Teknologi Imobilisasi Untuk Meningkatkan Industri Bio-

Produk
Nadia A. Abdelmajeed1, Olfat A. Khelil2 dan Enas Nabil Danial3

1Departemen Biokimia, Fakultas Ilmu Perempuan, Universitas King Abdulaziz, Jeddah, Arab Saudi.
2Departemen Biokimia Medis, Fakultas Kedokteran (Gadis) Universitas Al-Azher, Mesir.
3Kimia Produk Alami dan Mikroba, Pusat Penelitian Nasional, Kairo, Mesir.

Imobilisasi adalah pembatasan pergerakan biokatalis sesuai perlakuan kimia atau fisik.
Banyak molekul telah diimobilisasi dan sebagian besar adalah bio-molekul karena aplikasi biologis
dan biomedisnya. Imobilisasi enzim telah membuatnya sangat sesuai untuk berbagai bioteknologi
yang berkembang. Enzim immobilisasi telah terbukti berharga untuk banyak aplikasi medis termasuk
sistem pengiriman obat, diagnosis dan pengobatan penyakit, serta sensor untuk pengelolaan berat
badan dan diabetes. Imobilisasi enzim diaplikasikan pada industri tekstil. Teknologi mikroorganisme
yang tidak bergerak menawarkan banyak keuntungan dalam pengolahan air limbah. Sel yang telah
dimobilisasi juga digunakan dalam bioreaktor, dan produksi berguna senyawa seperti asam amino,
asam organik, antibiotik, streroid dan enzim (Brodelius dan Vandamme (1987); Tanaka dan Nakajima
(1990).

Secara umum istilah imobilisasi mengacu pada tindakan gerakan membatasi atau membuat
gerakan yang tidak mampu atau memperlambat gerakan. Sedangkan imobilisasi adalah fenomena
yang ada di alam semesta. Mikroorganisme di alam tidak terdistribusi secara teratur dan sering ada di
biofilm. Biofilm adalah komunitas mikrobial yang dilapisi permukaan yang terdiri dari beberapa
lapisan sel yang tertanam dalam matriks terhidrasi (Kierek dan Karatan, 2005).

Teknik imobilisasi digunakan untuk satu atau beberapa tujuan berikut;

1. Penggunaan kembali enzim (reduce cost).
2. Pemisahan produk yang mudah,
3. Pengolahan terus menerus.
4. Kontrol proses difasilitasi
5. Waktu tinggal yang rendah.
6. Optimalisasi hasil produk.
7. Stabilisasi oleh imobilisasi.
8. Tidak perlu isolasi enzim dan pemurnian.
9. Reaksi kompleks multi enzim.
10. Regenerasi krepaktor dalam sistem asli.
11. Menggunakan budaya campuran.

Teknologi imobilisasi telah banyak digunakan dalam fermentasi bioreaktor komersial (Nunez
dan Lema, 1987). Sel imobilisasi juga telah digunakan dalam bioreaktor, dan produksi senyawa
bermanfaat seperti asam amino, asam organik, antibiotik, steroid dan enzim (Brodelius dan
Vandamme, 1987; Tanaka dan Nakajima, 1990). Salah satu metode yang telah muncul sebagai sukses
di laboratorium dan berguna dalam aplikasi komersial adalah enkapsulasi sel dalam matriks gel
polimer. Hasil dari studi bioreaktor telah menunjukkan bahwa sel encapsu memiliki kelebihan
dibanding sel bebas dalam berbagai kondisi. Peningkatan aktivitas metabolik dan produksi metabolit
(Scherer et al., 1981; Gadkari, 1990), perlindungan dari zat beracun (Dwyer et al., 1986; Keweloh et
al., 1989) dan peningkatan stabilitas plasmid sel yang dienkapsulasi dibandingkan dengan sel bebas,
Semuanya telah diamati Imobilisasi seluruh sel telah terbukti menjadi alternatif yang lebih baik untuk
imobilisasi enzim terisolasi.

Sistem imobilisasi sel komersial dan eksperimental biasanya jatuh ke dalam satu dari tiga
kategori:
1. Perangkap sel pada gel polimer atau pendukung berpori.
2. Adhesi pada permukaan pembawa mikro.
3. Tangkap di belakang membran.

