BAGIAN III

MODUL-MODUL

III.1. MODUL I: PENGENALAN ALAT, MEDIA DAN METODE

STERILISASI
a. Urgensi Praktikum
Untuk menjamin pengerjaan yang tepat dan aman dalam laboratorium,
pengenalan peralatan dan media yang digunakan di laboratorium
harus diketahui. Selain alat dan media, pengetahuan mengenai teknik
pembersihan peralatan, sterilisasi dan pengerjaan aseptis juga
dibutuhkan untuk menjamin keberhasilan pengerjaan dalam
laboratorium.
b. Deskripsi Singkat Praktikum
Dalam praktikum ini mahasiswa akan diperkenalkan mengenai jenis-
jenis alat yang digunakan di laboratorium mikrobiologi, bagaimana
cara menggunakan alat-alat tersebut, jenis-jenis media yang
digunakan serta cara pembuatannya, cara pembersihan alat serta
metode sterilisasi alat dan bahan.
c. Sasaran Pembelajaran
Setelah mengikuti praktikum ini maka mahasiswa diharapkan dapat:
1. Mengenali jenis dan fungsi peralatan di laboratorium mikrobiologi.
2. Mengenali jenis dan kegunaan media di laboratorium mikrobiologi
3. Menghitung kebutuhan media dan membuat media mikrobiologis
4. Mendeskripsikan konsep sterilitas, macam-macam teknik sterilisasi
5. Mempratikkan pembersihan, pengemasan alat serta sterilisasi alat
dan bahan di laboratorium mikrobiologi.
6. Menulis laporan ilmiah berdasarkan hasil kegiatan di laboratorium
7. Mengkomunikasikan pendapatnya terkait hasil eksperimen dengan
baik
8. Aktif dalam pengerjaan maupun diskusi dengan asisten serta
mampu bekerja sama dengan teman kelompoknya dalam
melaksanakan praktikum.

6
d. Alokasi Waktu Praktikum
Alokasi waktu praktikum ialah 2,5 jam mulai dari persiapan masuk
laboratorium hingga selesainya praktikum.
e. Tempat Praktikum
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin.
f. Teori/Prinsip Dasar
Peralatan yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi hampir
sama dengan peralatan-peralatan yang umumnya digunakan di
laboratorium kimia yaitu berupa alat-alat gelas antara lain : tabung
reaksi, cawan petri, pipet ukur dan pipet volumetrik, labu ukur
(tentukur), labu didih, labu Erlenmeyer, gelas piala, pH meter, gelas
arloji, termometer, botol-botol tetes, pembakar spiritus, kaki tiga
dengan kawat asbes dan rak tabung. Di samping peralatan gelas
tersebut pada laboratorium mikrobiologi masih ada sejumlah alat yang
khusus antara lain: otoklaf, oven, mikroskop, jarum ose (inokulasi),
jarum preparat, gelas obyek, kaca penutup, cawan Petri, keranjang
kawat untuk sterilisasi, inkubator untuk membiakkan mikroorganisme
dengan suhu yang konstan, spektrofotometer untuk mengukur
kepekatan suspensi atau larutan. Penangas air untuk mencairkan
medium, magnetic stirrer untuk mengaduk dan tabung durham untuk
penelitian fermentasi.
Medium dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk menunjang
pertumbuhannya dan terdiri atas senyawa-senyawa organik (protein,
karbohidrat, lemak,mineral dan vitamin). Medium terbagi menjadi
jenis-jenis tertentu menurut beberapa kategori yakni: berdasarkan
bahan yang digunakan, berdasarkan kegunannya, berdasarkan
bentuknya. Agar semua mikroorganisme dapat tumbuh baik dalam
suatu media, maka medium pertumbuhan harus memenuhi syarat-
syarat antara lain : 1) Mengandung semua zat-zat makanan yang
mudah dipergunakan (available) oleh mikroba, 2) Mempunyai tekanan
osmosa, tegangan permukaan reaksi (pH) yang sesuai, 3) Tidak

7
 mengandung zat-zat penghambat (inhibitor), 4) Harus steril dan
dicegah adanya kontaminasi.
Sterilisasi adalah suatu usaha untuk membebaskan alat-alat atau
bahan-bahan dari segala macam bentuk kehidupan, terutama
mikroorganisme. Dalam praktek sterilisasi alat-alat atau medium dapat
dikerjakan secara mekanis (misalnya secara penyaringan), secara
kimia (menggunakan bahan-bahan kimia), dan secara fisik (dengan
panas atau sinar radiasi). Cara sterilisasi yang digunakan tergantung
pada macamnya bahan dan sifat bahan yang akan disterilkan
(ketahanan terhadap panas, bentuk bahan yang disterilkan misalnya
padat, cair atau bentuk lainnya).
g. Peralatan
Mikroskop optik, ose bulat, ose lurus, cawan petri, labu Erlenmeyer
(50-500 ml), beaker glass (50-500 ml), pipet tetes, tabung reaksi,
tongkat spreader, spoit (1 ml-10 ml), autoklaf, timbangan digital,
inkubator aerob, objek-deck glass, rak tabung, cotton swab steril, oven,
kompor dan panci, Biosafety Cabinet kelas 2, Laminar Air Flow, enkas,
colony counter, filter bakteri, shaking fermentor.
h. Bahan
Ekstrak beef, sukrosa, pepton, agar, Potato Dextrose Agar (PDA),
Potato Dextrose Broth (PDB), Media Nutrient Broth (NB), Tauge,
aquades, spiritus, alkohol 70%, kapas, kasa roll, benang godam,
aluminium foil, larutan natrium trifosfat 1%, larutan HCl 1%, larutan
fenol 5%, handscoen
i. Prosedur Kerja
a) Pengenalan alat
1. Alat diperlihatkan kepada mahasiswa dan dijelaskan bagian-
bagian, serta didemonstrasikan cara penggunaannya.
b) Pembersihan dan sterilisasi alat
Alat-alat yang masih baru (belum pernah dipakai)

