Silvia W Lestari, Triyana Sari eJKI

Fragmentasi DNA Spermatozoa: Penyebab, Deteksi,

dan Implikasinya pada Infertilitas Laki-Laki
Silvia W Lestari,1 Triyana Sari2
1
Departemen Biologi Medik Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia
2
Departemen Biologi Medik Fakultas Kedokteran Universitas Tarumanegara

Abstrak
Prediksi fertilitas laki-laki dapat dilakukan dengan analisis semen. Analisis semen konvensional
merupakan pemeriksaan sederhana dan tidak mahal, tetapi memiliki variabilitas yang tinggi.
Integritas DNA spermatozoa penting untuk transmisi informasi genetik. Fragmentasi DNA
spermatozoa sebagai akibat gangguan spermatogenesis, maturasi spermatozoa, stres oksidatif
dan infeksi, dapat menyebabkan infertilitas laki-laki, gangguan perkembangan embrio dan abortus
berulang. Hubungan fragmentasi DNA spermatozoa dengan luaran teknologi reproduksi berbantu
(TRB) mengarahkan fragmentasi DNA spermatozoa sebagai pemeriksaan infertilitas laki-laki. Dari
berbagai metode fragmentasi DNA spermatozoa yang umum dilakukan, sperm chromatin dispersion
(SCD) merupakan metode pemeriksaan fragmentasi DNA spermatozoa yang sederhana, akurat
dan tidak mahal, sehingga dapat dilaksanakan di laboratorium andrologi. Selain menghasilkan
diagnosis yang lebih baik, pemeriksaan fragmentasi DNA spermatozoa juga menggambarkan
prognosis infertilitas termasuk luaran program TRB.
Kata kunci: infertilitas laki-laki, fragmentasi DNA spermatozoa, SCD

Sperm DNA Fragmentation: Etiology, Detection and Implication

to Male Infertility

Abstract
The prediction of male fertility is determined by semen analysis. The conventional semen
analysis is simple and inexpensive but prone to variability. The integrity of sperm DNA is essential
for the transmission of genetic information. Fragmentation of sperm DNA as result of disruption
in spermatogenesis and sperm maturation, oxidative stress, and infection may lead to male
infertility, abnormal embryonic development and recurrent abortion. The association between
sperm DNA fragmentation and diminished reproductive outcomes has led to the introduction of
sperm DNA fragmentation testing on the clinical assessment of male infertility. Of all the sperm
DNA fragmentation tests, sperm chromatin dispersion (SCD) test is quite simple, accurate, and
inexpensive to be conducted on andrology laboratory. Besides having better diagnostic outcome,
sperm DNA fragmentation test also give better infertility prognosis including the prediction of
assisted reproductive technology (ART) program outcome.
Keywords : male infertility, sperm DNA fragmentation, SCD method