Dukungan ideal untuk kultur sel immobilisasi harus memenuhi persyaratan sebanyak mungkin:

1. Kapasitas pemuatan massa sel tinggi.

2. Akses mudah ke media nutrisi.
3. Prosedur imobilisasi nontoksik sederhana.
4. Jarak difusi optimum dari media yang mengalir ke pusat pendukung.
5. Sterilisasi.
6. Kestabilan mekanis.
7. Dapat digunakan kembali.
8. Mudah pemisahan sel dan carrier dari media.
9. Cocok untuk sistem reaktor konvensional.
10. Cocok untuk suspensi maupun sel tergantung anchorage.

Banyak molekul telah diimobilisasi dan sebagian besar adalah biomolekul karena aplikasi
biologis dan biomedisnya. Protein adalah contoh dari beberapa molekul ini. Enzim, antibodi, antigen,
molekul adhesi sel dan protein pemblokir adalah contoh molekul protein (Doaa dan Wafaa, 2009).
Selain itu, imobilisasi telah terbukti sangat berharga dalam mengimobilisasi enzim, karena
memungkinkan enzim mudah digunakan kembali beberapa kali untuk reaksi yang sama dengan waktu
paruh yang lebih lama dan degradasi yang lebih sedikit dan telah memberikan metode langsung untuk
mengendalikan laju reaksi serta waktu mulai dan berhenti reaksi. . Ini juga membantu mencegah
kontaminasi substrat dengan enzim / protein atau senyawa lainnya, yang menurunkan biaya
pemurnian. Manfaat enzim amobil ini telah membuatnya sangat sesuai untuk berbagai bioteknologi
yang berkembang (Barabino et al., 1978).

Enzim dapat diimobilisasi dengan teknik yang berbeda, namun mereka dikategorikan sebagai berikut
(Gambar 2):
1. Adsorpsi ke pembawa inert.
2. Entrapment dalam kisi gel yang dipolimerisasi (sintetis dan non-sintetis)
3. Cross menghubungkan protein.
4. Pengikatan kovalen ke pendukung yang tidak aktif reaktif.
5. Pertukaran Ion.
6. Kopolimerisasi.

Gambar 2.
 Adsorpsi fisik enzim ke pendukung padat mungkin adalah cara termudah untuk
mempersiapkan enzim amobil. Metode ini mengandalkan interaksi fisik non-spesifik antara protein
enzim dan permukaan matriks yang dihasilkan dengan mencampur larutan enzim pekat dengan zat
padat. Diantara keuntungan adsorpsi sebagai metode umum imobilisasi enzim yang tidak larut adalah
bahwa tidak diperlukan reagen dan hanya diperlukan sedikit tindakan pengaktifan. Oleh karena itu,
adsorpsi murah, mudah dilakukan, dan cenderung kurang mengganggu enzim daripada menggunakan
sarana kimia imobilisasi. Namun, kerugian dari metode ini adalah tidak spesifik. Selanjutnya, adsorpsi
protein lain atau zat lainnya karena enzim immobilisasi dapat terjadi. Hal ini dapat mengubah sifat
enzim immobilisasi atau, jika zat yang teradsorbsi adalah substrat untuk enzim, lajunya mungkin akan
menurun, tergantung pada mobilitas permukaan enzim dan substrat.

Membatasi enzim dalam kisi gel polimerisasi adalah metode lain untuk imobilisasi (Elnashar
et al., 2008). Hal ini memungkinkan difusi bebas dari substrat berat molekul rendah dan produk
reaksi. Metode yang biasa dilakukan adalah mempolimerisasi matriks hidrofilik dalam larutan enzim
berair dan memecah massa polimer ke ukuran partikel tertentu karena tidak ada ikatan antara matriks
enzim dan polimer. Namun, radikal bebas yang dihasilkan selama polimerisasi dapat mempengaruhi
aktivitas enzim yang terperangkap. Kelemahan lainnya adalah bahwa hanya substrat dengan berat
molekul rendah yang dapat menyebar dengan cepat dalam enzim yang membuat metode ini tidak
sesuai untuk enzim yang bekerja pada substrat makromolekul seperti ribonuklease, tripsin dan
dekstranase (Sankaran et al., 1989).

Imobilisasi enzim telah dicapai melalui interaksi silang antarmolekul protein, baik ke molekul
protein/ gel polimer lainnya (sintetis dan non-sintetis) atau ke gugus fungsional pada intra matriks
pendukung yang tidak larut. Cross-link internal dapat menstabilkan protein dengan mencegah
berlangsungnya kondisi stres. Hal ini dimungkinkan untuk menghubungkan dua polipeptida melalui
intermolcular cross-link (Ciaron, 2003). Bentuk khusus ini melibatkan penghubung silang kristal
enzim kecil dengan pereaksi bifungsional. Karena enzim berada dalam bentuk partikel yang stabil, ia
dapat dengan mudah dipisahkan dari campuran reaksi dan digunakan kembali (Dariush, 2003).

