RESEARCH PAPER

Comparative Study on Enzyme Immobilization Using Natural Hydrogel Matrices—

Experimental Studies Supported by Molecular Models Analysis

Wiwin Elprida Sitinjak

Teknologi Industri Pertanian, Institut Teknologi Sumatera
Wiwin.120330068@student.itera.ac.id

Abstrak

Saat ini, perhatian besar diberikan untuk melakukan proses manufaktur menggunakan
teknologi yang bersih dan ramah lingkungan. Tren pada penelitian ini juga berhubungan
dengan produksi biokatalis tak bergerak untuk kepentingan industri menggunakan matriks
dan metode yang memenuhi spesifikasi operasional dan persyaratan lingkungan. Oleh karena
itu, hidrogel yang terjadi secara alami dan metode jebakan semakin populer dalam hal
imobilisasi enzim. Karya yang disajikan adalah studi perbandingan imobilisasi invertase
menggunakan dua matriks hidrogel alami alginat dan gelatin. Pada Penelitian yang dilakukan
oleh peneliti, menerapkan system molekular pada structural kedua bahan pada penerapannya
sebagai enzim yang aktif. Selain itu, dilakukan karakterisasi preparat invertase yang diperoleh.
Sebagai hasil eksperimen akhir, hidrogel berbasis gelatin dipilih sebagai kendaraan yang efektif untuk
imobilisasi invertase. Jadi, dengan dalam kondisi ringan dan matriks pro-ekologis dan biodegradable,
adalah mungkin untuk mendapatkan biokatalis yang sangat stabil dan reaktif (Karolina Labus, 2020).
Kata Kunci: enzyme, carrier, immobilisasi, metode

PENDAHULUAN

Untuk memilih dukungan yang tepat dan metode imobilisasi, beberapa parameter
penting dari enzim terikat harus dipantau. Yang paling penting adalah aktivitas katalitik dan
stabilitas termal, pH, operasi dan penyimpanan. Faktor lain yang sangat penting juga tingkat
pelepasan enzim dari pembawa, yang merupakan fenomena yang tidak diinginkan dalam
aplikasi industri. Singkatnya, biokatalis amobil yang ideal untuk penggunaan komersial harus
dicirikan sebagai berikut: (i) perlekatan permanen pada penyangga, (ii) tidak beracun, (iii)
ketahanan yang cukup terhadap faktor fisikokimia lingkungan mikro, (iv) aktivitas katalitik
yang baik. tinggi, dan (v) dapat digunakan kembali, atau (vi) kemungkinan akan digunakan
dalam mode berkelanjutan (Karolina Labus, 2020).
Dekolorisasi zat warna oleh jamur dan enzim imobilisasi merupakan metode yang
efisien, ekonomis dan ramah lingkungan. Imobilisasi jamur memiliki beberapa keunggulan
yang dapat meningkatkan aktivitas enzim, seperti meningkatkan stabilitas termal dan
stabilitas operasional, meningkatkan selektivitas dan sensitivitas terhadap inhibitor.
Imobilisasi adalah pembatasan mobilitas sel dalam ruang terbatas. Keuntungan lain dari
teknik imobilisasi adalah dapat mencapai aktivitas enzim yang tinggi, memiliki stabilitas
operasional yang tinggi, dan tidak memerlukan pemurnian enzim. Selain itu, biomassa amobil
dapat digunakan untuk konsentrasi substrat yang 5lebih tinggi dan memiliki umur sel yang
lebih lama.Sistem imobilisasi dapat meningkatkan produktivitas bioreaktor dan ketahanannya
terhadap kondisi lingkungan seperti pH, suhu, pelarut organik dan zat beracun. Keuntungan
lain dari
imobilisasi jamur termasuk konsentrasi sel yang tinggi, penggunaan kembali sel, kondisi
lingkungan mikro yang menguntungkan seperti kontak sel dengan gradien nutrisi, gradien pH
untuk sel, menyediakan biokatalis yang lebih baik (seperti High-Grade), peningkatan
stabilitas genetika, dan dalam mampu melindungi sel dari kerusakan. Imobilisasi enzim
dilakukan untuk menjaga kestabilan enzim. Imobilisasi enzim adalah enkapsulasi enzim
dalam matriks polimer atau pengikatan enzim ke bahan pendukung. Namun,
mempertahankan sifat katalitiknya (Karolina Labus, 2020).
Imobilisasi enzim adalah suatu proses dimana suatu enzim ditempatkan secara fisik
pada suatu lokasi tertentu sehingga aktivitas katalitiknya tetap terjaga dan dapat digunakan
berulang kali. Keuntungan lain dari teknik imobilisasi adalah: 1) memungkinkan beberapa
langkah reaksi enzim, 2) memiliki aktivitas enzim yang tinggi dalam teknik imobilisasi, 3)
stabilitas operasional umumnya tinggi, 4) tidak memerlukan satu langkah
ekstraksi/pemurnian enzim, dan 5) biomassa amobil dapat digunakan untuk konsentrasi
substrat yang lebih besar dari dan menunjukkan pemisahan sel yang mudah dan
memperpanjang umur simpan . Teknik imobilisasi dibagi menjadi dua, yaitu imobilisasi aktif
dan imobilisasi pasif. Fiksasi positif adalah fiksasi atau terikat oleh kekuatan fisik atau kimia.
Perangkap fisik dapat menggunakan berbagai bahan seperti bahan berpori (agar, alginat,
karagenan, poliakrilamida, kitosan, gelatin dan kolagen), filter logam berpori, poliuretan,
silika gel, polistirena, dan selulosa triasetat. Di sisi lain, imobilisasi pasif dapat menggunakan
imobilisasi, suatu bentuk biofilm, yang merupakan lapisan sel yang tumbuh di permukaan
dudukan.

