Gambar 2. Skema analisis umum untuk analisis dan isolasi lignans tanaman.
Ekstraksi soxhlet atau perkolasi dengan pelarut polar adalah metode tradisional
untuk mengekstraksi lignans dari tanaman. Namun, ada ekstraksi yang kurang polar
dalam sebagian besar jaringan tanaman dan mungkin mengganggu analisis lignan
berikutnya, jika ekstraksi langsung dengan pelarut polar digunakan. Oleh karena itu,
dianjurkan untuk melakukan ekstraksi sekuensial dan pertama-tama lepaskan ikatan
lipofilik senyawa dengan pelarut organik non-polar seperti heksana, pentana, petroleum
eter, atau diklorometana. Ekstraksi hidrofilik, termasuk lignan, selanjutnya dapat
diekstraksi dengan pelarut polar seperti aseton, metanol, atau etanol dengan
menambahkan 5-10% air ke pelarut akan memudahkan penetrasi pelarut dan
mempromosikan ekstraksi senyawa polar lebih banyak seperti lignan glikosida.
Ekstraksi polifenol, termasuk lignans dan lignan glyco-sides, dari biji-bijian tertentu
mungkin memerlukan campuran pelarut dengan jumlah air besar, seperti aseton berair
30% , baru-baru ini digunakan untuk ekstraksi polifenol dari sorgum. Namun, beberapa
lignans memiliki polaritas rendah dan menengah dan akan diekstraksi dengan pelarut
ekstraksi non-polar. Campuran com-plex, atau sejumlah besar lignan, atau, misalnya
resin asam, juga bisa mempengaruhi kelarutan dan selektifitas senyawa terhadap pelarut
non-polar.
Ekstraksi langsung dengan solar ventilasi suhu panas atau ruang-suhu juga telah
digunakan untuk ekstraksi lignans tanaman. Hal ini mungkin juga pendekatan yang
tepat untuk lignans dengan polaritas rendah, tidak hanya mengandung satu gugus
hidroksil bebas, karena ekstraksi selektif dari ekstraksi non-lignan lipofilik tidak
mungkin terjadi.
Metode yang sangat baik untuk ekstraksi pelarut lignans tanaman adalah percepatan
ekstraksi pelarut (ASE), yang dilakukan pada suhu tinggi dan tekanan dan di bawah
nitrogen atmosfer inert. Metode ini memungkinkan cepat, otomatis, dan ekstraksi
berurutan menggunakan volume pelarut yang relatif kecil. Ekstraksi ASE baru-baru ini
diterapkan untuk ekstraksi lignan dari berbagai spesies pohon. Terutama, ekstrak yang
kaya lignan. Lignan di beberapa bahan tanaman mungkin memerlukan pretreatment
khusus sebelum ekstraksi dan analisis. Seco diglucoside (SDG) di Indonesia biji rami
(Linumusitatissimum) adalah contohnya, karena SDG sebagai oligomer yang terkait
dengan ester, atau bahkan polimer, yang terdiri dari SDG dan asam hidroksimetil
glutarat (HMGA). Turunan lignan oligomerik / polimerik ini mudah larut dalam
metanol atau etanol berair, tapi basa hidrolisis selanjutnya diperlukan untuk melepaskan
SDG bebas.
Selanjutnya, langkah hidrolisis asam tambahan harus ditambahkan jika
Aglycone Seco gratis diminati. Beberapa analitis prosedur, termasuk berbagai langkah
dan kombinasi hidrolisis enzy-matic, acidic, dan alkaline, sebelum atau sesudah
ekstraksi, telah dikembangkan untuk menganalisis SDG dan Seco dalam makanan dan
pakan. Hidrolisis sering juga dilakukan untuk mempermudah analisis kromatografi sub-
sekuen dari ekstrak yang mengandung lignan glikosida terutama dalam proses teknis,
seperti pulping dan pembuatan kertas, tapi juga sampel lingkungan dan untuk beberapa
makanan. Aplikasi, lignans dilarutkan ke dalam air, menurut Ekman dan Holmbom
ekstraksi lipofilik dari sampel air (serat disaring jauh) dari sumber pulp pertama kali
diekstraksi dengan dietil eter, dan kemudian sebagian dari fasa air yang mengandung
lignan dikeringkan dan dianalisis dengan GC. Kekurangan metode ini yaitu,
membutuhkan filtrasi untuk menghilangkan serat, yang mana bisa menjebak beberapa
lignans dengan afinitas tinggi ke serat atau lainnya. Kemudian Ors dan Holmbom
menerbitkan metode sampling yang lebih baik ekstraksi dalam sampel air, yang
mencakup sentrifugasi, mengeluarkan serat dan partikel, mengatur pH sampai 3,5
dengan asam sulfat encer, dan ekstraksi dengan MTBE sebanyak tiga kali sebelum
analisis akhir dari gabungan MTBE-ekstrak oleh GC. Metode ini
memungkinkan ekstraksi> 95% lignans hadir dalam air sam-ples, namun kurang efektif
untuk sesku dan dilignans.
Penggunaan ekstraksi fase padat (SPE) telah diterapkan untuk analisis lignan
dalam biji rami atau cairan biologis, dimana telah digunakan sebagai langkah pemurnian
setelah hidrolisis alkali atau enzimatik dari ekstrak mentah atau untuk
fraksinasi oligomer dari ekstrak mentah yang tidak dihidrolisis. SPE juga telah
digunakan untuk ekstraksi phe-nols dan polifenol sederhana dari tanaman dan makanan.
