Tentir praktikum Biokimia

1. Cara membuat Homogenat

a. Timbang sejumlah tertentu jaringan otak / otot
b. Tambahkan 1 ml larutan dapar fisiologi ( PBS ) ph 7,2
c. Lumatkan dengan alat pelumat potter elvejehm
d. Campurkan dengan sentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm
e. Ambil seluruh supernatan, catat volumenya letakkan di tabung lain pada suhu – 20 derajat
bila belum digunakan

2. Membandingkan aktivitas enzim spesifik kolin esterase jaringan otak dan otot
a. Tujuan :
Memperlihatkan bahwa otak sebagai jaringam yang sel selnya sangat aktif berkomunikasi
satu sama lain melalui berbagau mediator, mempunyai aktivitas enzim kolin esterase yang
jauh lebih tinggi dibandingkan jaringan otot lurik yang merupakan salah satu sasaran sel
saraf pusat
b. Dasar reaksi :
Buutyrilthiocholine + h2O  tiocholine + Butyrate
Tiocholine + DTNB ( dithionitrobenzoat)  2-nitro-5-mercatobenzenate
c. Bahan dan alat
- Bahan
supernatan homogenat jaringan otak dan otot
kit untuk mengukur aktiivitas enzim kolin esterase
- Alat hanya spektrofotometri
d. Cara kerja
blanko Uji (otak ) : duplo Uji (otot ) :duplo
Akuades 10 mikroliter - -
Uji otak - 10 mikro liter -
Uji otot - - 10 mikro liter
Larutan R 1 1500 mikro liter 1500 mikro liter 1500 mikroliter
Campurkan dengan baik, inkubasi pada suhu 37 derajat celcius selama 5 menit
Larutan R2 50 mikro liter 50 mikro liter 50 mikroliter
Campurkan dengan baik, baca asorbansi pada A405 , catat setelah 1 menitdari
penambahan laurtan R2
Rumus :
23460 x ( A405uji – A405blanko ) = .... U/L
Aktivitas kolin esterase spesifik :
= aktivitas /mg protein jaringan
=U/L per mg protein /dl
=U/L per 10 mg protein/L
= U/10 mg protein
3. Pengukuran kadar protein total jaringan otak dan otot
a. Tujuan
Mengukur kadar protein jaringan otak dan otot untuk menetapkan aktivitas spesifik suatu
enzim dalam jaringan otak dan otot ( aktivitas / mg protein total )
b. Bahan dan alat
- Bahan
Supernatan homogenat jaringan otak dan otot
Standart protein BSA/ bovine serum albumin dengan konsentrasi 6 G/dl
- Alat hanya spektrofotometri

Neuron 2015_
Tentir praktikum Biokimia

c. Cara kerja
blanko Standar Uji otak Uji otot
Pereaksi biuret 8 ml 8ml 8 ml 8 ml
Standar BSA ( 6 - 100 mikro liter - -
G/dl )
Supernatan - - 100 mikroliter -
otak
Supernatan - - - 100 mikroliter
otot
Akuades 100 mikroliter - - -
Campur dengan baik , diamkan 30 menit suhu kamar, baca asorbansi A540
Rumus :
AU – AB x 6 G/dl
AS – AB
Jadinya nanti dalam mg / dl
Kadar protein total dalam jaringan otak / otot adalah = konsentrasi protein total (mg/dl )
x volume seuruh supernatan / berat jaringan ditimbang (mg).

Kadar dinyatakan dalam mg protein / mg jaringan

Okeeeeee..... sekilas ini adallah sumber dari tahun lalu dan kemarin bg Eko ngambil
pretest dari sini ... jadi pahami yaaaa sahabat Neuron 2015.....

#Salam Departemen Biokim

Neuron 2015_