TEKNIK PEWARNAAN

Kelompok 2
Hanifah Dwi Wardhani (18.72.020146)
Orvalina Wilujeng (18.72.020149)
Reza Brian Anugerahno(18.72.020150)
Lisnawati(18.72.020163)
Ekawati(18.72.020464)
Juliansie(18.72.020470)

1
Pengertian Pewarnaan
Jaringan
Pengertian Pewarnaan Jaringan
Pewarnaan bertujuan agar dapat mempertajam atau memperjelas
berbagai elemen tisu, terutama sel-selnya, sehingga dapat dibedakan
dan ditelaah dengan mikroskop.

Ada beberapa jenis pewarnaan :

1. Pewarnaan Sederhana
2. Pewarnan khusus
3. Pewarnaan Differensial

3
Macam-macam pewarnaan
Sitohistologi
A. Diff quik

Diff-Quik adalah varian pewarna Romanowsky komersial,

umumnya digunakan dalam pewarnaan sitologi untuk
dengan cepat mewarnai dan membedakan berbagai noda,
biasanya apusan darah dan non-ginekologi, termasuk
aspirasi jarum halus.

5
Diff-Quik digunakan pada material yang dikeringkan sebelum fiksasi
alkohol (daripada langsung dicelupkan sebagai "wet-fixed").
Penggunaan utama noda tipe Romanowsky adalah untuk detail
sitoplasma, seperti mucins intracytoplasmic, tetesan lemak dan butiran
neurosekresi. Zat ekstraseluler, seperti lendir bebas, koloid, substansi
tanah, dll, juga mudah diwarnai, dan muncul metakromatik. Agen
mikrobiologi, seperti bakteri dan jamur, juga muncul lebih mudah di
Diff-Quik.

6
Cat Diff-Quik terdiri dari 3 larutan :
Reaksi fiksatif diff-Quik
- Pewarna triarylmethane
- Metanol
Larutan Diff-Quik I (eosinophilic)
- Pewarna Xanthene
- buffer pH
- Sodium azide
Diff-Quik larutan II (basofilik)
- Pewarna tiazin
- buffer pH

7
 Prosedur Pewarnaan
Diff-Quik modifikasi Giemsa campuran Alat dan bahan :
Eosin dan Metilen blue - Objek glass
Prinsip : Pencelupan Diff Quick adalah - Deck glass
merupakan salah satu teknik pencelupan - Methanol
rapid untuk smear sitologi yang dikeringkan - Eosin
di udara (Air Dried). Teknik pencelupan ini
- Metylen blue
digunakan untuk melihat tahap cellularity
dan juga untuk mendiagnosis sampel sel - Entelan
daripada Fine Needle Aspirates (FNA).

8
Prosedur :
- Sediaan difiksasi dengan methanol 1 menit
- Pewarnaan sitoplasma dengan eosin 1 menit
- Pewarnaan inti dengan methylene blue 1 menit
- Setelah ditiriskan dan dikeringkan sediaan ditetesi dengan entelan 1 tetes
kemudian ditutup dengan deck glass
- Sediaan siap dibaca

9
B. Papanicolaou

Pencelupan Papanicoloau (PAP) ditemukan oleh seorang saintis bernama Dr.

George papanicoloau (1832-1962). Dilahirkan di Greece, beliau menerima
ijazah dari Universiti Athens pada 1904 dan PhD dalam bidang zoology dari
Universiti Munich pada 1910. Dr. George Papanicoloau mula memerikasa
perubahan apusan vagina wanita pada 1923. Beliau menjumpai sel yang
abnormal, besar, nucleus berubah bentuk dan hiperkromatik pada wanita yang
menghidap kanser uterin. Penemuan ini dianggap sebagai satu titik permulaan
untuk perkembangan bidang sitologi.

10
Pewarnaan papanicolaou digunakan untuk pemeriksaan sel dalam sekret,
eksdudat, transudat atau biopsi berbagai jenis organ dalam dan jaringan.
Prosedur pertama yaitu pewarnaan inti dengan Hema-toxylin dan orange G serta
EA sebagai cat lawan yang mewarnai sitoplasma
Prinsip pewarnaan Papanicolaou adalah melakukan pewarnaan, hidrasi dan
dehidrasi sel. Pengambilan sediaan yang baik, fiksasi dan pewarnaan sediaan
yang baik serta pengamatan mikroskopik yang cermat, merupakan langkah yang
harus ditempuh dalam menegakkan diagnosis.

11
◉ hematoksilin, digunakan untuk men-cat inti sel. Haematein yang tidak sesuai mungkin
bertanggung jawab untuk warna kuning yang diberikan ke glikogen.
◉ OG-6 counterstain (-6 menandakan konsentrasi yang digunakan dari asam
phosphotungstic; varian lainnya adalah OG-5 dan OG-8). Oranye G digunakan. Ini
men-cat keratin. Peran aslinya adalah untuk mewarnai sel-sel kecil dari karsinoma sel
skuamosa keratinisasi yang ada di dahak.
◉ c. EA (Eosin Azure) kedua counterstain, terdiri dari tiga pewarna; angka menunjukkan
proporsi pewarna, mis. EA-36, EA-50, EA-65.
◉ d. Eosin Y mewarnai sel-sel skuamosa epitelial superfisial, nukleolus, silia, dan sel
darah merah.

