PROSEDUR KULTUR MIKROBA PATOGEN (E. coli, S. aureus, P.

aeruginosa, Salmonella)

I. Media dan pembuatan media

Alat dan bahan:
1. Soybean Casein Digest Agar/Soybean Casein Digest Broth (USP)
2. Aquades 1000 ml
3. Cawan petri
4. Tabung reaksi
5. Batang pengaduk, pipet volume, erlenmeyer, penangas/elemen pemanas

Cara kerja:
1. Menimbang sejumlah Soybean Casein Digest Agar/Soybean Casein Digest Broth dengan
timbangan analitik (sesuai prosedur kemasan) dimasukkan ke dalam erlenmayer
2. Menambahkan aquades 1000 ml dan aduk sampai merata dengan batang pengaduk
3. Memanaskan erlenmayer menggunakan penangas/elemen pemanas suhu 80-100 C
sampai media tercampur homogen (jernih) Jangan sampai terbentuk buih berlebih
4. Muangkan media dengan volume tertentu menggunakan pipet volume :
a. Media Soybean Casein Digest Agar (SCDA)
- 5 ml ke dalam tabung reaksi untuk SCDA miring
- 10 ml ke dalam tabung reaksi untuk SCDA tegak
b. Media Soybean Casein Digest Broth (SCDB) 8 ml ke dalam tabung reaksi
Tutup tabung reaksi denganpenutup tabung (penutupan jangan terlalu rapat!)
6. Sterilkan seluruh media dalam tabung reaksi tersebut dengan menggunakan autoklaf
selama 15 menit, pada suhu 121 C, dan tekanan 1 atm
7. Setelah diautoklaf, letakkan tabung reaksi pada arak tabung (posisi miring) biarkan
dingin (dan memadat untuk SCDA)

II. Teknik Pemindahan Kultur Mikroba

Alat dan bahan:
1. Media SCDA/Media SCDB
2. Jarum ose
3. Jarum inokulasi
4. Kultur murni bakteri
5. Lampu bunsen
6. Vortex mixer
 Cara kerja:
1. Siapkan Media SCDA/SCDB
2. Longgarkankan tutup dari masing-masing tabung reaksi yang berisi media (jangan di
lepaskan!)
3. Pegang tabung reaksi yang mengandung kultur murni bakteri di tangan kiri
4. Pegang jarum ose pada tangan kanan dan bakar di atas nyala lampu bunsen hingga
kawat memijar panaskan jarum ose dari pangkal ke ujung sampai memijar, sebelum
digunakan kawat didinginkan beberapa saat
5. Pegang ose menggunakan ibu jari dan jari telunjuk, gunakan jari kelingking untuk
membuka tutup tabung reaksi (tutup tabung reaksi tetap dipegang seperti posisi
semula)
6. Bakar mulut tabung reaksi, masukkan jarum ose dan ambil 1 ose biakan bakteri
7. Bakar kembali mulut tabung reaksi dan tutup tabung reaksi kembali
8. Ambillah tabung reaksi yang akan diinokulasi dengan tangan kiri, dengan cara yang sama
buka tutup tabung reaksi, dan bakar mulut tabung reaksi
9. Inokulasikan biakan bakteri pada tabung reaksi inokulasi dengan cara goresan zigzag dari
bawag ke atas pada permukaan SCDA miring
10. Bakar mulut tabung reaksi dan tutup tabung reaksi kembali, kemudian bakar ose
11. Beri label identitas
12. Lakukan dengan cara yang sama untuk media SCDB menggunakan jarum ose dan media
agar tegak secara tusukan tegak lurus menggunakan jarum inokulasi
13. Inkubasikan selama 24-48 Jam pada suhu 30-35 C dan amati pertumbuhannya
sampel induk

Teknik Pembiakan Mikroba

Dari sampel induk pada SCDA
1. a. diberi aquadest 3 - 5 ml kocok tabung sehingga diperoleh suspense pekat
b. atau ambil satu ose sampel induk ke dalam tabung reaksi berisi 3-5 ml akuades steril,

Pemusnahan limbah Patogen (Destruksi)

1. Alat gelas dan media yang kontak adengan mikroba di destruksi menggunakan autoklaf selama 15
menit pada suhu 121 oC dan tekanan 1 atm
2. Padatan dikumpulkan menjadi satu kelompokkan dalam limbah padat B3
3. Cuci peralatan menggunakan sabun hingga bersih
4. keringkan
Pengolahan Limbah Laboratorium

1. Limbah terbagi menjadi 2 golongan, yaitu

- Limbah B3 (Bahan Berbahaya dan Beracun) limbah yang langsung kontak dengan
produk/bahan baku/bahan kimia yang digunakan proses analisis
- Non B3 merupakan limbah rumah tangga (karton, logam, sisa tisu, plastic)
2. Pengolahan limbah dipisahkan berdasarkan golongan dan bentuk sediaannya
- Limbah cair
Semua limbah hasil analisis merupakan limbah B3 ditampung dalam botol coklat dan
beri label
Limbah non B3: dapat dibuang melalui saluran pembuangan biasa

- Limbah padat
Limbah B3 contohnya adalah kertas perkamen bekas analisis, sarung tangan bekas analisis
dan lainnya yang merupakan sisa analisis di insenerator/ diserahkan ke pihak ke 3

Daftar Pustaka :
United States Pharmacopeia 38th, 2015.
Farnakope Indonesia edisi 4, 1979.
Radji, M., 2004. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Farmasi. Departemen Farmasi Fakultas MIPA
Universitas Indonesia, Jakarta
Machmud, M., Teknik Penyimpanan dan Pemeliharaan Mikroba. Balai Penelitian Bioteknologi Tanaman
Pangan, Bogor.
PP 101 tahun 2014 tentang Pengolahan Limbah