PEMERIKSAAN TITER ANTIBODY VIRUS INFLUENZA

(MENGUKUR TITER HI)

Pertemuan ke : ……………………………………………………………………………………………………………………………

Hari / tanggal : ………………………………………………………….………………………………………………………………

Dasar teori :

Uji Hemagglutination Inhibition (HI) adalah merupakan metode uji serologi untuk
mengetahui kadar/titer antibody yang terkandung dalam serum pada ungags yang sudah
divaksin atau akibat dari paparan virus lapang. Serum diperoleh dari darah unggas yang keluar
beberapa saat setelah pengambilan, selanjutnya serum di inaktifasi pada suhu 560c selama 30
menit.

Keberadaan antibody dalam jumlah tertentu memeperlihatkan effektivitas dari vaksin

dalam memproteksi unggas tersebut dari suatu penyakit.

Prinsip uji HI adalah menghambat terjadinya agglutinasi sel darah merah (RBC) oleh
virus akibat terikatnya virus tersebut dengan antibody spesifik. Oleh karena itu uji HI hanya bisa
digunakan untuk virus yang mengagglutinasi RBC (Syukron et al., 2013) seperti Newcastle
Disease, Avian Influenza dan egg Drop Syndrome.

Proses hemaglutinasi ini terjadi akibat aktivitas hemaglutinin yang terdapat pada
amplop virus tersebut. Aktivitas hemaglutinasi berlangsung maksimal selama satu jam karena
dipengaruhi oleh kerja enzim neuraminidase yang merusak ikatan pada reseptor eritrosit
dengan hemaglutinin dari virus.

Pengamatan nilai titer antibody dari serum sampel berdasarkan hasil pengenceran
tertinggi (paling encer) yang masih sanggup menghambat aglutinasi (RBC) oleh antigen.
Titer antibody setiap unggas akan bervariasi karena dipengaruhi oleh beberapa kondisi seperti
jumlah virus yang menginfeksi, kesehatan ayam dan perbedaan waktu infeksi (Purnamawati
dan Sudarnika, 2008).

Alat dan bahan yang digunakan :

1. Multichannel Micropipette Volume 10-50µl

2. Single Chanel Micropipette Volume 10-50 µl
3. Microtips Volume 50 µl
4. Microplate Type V 96 Well
5. Pelarut Pbs 0,01 M Steril, pH 7,2
6. Serum Uji Yang Telah Diinaktifasi Pada Waterbath 560c Selama 30 Menit
7. Antigen, titer 4HAU

Cara Kerja :

1. Ke dalam microplate masukan 25 µl PBS, dari sumur no 1 hingga sumur no 12.

2. Tambahkan 25 µl serum uji pada sumur no. 1 yang sudah terisi 25 µl PBS
3. Kocok sampai homogeny, ambil 25 µl dari sumur no. 1 dan masukan ke sumur no. 2
kemudian kocok. Lakukan step ini sampai dengan sumur no. 11, setelah pengocokan pada
sumur 11 larutan sampel serum dibuang 25 µl, sumur ke 12 sebagai control RBC
4. Masukan 25 µl 4HAU antigen ke semua sumur kecuali sumur ke 12, kocok dan simpan di
suhu ruang selama 30 menit
5. Tambahkan 25 µl RBC 1% ke semua sumur
6. Kocok, dengan menggunakan rotator biarkan di suhu ruang 45 menit dan baca titer
antibodynya dengan cara memiringkan plate dengan kemiringan 45 0.
7. Sebagai control negative dan positif, lakukan pengujian terhadap standar positif serum dan
standar negative serum.
Table HI test, HI Test ( Titrasi Serum ) :

No. Well 1 2 3 ............... 11 12

Pengenceran 1:2 4 8 …………….. 2048 Control
antigen RBC
PBS 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl 25 µl
Serum uji 25 µl 25 µl 25 µl …………….. 25 µl 25 µl
Antigen 25 µl 25 µl 25 µl …………….. 25 µl 25 µl
4HAU
RBC 1% 25 µl 25 µl 25 µl …………….. 25 µl 25 µl

Cara Membuat Antigen 4 HAU :

1. Sebelum penambahan antigen pada uji HI, antigen tersebut dilakukan uji HA untuk
mengetahui titer awal dari antigen tersebut
2. Lakukan uji HA (cara mengukur titer HA)
3. Setelah diketahui titer awal dari antigen (missal titernya log 29 atau 512) kemudian untuk
mendapatkan 4HAU, antigen diencerkan dengan larutan PBS.

Cara Perhitungan :

1. Jika titer antigen 512, maka untuk dijadikan 4 HAU adalah :

512 : 4 = 128 (128 kali)
2. Untuk menjadikan 4 HAU adalah 1 bagian antigen diencerkan dengan 27 bagian larutan PBS
(1ml antigen + 127 ml PBS)
3. Untuk memastikan titer antigen 4 HAU, antigen yang telah diencerkan lakukan uji ha
kembali

Skema Kerja :

A. Titrasi Sepasang Serum Dengan titer HI

1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/1280 KSI/SII KE
 Nacl fisiologis - 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
SI/II 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 -
Ag 4UHA 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 -
Dicampurkan, dan didiamkan pada suhu kamr selama 20 menit
Suspense 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4
eritrosit 0,5%
Dihomogenkan, Diinkubasi Suhu 370C 45-60 Menit

B. Pembuatan Control Antigen

4UHA 2UHA 1UHA 0,5UHA
Nacl - 0,2 0,2 0,2
fisiologis
Ag 4UHA 0,2 0,2 0,2 0,2
Nacl 0,2 0,2 0,2 0,2
fisiologis
Suspense 0,4 0,4 0,4 0,4
eritrosit
Dihomogenkan, diinkubasi suhu 370C selama 45-60 menit

Hasil pengamatan :

Kesimpulan :
Diskusi :

Pembibing Nilai laporan Nilai hasil