152
Vol. 3, No. 2, Agustus 2015 Fragmentasi DNA Spermatozoa

Di Indonesia terdapat 40% pasangan usia subur dan 10% diantaranya mengalami
Pendahuluan Penyebab infertilitas pada pasangan suami
infertilitas. istri dapat diklasifikasikan
spermatogenesis, maturasi menjadi
spermatozoa, stres
3 golongan dengan proporsi: faktor perempuan 45%, faktor
oksidatif danlaki-laki
infeksi, 40%,
dapat dan faktor
menyebabkan infertilitas
Di Indonesia terdapat 40% pasangan usia
idiopatik 15%. Salah satu cara untuk menentukan penyebab
laki-laki. Metodefaktor laki-laki adalah
fragmentasi DNA spermatozoa
subur dan 10% diantaranya mengalami infertilitas. 1
dengan menilai kualitas semen yaitu analisis semen.adalah et al2 menyatakan
Chuang pemeriksaan bahwa spermatozoa
kualitas
Penyebab infertilitas pada pasangan suami istri
hasil analisis semen dari 25% laki-laki infertil adalah asthenozoospermia (abnormalitas
yang diharapkan menghasilkan diagnosis dan
dapat diklasifikasikan menjadi 3 golongan dengan
pergerakan sperma). Selebihnya adalah gangguan jumlahyang
prognosis (oligozoospermia) dan
lebih baik dibandingkan analisis
proporsi: faktor perempuan 45%, faktor laki-laki
morfologi (teratozoospermia) atau kombinasi antara semen ketiganya. Parameter
konvensional. 5 analisis
Berbagai penelitian telah
40%, dan faktor idiopatik 15%. Salah satu cara
semen konvensional yang rutin dilakukan saat ini memiliki variabilitas
mempelajari yang tinggi, kurang
penyebaran fragmentasi DNA
untuk menentukan penyebab faktor laki-laki adalah 3
terstandar dan tidak dapat dijadikan prediktor yang kuat untuk menilai fertilitas laki-laki.
spermatozoa pada laki-laki fertil dan infertil. Selain
dengan menilai kualitas semen yaitu analisis
1 DNA sel spermatozoa berbeda dengan sel somatik. Integritas
itu terdapat DNA korelasi
penelitian spermatozoafragmentasi DNA
semen. Chuang et al menyatakan bahwa hasil
2
penting untuk transmisi informasi genetik.4 Fragmentasispermatozoa DNA spermatozoa
dengan fertilitassebagai
laki-laki dan terhadap
analisis semen dari 25% laki-laki infertil adalah
akibat gangguan spermatogenesis, maturasi spermatozoa, luaran stres oksidatif
teknologi reproduksi dan infeksi, (TRB).
berbantu
asthenozoospermia (abnormalitas pergerakan
dapat menyebabkan infertilitas laki-laki. Metode fragmentasi DNA spermatozoa adalah
sperma). Selebihnya adalah gangguan jumlah
pemeriksaan kualitas spermatozoa yang diharapkan Struktur menghasilkan
DNA dan Kromatindiagnosis dan
Spermatozoa
(oligozoospermia) dan morfologi (teratozoospermia)
prognosis yang lebih baik dibandingkan analisis semen konvensional.5 Berbagai
atau kombinasi antara ketiganya. Parameter Berbeda dengan sel somatik, spermatozoa
penelitian telah mempelajari penyebaran fragmentasi DNA spermatozoa pada laki-laki
analisis semen konvensional yang rutin dilakukan manusia memiliki struktur dan integritas fungsional
fertil dan infertil. Selain itu terdapat penelitian korelasi fragmentasi DNA spermatozoa
saat ini memiliki variabilitas yang tinggi, kurang yang dikemas dalam sistem yang unik. Materi DNA
dengan fertilitas laki-laki dan terhadap luaran teknologi reproduksi berbantu (TRB).
terstandar dan tidak dapat dijadikan prediktor yang spermatozoa manusia dikemas dengan bantuan
kuat untuk menilai fertilitas laki-laki.3 protein khusus yang mengatur proses kondensasi
Struktur DNA dan Kromatin Spermatozoa
DNA sel spermatozoa berbeda dengan sel dan dekompresi melalui mekanisme tertentu.
Berbeda dengan sel somatik, spermatozoa manusia memiliki struktur dan integritas
somatik. Integritas DNA spermatozoa penting Keseimbangan proses itu disinkronisasi oleh
fungsional yang dikemas dalam 4 sistem yang unik. Materi DNA spermatozoa manusia
untuk transmisi informasi genetik. Fragmentasi struktur organisasi DNA spermatozoa (Gambar 1).6
dikemas dengan bantuan protein khusus yang mengatur proses kondensasi dan
DNA spermatozoa sebagai akibat gangguan
dekompresi melalui mekanisme tertentu. Keseimbangan proses itu disinkronisasi oleh
struktur organisasi DNA spermatozoa (Gambar 1).6

6 6
Gambar
Gambar 1. 1. Organisasi
Organisasi DNADNA Spermatozoa
Spermatozoa Terorganisir
Terorganisir dalam
dalam Bentuk
Bentuk Toroid
Toroid

Secara struktural, sebagian besar DNA spermatozoa melingkar menjadi toroid,

sebagian kecil berikatan dengan histon dan sisanya melekat di matriks inti spermatozoa
matrix attachment regions (MARs).6 Organisasi DNA spermatozoa yang paling padat
berada di dalam toroid. Selama proses maturasi, sebagian besar protein histon yang

153
Silvia W Lestari, Triyana Sari eJKI

Secara struktural, sebagian besar DNA Protamin terdiri atas pita besar bermuatan
spermatozoa melingkar menjadi toroid, sebagian positif dan residu arginin yang dinetralkan oleh
kecil berikatan dengan histon dan sisanya melekat ikatan fosfodiester DNA. Interaksi tersebut
di matriks berasosiasi
inti spermatozoa
denganmatrix attachment
DNA digantikan mengurangi
oleh protamin (Gambar 2).7 Adanya
repulsion antar ikatan
protamin yang DNA,
regions (MARs). 6
berikatanOrganisasi
dengan DNA, DNA memungkinkan
spermatozoa terjadi sehingga
prosesmemungkinkan
kondensasi yang DNAlebih
berlipat-lipat
erat dan untuk
yang paling membuat
padat berada
DNAdiresisten
dalam toroid.
terhadap Selama
nuklease. menciptakan toroid yang kompak dan erat. Toroid
proses maturasi, sebagian
Protamin besar
terdiri atasprotein histon
pita besar bermuatanberbaris berdampingan
positif dan residu argininuntuk menghasilkan
yang dinetralkan luas
yang berasosiasi
oleh ikatan fosfodiester DNA. Interaksi tersebut mengurangi repulsion antar ikatantidak
dengan DNA digantikan oleh permukaan maksimal. 6
Protamin DNA,hanya
protamin (Gambar
sehingga2). 7
Adanya protamin
memungkinkan yang
DNA berlipat-lipat memberikan pemadatan
untuk menciptakan toroidstruktur DNA, tetapi
yang kompak dan juga
berikatan dengan DNA,berbaris
erat. Toroid memungkinkan terjadiuntuk memberikan
berdampingan menghasilkanperlindungan
luas permukaandari kerusakan.
maksimal.6Ikatan
proses kondensasi
Protaminyangtidaklebih
hanyaeratmemberikan
dan membuat disulfida
pemadatan antarDNA,
struktur molekul di kromatin
tetapi sel spermatozoa
juga memberikan
DNA resisten terhadap nuklease. lebih resisten terhadap kerusakan
perlindungan dari kerusakan. Ikatan disulfida antar molekul di kromatin sel spermatozoa mekanik
dibandingkandengan
lebih resisten terhadap kerusakan mekanik dibandingkan denganselselsomatik.
somatik.66

