Detection of hepatitis C virus RNA in saliva of patients with active

infection not associated with periodontal or liver disease severity

Francisca Sosa-Jurado1*, Verónica L Hernández-Galindo2, Daniel Meléndez-Mena3, Miguel A
Mendoza-Torres3, Fernando J Martínez-Arroniz4, Verónica Vallejo-Ruiz1, Julio Reyes-Leyva1 and
Gerardo Santos-López1*

Abstrak
Latar Belakang: Virus hepatitis C (HCV) terutama ditularkan melalui jalur parenteral,
transfusi darah dan obat intravena menggunakan faktor risiko paling sering. Namun, sudah
disarankan ada rute transmisi lainnya. Ada beberapa penelitian di mana RNA HCV terdeteksi
pada air liur pasien yang terinfeksi HCV, dan studi epidemiologi telah mengusulkan perawatan
gigi sebagai faktor risiko penularan HCV. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendeteksi
adanya RNA HCV pada air liur pasien dengan infeksi aktif dan berhubungan dengan penyakit
periodontal atau hati.

Metode: Pasien dengan viral load HCV terukur dalam serum terdaftar dalam penelitian ini.
Penyakit periodontal dinilai menggunakan indeks gingiva yang dimodifikasi (MGI). Kehadiran
plak gigi dinilai dengan penggunaan pengungkapan tablet. Pasien dievaluasi secara klinis dan
laboratorium untuk mengidentifikasi stadium penyakit hati, RNA HCV ditentukan dalam air
liur oleh nested RT-PCR. Untuk mengetahui hubungan antara parameter yang berbeda
digunakan analisis univariat dan multivariat.

Hasil: Sebanyak 45 pasien disertakan. Dari pasien tersebut, 21 (46,6%) memiliki hepatitis, 23
(51,1%) memiliki sirosis dan satu pasien (2,4%) mempresentasikan karsinoma hepatoseluler
(HCC). Viral load dalam serum berkisar antara 2,31-6,68 log IU / ml dengan rata-rata 5,46 log
IU / ml (95% CI 5.23-5.70). RNA HCV positif pada air liur 29 pasien (64,4%) dan tidak
terdeteksi pada 16 (35,6%). Untuk analisis univariat, tiga variabel independen dikaitkan dengan
deteksi HCV-RNA dalam air liur: jenis kelamin, viral load dan plak gigi dan analisis
multivariat hanya satu viral load variabel independen> 5,17 log IU / mL tetap dikaitkan secara
bermakna dengan deteksi HCV dalam air liur. (P = 0.0002). Perbedaan statistik diamati saat
viral load dianalisis, log 5,85 IU / mL (95% CI 5,67-6,02) untuk pasien dengan HCV dalam air
liur vs. log 4,77 IU / mL (95% CI 4,35-5,19) untuk pasien tanpa HCV dalam Air liur (p =
0.0001). Deteksi HCV-RNA dalam air liur lebih sering terjadi pada pasien dengan viral load
serum yang relatif tinggi.

Kesimpulan: HCV-RNA dalam air liur dikaitkan dengan tingkat viral load serum namun tidak
dengan tingkat keparahan penyakit periodontal atau hati.

