DASAR GENETIK KANKER

 Jumlah Sel Adalah Produk Dari Tingkat Pembelahan Sel (Mitosis) Dan Kematian
Sel (Apoptosis)
Jumlah sel secara tepat diatur dalam semua
organisme multisel dan hal ini dicapai melalui
pengendalian laju pembelahan sel serta kematian
dari semua sel di dalam organisme. Meskipun belum
jelas, dengan sedikit pemikiran kita tahu bahwa hal
ini dikarenakan konsistensi yang luar biasa dari
ukuran dan bentuk individu dalam suatu spesies
(dengan beberapa tingkat penyimpangan, tetapi tupai selalu tampak seperti tupai dan
manusia pasti tampak seperti manusia). Jadi bagaimana jumlah sel dalam organisme
multiseluler diatur? Sel-sel baru diproduksi melalui duplikasi yang tepat dari isi sel
yang ada, diikuti oleh pembagian sel ini untuk membentuk dua sel anak — sebuah
proses yang dikenal sebagai mitosis. Sel-sel juga dihilangkan dengan cara yang sama
persis dengan memicu proses bunuh diri sel secara internal yang dikenal sebagai
apoptosis (atau kematian sel terprogram). Jumlah sel dalam organisme multisel adalah
produk dari tingkat mitosis dan apoptosis. Gangguan pada mitosis atau apoptosis yang
normal dapat menyebabkan peningkatan (atau penurunan) jumlah sel. Sebagaimana
akan kita lihat, kanker mewakili spektrum kondisi di mana kontrol normal pada
jumlah sel menghilang. Kanker dapat muncul sebagai akibat mutasi gen yang
mempengaruhi tingkat mitosis serta apoptosis, sehingga menyebabkan akumulasi sel
ekstra.

 Kejadian Kanker Bervariasi Antar Jaringan

Kanker bukanlah penyakit tunggal
tetapi sekelompok dari beragam kondisi
yang semuanya berbagi kesamaan yaitu
peningkatan jumlah sel dalam jaringan
tertentu. Kanker dapat bersifat jinak (di
mana kanker gagal menyebar ke jaringan
lain dan, dalam banyak kasus tidak
mengancam nyawa) atau ganas (di mana kanker bersifat invasif dan menyebar ke
jaringan lain di dalam tubuh). Kanker dapat muncul dari hampir semua jaringan di
dalam tubuh tetapi paling sering ditemukan pada epitel — lembaran sel yang
membentuk lapisan atas kulit dan yang melapisi dinding rongga dan tabung di dalam
tubuh. Kanker yang timbul dari epitel disebut karsinoma dan tumor ini bertanggung
jawab untuk lebih dari 80% dari semua kematian terkait kanker di dunia Barat.
Fakta terakhir mungkin terkait dengan dua faktor: (1) epitel berada pada risiko
tertinggi paparan agen penyebab kanker (karsinogen) karena sel-sel ini melapisi
permukaan tubuh yang bersentuhan langsung dengan lingkungan (misalnya kulit, paru-
paru, mulut, esofagus, lambung, usus, saluran kemih, leher rahim) yang merupakan
sumber utama karsinogen (seperti yang akan kita lihat, karsinogen dapat bersifat kimia,
fisik atau biologis). (2) Karena sel-sel epitel rentan terhadap kerusakan (karena paparan
lingkungan atau agen infeksi) sel-sel ini memiliki tingkat penggantian yang tinggi dan
karena itu sangat mitosis (yaitu sel-sel ini terus-menerus membelah). Kanker muncul
lebih sering dalam jaringan yang menunjukkan tingkat mitosis yang tinggi mungkin
karena sel-sel ini sudah membelah pada tingkat yang relatif tinggi dan hambatan untuk
pembelahan sel lebih rendah daripada di jaringan yang tidak membagi (jaringan post-
mitotic). Hal ini membawa kita ke poin penting lainnya; tidak semua sel di tubuh
membelah pada tingkat yang sama. Beberapa jaringan menunjukkan tingkat
pembelahan sel yang sangat rendah (otak dan jaringan otot misalnya) dan kanker jarang
muncul di jaringan seperti itu sebagai hasilnya (meskipun mereka dapat bermigrasi ke
sana dari jaringan lain). Beberapa contoh kanker umum yang berasal dari epitel
diberikan pada Tabel 2.1 di bawah ini.

Tumor ganas lainnya muncul dari jaringan non-epitel di seluruh tubuh. Mereka
yang muncul dari berbagai jaringan ikat, yang disebut sarkoma, merupakan 1% dari
 tumor yang ditemukan di klinik kanker. Kelompok kedua tumor asal non-epitel berasal
dari berbagai jenis sel yang membentuk jaringan pembentuk darah (hematopoietik)
dan termasuk sel-sel sistem kekebalan tubuh. Tumor tersebut (disebut keganasan
hematopoietik) termasuk leukemia dan limfoma dan ini bertanggung jawab atas
sekitar 17% kematian terkait kanker. Kelompok terakhir tumor non-epitel muncul dari
berbagai komponen pusat (yaitu otak) dan sistem saraf perifer (yaitu saraf tulang
belakang dan jaringan saraf terluar) dan disebut tumor neuroektodermal. Tumor ini
menyebabkan sekitar 2,5% kematian terkait kanker.

 Ada Korelasi Yang Baik Antara Kerusakan Sel Atau Infeksi Dan Kejadian
Kanker
Sebagaimana akan kita lihat, kanker paling sering muncul sebagai akibat mutasi
yang mempengaruhi gen yang mengatur tingkat mitosis dan / atau apoptosis. Hampir
semua karsinogen adalah agen mutagenik, yaitu agen yang menyebabkan mutasi
genetik. Dengan demikian, jaringan yang biasanya mengalami tingkat tertinggi paparan
karsinogen juga memiliki risiko mutasi tertinggi. Karena jaringan epitel terus-menerus
terkena zat-zat yang mengandung karsinogen (di udara yang kita hirup, makanan yang
kita makan, cairan yang kita minum, virus yang kita temui) maka sel-sel ini berada pada
risiko tertinggi untuk memperoleh mutasi yang dapat menyebabkan kanker. Namun,
karena deteksi kerusakan DNA dan mekanisme perbaikan, serta mekanisme untuk
membatasi kemampuan sel abnormal untuk bereplikasi (termasuk penghapusan sel-sel
ini secara sederhana dengan apoptosis, serta induksi dari keadaan non-replikasi yang
disebut penuaan) penting untuk dicatat bahwa sebagian besar mutasi tidak
menghasilkan kanker. Namun, ketika kanker muncul, mereka paling sering ditemukan
di jaringan epitel karena ini berada pada risiko terbesar kerusakan atau infeksi (lihat
tabel 1).
Tabel 1. Kanker epitel manusia yang umum terjadi
Paru-paru
Payudara
Kulit
Usus
Esofagus
Usus besar
Serviks
Perut
 Sebagaimana ditunjukkan di atas, virus juga mampu menyebabkan kanker dan
seperti yang akan kita lihat di bawah, virus penyebab kanker berperan penting dalam
penemuan dasar genetik kanker. Virus dapat memprovokasi kanker melalui penyisipan
ke dalam genom inangnya. Hal ini dapat menyebabkan kanker dalam dua cara yang
berbeda: (1) genom virus dapat membawa gen yang memungkinkan sel inang lepas
dari kontrol normal yang terletak di atasnya yang membatasi pembelahan sel dan / atau
membatasi jangka hidupnya, dan (2) virus dapat mengintegrasikan genomnya dekat
dengan gen inang yang mengatur proliferasi dan / atau apoptosis dan ini dapat
menghasilkan ekspresi gen yang menyimpang.