METODE
Pada suhu kamar sampai miselium bertemu dengan simpanan . Pengukuran aktivitas mangan
peroksidase (MnP) dilakukan dengan memantau oksidasi 20 mM 2,6. Dimetilfenol (2.6) Tes
enzim Pleurotus ostreatus dikultur steril dari pota pada agar Dekstrosa pada suhu kamar
selama 714 hari sampai miselium memenuhi cawan Petri. Inokulasikan miselarium ke dalam
media jagung dalam botol kaca (1 kg jagung giling, 100 g CaCO3 dan beberapa air suling,
diaduk merata). Sampai Mycelium Rium mengisi botol. Tiga sumbat bahan inokulum media
jagung telah ditambahkan ke substrat baglog. Substrat Baglog mengandung 3 kg serbuk
gergaji, 30 g CaCO3, gipsum 30 g, 90 g tepung maizena, dan 150 g TSP Triple Super
Phosphate (TSP). menginkubasi inokulum pada substrat kantung selama 30-45 hari pada suhu
kamar sampai hifa memenuhi kantung.

HASIL
Dalam penelitian ini, Saccharomyces cerevisiae (EC 3.2.1.26, tipe larut) invertase
diekspos ke target amobil dengan mengenkapsulasinya dalam dua matriks hidrogel berbeda
yang berasal dari alam. Alginat dan gelatin. Pertama, model struktural dari matriks hidrogel
yang diuji diperiksa sesuai dengan tren perkembangan saat ini dalam penelitian desain
material. Dalam hal ini, kecenderungan mereka sebagai pembawa imobilisasi enzim
dianalisis. Selain itu, kami menyelidiki kemungkinan bahwa akan membentuk ikatan yang
stabil antara model molekuler enzim dan rantai polimer pembawa hidrogel. Faktor-faktor
seperti konsentrasi zat pengikat silang utama dan konsentrasi serta waktu langkah pengikatan
silang tambahan dengan glutaraldehida kemudian diselidiki untuk memilih kondisi proses
imobilisasi yang sesuai. Verifikasi kesesuaian masing-masing dari faktor ditentukan
berdasarkan korelasi antara aktivitas invertase terikat hidrogel yang dihasilkan, hasil
imobilisasi, dan laju penghabisan enzim dari pendukung (Karolina Labus, 2020).
Secara kimia, alginat adalah kopolimer yang terbentuk dari residu asam
Dmannuronat terkait-B (14) (M) dan (14) asam Lguluronat (G) terkait-B. Unit M dan G
adalah epimer (residu asam dmannuronat diubah secara enzimatik menjadi 1guluronat setelah
polimerisasi), hanya berbeda dalam C5 yang memiliki banyak perbedaan struktural asam
mannuronat D menjadi 4C1 dengan hubungan diequatorial antara mereka dan asam
Lguluronat dalam 1C4 dengan hubungan sumbu antara mereka. Alginat Fisik ikatan silang
oleh ikatan Ca, membentuk ikatan terkoordinasi disekitar gugus Karboksil yang hanya
mengikat residu G.

Gambar 1. (a) Representasi skematis mekanisme ikatan silang yang dimediasi ion kalsium
dari alginate
Metode imobilisasi enzim terdapat metode yaitu Persiapan Model Molekul Struktur Hidrogel,
Persiapan Model Virtual Invertase, Pembuatan Matriks Hidrogel yang Mengandung
Immobilized Invertase, Uji Analitik untuk Penentuan Kandungan Protein, Uji Analitik untuk
Penentuan Konsentrasi Glukosa, Penentuan Aktivitas Katalitik Invertase Asli dan Amobil,
Penentuan Kebocoran Enzim dari Matriks Hidrogel, Pengaruh Konsentrasi Cross-Linking
Agent Primer Terhadap Efisiensi Imobilisasi Invertase Pada Matriks Hidrogel, Pengaruh
Tahap Tambahan Cross-Linking Dengan Glutaraldehida Terhadap Efisiensi Imobilisasi
Invertase Pada Matriks Hidrogel, Penentuan Stabilitas Operasional Invertase Amobil dalam
Matriks Hidrogel, Penentuan Pengaruh pH Terhadap Aktivitas dan Stabilitas Invertase
Amobil dalam Matriks Hidrogel, Penentuan Pengaruh Temperatur Terhadap Aktivitas dan
Stabilitas Invertase Amobil Pada Matriks Hidrogel dan Penentuan Stabilitas Penyimpanan
Invertase Amobil dalam Matriks Hidrogel (Karolina Labus, 2020).

KESIMPULAN
-
 DAFTAR PUSTAKA

Karolina Labus, K. W. (2020). Comparative Study on Enzyme Immobilization Using Natural

Hydrogel Matrices—Experimental Studies Supported by Molecular Models Analysis.
Jurnal MDPI, 1 - 23.