Kata kunci: Penyakit periodontal, viral load, prevalensi gingivitis, faktor risiko, tingkat
keparahan penyakit hati.
Latar Belakang
Infeksi virus Hepatitis C (HCV) merupakan masalah kesehatan masyarakat yang
penting dengan sekitar 160 juta orang (prevalensi ~ 2,35%) terinfeksi di seluruh dunia [1].
HCV adalah agen penyebab hepatitis kronis, sirosis, dan karsinoma hepatoseluler (HCC).
Dengan demikian, HCV masing-masing menyebabkan 27% dan 25% dari semua kasus sirosis
dan HCC [2].
HCV terutama ditularkan melalui rute parenteral, dan faktor risiko yang lebih sering
adalah transfusi darah sebelum tersedianya tes untuk pemeriksaan donor dan penggunaan obat
intravena. Penularan HCV juga terkait dengan faktor risiko lainnya termasuk praktik seksual
tanpa kondom, beberapa pasangan seks, tato, tindik dan riwayat operasi atau hepatitis intra-
keluarga [3].
Diagnosis infeksi HCV yang sering terjadi pada pasien tanpa faktor risiko parenteral
menunjukkan adanya rute transmisi lainnya [4]. Sehubungan dengan itu, RNA HCV telah
terdeteksi pada air liur pasien yang terinfeksi-HCV, [5-8] dan studi epidemiologi yang
mengusulkan perawatan gigi merupakan faktor risiko lain yang mungkin terjadi.
Faktor penyebab penularan HCV dalam air liur adalah adanya penyakit periodontal [9].
Oleh karena itu, radang gusi parah ditandai oleh perdarahan konstan disertai dengan
peningkatan sekresi cairan crevicular gingival (GCF), yang mungkin merupakan sumber
potensial HCV [5] dan kelenjar liur [10-12].
Prevalensi gingivitis mencapai 84% pada pria dewasa [13] dan 54% pada wanita [14]
di beberapa wilayah di Meksiko. Oleh karena itu, dalam penelitian ini kami menentukan adanya
viral RNA dalam sampel air liur dari sekelompok pasien dengan hepatitis C aktif untuk
mengidentifikasi apakah deteksi HCV ludah dikaitkan dengan adanya penyakit periodontal,
tingkat keparahan penyakit hati, atau Jumlah RNA virus dalam darah tepi.
Metode
Pasien
Empat puluh lima pasien yang mendapat perawatan medis di Dinas Gastroenterologi
Unit Medis Khusus Tinggi Institut Meksiko untuk Jaminan Sosial di Puebla, Meksiko terdaftar
dalam penelitian ini. Kriteria inklusi adalah pasien dari kedua jenis kelamin, rentang usia 18-
70 tahun, kadar alanine aminotransferase (ALT) abnormal, antibodi anti-HCV positif dan viral
load HCV terdeteksi dalam serum (viral load> 1,77 log IU / ml). Pasien dievaluasi secara klinis
dan laboratorium untuk mengidentifikasi stadium penyakit hati. Sebagai bagian dari prosedur
diagnostik, waktu protrombin dan jumlah trombosit dilakukan. Kuesioner epidemiologi
diterapkan untuk mengevaluasi faktor risiko, dan informed consent tertulis diperoleh dari
masing-masing peserta.
Pasien koinfeksi dengan virus human immunodeficiency virus (HIV) dan / atau virus
hepatitis B (HBV), pasien yang telah menjalani pengobatan antiviral, pasien edentate dan
pasien dengan ulkus oral dikeluarkan dari penelitian ini.
Penelitian ini dilakukan mengikuti peraturan etis yang disetujui oleh Komite Etika
Penelitian dan Kesehatan Lokal # 2101 dari Lembaga Penjamin Sosial Meksiko (Protokol: R-
2008-2101-10) dan sesuai dengan Deklarasi Helsinki.
 Ukuran sampel (n) dihitung menurut Hernandez Samperi et al., 2010 [15], dengan
menggunakan rumus: n = (n '/ (1 + n' / N)), di mana n 'dihitung sebagai s2 / V2 , S2 = p (1- p)
dan V2 adalah kuadrat kesalahan standar, sedangkan N adalah jumlah pasien tanpa pengobatan;
P adalah prevalensi (%) yang dihitung dalam penelitian sebelumnya yang melaporkan positif
terhadap HCV dalam air liur [5,7]. Substitusi dalam formula ini dilakukan dengan nilai berikut:
N = 80, se = 0,05, dan p = 0,3.

Pengukuran indeks gingiva yang dimodifikasi

Status periodontal dievaluasi dengan menggunakan Modified Gingival Index (MGI).
Hasil dilaporkan sehat (0 sampai <0,1), ringan (0,1 sampai <1,0), sedang (1,0 - 2,0) dan berat
(> 2,0) [16,17].

Penentuan plak gigi

Untuk menilai jumlah plak gigi, pengungkapan tablet digunakan untuk menodai gigi.
Pigmentasi gigi kemudian dibandingkan dengan grafik gigi dan hasilnya dilaporkan baik
<20%, dapat diterima 20% - 40%, dan miskin> 40% [18].