 Kanker Adalah Kejadian Yang Relatif Jarang Terjadi

Insiden kanker sangat
rendah ketika seseorang
menganggap bahwa jumlah total
sel dalam tubuh manusia ada 1013
bagian (itu 10 triliun!). Faktanya,
jumlah total sel yang dihasilkan
dalam masa hidup manusia rata-
rata adalah 1000 kali jumlah ini
(1016) karena fakta bahwa sel-sel
dalam banyak jaringan konstituen
kita mengalami penggantian yang relatif konstan (pada tingkat 107 sel per detik).
Ketika kita mempertimbangkan potensi besar untuk mutasi terjadi di salah satu sel ini,
baik karena mutasi tak sengaja selama replikasi genom selama pembelahan sel atau
karena mutagen eksternal, kita harus menyimpulkan bahwa kanker adalah kejadian
yang sangat jarang terjadi. Ini kemungkinan besar karena beberapa lapisan kontrol yang
telah berevolusi untuk membatasi pembagian sel yang tidak terkendali karena
konsekuensi bencana yang dapat terjadi. Karena insiden tumor yang relatif rendah itu
mungkin tampak jelas bahwa kanker biasanya timbul dari sel tunggal yang akhirnya
menimbulkan populasi sel tumor heterogen. Namun, fakta ini diperdebatkan selama
beberapa waktu karena banyak tumor tampak poliklonal setelah diagnosis. Hal ini
karena banyak mutasi yang mempromosikan keadaan kanker dapat menonaktifkan
kerusakan DNA normal dan memperbaiki sistem yang memastikan transmisi DNA
yang setia ke sel anak selama pembelahan sel. Kemudian, kita akan membahas produk
gen yang sangat penting dalam hal ini, p53. Ketika mutasi tersebut muncul, mereka
memfasilitasi akumulasi mutasi lebih lanjut pada tingkat yang jauh lebih cepat daripada
yang akan terjadi. Tumor biasanya mengalami semacam proses seleksi Darwin di
mana berbagai genotipe baru diproduksi dan yang paling cocok bertahan hidup dalam
menghadapi faktor-faktor yang bekerja melawan pembentukan tumor.
Kita sekarang tahu bahwa kebanyakan tumor bersifat monoklonal, yaitu,
mereka muncul dari sel prekursor tunggal yang telah menjadi kanker. Beberapa bukti
untuk ini berasal dari mempelajari tumor yang berasal dari sel B; sel-sel sistem
kekebalan tubuh yang menghasilkan antibodi. Potensi sistem kekebalan tubuh kita
untuk menghasilkan antibodi yang berbeda secara praktis tidak terbatas, tetapi hanya
satu jenis antibodi yang dibuat oleh masing-masing sel B (ini adalah karena cara di
mana gen antibodi dikocok untuk menghasilkan kombinasi yang unik dan ini terjadi
secara acak selama pematangan setiap sel B). Hal utama yang perlu ditekankan di sini
adalah bahwa tumor sel B (limfoma sel B dan multiple myeloma) akan menghasilkan
banyak antibodi yang berbeda jika mereka muncul dari beberapa sel B yang berubah
secara independen. Atau, tumor semacam itu akan menghasilkan antibodi yang sama
jika mereka muncul dari sel B yang
diubah tunggal. Jadi, yang mana itu?
Analisis antibodi yang dihasilkan
oleh tumor sel B (lihat Gambar
disamping) mengungkapkan bahwa
mereka bersifat monoklonal, sangat
menyarankan bahwa tumor seperti
itu muncul dari sebuah progenitor
kanker tunggal.
Bukti lain untuk monoklonalitas tumor
berasal dari analisis lesi kromosom yang dapat
ditemukan pada banyak kanker. Analisis lesi
tersebut mengungkapkan bahwa semua sel
tumor biasanya akan menampilkan lesi yang
sama. Salah satu yang paling terkenal adalah
kromosom Philadelphia (atau Ph) (dinamai
berdasarkan tempat penemuannya) yang
ditemukan pada leukemia myeloid kronis dan menghasilkan translokasi gen BCR (dan
 promotor terkait) di hulu dari gen Abl untuk menciptakan gen fusi baru (Bcr-Abl),
produk protein yang sangat meningkatkan aktivitas kinase.