Faktor utama yang diperhitungkan untuk imobilisasi kovalen enzim adalah;

1. Kelompok protein fungsional cocok untuk mengikat kovalen dalam kondisi ringan (Taylor,
1991). Residu reaktif enzim yang terlibat dalam imobilisasi kovalen.
2. Reaksi kopling antara protein dan pendukungnya. Karakteristik variabel pendukung protei.
3. Dukungan fungsional yang sesuai untuk imobilisasi protein.
4. Kopling molekul protein ke pendukung padat melibatkan reaksi ringan antara residu asam
amino protein dan beberapa kelompok pembawa fungsional. Kelas utama reaksi kopling yang
digunakan untuk imobilisasi protein adalah: diazotisasi, pembentukan ikatan amida (peptida),
alkilasi dan arilasi, formasi dasar Schiff, reaksi Ugi, amidinasi, reaksi pertukaran tiol
disulfida, interaksi enzim mercurry dan iradiasi untuk imobilisasi. Protein dengan ikatan
kovalen.

Penukar ion adalah bahan yang tidak larut yang mengandung gugus yang terikat secara
kimiawi dan ion-ion penghambat bergerak. Ion-ion penghubung dapat dibalikkan secara reversibel
dengan ion-ion lain dengan muatan yang sama tanpa adanya perubahan dalam matriks yang tidak
larut. Dengan demikian enzim dapat membawa muatan tergantung pada pH dan jenis proteinnya.
Properti ini dimanfaatkan oleh Tosa et al. (1967) untuk menghubungkan enzim dengan penukar ion
melalui interaksi elektrostatik. Meskipun perubahan pH dan kekuatan ion dapat menyebabkan
kebocoran enzim, seperangkat kondisi operasi yang bijaksana dapat mengatasi masalah ini.

Sejumlah besar polimer telah digunakan untuk membantu atau mempengaruhi imobilisasi sel.
Polimer semacam itu dapat digunakan sendiri sebagai pendukung sel, dalam manik-manik atau kubus,
sekam, serat, atau bentuk 'matriks asli' skala lebih besar, atau dikombinasikan dengan bahan
pendukung lainnya, untuk meningkatkan kekuatan keseluruhan atau kemungkinan pemuatan
biomassa. Sebuah dukungan (Gambar 6).

Gambar 6. Bentuk dan jenis pembawa enzim yang berbeda (a) manik-manik, (b) serat, (c) kapsul, (d) film, dan
(e) membran.

Pilihan pembawa bergantung pada faktor-faktor tertentu yang memainkan peran penting
dalam aplikasi pengolahan industri. Menurut Messing (1975), faktor tersebut termasuk kekuatan
mekanik, resistensi mikroba, stabilitas termal, ketahanan kimia, fungsi kimia, biaya rendah,
hidrofilisitas, regenerasi dan tinggi kapasitas enzim.

Teknik imobilisasi yang dikembangkan terutama ditujukan untuk mempertahankan fungsi

katalitik utama dari enzim asli. Sebaliknya, peningkatan imobiisasi difokuskan terutama pada
pemanfaatan teknik imobilisasi yang ada untuk mengubah (atau memperbaiki) kinerja enzim, agar
sesuai dengan aplikasi yang diinginkan. Dengan demikian, enzim asli mungkin tidak sesuai untuk
proses yang diinginkan, karena kinerjanya buruk seperti aktivitas rendah, atau stabilitas atau
selektivitas. Akibatnya, teknik yang akan dikembangkan harus memperbaiki kinerja enzim selain
melumpuhkannya. Berdasarkan fakta bahwa keberhasilan kemudian sebagian besar bergantung pada
pengetahuan yang diperoleh dari informasi eksperimental dari aplikasi terdahulu, maka penting untuk
memberikan analisis terperinci mengenai hasil yang sejauh ini diperoleh dari perbaikan, dengan
imobilisasi, dari tiga karakteristik katalitik, Yaitu aktivitas, stabilitas dan selektivitas enzim.

Kemajuan terkini dalam bioteknologi telah mempromosikan penggunaan enzim amobil untuk
berbagai aplikasi. Penelitian inovatif baru-baru ini telah selesai berkaitan dengan penemuan teknik
imobilisasi yang lebih baik, metode baru untuk produksi atau pemecah senyawa yang diinginkan
dengan menggunakan reaksi biokatalitik, metode pemberian obat dan identifikasi tumor dengan
menggunakan enzim amobil. Penggunaan enzim amobil dalam biosensor memperbaiki reaktor yang
digunakan secara efisien dan hemat biaya untuk melaksanakan reaksi yang dikatalisis oleh enzim ini.