Pengumpulan sampel dan ekstraksi RNA dalam air liur

Saliva air liur dikumpulkan dalam stoples kaca steril. Sampel diberi aliquoted dan
dipindahkan ke 1,5 ml tabung steril dan disimpan pada suhu 80ºC sampai digunakan. Total
RNA diekstrak dari 200 ml air liur menggunakan reagen Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, AS)
mengikuti prosedur konvensional. Konsentrasi dan kualitas RNA ditentukan dengan
spektrofotometri dan divisualisasikan dengan elektroforesis agarosa 1% gel dengan etidium
bromida.
Deteksi HCV RNA dalam air liur
HCV-RNA diamplifikasi dengan menggunakan nested reverse transcription-PCR
dengan dua set primer yang sesuai dengan 5'UTR, seperti yang dilaporkan sebelumnya [19,20].
Reverse transcription dan putaran pertama PCR (25-μl reaction) dilakukan dengan
menggunakan One-Step RT-PCR dengan Platinum Taq (Invitrogen). Parameter program
adalah 55 ° C selama 30 menit, 94 ° C selama 2 menit, dan 40 siklus 94 ° C selama 30 detik,
56 ° C selama 30 detik, dan 72 ° C selama 30 detik. Ronde kedua PCR (25 μl reaction)
dilakukan dengan menggunakan Bio-Mix (Bioline, London, UK) dan 2 μl produk PCR putaran
pertama. Kondisi siklon termal adalah 94 ° C selama 2 menit dan 40 siklus 94 ° C selama 30
detik, 60 ° C selama 30 detik, dan 72 ° C selama 30 detik. Produk PCR 305 dan 251 bp
dianalisis dengan elektroforesis gel agarose 1%. Teknik ini memiliki batas deteksi 50 IU / ml,
sebanding dengan tes komersial yang digunakan untuk deteksi kualitatif genom HCV [21,22].
Fragmen gen siklopilin rumah tangga diperkuat untuk setiap sampel sebagai kontrol internal
untuk ekstraksi RNA dan reaksi RT / PCR, dengan menggunakan primer dan kondisi yang
telah dipublikasikan sebelumnya [23]. Pada semua seri uji, diketahui kontrol HCV negatif dan
positif telah disertakan dan sampel dikelola dengan tindakan pencegahan yang sama selama
proses pengangkutan, pengangkutan dan pemrosesan.
Penentuan viral load serum
Total RNA dalam sampel serum diekstraksi dengan proses otomatis yang dilakukan di
BioRobot 9604 (Qiagen, Hilden, Jerman) dan viral load ditentukan dengan menggunakan
COBAS Taqman HCV Test v.2.0 (Roche Molecular Systems, Indianapolis, IN).

Deteksi HCV dan genotip dalam serum

RNA HCV dalam sampel serum diekstrak dengan menggunakan QIAamp RNA Viral
Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) dan diperkuat dengan menggunakan RT-PCR bersarang
dengan dua rangkaian primer yang sesuai dengan 5 'UTR, seperti yang dilaporkan sebelumnya
[18,19 ]. Pengujian genotipe HCV dilakukan dengan probe uji pesawat INNO-LiPA versi 2.0
(Innogenetics, Ghent, Belgia).