 Kanker Adalah Proses Multi-Step

Satu mutasi yang terjadi jarang yang cukup untuk menyebabkan kanker.
Hal ini disebabkan oleh mekanisme yang telah berevolusi selama ribuan tahun untuk
melindungi diri dari peristiwa-peristiwa semacam itu. Organisme multisel dengan
jaringan khusus hanya bisa makmur jika sel-sel penyusun mereka bekerja bersama
untuk memastikan keberhasilan reproduksi dan kelangsungan hidup jangka panjang
organisme. Jika sel mutan yang muncul menunjukkan perilaku 'egois', dengan
mereplikasi diri tanpa memperhatikan kebutuhan organisme, kita dapat mengharapkan
sel-sel tersebut diperlakukan dengan kasar (kematian melalui apoptosis adalah
hukuman yang paling umum). Oleh karena itu, seharusnya sedikit mengejutkan untuk
mengetahui bahwa hampir semua organisme multiseluler kompleks telah
mengembangkan serangkaian mekanisme perlindungan yang membatasi potensi
kanker untuk berkembang. Untuk mengembangkan kanker karena itu, sel yang
menimbulkan kanker harus mengatasi beberapa faktor yang bekerja melawan
kelangsungan hidupnya. Inilah sebabnya mengapa kanker adalah kejadian yang relatif
jarang terjadi. Diperkirakan bahwa 6-8 mutasi independen biasanya diperlukan untuk
tumor terjadi.
Mutasi pada onkogen dan gen supresor tumor berkontribusi pada
perkembangan kanker. Mutasi gen inang yang dapat meningkatkan proliferasi dan /
atau sifat biologis lainnya yang meningkatkan kemungkinan kanker disebut mutasi
onkogenik. Onkogen adalah gen yang ketika dalam bentuk mutase meningkatkan
kanker. Mutasi onkogenik biasanya adalah mutasi “memperoleh fungsi” yang
meningkatkan aktivitas atau tingkat ekspresi dari produk gen.
Sebaliknya, gen penekan tumor adalah gen yang biasanya bertindak untuk
melawan perkembangan kanker. Gen-gen seperti itu sering tidak aktif dalam kanker
sehingga mereka tidak lagi menjalankan fungsi normalnya. Mutasi semacam itu
biasanya mutasi null, atau mutasi dengan kehilangan fungsi, di mana produk gen
kehilangan sebagian atau total aktivitas atau ekspresi. Dalam keadaan tertentu, mutasi
genetik dapat menghasilkan mutasi dominan (juga disebut dominan-negatif) yang
tidak hanya gagal menjalankan fungsi normalnya, tetapi juga dapat mengganggu fungsi
protein tipe liar yang tersisa.
 Beberapa faktor terpenting yang mencegah sel-sel individual berkembang
biak dengan cara yang tidak terkontrol meliputi:
1. Persyaratan untuk faktor pertumbuhan
Sel membutuhkan faktor pertumbuhan untuk memungkinkan mereka
untuk membelah dan faktor-faktor ini hampir selalu disediakan oleh sel lain (yaitu
dengan cara parakrin). Karena pasokan faktor pertumbuhan terbatas, kanker perlu
mencari cara untuk meningkatkan pasokan faktor-faktor tersebut (dengan memperoleh
kemampuan untuk membuat faktor-faktor ini) atau dengan memecah molekul sinyal
hilir yang terkait dengan
pengikatan faktor
pertumbuhan ke reseptor
membran mereka.
sedemikian rupa sehingga
reseptor tampaknya terus-
menerus diaktifkan.
2. Tumor supresor gen bertindak sebagai rem pada proliferasi
Beberapa protein bertindak untuk menekan proliferasi yang tidak terkontrol
dengan memantau sel-sel untuk tanda-tanda kerusakan DNA atau tanda-tanda perilaku
menyimpang lainnya. Salah satu gen penekan tumor yang paling penting adalah faktor
transkripsi p53, yang akan kita bahas lebih rinci nanti. P53 beroperasi dengan
berkolaborasi dengan protein (ATM, ATR, Chk1, Chk2) yang terlibat dalam deteksi
dan perbaikan kerusakan DNA. Ketika p53 menjadi aktif dalam sel (hal ini dicapai
melalui stabilisasi protein p53 biasanya-labil) itu menginduksi transkripsi gen yang
dapat memblokir masuk ke mitosis. Ini memungkinkan perbaikan DNA dilakukan
sebelum sel diizinkan untuk memulai kembali mitosis.
Mungkin yang lebih penting, kerusakan DNA yang luas menghasilkan ekspresi
gen yang bergantung pada p53 (Noxa, Puma dan Bax) yang mempromosikan
apoptosis (kematian sel terprogram) dan karenanya menghilangkan sel sepenuhnya.
Mungkin lebih baik untuk hanya membuang sel yang membawa DNA yang rusak
daripada risiko perbaikan tidak lengkap yang pada akhirnya dapat menimbulkan
ancaman bagi kelangsungan hidup seluruh organisme. Karena peran penting yang
dimainkan p53 dalam memonitor integritas genom, hilangnya fungsi p53 dapat sangat
mempercepat perkembangan menjadi kanker. Gen p53 ditemukan dalam bentuk
mutan di sekitar 50% dari semua kanker.
3. Kebutuhan oksigen dan nutrisi
Pasokan oksigen dan nutrisi diatur oleh kedekatan dengan pembuluh
darah. Karena tumor adalah massa sel yang tidak normal, mereka memerlukan
pembuluh darah baru (neo-vaskularisasi) untuk tumbuh melampaui ukuran tertentu (1
cm3). Ini adalah pengekangan besar pada pertumbuhan tumor padat dan karena ini,
tumor tersebut perlu mendorong pembuluh darah baru untuk tumbuh (proses yang
disebut angiogenesis) atau sel-sel tumor
akan mati karena hipoksia (kekurangan
oksigen) dan nutrisi. perampasan.
Kemampuan untuk menginduksi
pertumbuhan pembuluh darah baru
merupakan langkah besar dalam
perkembangan kanker dan sering
dikaitkan dengan produksi VEGF
(vascular endothelial growth factor/
faktor pertumbuhan endotel
vaskular) oleh tumor.
4. Sistem kekebalan bertindak sebagai penghalang bagi perkembangan kanker
Vertebrata dan organisme lain yang lebih tinggi memiliki sistem kekebalan
yang mampu mengenali sel menyimpang yang mungkin mengekspresikan protein atau
sel yang bermutasi yang gagal mengekspresikan protein yang biasanya diekspresikan
oleh sel sehat. Sel-sel tertentu dari sistem kekebalan (disebut sel T sitotoksik dan sel
pembunuh alami/natural killer) telah berevolusi untuk berpatroli di tubuh untuk
menyingkirkan sel (dengan membunuh sel-sel ini melalui apoptosis) yang
menampilkan protein mutan atau 'asing'. Sel-sel semacam itu berfungsi sebagai
pertahanan penting melawan perkembangan kanker.
 Karena faktor-faktor ini, peristiwa mutagenik tunggal sangat tidak
memungkinkan sel untuk secara bersamaan melarikan diri dari semua kontrol
pertumbuhan di atas. Sebaliknya, apa yang biasanya terjadi adalah bahwa sel pra-
kanker mengalami proses transformasi progresif dari keadaan yang relatif non-
kanker menjadi status yang semakin berubah kearah kanker. Pada setiap titik di
sepanjang jalan, mutasi lebih lanjut terjadi (difasilitasi oleh mutasi sebelumnya) yang
memungkinkan sel untuk maju ke tahap berikutnya. Oleh karena itu, perkembangan
kanker biasanya terjadi selama jangka waktu yang relatif lama dan inilah mengapa
kanker lebih mungkin muncul (atau menjadi dapat dideteksi secara klinis) di kemudian
hari. Namun, ini dapat dipercepat jika mutasi yang sudah ada sebelumnya diwariskan
yang sudah memberikan tanah subur
di mana mutasi lebih lanjut dapat
berkembang. Dengan demikian,
kanker tidak diragukan lagi memiliki
komponen yang diwariskan dan ini
dapat memiliki dampak yang
signifikan terhadap kejadian kanker
pada keluarga atau negara tertentu.
Gambar 9.10. konjugasi dari
sel T sitotoksik (di sebelah kiri) ke
targetnya, di sini mouse mastocytoma,
menunjukkan polarisasi butiran ke
arah target pada titik kontak.
Cytoskeletons dari kedua sel
diperlihatkan oleh pewarnaan
immunoflourescent dengan antibodi
untuk granzyme A (merah). Dua
puluh menit setelah konjugasi
sitoskeleton sel target mungkin masih
utuh (di atas), tetapi ini dengan cepat
menjadi terganggu (di bawah).

 Transformasi Seluler
Selama perkembangan dari keadaan normal menjadi kanker, sel-sel sering
digambarkan menjalani 'transformasi'. Transformasi seluler adalah istilah yang
digunakan untuk menggambarkan sel-sel yang berada pada berbagai tahap
perkembangan menjadi kanker. Sel-sel yang berubah menampilkan berbagai sifat yang
biasanya tidak ditampilkan oleh sel normal dan karakteristik ini sangat berguna untuk
 penemuan gen yang terlibat dalam perkembangan kanker. Beberapa karakteristik sel
yang ditransformasikan akan dibahas.
1. Kemampuan untuk tumbuh dalam kultur laboratorium (in vitro) untuk jangka
waktu yang lama.
Kemampuan untuk menumbuhkan sel di laboratorium, secara in vitro (secara
harfiah berarti 'dalam kaca') seperti yang biasanya dijelaskan, telah sangat memudahkan
studi fungsi sel normal. Namun, dalam prakteknya ini cukup sulit untuk dicapai karena
sel perlu diberikan semua faktor yang diperlukan untuk kelangsungan hidup mereka,
serta faktor-faktor yang akan merangsang pembelahan sel. Sementara penelitian awal
berhasil menjaga sel-sel hidup in vitro untuk berbagai periode waktu, tidak sampai
penemuan faktor pertumbuhan yang menjadi mungkin untuk merangsang sel-sel
untuk menjalani pembelahan sel di pengaturan laboratorium. Seperti disebutkan
sebelumnya, faktor pertumbuhan penting untuk pembelahan sel karena protein ini
berikatan dengan reseptor permukaan sel dan mengaktifkan kaskade pensinyalan yang
mendorong pembelahan sel. Serum adalah sumber yang tepat dari faktor-faktor tersebut
dan ketika ditambahkan ke sel dapat
mempromosikan pembagian sebagian besar
tipe sel. Namun, bahkan dengan adanya serum,
sel yang tidak tertransformasi pada umumnya
akan mengalami sejumlah pembelahan sel (25-
30) dan kemudian akan menjadi tidak
responsif. Dengan demikian, sel yang tidak
ditransformasikan memiliki semacam jam
bawaan yang membatasi jumlah divisi yang
dapat dialami sel tersebut sebelum memasuki
keadaan yang disebut penuaan replikatif.
Batas ini (disebut batas Hayflick setelah
ilmuwan yang menemukan fenomena ini) agak
bervariasi dari satu jenis sel yang lain.
Meskipun butuh bertahun-tahun untuk
menemukan mengapa hal ini terjadi, kita
sekarang tahu bahwa ini berkaitan dengan
pemendekan kromosom (disebut telomere) selama setiap pembagian sel yang
berurutan. Pada beberapa titik telomere menjadi sangat terkikis (seperti ujung tali
 sepatu yang berjumbai dengan waktu) bahwa duplikasi kromosom lebih lanjut menjadi
tidak mungkin dan sel-sel tidak lagi dapat mengalami pembelahan. Sel-sel seperti itu
sering menampilkan fusi-fusi kromosom, pecah-pecah dan kelainan lainnya (lihat
gambar).
Ciri khas transformasi adalah kemampuan untuk terus membelah jauh
melampaui batas normal Hayflick dan ini tampaknya terkait dengan ekspresi enzim
(disebut telomerase) yang dapat memperbaiki telomere dan karenanya sangat
meningkatkan jumlah pembelahan sel yang diekspresikan sel enzim ini dapat
melakukannya. Ekspresi telomerase biasanya terbatas pada sel embrio atau sel punca,
tetapi banyak kanker menampilkan reaktivasi ekspresi gen telomerase yang
meningkatkan jumlah pembelahan sel yang dapat dialami sel tersebut.