8
• Godok alat-alat gelas (tabung reaksi, cawan Petri dan labu)
yang masih baru dalam larutan Na 3PO4 (Tri Natrium Fosfat)
1% sampai mendidih beberapa menit.
• Kemudian cuci dengan air sampai bersih dan rendam dalam
larutan HCl 1,0 % selama 24 jam untuk melarutkan sisa-sisa
fosfat pada gelas.
• Cuci kembali dengan air dan kemudian bilas dengan air suling.
• Keringkan dalam hot air sterilizer (oven) atau langsung
dengan sinar matahari.
Alat-alat gelas yang sudah dipakai
• Sterilkan semua alat-alat gelas yang telah dipakai dalam
otoklaf pada tekanan 15 lbs (2 atm) pada suhu 121°C
• Setelah proses sterilisasi buang isinya , kemudian rendam
dalam larutan Na3PO4 1% dan didihkan selama beberapa
menit.
• Setelah dingin atau hangat-hangat alat-alat gelas disikat
sampai bersih dan dibilas dengan air
• Kemudian rendam dalam larutan HCl 1 %
• Cuci lagi dengan air sebersih mungkin, kemudian dibilas
dengan air suling
• Keringkan dalam oven atau sinar matahari langsung.
Untuk membersihkan alat-alat yang berisi agar-agar (medium
agar), dilakukan sebagai berikut:
• Buang terlebih dahulu agar-agar yang terdapat dalam alat-alat
gelas atau tabung dalam tempat yang telah disediakan (perlu
diingat jangan membuang sisa agar-agar panas atau dingin
dalam bak pembuangan air).
• Cara selanjutnya seperti yang tersebut diatas dan seterusnya.
Pipet yang sudah dipakai.
• Pipet yang telah dipakai untuk mengambil mikroorganisme
harus didesinfeksi dengan larutan phenol 5% selang waktu
tertentu

9
 • Keringkan seperlunya
• Godog dalam larutan Na3PO4 1% selama 10 menit
• Cuci dengan air dan keringkan
• Rendam dalam larutan HCl 1,0 % untuk melarutkan sisa fosfat
pada gelas selama 24 jam, HCl harus betul-betul masuk
kedalam pipet.
• Cuci dengan air bersih, kemudian dibilas dengan air suling.
• Keringkan dalam hot air sterilizer atau pada sinar matahari
Sterilisasi alat
• Alat-alat gelas tanpa skala seperti cawan petri dan peralatan
logam seperti seperti pinset dan gunting yang telah dibungkus
kemudian dimasukkan ke dalam oven dan sterilkan pada suhu
180°C hingga 2 jam
• Alat-alat gelas berskala, pipet-pipet, karet pipet, dan alat-alat
lain yang tidak tahan pemanasan dimasukkan ke dalam
autoklaf kemudian disterilisasi selama 15 menit suhu 121°C,
tekanan 1,1 atm.
• Khusus untuk ose, ose dipijarkan dengan api lampu spiritus
hingga berpijar merah mulai dari bagian belakang jarum
hingga ke depan.
c) Pembuatan Media
1) Media Nutrient Agar (NA)
• Timbang 3 gram ekstrak beef, 5 gram pepton, 15 gram agar
• Larutkan masing-masing bahan dalam aquades kemudian
panaskan hingga larutan medium menjadi jernih
• Cukupkan volume media hingga 1 liter
• Tutup mulut labu dengan kapas terbalut kasa dan lapisi
dengan aluminium foil
• Sterilkan dalam autoklaf selama 15 menit, suhu 121°C.
• Media yang telah disterilkan disimpan dalam kulkas atau
segera digunakan. Media yang telah dibekukan di kulkas