Analisis data
Untuk variabel kontinyu, rata-rata, frekuensi dan persentase dihitung. Analisis univariat
dilakukan dengan menggunakan uji χ2 atau Fisher untuk mendeteksi variabel independen yang
terkait dengan deteksi viral RNA dalam air liur. Variabel dengan nilai p <0,1 diperkenalkan
pada analisis multivariat dan, setelah itu, mereka dengan nilai p <0,05 dianggap independen
terkait dengan deteksi RNA virus. Korelasi Pearson antara MGI dan persentase plak juga
diterapkan. Dan untuk menganalisis perbedaan antara viral load digunakan uji Mann-Whitney
U. Semua analisis statistik dilakukan dengan menggunakan Statgraphics Centurion XV v.
15.2.06 (Stat Point Technologies, Inc., Virginia, AS.S.).
Hasil
Ukuran sampel minimal yang ditentukan adalah n = 39 pasien. Dalam penelitian ini,
kami mempelajari total 45 pasien, dimana 19 (42,2%) adalah laki-laki dan 26 (57,8%) adalah
perempuan. Usia rata-rata adalah 45,7 tahun (95% CI: 42,4-49,0). Dua puluh satu (46,6%)
pasien memiliki hepatitis kronis tanpa tanda klinis sirosis, 23 (51,1%) memiliki berbagai
tingkat sirosis dan satu (2,4%) pasien mempresentasikan HCC. Viral load dalam serum berada
pada kisaran 2,31-6,68 log IU / ml dengan rata-rata 5,46 log IU / ml (95% CI 5.23-5.70). Waktu
protrombin berada pada kisaran 45-104% dengan rata-rata 79% (95% CI 73-84). Jumlah
trombosit berada pada kisaran 5 × 104-3,0 × 105 per mm3 dengan rata-rata 1,55 × 105 per
mm3 (95% CI 1,30 x 105-1,80 x 105) (Tabel 1). HCVgenotipe ditentukan pada 45 pasien yang
termasuk dalam penelitian ini, 17 pasien memiliki HCV 1a (37,7%), 20 memiliki 1b (44,4%),
1 memiliki 2a (2,2%), 3 memiliki 2b (6,8%) dan 4 memiliki 3a (8,9 %) (Tabel 1).
 Empat pasien menunjukkan tingkat plak gigi yang baik (8,9%), namun ini hanya dapat
diterima pada 16 (35,6%) dan tidak dapat diterima pada 25 (55,6%) pasien (Tabel 2). Tingkat
MGI yang ditemukan pada pasien dengan infeksi HCV aktif adalah sebagai berikut: sehat (0,0-
0,1) pada tiga pasien (6,7%), ringan (0,2-1,0) pada 10 (22,2%) pasien, sedang (1,1-2,0) Pada
tujuh (15,5%) pasien, dan parah (> 2,0) pada 25 (55,6%) pasien (Tabel 2). Korelasi positif (r =
0,88, p = 0,0094) antara MGI dan plak gigi ditemukan (Gambar 1).
 RNA HCV terdeteksi pada air liur 29 (64,4%) pasien dan tidak terdeteksi pada 16
(35,6%) pasien (Tabel 2). Menurut analisis univariat, tiga variabel independen dikaitkan
dengan deteksi RNA HCV dalam air liur: jenis kelamin, viral load dan tingkat yang dapat
diterima dari plak gigi. Memang, 16/19 pria (84,2%) vs 13/26 wanita (50%) positif terhadap
HCV dalam air liur (p = 0,001); 27/31 (87%) pasien dengan viral load> 5,17 log IU / Ml positif
terhadap HCV pada pasien dengan air liur vs 2/14 (14,3%) dengan viral load <5,17 log IU /
mL (p = 0.0000); Dan 15/20 (75%) pasien dengan tingkat plak gigi yang dapat diterima positif
terhadap HCV pada pasien dengan air liur vs 14/25 (56%) dengan tingkat plak gigi yang tidak
dapat diterima (p = 0,07) (Tabel 3). Analisis univariat juga menunjukkan bahwa usia, tingkat
keparahan penyakit hati, MGI, aktivitas protrombin, jumlah trombosit, dan genotipe virus tidak
dikaitkan dengan deteksi RNA HCV dalam air liur. Sehubungan dengan itu, HVC saliva
terdeteksi pada pasien berusia 15/22 (49%) ≤ 45 tahun vs 14/23 (51%) pasien> 46 tahun (p =
0,17); Pada 13/22 (59%) pasien dengan sirosis vs 16/23 (69,5%) pasien tanpa sirosis (p =
0,358). Ada 9/13 (69,2%) pasien dengan jumlah trombosit <105 / mm3 vs 20/32 (62,5%) pasien
dengan jumlah trombosit> 105 / mm3 (p = 0,652). Ada 8/12 (66%) pasien dengan aktivitas