2. Mengurangi kebutuhan untuk faktor pertumbuhan

Kami telah menyebutkan faktor
pertumbuhan beberapa kali karena protein ini
sangat penting untuk inisiasi pembelahan sel. Ciri
khas lain dari transformasi seluler adalah
berkurangnya persyaratan untuk faktor-faktor
tersebut. Hal ini dapat dicapai dengan beberapa cara.
Beberapa sel yang berubah memperoleh
kemampuan untuk membuat faktor pertumbuhan
mereka sendiri (pertumbuhan autokrin). Cara lain
untuk mencapai hal ini adalah dengan sangat
memperkuat jumlah reseptor faktor pertumbuhan yang diekspresikan oleh sel karena
ini memiliki efek meniru keterlibatan faktor pertumbuhan reseptor. Namun cara lain
untuk menggantikan kebutuhan untuk faktor pertumbuhan adalah untuk memperoleh
mutasi pada gen yang berfungsi dalam jalur sinyal reseptor faktor pertumbuhan,
sehingga kaskade signaling secara permanen diaktifkan (contoh mutasi tersebut adalah
mutasi Ras dan B-Raf yang ditemukan. di banyak kanker).
3. Kebebasan Anchorage
Fitur lain dari sel normal adalah sel-sel ini (dengan pengecualian sel-sel darah)
biasanya tidak tumbuh kecuali melekat pada dukungan kuat atau substrat. Di
laboratorium, dukungan ini disediakan oleh bejana kultur sel plastik (cawan petri atau
labu) dimana sel-sel ditanam. Namun, sel-
sel normal akan dengan cepat berhenti
membelah ketika labu ditutupi dengan sel
monolayer. Sel yang berubah, di sisi lain,
biasanya akan terus membelah dengan
menumpuk di atas satu sama lain dan
bahkan akan tumbuh ketika benar-benar
terlepas dari labu (atau ketika tersuspensi dalam agar lunak). Sel yang ditransformasi
akan sering mengingkari kehadiran mereka dalam kultur sel-sel yang sehat dengan
membentuk gumpalan yang tidak teratur atau fokus di mana sel menumpuk menjadi
agregat tiga dimensi. Secara historis, fokus semacam itu penting untuk mendeteksi
transformasi seluler.
Contoh fokus yang bertransformasi

4. Morfologi yang berubah

Sel yang berubah juga menunjukkan morfologi yang mengalami kelainan.
Sedangkan sel-sel normal biasanya mengadopsi konformasi sepenuhnya di dalam
kultur, sel-sel yang berubah sering menjadi lebih bulat atau mengadopsi morfologi
spindel (lihat di bawah). Hal ini kemungkinan besar berkaitan dengan perubahan yang
terjadi pada sitoskeleton sel-sel tersebut yang menghasilkan cytoskeleton yang jauh
 lebih tidak teratur dan oleh karena itu morfologi sel lebih fleksibel. Dengan demikian,
sel-sel yang berubah terlihat sangat berbeda dengan sel-sel lain yang normal di bawah
mikroskop dan fitur ini masih dimanfaatkan bahkan hari ini dalam diagnosis banyak
kanker oleh ahli histopatologi.

5. Hilangnya inhibisi kontak

Sel-sel normal memiliki properti yang disebut inhibisi kontak. Sel-sel
semacam itu akan berhenti membelah ketika mereka bersentuhan dengan sel-sel lain di
semua sisi. Properti ini menghasilkan pembentukan monolayers tertata (satu lapisan sel
tebal) ketika sel yang tidak ditransformasikan tumbuh dalam kultur. Namun, sel yang
berubah tidak menunjukkan inhibisi kontak dan biasanya akan tumbuh dengan
kepadatan sel yang lebih tinggi dalam kultur sebagai hasilnya.
6. Kemampuan untuk membentuk tumor saat dimasukkan ke tikus dengan
imunokompromais
Tes akhir dari keadaan yang berubah adalah
apakah sel-sel tersebut dapat membentuk tumor
ketika diperkenalkan ke inang hewan. Dalam
prakteknya, tes ini dilakukan pada tikus
immunocompromise yang kekurangan sel T karena
mutasi yang menghalangi perkembangan thymus
(kelenjar di mana sel T normal), hal ini juga memiliki kekuatan pada efek
pengembangan sel B yang menumpulkan. Penggunaan tikus immunocompromised
secara dramatis mengurangi kemungkinan penolakan atau eliminasi tumor yang
biasanya akan dihasilkan dari respon imun terhadap tumor. Tikus-tikus ini juga
 kehilangan semua rambut mereka dan disebut tikus telanjang sebagai hasilnya. Ini
juga membuat nyaman untuk melacak pertumbuhan tumor karena sel-sel kandidat
tumor sering disuntikkan di bawah kulit. Penting untuk dicatat bahwa sel-sel yang
menampilkan banyak keunggulan fenotipe yang berubah sering gagal untuk
membentuk tumor ketika dimasukkan ke tikus telanjang, sangat menyarankan bahwa
sel-sel tersebut hanya sebagian berubah, tetapi tidak sepenuhnya. Dengan demikian,
kemampuan untuk membentuk tumor in vivo adalah tes penting dari keadaan yang
sepenuhnya berubah. Model ini juga terbukti sangat berguna untuk pengujian pra-klinis
(yaitu sebelum pengujian pada manusia) dari terapi kanker potensial.

