Nadhilah Gitarani

10615042
Kelompok 11

Ligation Independent Cloning (LIC)

Ligation Independent Cloning (LIC) adalah salah satu teknik molekular kloning yang dapat
dilakukan tanpa menggunakan enzim ligase. Teknik ini membuat gen-gen yang akan dikloning
memiliki restriction sites tersendiri untuk di kloning sehingga tidak perlu khawatir akan memotong
bagian DNA lainnya. Prinsipnya LIC menggunakan aktivitas 3 5 dari enzim T4 DNA Polymerase
untuk menghasilkan 10-15 basa yang sangat spesifik sesuai dengan ekspersi gen vektor yang
digunakan (New England Biolabs, 2016).
Pada LIC, terdapat 3 tahapan yang utama: persiapan vektor DNA, persiapan gen yang akan
disisipkan, dan annealing gen yang akan disisipkan pada vektor. Pada tahap persiapan vektor, vektor
akan mengalami linearisasi, kemudian ditambahkan T4 DNA Polymerase dalam keaadaan terdapat
dTTP. Akibat aktivitas 3 5enzim polymerase, basa-basa akan dibuang dari kedua ujung 3 hingga
mencapai Timin pertama. Hasilnya akan dihasilkan 10-15 basa spesifik yang akan menggantung pada
vektor LIC yang akan ditempeli pada proses annealing. Pada tahap persiapan gen yang akan di
sisipkan, diperlukan primer forward dan reverse yang komplemen dengan 10-15 basa yang
menggantung pada vektor. Lalu gen yang akan disisipkan diamplifikasi terlebih dahulu dengan PCR.
Setelah itu hasil PCR tersebut di inkubasi dengan T4 DNA Polymerase dengan keadaan tedapat
dATP. Akibat aktivitas 3 5enzim polymerase, basa-basa akan dibuang dari kedua ujung 3 hingga
mencapai Adenosin pertama. Hasilnya akan dihasilkan 10-15 basa spesifik yang akan menggantung
pada gen yang akan disisipkan.Selanjutnya adalah tahap annealing vektor dengan gen yang akan
disisipkan dengan cara diinkubasi. Lalu dilakukan trasformasi untuk kemudian diperbanyak
menggunakan PCR (Helmholtz Zentrum Mnchen, 2017).
Penggunaan metode LIC sangat efisien dan juga tidak memerlukan biaya yang besar. Oleh
karena itu, metode ini digunakan salah satunya dalam mempelajari sekitar 880 target dari Bacillus
subtilis (Setlow, 2005).

(New England Biolabs, 2016)

Referensi
Helmholtz Zentrum Mnchen. 2017. Ligase Independent Cloning (LIC)
https://www.helmholtz- muenchen.de/fileadmin/PEPF/Protocols/LIC-cloning.pdf
New England Biolabs. 2016. Molecular Cloning: Technical Guide. Massachusetts: New England
Biolabs.
Setlow, J.K. 2005. Genetic Engineering: Principles and Methods. Berlin: Springer Science &
Business Media