10
 harus dipanaskan terlebih dahulu hingga jernih sebelum
digunakan.
2) Media Potato Dextrosa Agar (PDA)
• Timbang 39 gram media PDA
• Larutkan dalam aquades kemudian panaskan hingga larutan
medium menjadi jernih
• Cukupkan volume media hingga 1 liter
• Tutup mulut labu dengan kapas terbalut kasa dan lapisi
dengan aluminium foil
• Sterilkan dalam autoklaf selama 15 menit, suhu 121°C
• Media yang telah disterilkan disimpan dalam kulkas atau
segera digunakan. Media yang telah dibekukan di kulkas
harus dipanaskan terlebih dahulu hingga jernih sebelum
digunakan.
3) Media Tauge Extract Agar (TEA)
• Timbang 100 gram tauge, sukrosa 60 gram, agar 15 gram
• Rebus tauge sampai mendidih selama 1-2 jam, saring
dengan kapas.
• Cukupkan volume media hingga 1 liter, larutkan agar dan
glukosa.
• Tutup mulut labu dengan kapas terbalut kasa dan lapisi
dengan aluminium foil
• Sterilkan dalam autoklaf selama 15 menit, suhu 121°C.
• Media yang telah disterilkan disimpan dalam kulkas atau
segera digunakan. Media yang telah dibekukan di kulkas
harus dipanaskan terlebih dahulu hingga jernih sebelum
digunakan.
4) Pembuatan media agar miring
• Timbang komponen media nutrien agar dan potato dextrosa
agar yang telah dikonversi menjadi 100 ml
• Larutkan bahan-bahan dalam aquades dan panaskan hingga
agar larut dan media menjadi bening

11
 • Pipet 6 ml media dengan spoit 10 ml kemudian masukkan ke
dalam tabung reaksi
• Tutup tabung reaksi dengan kapas dan sterilisasi dengan
autoklaf selama 15 menit, suhu 121°C.
• Setelah disterilkan, media yang masih dalam keadaan cair
dimiringkan dengan cara meletakkan tabung pada area
dengan ketinggian berbeda hingga media memadat. Simpan
media dalam kulkas atau segera gunakan.
5) Pembuatan Media Nutrient Broth (NB) dan Potato Dextrose
Broth (PDB)
• Timbang masing-masing bahan media nutrien broth dan
potato dextrose (dibuat 100 ml masing-masing medium)
• Larutkan dalam aquades dan pipet 3-5 ml ke dalam tabung
reaksi.
• Tutup tabung reaksi dengan kapas dan sterilkan dalam
autoklaf suhu 121°C 15 menit tekanan 1,1 atm

Media Agar miring Agar miring Agar Plat agar (cawan petri 15-
cair (tampak (tampak tegak
depan) samping) 20 ml)

Gambar 1. Jumlah media kultur yang sesuai untuk berbagai penggunaan (Sumber:
Harley-Prescott: Laboratory Exercises in Microbiology 5th Edition. 2002. The McGraw-Hill
Companies)

j. Referensi dan Bahan Bacaan

1. Harley JP, Prescott LM. 2002. Harley-Prescott: Laboratory
th
Exercises in Microbiology. 5 Edition. The McGraw-Hill
Companies.
2. Djide MN, Sartini. 2012. Dasar-Dasar Mikrobiologi Farmasi.
Penerbit Lephas Unhas.

12
Lembar Kerja
Skema Kerja

Tanggal disetujui: Nama & Paraf asisten:

13
 Skema Kerja

Tanggal disetujui: Nama & Paraf asisten:

14
 PERALATAN LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Spesifikasi Gambar
Nama alat: ……………………….…...……….
Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Tanggal praktikum: Paraf asisten:

15
Nama alat: ……………………….…...……….
Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

……………………………………………………

Paraf asisten:
Tanggal praktikum:

16
Nama alat: ……………………….…...……….
Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………
Tanggal praktikum: Paraf asisten:

17
Nama alat: ……………………….…...……….
Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………

……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
……………………………………………………
……………………………………………………

Nama alat: ……………………….…...……….

Kegunaan: …………………………………….
…………………………………...………………
………………………………………………...…
…………………………………………………...
……………………………………………………
Tanggal praktikum: Paraf asisten:

18
 Pembuatan Media

PERHITUNGAN BAHAN MEDIA

NAMA MEDIA
Jumlah per …….. ml
Komposisi Kegunaan
% g

PERHITUNGAN:
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………..……………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
Tanggal praktikum: Nama & Paraf asisten:

19
 PERHITUNGAN BAHAN MEDIA
NAMA MEDIA
Jumlah per …….. ml
Komposisi Kegunaan
% g

PERHITUNGAN:
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………..……………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
Tanggal praktikum: Nama & Paraf asisten:

20
 PERHITUNGAN BAHAN MEDIA
NAMA MEDIA
Jumlah per …….. ml
Komposisi Kegunaan
% g

PERHITUNGAN:
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………..……………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
Tanggal praktikum: Nama & Paraf asisten:

21
Pembahasan
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………..……………………
………………….……………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………..……………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………

22
Pembahasan
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………..…………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………..…………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………

23
Pembahasan
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………..……………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………..………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………

24
Pembahasan
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………..……………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
……………………………………………………………………………

25
Referensi
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
…………………………………………………………………..……………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………
Tanggal ACC: Nama & Paraf asisten: Nilai:

26