Tabel 3.2 Properti dari sel yang bertransformasi

Morfologi yang berubah (bentuk bulat, refraktil dalam mikroskop fase
kontras)
Hilangnya inhibisi kontak (kemampuan tumbuh satu sama lain)
Kemampuan untuk tumbuh tanpa melekat pada substrat padat
(anchorage independence)
Kemampuan untuk berkembang biak tanpa batas (abadi)
Mengurangi kebutuhan untuk faktor pertumbuhan mitogenik
Kepadatan saturasi tinggi (kemampuan untuk mengumpulkan sejumlah
besar sel dalam cawan kultur)
Ketidakmampuan untuk menghentikan proliferasi sebagai respons
terhadap deprivasi faktor pertumbuhan
Meningkatkan transpor glukosa
Tumorigenisitas

 Pengenalan Gen Mutan Terhadap Sel Normal Dapat Menghasilkan Fitur

Transformasi Seluler
Karena sel normal yang tidak terfransformasikan berperilaku berbeda terhadap
sel yang berubah ketika ditempatkan ke dalam kultur sel, banyak ilmuwan mulai
mencari cara untuk mengubah sel normal menjadi sel kanker dengan mengekspos sel-
sel tersebut ke bahan kimia mutagenik, virus, atau yang paling penting, dengan
memperkenalkan gen individu (sering diisolasi dari sel kanker) terhadap sel-sel
seperti itu. Hal ini dimungkinkan karena penemuan (pada tahun 1972) dari metode
sederhana untuk pengenalan DNA ke dalam sel. Metode ini, yang disebut transfeksi,
masih digunakan sehari-hari di laboratorium di seluruh dunia dan digunakan untuk
menguji fungsi gen-gen individual saat ekspresi dalam sel.
Transfeksi DNA melibatkan pembentukan kompleks antara DNA dan garam
kalsium. Ini mengendapkan DNA, yang ketika ditambahkan ke sel, diambil oleh
 pinositosis dan lolos ke sitosol sel di mana ia kemudian dapat memasuki nukleus dan
menjadi diekspresikan (dan bahkan diintegrasikan ke dalam genom untuk ekspresi
permanen jika beberapa trik eksperimental digunakan ).
Penting untuk dicatat bahwa mutasi individu dapat menghasilkan satu atau
lebih fitur sel yang berubah tetapi mungkin tidak sepenuhnya mengubah sel.
Beberapa mutasi independen biasanya diperlukan untuk mencapai keadaan yang
sepenuhnya berubah dan inilah mengapa perkembangan kanker adalah proses multi-
langkah. Tes transformasi seluler sangat penting dalam mengungkap dasar molekuler
kanker karena banyak mutasi penyebab kanker ditemukan dalam konteks tes tersebut.
Biasanya, pengujian digunakan dengan cara berikut. Sel normal (yaitu tidak
berubah) diperlakukan dengan bahan kimia mutagenik dalam kultur untuk
memperkenalkan mutasi acak yang memulai transformasi seluler. Tetapi bagaimana
gen mutan yang memprovokasi transformasi harus ditunjuk? Perhatikan bahwa ini
adalah baik sebelum pengembangan metode pengurutan throughput tinggi sehingga
tantangan mengisolasi gen mutan adalah sangat sulit (dan masih, bahkan menggunakan
metode sequencing modern). Namun, dengan mengisolasi DNA dari populasi sel yang
diubah secara kimia, diikuti dengan memotongnya menjadi potongan-potongan kecil
dan reintroduksi ke sel-sel normal menggunakan metode transfeksi, para ilmuwan dapat
mencari hanya potongan DNA yang dapat mereproduksi keadaan yang berubah. Karena
trik molekuler yang kita tidak perlu masuk ke sini, potongan DNA yang mampu
mengubah sel normal (dan memang membentuk tumor pada tikus telanjang) kemudian
dapat diisolasi dan diurutkan untuk menentukan mutasi yang memunculkan kondisi
yang berubah.

 Onkogen Dan Gen Supresor Tumor

Onkogen (Onco, dari bahasa Yunani yang berarti 'tonjolan’ atau 'massa') adalah
gen yang dalam bentuk mutan mempromosikan perkembangan kanker. Gen-gen
seperti itu biasanya adalah gen yang biasanya mempromosikan pembelahan sel, tetapi
 setelah mutase gen tersebut melakukannya pada tingkat yang lebih tinggi. Banyak
onkogen telah diidentifikasi hingga saat ini dan banyak dari ini berubah menjadi faktor
pertumbuhan, reseptornya, atau protein pensinyalan yang bertindak di bagian
hilir reseptor faktor pertumbuhan. Beberapa onkogen terlibat dalam pengaturan
kematian sel terprogram (apoptosis) dan berkontribusi pada perkembangan kanker
dengan memperpanjang jangka hidup sel yang mengekspresikan bentuk mutan dari gen
tersebut. Mutasi yang mengubah gen menjadi onkogen biasanya merupakan mutasi
‘mendapat fungsi’ yang sangat meningkatkan aktivitas protein yang dikodekan oleh
gen. Ini dapat dicapai dengan beberapa cara:
1. Melalui peningkatan stabilitas protein
2. Meningkatkan tingkat ekspresi gen yang mengkodekan protein ini
3. Dengan mengubah situs aktif protein (jika merupakan enzim) sehingga dapat
berfungsi pada tingkat yang lebih tinggi atau oleh beberapa perubahan
konformasi lainnya yang menghasilkan protein yang lebih aktif.
Mekanisme lain juga dimungkinkan.
Gen supresor tumor biasanya menentang proliferasi atau kekuatan
bertahan hidup sel, tetapi dalam bentuk mutan, mereka telah kehilangan kemampuan
untuk melakukan hal ini. Dengan demikian, gen penekan tumor biasanya mengalami
mutasi kehilangan fungsi pada kanker dan mutasi seperti itu biasanya menonaktifkan
fungsi normal dari gen tersebut. Dalam beberapa kasus, gen-gen penekan tumor dapat
bermutasi menjadi mutan-mutan pengganggu dominan yang sebenarnya menentang
fungsi dari protein tipe-liar yang disandikan oleh gen-gen ini (kita akan melihat contoh
ini nanti ketika kita mendiskusikan gen supresor tumor p53).
 Penemuan Onkogen
Studi tentang virus tumor memperkenalkan gagasan bahwa kanker adalah
penyakit gen. Pada tahun 1908 ditemukan bahwa agen yang bisa disaring berasal dari
sel-sel leukemia ayam dapat ditransfer ke burung lain, yang kemudian mengembangkan
penyakit. Ini sangat melibatkan virus atau agen infeksi serupa sebagai penghasut dari
bentuk kanker ini (ingat bahwa leukemia adalah kanker leukosit atau sel darah).
 Peyton Rous, yang bekerja di Institut Rockefeller di New York mengejar garis
penyelidikan serupa yang bekerja pada sarkoma yang terjadi secara alami yang
ditemukan pada ayam dan menunjukkan bahwa ia dapat mentransfer penyakit ke
burung lain dengan menggiling jaringan sarkoma, diikuti dengan penyaringan untuk
menghilangkan sel bahan, dan suntikan filtrat ke hewan yang tidak terpengaruh yang
kemudian mengembangkan sarkoma. Karya ini diterbitkan pada tahun 1911 dan
mewakili terobosan besar pada saat itu. Virus yang memprovokasi sarkoma ini
kemudian disebut Rous Sarcoma Virus (RSV) dan ini memicu perburuan untuk gen
virus yang terlibat. Lebih penting lagi, pada saat ada ketidakpastian yang besar
mengenai penyebab kanker (beberapa percaya bahwa kanker adalah pertumbuhan asing
yang entah bagaimana berakar pada inangnya) percobaan ini memantapkan gagasan
bagi banyak orang bahwa kanker adalah penyakit gen. Bertahun-tahun kemudian,
Renato Dulbecco, yang bekerja di Caltech, menemukan bahwa RSV juga dapat
menghasilkan banyak fitur transformasi (seperti yang dibahas sebelumnya) pada infeksi
sel-sel normal in vitro.
Pengamatan ini secara radikal mengubah bagaimana kanker dapat dipelajari dan
pada tahun 1974, Michael Bishop dan Harold Varmus berhasil mengisolasi gen RSV
yang bertanggung jawab untuk memprovokasi fenotipe yang diubah. Mereka menjuluki
gen ini Src (singkatan dari sarkoma) tetapi dengan cepat membuat pengamatan yang
mengejutkan. Mereka menganggap (seperti yang dilakukan kebanyakan ilmuwan lain)
bahwa sel normal yang tidak ditransformasi tidak akan mengekspresikan gen Src tetapi
mereka segera menemukan bahwa gen Src hadir di dalam genom dari semua sel
yang mereka lihat. Ternyata gen virus Src (v-Src) yang mereka isolasi adalah contoh
gen yang dibajak yang menjadi bagian dari genom virus karena keuntungan selektif
yang ditawarkan virus itu saat masuk ke inangnya. Varmus dan Bishop kemudian
dianugerahi Hadiah Nobel untuk Fisiologi atau Kedokteran (pada 1989) untuk
pekerjaan mereka, karena Src adalah onkogen pertama yang ditemukan.
Sebagian besar kanker tidak menyebar dengan cara yang menular,
 sehingga virus jelas bukan satu-satunya cara untuk memulai kanker (meskipun banyak
ilmuwan mencari bukti adanya virus di banyak jenis kanker, umumnya dengan sedikit
keberhasilan). Namun, beberapa kanker manusia disebabkan oleh infeksi virus (lihat
tabel 4.6) tetapi sebagian besar kanker terkait dengan faktor-faktor lain (terutama
lingkungan) yang mengakibatkan mutasi gen inang.

