna
dan kata sandi
5. Klik CHECK STATUS dan periksa apakah modul siap,bila tidak siap lakukan
Troubleshooting mengacu pada buku panduan.

Penyiapan contoh uji

1. Lakukan tindakan desinfeksi pada area kerja.

2. Tandai catridge dengan identitas contoh uji. Jangan menempelkan label pada
penutup catrige atau menutupi barcode pada cartridge. Tuliskan identitas atau
tempelkan label pada dinding catridge.
3. Masukkan contoh uji ke dalam wadah sputum yang tidak bocor
4. Bukalah penutup wadah sputum, tambahkan reagen dengan perbandingan 1 bagian
volume sampel dan 2 bagian volume reagen
5. Kocok sampai homogen.
6. Biarkan selama 5 menit pada suhu kamar.
7. Kocok kembali .
8. Biarkan selama 10 menit pada suhu kamar.

! Catatan : Setelah no. 8 amati : tidak boleh ada gumpalan pada sputum bila masih ada
gumpalan kocok lagi dan kemudian biarkan selama 3-5 menit pada suhu kamar(3).

Penyiapan Cartridge

! Catatan : Lakukan uji dalam 30 menit setelah contoh uji dimasukkan ke dalam catridge.

1. Hisap contoh uji dengan menggunakan pipet steril sampai meniscus diatas tanda
minimum (=2ml)
2. Buka penutup catridge.
3. Pindahkan contoh uji ke dalam ruang catridge Xpert MTB/RIF (Gambar . 1).
 Kode:
Laboratorium : Prosedur Tetap No. Versi:
Alamat : Tanggal berlaku
GeneXpert MTB/RIF Hal 5 dari 6
Penanggung Jawab :

4. Alirkan perlahan untuk mencegah aerosol.

5. Tutup catridge. Pastikan penutup terpasang kuat.

! Catatan : Sisa contoh uji dapat disimpan sampai 12 jam pada suhu 2-8 C untuk
kemungkinan pemeriksaan ulangan bila diperlukan.

Uji dengan alat GeneXpert

1. Lihat tampilan pada GeneXpert Dx System, klik CREATE TEST.

2. Pindai barcode pada catridge Xpert MTB/RIF.
3. Akan tampil Create Test window.
4. Menggunakan informasi barcode, mesin secara otomatis akan mengisi kotak-kotak
pada: Select Assay, Reagent Lot ID, Cartridge SN, and Expiration Date.
5. Pindai atau ketik identitas contoh uji. Pastikan identitas benar. Identitas contoh uji
berhubungan dengan hasil uji dan akan ditampilkan dalam View Results window
dan semua laporan .
6. Klik Start Test.
7. Ketik kata sandi .
8. Bila lampu hijau berkedip, buka pintu modul dan masukkan catridge.
9. Tutup pintu
10. Selama pengujian lampu hijau tetap menyala tanpa berkedip.
11. Apabila pengujian selesai lampu hijau akan padam.
12. Tunggu sampai sistem membuka pintu pada akhir pengujian, kemudian buka pintu
modul dan keluarkan catridge.
13. Buang catridge yang telah dipakai ke dalam wadah limbah sesuai pedoman
Pengendalian Penyakit Infeksi (PPI).

Pembacaan, pencatatan dan pelaporan

Membaca hasil pada perangkat lunak GeneXpert (Basic user settings)

1. Klik VIEW RESULTS tampak tampilan view result

2. Apabila perangkat lunak melaporkan Error Invalid or No result,ulangi pengujian
dengan menggunakan contoh uji yang telah diolah dan catridge yang baru.
3. Bila menunjukkan laporan Error, Invalid or No result maka lakukan
troubleshooting yang mengacu pada buku pedoman untuk menghilangkan masalah
teknik sebelum meminta contoh uji yang baru
 Kode:
Laboratorium : Prosedur Tetap No. Versi:
Alamat : Tanggal berlaku
GeneXpert MTB/RIF Hal 6 dari 6
Penanggung Jawab :

Pelaporan

Catatan : Hasil uji harus dilaporkan pada register khusus laboratorium TB. Tulis dengan tinta
merah untuk hasil positif. Laporan harus diberikan sesegera mungkin.

o Laporkan tidak ditemukan MTB atau ditemukan MTB

o Untuk uji resistensi rifampicin hasil dilaporkan ditemukan resisten Rifampicin

atau tidak ditemukan resisten Rifampicin.

o Contoh uji harus diminta kembali apabila mesin beberapa kali tidak mengeluarkan
hasil, hentikan pemeriksaan dan/atau perbaiki masalah teknis.

Pemantapan Mutu
To be determined
Pengolahan Limbah
o Setelah selesai bekerja, masukan semua bahan yang terkontaminasi (pot dahak,
pipet dan catridge) ke dalam kantung tertutup dan segera dibakar
o Bila kantong limbah tidak segera dibakar, simpanlah dalam wadah tertutup yang tidak
bocor.
o Bila di laboratorium memiliki autoclave, limbah infeksius harus dikumpulkan dalam
kantong yang dapat diautoclave dan lakukan tindakan autoclave sebelum dibakar.

Referensi
(1) Cepheid GeneXpert GXMTB/RIF-10. Package insert. 300-6252 Rev. D, September
2010
(2) Cepheid GeneXpert Dx System. Operator Manual. Software version 4.0. 3007607,
Rev. C.1
(3) Indira Soundiram, Cepheid Technical Advisor. Personal communication.