prothrombin <70% vs 21/33 (63%) pasien dengan aktivitas protrombin> 70% (p = 0,703). Ada
9/13 (69%) pasien dengan gingivitis sedang sampai parah (MGI> 1,0) vs 20/32 pasien dengan
gusi sehat (MGI <1.0) (p = 0,66). Sehubungan dengan genotipe HCV 24/37 (64,7%) pasien
memiliki genotipe 1 banding 5/8 (62%) dengan genotipe lain (p = 0,484) (Tabel 3).
 Variabel dengan nilai p <0,1 diperkenalkan dalam analisis multivariat dan hanya satu
variabel independen, viral load> 5,17 log IU / mL, secara signifikan dikaitkan dengan deteksi
HCV pada air liur (p = 0.0002) (Tabel 3). Untuk menguatkan bahwa viral load dikaitkan dengan
adanya HCV dalam air liur; Pasien dikelompokkan berdasarkan hasil positif dan negatif dari
deteksi HCV saliva. Perbedaan statistik diamati antara alat viral load, log 5,85 IU / mL (95%
CI 5,67-6,02) untuk pasien dengan HCV dalam air liur vs 4,77 IU / mL (95% CI 4,35 - 5,19)
untuk pasien tanpa HCV dalam air liur ( P = 0.0001) (Gambar 2).
Diskusi
Dalam penelitian ini kami menentukan adanya HCV dalam air liur pasien dengan
hepatitis C aktif untuk mengidentifikasi beberapa faktor yang terkait. Peran cairan rongga
mulut dalam transmisi HCV kontroversial. Beberapa penelitian melaporkan adanya RNA HCV
dalam air liur, namun infektivitas partikel HCV saliva belum dikonfirmasi. Kemudian, tidak
ada data solid yang mendukung bahwa keberadaan HCV dalam air liur adalah rute transmisi
HCV yang efektif.
Selain itu, studi epidemiologi menunjukkan terbatasnya transmisi HCV saliva [4].
Sumber potensial HCV dalam air liur meliputi GCF, leukosit yang bermigrasi melalui epitel
ke gingival groove [5], kelenjar ludah [10,11] dan sel mononuklear perifer dari jaringan
perdarahan [12]. Oleh karena itu, kami berhipotesis bahwa kehadiran penyakit periodontal dan
gingiva dapat menjadi faktor penyebab penyebaran virus. Namun, dalam penelitian kami dan
penelitian lain, HCV ludah telah terdeteksi pada pasien dengan periodontium sehat dan
berpenyakit [5,6,8]. Dalam hal ini, kami tidak menemukan hubungan antara tingkat inflamasi
gingiva dan deteksi viral RNA dalam air liur. Tidak ada perbedaan bermakna antara HCV
saliva antara pasien dengan gusi sehat (9/13, 69%) dan mereka dengan penyakit gingiva (20/32,
62,5%). Telah diamati korelasi positif antara MGI dan persen plak (Gambar 1), bertepatan
dengan penelitian lain menunjukkan bahwa tingkat keparahan penyakit periodontal bervariasi
tergantung pada kuantitas dan kualitas keberadaan biofilm [24]. Kami menemukan bahwa
faktor utama yang terkait dengan keberadaan HCV dalam air liur adalah viral load yang tinggi
dalam serum (> 5,17 log IU / ml) seperti yang ditemukan pada beberapa penelitian lain [5,7].
Dalam penelitian kami, 27/29 (93,1%) pasien dengan RNA virus dalam air liur memiliki viral
load yang tinggi; Namun, 4/16 (25%) pasien dengan hasil negatif pada air liur juga berada
dalam kisaran viral load tinggi (5,17-5,60 log IU / ml).
Dalam penelitian kami, kami menentukan dua parameter klinis lainnya pada pasien,
untuk mendapatkan data lain terkait dengan tingkat keparahan penyakit hati. Waktu
prothrombine dan jumlah trombosit adalah parameter penting yang mungkin terkait dengan
perdarahan rongga bucal, oleh karena itu dapat dikaitkan dengan kemungkinan infeksi yang
lebih tinggi melalui air liur, namun tidak satupun dari dua parameter tersebut dikaitkan secara
statistik dengan adanya RNA HCV dalam air liur.
Prevalensi HCV saliva berbeda dengan sumber sampel, populasi penelitian, dan metode
ekstraksi dan deteksi RNA virus. Dalam penelitian kami prevalensi HCV dalam air liur adalah