Pencarian untuk kanker lain yang menyebabkan onkogen dimulai dan gagasan
bahwa onkogen mungkin adalah bentuk mutan gen normal (dijuluki proto-onkogen)
segera menguasai. Tes transfeksi yang dijelaskan sebelumnya (di mana DNA yang
disiapkan dari tumor terpecah menjadi potongan kecil dan dimasukkan ke dalam sel
normal) terbukti sangat efektif dalam mengidentifikasi banyak onkogen tambahan dan
tes tersebut masih digunakan untuk tujuan ini hari ini.
 Onkogen Ras dan B-Raf
Jalur sinyal faktor pertumbuhan dan kanker
Faktor pertumbuhan mempromosikan pembelahan sel melalui aktivasi sinyal
kaskade yang mengaktifkan baterai gen baru yang diperlukan untuk mereplikasi isi
sel (termasuk genomnya), memuncak dalam pembagian isi sel yang digandakan
menjadi dua sel anak baru. Jelas ini adalah proses yang sangat kompleks dan tidak bisa
dilalui dengan ringan. Oleh karena itu, pasokan faktor pertumbuhan dikontrol secara
ketat untuk memastikan bahwa jumlah sel dalam jaringan target tetap konstan. Sel pada
dasarnya bersaing untuk faktor pertumbuhan dan untuk kanker berkembang, sel-
sel tersebut harus menemukan cara menjadi independen dari persyaratan untuk
menerima faktor pertumbuhan untuk mendorong mitosis.
 Ternyata kanker yang berbeda memecahkan masalah faktor pertumbuhan
dengan cara yang sedikit berbeda. Kami telah menyebutkan bahwa beberapa kanker
menjadi independen terhadap faktor pertumbuhan dengan meningkatkan ekspresi
reseptor faktor pertumbuhan (misalnya, reseptor Epidermal Growth Factor,
erbB, diregulasi pada kanker perut, otak dan payudara). Ini memiliki efek membuat sel
kanker hiper responsif ke tingkat ambien faktor pertumbuhan yang biasanya tidak akan
merangsang pembelahan sel. Selain itu, ekspresi reseptor faktor pertumbuhan yang
ditingkatkan juga dapat meningkatkan laju di mana reseptor mengalami aktivasi
spontan (yaitu ligan-independen).
Tumor lain memenuhi kebutuhan faktor pertumbuhan dengan membuat faktor
pertumbuhan sendiri. Namun, banyak tumor lain membuang kebutuhan untuk faktor
pertumbuhan atau reseptor terkait mereka dengan memperoleh mutasi pada molekul
pemberi sinyal utama yang bertindak pada hilir reseptor faktor pertumbuhan.
Contoh mutasi yang terkenal ini ditemukan pada protein Ras dan B-Raf yang
memainkan peran sentral dalam menyebarkan sinyal mitogenik dari banyak reseptor
faktor pertumbuhan yang berbeda.
Ras mengendalikan aktivasi Raf tetapi hanya dalam kondisi yang terikat GTP
Ras adalah protein pengikat
GTP yang biasanya ditambatkan ke
membran plasma melalui modifikasi
lipid yang terjadi selama sintesis
protein ini. Dalam keadaan terikat
GTP, Ras aktif tetapi segera
menghidrolisis GTP menjadi GDP (dengan memisahkan kelompok fosfat) untuk
kembali ke konformasi GDP-nya yang tidak aktif. Pekerjaan utama Ras adalah
mengaktifkan kinase protein hilir, Raf (sebenarnya Raf datang dalam 3 rasa A-Raf,
B-Raf dan C-Raf).