Selain itu, obat mendapat manfaat dari imobilisasi enzim, jika dilihat dari aplikasi dibidang medis.
Enzim immobilisasi telah terbukti berharga untuk banyak aplikasi di lapangan termasuk sistem
pengiriman obat, diagnosis dan pengobatan penyakit, serta sensor pengelolaan berat dan diabetes
(Allen, 1998).
 1. Sistem pengiriman obat: Dalam sistem pemberian obat, adalah mungkin untuk melepaskan
obat sesuai sifat penyakit sebagai respons terhadap sinyal kimia. Insulin dilepaskan sebagai
respon terhadap peningkatan konsentrasi glukosa dapat dicapai dengan menggunakan sistem
ini (Soetan et al., 2010).
2. Diagnosis dan pengobatan penyakit: Banyak enzim immo-bilized digunakan untuk diagnosis
dan pengobatan penyakit. Contoh untuk diagnosis penyakit tercantum pada Tabel 3.
Intoleransi laktosa adalah contoh penyakit yang dapat diobati dengan menggunakan enzim
amobil (Richmond et al, 1981). Konsumsi makanan dengan kadar laktosa tinggi
menyebabkan masalah medis bagi orang yang tidak toleran terhadap laktosa. Karena enzim
alami (-galaktosidase) di usus manusia, kehilangan aktivitasnya selama masa hidup, maka
hidrolisis laktosa menjadi glukosa dan galaktosa sangat dipengaruhi. Elnashar dan Yassin
(2009) memperoleh enzim -galaktosidase amobil pada biopolimer termo stabil dari
karaginan dicangkokkan. Padahal, Kettering dkk. (2009) menggunakan nanopartikel besi
magnetik dengan cisplatin yang teradsorpsi pada mereka untuk pelepasan obat dalam
perawatan pemanasan magnetik untuk kanker.
3. Sensor: Sensor analitik adalah aplikasi immobilisasi enzim yang sangat populer pada waktu
sekarang. Enzim immobilisasi digunakan sebagai biokatalis untuk mengubah senyawa
elektrokimia yang sebelumnya tidak reaktif menjadi senyawa yang menghasilkan sinyal
listrik yang kemudian dikalibrasi pada skala tertentu (Kettering et al., 2009). Biosensor yang
paling populer termasuk yang membantu memantau kadar glukosa untuk penderita diabetes
(Whiteley et al., 2003).

Imobilisasi bagian jaringan, sel dan komponen jaringan untuk pewarnaan histolo-gical dan
imunohistokimia atau sistem deteksi saat ini berlaku. Proses ini berlangsung dengan persiapan. Hal ini
berguna untuk menggunakan faktor perekat yang sesuai untuk meningkatkan efisiensi, laju dan / atau
kekuatan adhesi pelekatan (Mansour et al., 2007).

ELISA adalah tes yang digunakan sebagai alat skrining umum untuk mendeteksi antibodi atau
antigen dalam sampel (Farre et al., 2007). Teknologi ELISA menghubungkan enzim terukur dengan
antigen atau antibodi. Namun, teknik ELISA dalam beberapa kasus dianggap memakan waktu dan
membutuhkan peralatan khusus untuk menjalankan pengujian (tidak portabel).

Peningkatan ketersediaan enzim amobil ini akan memungkinkan pertumbuhan aplikasi enzim
amobil di seluruh bidang kimia dan medis. Melanjutkan penelitian tentang pemberian obat dan
analisis lokasi tumor, bersamaan dengan penggunaan enzim amobil di biosensor, membuat
penggunaan enzim amobil yang tidak meningkat dalam pengobatan tidak dapat dihindari. Akhirnya,
pengembangan bioreaktor yang terus berlanjut yang menggunakan enzim amobil terus memperbaiki
efisiensi reaksi yang memanfaatkan katalis bio-immobilisasi. Perbaikan ini kemungkinan akan
menghasilkan pertumbuhan penerapan enzim amobil ke bidang baru yang semakin realistis.

Nama Anggota Kelompok 7 :

1. Sabila Nidia Sari (1400017076)

2. Nurul Amalia F. (1400017077)
3. Ratna Nengsih (1400017079)
4. Dwi Aditya (1400017080)
5. Andika Setyo Budi (1400017082)
6. Bramadi Arya (1601017046)