64,4% pada pasien dengan infeksi aktif. Beberapa penelitian melaporkan nilai prevalensi 31-
100% pada sampel air liur [5,7] dan 38-85% pada sampel cairan alur oral dan gingival [5,8].
Studi lain melaporkan 52% HCV air liur pada sekelompok pasien koinfeksi HIV [25].
Perlu dicatat bahwa, dalam penelitian kami, 20% pasien memiliki sumber infeksi yang
tidak dapat diidentifikasi seperti yang ditemukan pada penelitian lain [26,27]. Beberapa
penelitian epidemiologis HCV dilakukan pada orang Meksiko yang melibatkan donor darah,
[28-30] populasi terbuka, [31,32] dan pasien dengan sirosis [33] menyebutkan bahwa
pengobatan gigi sebagai faktor risiko yang mungkin terjadi. Penelitian lain menemukan bahwa
hidup dengan anggota keluarga yang terinfeksi HCV [34,35] atau menderita penyakit hati
[33,36,37] merupakan faktor risiko terkait. Meskipun diketahui bahwa beberapa faktor
berkontribusi terhadap transmisibilitas HCV untuk air liur [5,38] dan viral load sangat rendah
pada [39] ini. Kehadiran HCV dalam air liur adalah untuk menarik perhatian terutama pada
pasien dengan infeksi aktif dan viral load yang tinggi, pasien yang memerlukan bimbingan
kesehatan mulut mereka oleh dokter gigi. Di sisi lain ada perubahan yang sangat baik dalam
praktik prosedur pengendalian infeksi antar dokter gigi. Meski tidak semuanya akrab dengan
prosedur pengendalian infeksi 40,41]. Hasil ini harus ditafsirkan dengan hati-hati. Karena
transmisi HCV nonparenteral domestik terjadi [42,43], namun mekanisme transmisi belum
terbentuk.
Kesimpulan
Deteksi HCV dalam air liur dikaitkan dengan viral load yang relatif tinggi dalam serum
namun tidak dengan tingkat penyakit periodontal atau tingkat keparahan penyakit hati.
Daftar Pustaka
1. Lavanchy D: Evolving epidemiology of hepatitis C virus. Clin Microbiol Infect 2011,
17(2):107–115.
2. Perz JF, Armstrong GL, Farrington LA, Hutin YJ, Bell BP: The contributions of
hepatitis B virus and hepatitis C virus infections to cirrhosis and primary liver cancer
worldwide. J Hepatol 2006, 45(4):529–538.
3. Alter MJ: Epidemiology of hepatitis C virus infection. World J Gastroenterol 2007,
13(17):2436–2441.
4. Ferreiro MC, Dios PD, Scully C: Transmission of hepatitis C virus by saliva Oral Dis
2005, 11(4):230–235.
5. Suzuki T, Omata K, Satoh T, Miyasaka T, Arai C, Maeda M, Matsuno T, Miyamura T:
Quantitative detection of hepatitis C virus (HCV) RNA in saliva and gingival crevicular
fluid of HCV-infected patients. J Clin Microbiol 2005, 43(9):4413–4417.
6. Lins L, Almeida H, Vitvisk L, Carmo T, Parana R, Reis MG: Detection of hepatitis C
virus RNA in saliva is not related to oral health status or viral load. J Med Virol 2005,
77(2):216–220.
7. Wang CC, Morishima C, Chung M, Engelberg R, Krantz E, Krows M, Sullivan DG,
Gretch DR, Corey L: High serum hepatitis C virus (HCV) RNA load predicts the
presence of HCV RNA in saliva from individuals with chronic and acute HCV
infection. J Infect Dis 2006, 193(5):672–676.
8. Shafique M, Ahmad N, Awan FR, Mustafa T, Ullah M, Qureshi JA: Investigating the
concurrent presence of HCV in serum, oral fluid and urine samples from chronic HCV
patients in Faisalabad, Pakistan. Arch Virol 2009, 154(9):1523–1527.
9. Farghaly AG, Mansour GA, Mahdy NH, Yousri A: Hepatitis B and C virus infections
among patients with gingivitis and adult periodontitis: seroprevalence and public health
importance. J Egypt Public Health Assoc 1998, 73(5–6):707–735.
10. Arrieta JJ, Rodriguez-Inigo E, Ortiz-Movilla N, Bartolome J, Pardo M, Manzarbeitia
