Disahkan oleh :

Direktur RSKP Respira DIY

INSTRUKSI KERJA

PEWARNAAN ZIEHL NELSEN

SEDIAAN DAHAK BTA dr. Joko Santoso, M Kes
NIP: 19601126 199010 1 001
Nomor Dokumen : IK/LAB/009/15 Terbit ke :
Halaman : 1/3 Revisi :

1 TUJUAN:
Sebagai pedoman petugas laboratorium untuk mewarnai sediaan dahak dengan benar.
2 REFERENSI:
2.1 A.Fujiki, Mikroskopis TB untuk Program Tuberkulosis Nasional, 2007
2.2 Akiko Fujiki, Preparasi sediaan dahak BTA yang baik, Panduan petugas laboratrium TB di Unit
pelayanan kesehatan, 2007
2.3 Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta, Pelatihan Mikroskopis Tuberkulosis Bagi Petugas Laboratorium
Unit Pelayanan Kesehatan (UPK) DOTS di Provinsi D.I.Yogyakarta, 2012
2.4 Modul pelatihan Pemeriksaan Dahak Mikroskopis TB, Kemenkes RI, Ditjenn P2M dan PL, 2012.
3 LINGKUP APLIKASI:
Pewarnaan sediaan BTA.
4 DEFINISI:
Pewarnaan sediaan dahak adalah pemberian warna pada sediaan dahak untuk membedakan apakah
BTA atau bukan BTA. Pewarnaan pada pemeriksaan BTA secara mikroskopis menggunakan cat Ziehl
Nielsen yang terdiri dari ZN A ( carbol fuchsin ), ZN B ( asam alkohol ), dan ZN C ( methyleen blue).
Prinsip pewarnaan ZN adalah Mycobacterium tuberculosis mempunyai lapisan dinding lipid ( mycolic
acid ) yang tahan terhadap asam. Proses pemanasan mempermudah masuknya carbol fuchsin ke dalam
dinding sel. Sifat dinding sel yang tahan asam menyebabkan bakteri tetap mengikat zat warna carbol
fuchsin walaupun didekolorisasi dengan asam alkohol. Pemberian ZN C akan memberikan warna biru
pada latar belakang sediaan dan mewarnai bakteri selain BTA.

5 PERALATAN, BAHAN dan REAGEN

5.1 Peralatan:
5.1.1 Rak pewarnaan
5.1.2 Rak pengering
5.1.3 Lampu spritus
5.1.4 Pinset
5.1.5 Air mengalir/ botol semprot air
5.1.6 Pengatur waktu
5.2 Bahan:
5.2.1 Sediaan dahak
5.3 Reagen:
 5.3.1 Cat ZN A ( karbol fuchsin 0,3% )
5.3.2 Cat ZN B ( asam alkohol )
5.3.3 Cat ZN C ( methyleen blue 0,3% )

6 LANGKAH-LANGKAH:

6.1 Letakkan sediaan dahak di atas rak pewarnaan, diatur jaraknya sehingga tidak terlalu rapat.

6.2 Tuangkan cat ZN A hingga menutupi permukaan sediaan dahak.

6.3 Panaskan sediaan dengan api sampai keluar uap (jangan sampai mendidih), dinginkan selama
minimal lima menit.
6.4 Buang cat ZN A perlahan-lahan satu per satu.
6.5 Bilas dengan air mengalir mulai dari frosted.
6.6 Tuangkan cat ZN B sampai tidak tampak warna merah.
6.7 Bilas dengan air mengalir.
6.8 Tuangkan cat ZN C hingga menutupi sediaan dan biarkan 10-20 detik.
6.9 Buang cat ZN C perlahan-lahan.
6.10 Bilas dengan air mengalir
6.11 Letakkan sediaan pada rak pengering

7 DOKUMENTASI
Instruksi Kerja ini disimpan dalam bentuk berkas dan file dalam komputer dengan status legalitas yang
sama. Adapun formulir/dokumen terkait yang digunakan adalah:
- TB 04
- TB 05
- TB 06
- Buku Penerimaan Sampel
- Buku Pemeriksaan Mikrobiologi
- IK Pengumpulan Dahak
- IK Pewarnaan Sediaan Dahak
- IK Pembacaan Mikroskopis Sediaan Dahak (BTA)
- IK Pelayanan Laboratorium Mikrobiologi
 Catatan Revisi/Perubahan
No Isi Perubahan Tanggal Mulai Berlaku