Ras-GTP mendorong aktivasi Raf melalui perekrutan Raf ke membran plasma

Ras mengaktifkan Raf dengan merekrut yang terakhir ke membran plasma di
mana Raf dapat terfosforilasi oleh kinase yang berhubungan dengan membran (dengan
demikian mengaktifkan Raf). Sifat kinase yang mengaktifkan Raf masih belum pasti
tetapi Src (onkogen pertama yang ditemukan) telah terlibat dalam proses ini. Tetapi
terdapat suatu masalah. Ras tidak dapat mengikat Raf kecuali Ras dalam keadaan
terikat GTP dan untuk mengikat molekul GTP dibutuhkan bantuan dari protein yang
disebut GDP / GTP exchange factor (biasa disebut GEF) yang akan membantu Ras
dalam melepaskan GDP, menukarkanya dengan molekul GTP.
Sos membantu Ras untuk mengikat GTP
GEF utama untuk Ras adalah protein yang disebut Sos (son of sevenless) tetapi
Sos biasanya tidak hidup di membran plasma sehingga perlu bantuan untuk direkrut di
sana. Bantuan ini datang dalam bentuk protein yang disebut GRB2 (growth factor
receptor-binding protein 2) yang memiliki domain (disebut domain SH3) yang Sos
ikat. Namun, Grb2 biasanya tidak hidup di membran plasma, jadi bagaimana cara
mendapatkannya dan membawa Sos dengannya? Jawabannya terletak pada reseptor
faktor pertumbuhan.
Aktivasi reseptor faktor pertumbuhan menciptakan situs pengikatan untuk Grb2
dan Sos terkait
Karena banyak faktor pertumbuhan
bersifat dimerik, keterlibatan dengan
reseptor spesifiknya menghasilkan agregasi
reseptor dalam membran plasma. Banyak
reseptor faktor pertumbuhan adalah
kinase dan agregasi molekul-molekul ini,
sebagai akibat pengikatan ligan, biasanya
menghasilkan reseptor memfosforilasi satu
sama lain dalam ekor sitoplasma mereka
(yaitu bagian dari reseptor yang menghadap
sitoplasma). Jadi, aktivasi ligan-induced
reseptor faktor pertumbuhan menciptakan situs mengikat untuk GRB2 / Sos dan ini
menghasilkan aktivasi Ras melalui Sos-mediated stimulasi pertukaran GTP pada Ras.
Ras kemudian merekrut Raf ke membran, di mana sekarang menjadi terfosforilasi dan
Raf aktif menyebarkan sinyal lebih lanjut dengan mengaktifkan MEK hilir kinase,
diikuti oleh ERK.
Aktivasi kaskade Ras / Raf / MEK / ERK mempromosikan ekspresi gen baru
Sebagai hasil dari urutan kejadian bertahap ini, ERK (extracellular receptor-
activated Kinase) menjadi aktif dan kinase ini mengontrol aktivitas baterai faktor
transkripsi yang mengontrol ekspresi banyak gen yang terlibat dalam pembelahan sel.
 Dengan demikian, aktivasi ERK, melalui Ras dan Raf, mempromosikan pembelahan
sel melalui aksi ERK pada faktor transkripsi.
Mutasi Ras pada kanker
Karena peran penting dalam sinyal reseptor faktor pertumbuhan, Ras sangat
umum bermutasi pada kanker dan mutasi ini biasanya meningkatkan afinitas Ras
terhadap GTP sehingga Ras menghabiskan sebagian besar waktunya di sel dalam 'on'
(yaitu terikat GTP) sebagai kebalikan dari keadaan 'off' (yaitu terikat GDP). Pola mutasi
Ras dalam kanker didikte oleh jenis jaringan serta Ras isoform (ada 3 Ras gen; H-Ras,
K-Ras dan N-Ras). 30% kanker memiliki mutasi Ras dan dalam banyak kasus mutasi
ini terjadi pada bagian 12 dan 13 dari protein Ras, tepat di tengah loop pengikatan GTP
(disebut P-loop [‘P’ = phosphate] region). Dalam semua kasus, mutasi ini
meningkatkan aktivitas Ras dan karena itu diklasifikasikan sebagai mutasi gain-of-
function.
Mutant Ras dapat mengubah sel
Transfeksi Ras mutan ke dalam banyak jenis sel normal cukup untuk sebagian
mengubah sel-sel ini dengan meningkatkan laju proliferasi dan memberikan kebebasan
faktor pertumbuhan. Namun, sesuai dengan gagasan bahwa mutasi tunggal jarang
cukup untuk menyebabkan kanker sendiri, mutant Ras mengubah sel jauh lebih
efisien jika sel-sel ini juga membawa gen p53 mutan (lihat kuliah p53 untuk lebih
lanjut tentang topik ini. Hal ini menggambarkan sinergis interaksi yang terjadi antara
mutasi independen untuk mempromosikan transformasi sel.
 Mutasi B-Raf Dan Melanoma Maligna
Melanoma maligna adalah salah satu bentuk kanker pada manusia yang paling
sulit untuk diobati (karena resistensi obat kemoterapi yang mendalam) dan kejadian
kondisi ini di negara maju telah meningkat lebih cepat daripada keganasan lainnya
selama 40 tahun terakhir. Melanoma terjadi ketika sel-sel penghasil pigmen (melanosit)
di dalam membran basal kulit menjadi berubah karena lesi kromosom yang sering
melibatkan B-Raf kinase.
Kebanyakan melanoma muncul di area kulit yang terbuka (anggota badan,
wajah dan batang tubuh) dan ada korelasi kuat antara paparan intensitas tinggi
intermiten terhadap sinar matahari dan perkembangan melanoma. Tidak seperti
kebanyakan bentuk kanker lainnya, insiden melanoma tidak berkorelasi dengan
bertambahnya usia dan melanoma adalah salah satu penyebab paling umum kanker dan
kematian terkait kanker dalam kelompok usia 20-35.
 Sementara mayoritas (~ 85%) dari individu yang didiagnosis dengan melanoma
dapat berhasil diobati dengan intervensi awal, diagnosis yang terlambat memiliki
prognosis yang sangat buruk karena melanoma ganas sangat invasif dan terkenal tidak
responsif terhadap sebagian besar obat kemoterapi konvensional. Saat ini, hanya satu
obat yang disetujui FDA AS (Dacarbazine) menunjukkan tingkat kemanjuran untuk
pengobatan melanoma metastatik. Dacarbazine memunculkan respon pada 15-25%
pasien melanoma tetapi tingkat respons lengkap sangat buruk sekitar 5%. Mekanisme
yang mendasari resistensi akut terhadap terapi ini masih belum jelas tetapi hampir pasti
terkait dengan disregulasi mesin kematian sel (apoptosis) dalam kanker tersebut.
B-Raf bermutasi di sebagian besar melanoma
Sebuah terobosan besar dalam pemahaman kita tentang dasar molekuler
melanoma adalah penemuan pada tahun 2002, bahwa mutasi pada kinase B-Raf
ditemukan pada ~ 70% melanoma. Secara signifikan, mutasi pada B-Raf berkorelasi
dengan perkembangan melanoma dari fase awal (fase pertumbuhan radial) dari
penyakit yang dapat diobati, ke fase metastatik yang lebih agresif (fase pertumbuhan
vertikal), yang jauh lebih refrakter terhadap kemoterapi. Dengan demikian, mutasi B-
Raf sangat mungkin berperan dalam perkembangan melanoma dan protein ini sekarang
dianggap sebagai onkogen bonafid.
Mutasi B-Raf terutama mengubah satu residu asam amino
Sekitar 80% mutasi B-Raf ditemukan pada posisi 600 dari B-Raf kinase di mana
valine diubah menjadi asam glutamat (V600E). Mutasi terakhir menghasilkan kinase
aktif konstitutif yang kira-kira 500 kali lebih aktif daripada protein tipe liar.
Mutasi B-Raf secara dramatis
meningkatkan tingkat MEK aktif dan
target hilirnya, ERK. Mirip dengan mutasi
Ras, mutasi B-Raf oleh karena itu secara
dramatis meningkatkan tingkat ekspresi
gen yang mempromosikan proliferasi dan
selain itu, B-Raf aktif juga dapat menekan
aktivasi mesin kematian sel, sehingga
menganugerahkan keadaan kemoresisten
pada sel-sel tersebut.
 Mutasi B-Raf tidak cukup untuk menghasilkan kanker
Seperti Ras, mutasi pada B-Raf mendorong transformasi seluler tetapi lesi
genetik tambahan diperlukan untuk mengubah sel sepenuhnya. Kita tahu ini karena
mutasi B-Raf V600E biasanya ditemukan pada lesi jinak yang ditemukan pada kulit
banyak individu yang biasa disebut tahi lalat. Mutasi lebih lanjut diperlukan untuk
memungkinkan lesi ini berkembang ke keadaan kanker dan penelitian terbaru
menunjukkan bahwa mutasi pada gen CDKN2a yang mengkode protein ARF dan p16
(karena dua kerangka baca alternatif) bekerja sama dengan B-Raf untuk mengubah sel.

 Tumor supresor gen: p53 penjaga genom

Virus monyet, SV40, adalah virus DNA yang dapat menyebabkan tumor
sebagian besar karena gen SV40 T besar (untuk Tumor besar) yang mengkode protein
yang dapat menetralkan fungsi dua protein seluler utama pRb (retinoblastoma
protein) dan p53.
Setelah infeksi sel-sel tikus dengan SV40,
respon imun yang kuat dihasilkan terhadap antigen T
besar SV40 dan antibodi khusus untuk T besar yang
kemudian digunakan untuk mencari target sel dari
protein virus ini.
Antigen T besar dengan demikian
immunopresipitasi dari sel yang terinfeksi dan
kompleks ini dianalisis dengan elektroforesis gel dan
ditemukan mengandung protein berat molekul yang
jelas dari 53 KDa-maka penunjukan protein ini
sebagai p53. Hal ini menunjukkan bahwa protein ini
entah bagaimana dapat terlibat dalam pengembangan
kanker (karena terikat pada antigen T besar SV40 setelah infeksi oleh virus ini).
Kloning gen p53 diikuti dan pada awalnya ditemukan bahwa co-transfeksi p53
dengan Ras onkogen menjadi fibroblast embrio tikus dapat mengubah sel-sel ini. Hal
ini menunjukkan bahwa p53 mungkin onkogen, tetapi kemudian menjadi jelas bahwa
klon p53 yang digunakan untuk percobaan ini adalah bentuk mutan p53 (klon ini telah
diisolasi dari garis sel tumor) yang bertindak sebagai mutan dominan negatif. Kloning
selanjutnya dari gen p53 wild type malah menunjukkan bahwa fungsi normal dari gen
ini adalah menekan transformasi. Perbandingan gen p53 normal dan mutan
mengungkapkan bahwa dua gen berbeda dengan mutasi titik tunggal yang mengubah
p53 menjadi protein mutan yang dominan mengganggu.