F, Oliva H, Macias DM, Carreno V: In situ detection of hepatitis C virus RNA in
salivary glands. Am J Pathol 2001, 158(1):259–264.
11. Toussirot E, Le Huede G, Mougin C, Balblanc JC, Bettinger D, Wendling D: Presence
of hepatitis C virus RNA in the salivary glands of patients with Sjogren's syndrome and
hepatitis C virus infection. J Rheumatol 2002, 29(11):2382–2385.
12. Vera-Otarola J, Barria MI, Leon U, Marsac D, Carvallo P, Soza A, Lopez-Lastra M:
Hepatitis C virus quasispecies in plasma and peripheral blood mononuclear cells of
treatment naive chronically infected patients. J Viral Hepat 2009, 16(9):633–643.
13. Minaya-Sanchez M, Medina-Solis CE, Maupome G, Vallejos-Sanchez AA, Casanova-
Rosado JF, Marquez-Corona Mde L: Prevalence of and risk indicators for chronic
periodontitis in males from Campeche, Mexico. Rev Salud Publica (Bogota) 2007,
9(3):388–398.
14. Díaz Guzmán LM, Castellanos Suárez JL: Lesiones de la mucosa bucal y
comportamiento de la enfermedad periodontal en embarazadas. Med Oral Patol Oral
Cir Bucal 2004, 9:430–437.
15. Hernandez Sampieri R, Fernandez Collado C, Baptista Lucio P: Metodología de la
investigación. México, D.F., México: McGraw Hill/Interamericana Editores, S.A. de
C.V; 2010:243–247.
16. Silness J, Loe H: Periodontal Disease in Pregnancy. Ii. Correlation between Oral
Hygiene and Periodontal Condtion. Acta Odontol Scand 1964, 22:121–135.
17. Lobene RR, Weatherford T, Ross NM, Lamm RA, Menaker L: A modified gingival
index for use in clinical trials. Clin Prev Dent 1986, 8(1):3–6.
18. O'Leary TJ, Drake RB, Naylor JE: The plaque control record. J Periodontol 1972,
43(1):38.
19. Garson JA, Tedder RS, Briggs M, Tuke P, Glazebrook JA, Trute A, Parker D, Barbara
JA, Contreras M, Aloysius S: Detection of hepatitis C viral sequences in blood
donations by "nested" polymerase chain reaction and prediction of infectivity. Lancet
1990, 335(8703):1419–1422.
20. Okamoto H, Kanai N, Mishiro S: Full-length nucleotide sequence of a Japanese
hepatitis C virus isolate (HC-J1) with high homology to USA isolates. Nucleic Acids
Res 1992, 20(23):6410.
21. Chevaliez S, Pawlotsky JM: Hepatitis C virus serologic and virologic tests and clinical
diagnosis of HCV-related liver disease. Int J Med Sci 2006, 3(2):35–40.
22. Sosa-Jurado F, Santos-Lopez G, Guzman-Flores B, Ruiz-Conde JI, Melendez-Mena D,
Vargas-Maldonado MT, Martinez-Laguna Y, Contreras- Mioni L, Vallejo-Ruiz V,
Reyes-Leyva J: Hepatitis C virus infection in blood donors from the state of Puebla,
Mexico. Virol J 2010, 7:18.
23. Yasojima K, Kilgore KS, Washington RA, Lucchesi BR, McGeer PL: Complement
gene expression by rabbit heart: upregulation by ischemia and reperfusion. Circ Res
1998, 82(11):1224–1230.
24. Kornman KS: Nature of periodontal diseases: assessment and diagnosis. J Periodontal
Res 1987, 22(3):192–204.
25. Eirea M, Dios PD, Hermida M, Rodriguez I, Castro A, Ocampo A: Detection of HCV-
RNA in saliva of HIV-HCV coinfected patients. AIDS Res Hum Retroviruses 2005,
21(12):1011–1015.
26. Zein NN: The epidemiology and natural history of hepatitis C virus infection. Cleve
Clin J Med 2003, 70(Suppl 4):S2–6.
27. Payan C, Roudot-Thoraval F, Marcellin P, Bled N, Duverlie G, Fouchard- Hubert I,
Trimoulet P, Couzigou P, Cointe D, Chaput C, et al: Changing of hepatitis C virus
genotype patterns in France at the beginning of the third millenium: The GEMHEP
GenoCII Study. J Viral Hepat 2005, 12(4):405–413.
28. Mendez-Sanchez N, Baptista-Gonzalez H, Sanchez-Gomez RH, Bordes- Aznar J,