12
◉ Cahaya Hijau SF berwarna kekuningan menandai sitoplasma sel lain, termasuk sel
skuamosa non-keratinisasi. Pewarna ini sekarang cukup mahal dan sulit diperoleh,
oleh karena itu beberapa pabrikan beralih ke FCF Cepat Hijau; Namun, ini
menghasilkan hasil yang berbeda secara visual dan tidak dianggap memuaskan oleh
beberapa orang.
◉ Bismarck coklat Y tidak ada noda dan dalam formulasi kontemporer sering diabaikan.

◉ Ketika dilakukan dengan benar, spesimen harus menampilkan warna dari seluruh
spektrum: merah, oranye, kuning, hijau, biru, dan ungu. Pola kromatin terlihat jelas,
sel-sel dari lesi batas lebih mudah ditafsirkan dan fotomikrografnya lebih baik. Hasil
pewarnaan pada sel yang sangat transparan, sehingga spesimen yang lebih tebal
dengan sel yang tumpang tindih dapat diinterpretasikan.

13
◉ Pada spesimen yang disiapkan dengan baik, inti sel berwarna biru pekat sampai hitam.
Sel dengan kandungan keratin yang tinggi berwarna kuning, glikogen juga berwarna
kuning. Sel-sel superfisial berwarna oranye sampai merah muda, dan sel-sel
menengah dan parabasal berwarna hijau pirus ke biru. Sel metaplastik sering menodai
hijau dan merah jambu sekaligus.

◉ Cat EA mengandung dua bahan kimia yang saling tidak

◉ kompatibel, Bismarck brown dan asam fosfotungstat, yang saling mencetuskan,
merusak masa manfaat campuran dan mengorbankan pewarnaan diferensial eosin dan
hijau muda. Deskripsi komposisi larutan pewarna bervariasi berdasarkan sumber dan
berbeda bahkan dalam publikasi Papanicolaou sendiri. Campuran dari nama yang
sama dari vendor yang berbeda dapat berbeda dalam komposisi, kadang-kadang
menghasilkan hasil yang berbeda atau buruk.
14
Prosedur Pewarnaan

Prinsip : Spesimen pada kaca slide

Difiksasi alkohol 96 % (spray/ rendam minimal 30 menit)
Dipulas Haematoxylin (inti), lalu OG-6, dan EA 50 atau 65
Fiksasi sediaan :
· Rendam dengan alkohol absolut/ 96 %, segera 10- 15 detik segera
rendam angkat sediaan minimal 30 menit kirim ke lab
· Spray dengan alkohol absolut / 96% semprot pada jarak 15-20 cm

15
Bila sediaan kering : Alat dan bahan :
rehidrasi : rendam aquadest :gliserin (aa) - Objek glass
selama 3-5 menit, fiksasi - Deck glass
alkohol 96% 30 menit, lalu pulas
- Alkohol 96%,70%,50%
air mengalir 3-5 menit, fiksasi
alkohol 96% lalu pulas. - Haris hematoksilin
- Eosin alkohol 50%
- Orange Green ( OG) 6
- Xylol
- Entelan

16
Prosedur pewarnaan:
◉ Rehidrasi sediaan kedalam alkohol 70%, alkohol 50%, aquades masing-masing 7
celup
◉ Pewarnaan inti dengan haris hematoxylin (untuk histopatologi = 45 menit, untuk
sitopatologi = 15 menit.) lalu bilas dengan air yang mengalir
◉ Dehidrasi dengan air alkohol 50%, alkohol 70%, alkohol 90% masing-masing 7 celup
◉ Mewarnai sitoplasma dengan OG 6 selama 3 menit
◉ Dehidrasi dengan alkohol 70% dan 96% 7 celup
◉ Mewarnai sitoplasma dengan eosin alkohol selama 3 menit

17
Dehidrasi dengan alkohol 70% dan 96% 7 celup
◉ Tiriskan dan keringkan lalu jernihkan dengan larutan xylol 1 menit atau
lebih, lalu keringkan di udara
◉ Teteskan entelan 1 tetes pada sediaan lalu tutup dengan deck glass jangan
sampai ada gelembung.
◉ Sediaan siap dibaca

18
Perbedaan pewarnaan/pulasan
sitologi

Papanicolaou Diff quik

eritrosit merah eritrosit biru abu-abu

sitoplasma merah sitoplasma amfofilik,sitoplasma bisa merah muda

19
Kelebihan dan kekurangan
Papanicolau Diff quik
fiksasi basah fiksasi kering
cepat

Prosedur lama Prosedur cepat

detail inti jelas detail sitoplasma dan batas sel jelas

inti sel membesar

baik untuk sel skuamosa (polikromatik) metakromatik

sel kecil-kecil sesuai/ proporsional Baik lihat materi miksoid, lendir, sekret,

20
21