P53 biasanya berfungsi untuk menekan proliferasi sebagai respons terhadap

kerusakan DNA dan bentuk lain dari stres sel
Pada tahun 1987
menjadi jelas bahwa alel p53
mutan sangat umum dalam
berbagai macam tumor
manusia (30-50%). Jadi,
bagaimana p53 mutan
berkontribusi pada
perkembangan kanker?
Eksperimen menunjukkan bahwa bahkan alel p53 mutan tunggal dapat berkontribusi
pada perkembangan kanker tersirat bahwa molekul p53 mutan mungkin bukan mutasi
null sederhana (yaitu mutasi yang mengakibatkan hilangnya fungsi gen yang
bersangkutan). Analisis sekuens p53 alel mutan dari berbagai kanker mengungkapkan
bahwa sebagian besar dari ini adalah missense daripada mutasi nonsense. Sampai saat
ini, lebih dari 15.000 tumor p53 alleles telah diurutkan dan 75% dari mutan-mutan ini
membawa mutasi missense (ini adalah mutasi yang mengubah urutan pengkodean gen
untuk menghasilkan komposisi asam amino yang sedikit berbeda dibandingkan dengan
mengganggu ekspresi protein sepenuhnya), menunjukkan bahwa tumor entah
bagaimana mendapat manfaat dari p53 mutan daripada kehilangan fungsi p53
sederhana.
 P53 biasanya berfungsi sebagai
heterotetramer dan menjadi jelas bahwa
protein p53 mutan, ketika dimasukkan ke
dalam tetramer, dapat mengganggu fungsi
kompleks. Jika molekul p53 mutan tunggal
dapat mengganggu fungsi tetramer maka
hanya seperenam belas p53 dalam sel yang membawa alel p53 dominan negatif akan
berfungsi.
P53 biasanya memiliki waktu paruh yang singkat
Pewarnaan sel dengan antibodi anti-p53 mengungkapkan bahwa p53 biasanya
merupakan protein nuklear dan ini
menunjukkan bahwa protein ini mungkin
merupakan faktor transkripsi.
Eksperimen lain mengungkapkan bahwa
protein ini biasanya memiliki waktu
paruh yang sangat singkat sekitar 20
menit atau lebih. Ini karena stabilitas
protein p53 dikendalikan oleh protein
lain, Mdm2 (disebut Hdm2 dalam sel
manusia). Mdm2 berikatan dengan p53
dan menargetkan protein ini untuk
degradasi melalui jalur pemusnahan protein ubiquitin-proteasome. Mdm2 juga
mengekspor p53 keluar dari nukleus sehingga mencegah akses p53 ke DNA dan
memblokir aktivitas transkripsionalnya. Menariknya, ekspresi Mdm2 dikendalikan
oleh p53, oleh karena itu, p53 mengontrol sintesis inhibitornya sendiri.
Pada sel sehat, Mdm2 biasanya memiliki tangan atas dan p53 terus terdegradasi
sebagai hasilnya. Namun, setelah kerusakan DNA oleh radiasi atau mutagen kimia,
Mdm2 terfosforilasi oleh kinase (ATM) yang terlibat dalam deteksi kerusakan
untai DNA. Hal ini menonaktifkan Mdm2 dan menghasilkan stabilisasi p53. Ada
beberapa redundansi dalam sistem karena p53 juga dapat langsung terfosforilasi oleh
ATM dan juga oleh kinase lainnya (Chk1 dan Chk2; Chk adalah singkatan dari
check point) yang terlibat dalam jalur respon kerusakan DNA. Fosforilasi p53 oleh
ATM, Chk1 atau Chk2 juga dapat menstabilkan p53. Dengan demikian, paruh p53
sangat meningkat sebagai respons terhadap kerusakan DNA.
Berbagai sinyal menyebabkan stabilisasi p53
Selama awal 1990-an ditemukan
bahwa selain radiasi UV dan sinar-X,
beberapa agen perusak DNA kimiawi lain dan
juga agen yang mengganggu fungsi
mikrotubulus dapat menyebabkan akumulasi
p53. Dengan demikian, p53 terakumulasi
dalam sel ketika ada bukti bahwa beberapa
bentuk kerusakan DNA telah terjadi.
Jadi apa yang dilakukan p53?
Seperti disebutkan di atas, p53 adalah faktor transkripsi dan mengontrol
ekspresi gen yang dapat menangkap siklus pembelahan sel - gen p21 adalah gen yang
paling terkemuka yang dikendalikan oleh p53 dalam konteks ini. Oleh karena itu,
setelah stabilisasi p53, protein p21 dengan cepat diekspresikan dan ini menghentikan
siklus sel dengan menghambat kinase tertentu yang sangat penting untuk pembelahan
sel (cyclin-dependent kinases).
P53 juga menginduksi ekspresi DNA polimerase
Beta yang terlibat dalam perbaikan DNA. Oleh karena
itu, setelah mendeteksi kerusakan DNA (oleh ATM,
Chk1, Chk2) p53 menjadi stabil, hal itu menghentikan
pembelahan sel dan menginduksi protein yang
diperlukan untuk perbaikan DNA.
Tetapi p53 juga mengontrol ekspresi gen yang dapat secara langsung memicu
apoptosis. Produk-produk dari gen-gen ini, Bax, Noxa dan Puma, dapat secara
langsung melibatkan mesin-mesin apoptosis dan menghasilkan kematian sel yang
cepat. Tidak jelas bagaimana keputusan antara penghentian siklus sel dan perbaikan
versus apoptosis dibuat, tetapi ini mungkin berhubungan dengan tingkat p53 yang
terakumulasi dalam sel, dan dengan perluasan ke tingkat kerusakan DNA yang diderita
sel. Oleh karena itu, tingkat kerusakan DNA yang rendah dapat mengakibatkan
penangkapan dan perbaikan divisi sel sementara tingkat yang lebih tinggi dapat memicu
apoptosis p53-dependent.
Mutasi p53 paling sering ditemukan dalam domain pengikatan DNA
Secara signifikan, sebagian besar mutasi yang ditemukan dalam gen p53
ditemukan di dalam wilayah protein pengikat DNA. Hal ini menghasilkan produksi
protein p53 mutan
yang masih dapat
membentuk bagian
dari tetramer p53
tetapi tidak dapat
mengikat gen target
mereka dengan tepat dalam DNA. Ini memiliki efek menciptakan protein mutan
dominan mengganggu yang dapat menetralkan fungsi protein p53 wild type yang
ditemukan di tetramers yang sama. Menariknya, karena p53 mengendalikan ekspresi
inhibitornya sendiri (Mdm2), sel-sel yang membawa molekul p53 mutan sering kali
menunjukkan peningkatan yang sangat tinggi pada protein p53. Oleh karena itu, salah
satu keunggulan kanker sering sangat meningkatnya kadar p53, yang sayangnya
tidak mampu mengaktifkan transkripsi gen targetnya karena sifat mutannya.
Beberapa individu mewarisi mutasi p53 (sindrom Li-Fraumeni) dan 60% dari
individu-individu ini mengembangkan kanker pada usia 22.
Singkatnya, mutasi p53 sangat memudahkan perkembangan menjadi kanker
dengan menonaktifkan dua hasil penting dari kerusakan DNA: penghentian siklus sel
dan apoptosis.