Uribe-Esquivel M: [The prevalence of hepatitis B and C in blood donors in a 3rd-level
hospital of Mexico City]. Salud Publica Mex 1999, 41(6):475–478.
29. Vences-Avilés MA, González-Bravo F: Diagnóstico de la infección por el virus de la
hepatitis C en donadores de sangre. Rev Mex Patol Clin 2005, 52(1):6–12.
30. Ladron-de Guevara L, Gomez N, Vazquez-Cantarell M, Garcia-Mendez S, Di Silvio
M: [Prevalence of and risk factors for hepatitis C in blood donors]. Rev Gastroenterol
Mex 2002, 67(1):11–16.
31. Valdespino JL, Conde-González CJ, Olaiz-Fernández G, Palma O, Kershenobich D,
Sepúlveda J: Seroprevalencia de la hepatitis C en adultos de México: &iquest;un
problema de salud pública emergente? Salud Publica Mex 2007, 49:s395–s403.
32. Mendez-Sanchez N, Ponciano-Rodriguez G, Chavez-Tapia NC, Motola-Kuba D,
Almeda-Valdes P, Sanchez-Lara K, Ramos MH, Uribe M: Prevalence of hepatitis C
infection in a population of asymptomatic people in a checkup unit in Mexico city. Dig
Dis Sci 2005, 50(4):733–737.
33. Garcia-Montalvo BM, Galguera-Colorado PL: Distribution of hepatitis C virus
genotypes, risk factors and liver disease in patients from Yucatan, Mexico. Ann Hepatol
2008, 7(4):345–349.
34. Vivas-Arceo C, Benavides SA, De Jesus TJ, Panduro A, Rivas-Estilla AM: Hepatitis C
virus: prevalence and routes of infection among blood donors of West Mexico. Hepatol
Res 2003, 25(2):115–123.
35. Alvarez-Munoz MT, Vences-Aviles MA, Damacio L, Vazquez-Rosales G, Torres J,
Gonzalez-Bravo F, Munoz O: Hepatitis C virus RNA (HCV-RNA) in blood donors and
family members seropositive for anti-HCV antibodies.
Arch Med Res 2001, 32(5):442–445.
36. Burguete-Garcia AI, Conde-Gonzalez CJ, Jimenez-Mendez R, Juarez-Diaz Y, Meda-
Monzon E, Torres-Poveda K, Madrid-Marina V: Hepatitis C seroprevalence and
correlation between viral load and viral genotype among primary care clients in
Mexico. Salud Publica Mex 2011, 53(Suppl 1):S7–12.
37. Romero-Figueroa S, Ceballos-Salgado E, Santillan-Arreygue L, Miranda-Garcia M,
Rubio-Lezama M, Garduno-Garcia JJ: Risk factors associated with hepatitis C virus
infection in an urban population of the State of Mexico. Arch Virol 2012, 157(2):329–
332.
38. Belec L, Legoff J, Si-Mohamed A, Bloch F, Mbopi Keou FX, Becquart P, Matta M,
Prazuck T, Petite JP, Gutmann L, et al: Mucosal humoral immune response to hepatitis
C virus E1/E2 surface glycoproteins and HCV shedding in saliva and cervicovaginal
fluids from chronically HCV-infected patients. J Hepatol 2003, 38(6):833–842.
39. Menezes GB, Pereira FA, Duarte CA, Carmo TM, da Silva Filho HP, Zarife MA,
Krieger MA, Reis EA, Reis MG: Hepatitis C virus quantification in serum and saliva
of HCV-infected patients. Mem Inst Oswaldo Cruz 2012, 107(5):680–683.
40. King TB, Muzzin KB: A national survey of dental hygienists' infection control attitudes
and practices. J Dent Hyg 2005, 79(2):8.
41. Su J, Deng XH, Sun Z: A 10-year survey of compliance with recommended procedures
for infection control by dentists in Beijing. Int Dent J 2012, 62(3):148–153.
42. Paez JA, Sharaf EN, Rimlinger F, El-Daly M, El-Hariri H, El-Hoseiny M, Mohsen A,
Mostafa A, Delarocque AE, Abdel HM, Fontanet A, Mohamed MK, Thiers V: HCV
iatrogenic and intrafamilial transmission in Greater Cairo, Egypt. Gut 2010,
9(11):1554–1560.
43. de Waure C, Cefalo C, Chiaradia G, Sferrazza A, Miele L, Gasbarrini G, Ricciardi W,
Grieco A, La Torre G: Intrafamilial transmission of hepatitis C virus in Italy: a
systematic review. J Epidemiol Community Health 2010,
64(10):843–848.