Ekstraksi cairan superkritis (SFE) adalah teknik ekstraksi yang menarik yang bisa
memiliki beberapa kelebihan juga pada analisis lignan. Ekstraksi SFE dengan karbon
dioksida bekerja dengan baik untuk lignans polaritas rendah sampai sedang seperti yang
HMR adalah salah satu lignans yang paling banyak dipelajari. Freudenberg
dan Knof melaporkan bahwa kondisi asam sangat kuat untuk pembentukan -Coni dari
HMR. Ekman membahas kemungkinan auto-oksidasi HMR sampai 7-oxo-MR pada
sampel kayu non-segar. Dia juga menyarankan agar adanya -ConiA dalam ekstrak buah
kayu segar bisa menjadi hasil hidrolisis cincin lakton -Coni selama prosedur ekstraksi.
Kemudian, Ekman dan Holmbom melaporkan bahwa nilai pH berkisar antara 9-12
dalam air menyebabkan transformasi katalitik dasar HMR ke senyawa (E) -4- (4-
hidroksi-3-methoxyphenyl) -2- (4-hidroksi-3-metoksifenilmetil) tapi-asam 3-enoat dan
transformasi menjad -ConiA karena penumpukan alkalinitas selama pengeringan
sampel. Hal ini juga diperkuat oleh Eklund dkk., menunjukkan bahwa HMR
mengalami beberapa transformasi di bawah dasar dan kondisi asam. Produk yang
mungkin termasuk-Coni, ConiA, HMR acid, dan isomer iso-HMR. HMR juga bereaksi
dengan berbagai nukleofil dalam kondisi asam dan dasar, menghasilkan produk seperti
MR, dan 7-methoxy-dan 7-ethoxy-MR, antara lain. Sebenarnya, HMR sangat tidak
stabil dalam larutan dan akan hilang hampir seluruhnya selama hidrolisis asam dan alka-
line.
Selanjutnya, transformasi ke Coni mungkin tanpa disadari karena kelarutannya
-Coni dalam air rendah oleh karena itu mungkin akan mengendap dan menghilang untuk
analisis berikutnya. HMR juga mengalami transformasi oksidatif paparan cahaya.
Kedua isomer HMR dapat disamakan dan keduanya dioksidasi menjadi 7-oxo-MR dan
selanjutnya berwarna, oligomer saat terkena iradiasi oleh cahaya. Adanya radikal bebas
dalam larutan yang mengandung lig-nans dapat menyebabkan transformasi kimia yang
tidak diinginkan, karena kebanyakan lignan dikenal sebagai penangkap radikal yang
efekti. Lig-nans tidak bisa hanya membentuk aduk yang berbeda, tapi juga bisa
menjalani dimerisasi dan reaksi radikal mungkin tidak diketahui. Meskipun kinetika
reaksi relatif lambat, risiko ini harus dijaga selama pengolahan sampel dan analisis.
Seco sebagian dapat berubah menjadi Seco-acetonide selama kromatografi kol-umn
dengan aseton pada silika sedikit asam. Artefak serupa, yaitu acetonides dari Seco,
cLari, dan isotaxiresinol juga dilaporkan oleh Yang et al.setelah isolasi senyawa fenolik
dariTaxusmairei.
Kondisi asam juga bisa membawa artefak seperti anhydro-Seco
dan anhydro-cLari dengan menghilangkan molekul air dari struktur diol, seperti yang
ditunjukkan pada eter guaiacylglyceryl lignan ini. Anhydro-Seco juga merupakan
artefak yang diproduksi pada hidrolisis asam SDG, sejauh ini dilaporkan terjadi secara
alami hanya disimpul kayu abies amabilis, bisa ditransformasikan ke Lari
dan cLari oleh reaksi siklisasi intramolekuler yang dikatalisis asam. Lari juga akan
mengatur lebih lanjut ke cLari kondisi asam yang lebih kuat. Anjaeyulu dkk membahas
apaka lignan metil dan etil arboreal adalah produk alami dari Artefak Gmelina arboreaor
terbentuk selama proses ekstraksi. Mereka menyimpulkan bahwa lignan ini pasti
terjadi secara alami. Sililasi sebelum analisis dengan GC biasanya cukup lurus untuk
lingkungan, namun hidroksil yang terhambat secara sterik, seperti gugus 8-OH
dalam (-) - NTG, dapat menghasilkan hanya sebagian senyawa sililasi, yang bisa
menyebabkan kebingungan. Artefak sililasi lain yang mungkin adalah cyclisation dari
Lari ke cLari oleh waktu, yang mungkin jatuh tempo untuk pembentukan asam
hidroklorida dalam sampel sililasi Dianjurkan sampel sililasi harus dianalisis di dalam
12 h untuk menghindari degradasi senyawa sililasi.
Dapus:
J.M. Awika, L.W. Rooney, X. Wu, R.L. Prior, L. Cisneros-Zevallos, J. Agric. Food
Chem. 51 (2003) 6657.
A. Koulman, R. Bos, M. Medarde, N. Pras, W.J. Quax, Planta Med. 67 (2001) 858.
J.-M. Pihlava, H. Hyv arinen, E.-L. Ryh anen, V. Hietaniemi, Patent pending
WO02062818.