7
Gambar 2. Reorganisasi Kromatin Selama Proses Spermatogenesis
Gambar 2. Reorganisasi Kromatin Selama Proses Spermatogenesis7
Untuk memperoleh struktur DNA yang padat, proses pengemasan DNA
spermatozoastruktur
Untuk memperoleh juga merupakan
DNA yang padat, mekanismegenkontrol ekspresi
yang vital untukgen. Proses tersebut
spermiogenesis dan masa
menahan akses ke
proses pengemasan DNA spermatozoa juga reading frame dan menyebabkan tidak terjadinya
fertilisasi awal secara khusus berasosiasi ekspresi gen dengan
merupakan selama
mekanismespermatogenesis. Saat spermatozoa
kontrol ekspresi gen. fusi dengan
histon oosit protamin
di spermatozoa. DNA yangakanberikatan
digantikan dengan
seluruhnya dengan protein
Proses tersebut menahan akses ke reading frame histon yang disediakan oleh oosit saat empat
histon memberikan akses pada reading frame.jam pertama.
Penggantian
dan menyebabkan tersebut ekspresi
tidak terjadinya memberikan gen kesempatan
Histon DNA bagispermatozoa
genom paternal untuk oleh
tidak digantikan
meningkatkan akses dalam
selama spermatogenesis. Saat spermatozoa fusi memproduksi protein. Oleh karena itu, keseluruhan
histon pascafertilisasi yang ditemukan dalam oosit. proses
dengan oositpengemasan
protamin akan DNA/kromatin spermatozoa mengindikasikan
digantikan seluruhnya fungsi struktur toroid
Hal tersebut memungkinkan kerusakanuntukhiston
melindungi spermatozoa
dengan protein histon yang disediakan oleh oositselama perjalanan dalam saluran reproduksi
DNA spermatozoa ditransmisikan ke embrio laki-laki dan tanpa
saat empat perempuan
jam pertama.
6
hingga terjadinyatersebut
Penggantian fertilisasi dan tidak berperan
terdeteksi dalam perkembangan
dan termodifikasi. Kejadian tersebut
embrio.
memberikan kesempatan bagi genom paternal merugikan karena kebanyakan DNA yang terikat di
untuk meningkatkanStruktur DNAdalam
akses spermatozoa lainnya adalah
memproduksi DNA
histon yang kluster
adalah terikat gen
denganyanghiston. Histon
bertanggungjawab
terutama berikatan di
protein. Oleh karena itu, keseluruhan proses daerah promotor gen.
terhadap perkembangan awal embrio.6 untuk
Seluruh famili gen yang vital
pengemasanspermiogenesis
DNA/kromatin dan masa fertilisasi awal secara
spermatozoa khusus
Selain DNA berasosiasi
spermatozoa dengan
yang histon
terikat di
dengan
spermatozoa. DNA yang
mengindikasikan fungsi struktur toroid untuk berikatan dengan histon memberikan akses
protamin dan histon bentuk terakhir pada reading
organisasi
frame. Histonselama
melindungi spermatozoa DNA perjalanan
spermatozoa dalam tidak digantikan
spermatozoa oleh adalah
histon pascafertilisasi
matrix attachment yangregion
ditemukan
saluran reproduksi dalam
laki-laki oosit.
dan Hal tersebut
perempuan hingga memungkinkan
(MAR). kerusakan
MAR merupakan histon DNAbagian spermatozoa
DNA yang
ditransmisikan ke embrio
terjadinya fertilisasi dan tidak berperan dalam tanpa terdeteksi dan termodifikasi. Kejadian
melekat di lingkaran domain kromatin tersebut
matriks inti
perkembangan merugikan
embrio.6karena kebanyakan DNA yang kaya terikat di histon
protein. MAR adalah
berukurankluster
tidakgen
lebihyang
dari 1000
6
bertanggungjawab terhadap
Struktur DNA spermatozoa lainnya adalah perkembangan awal embrio.
pasang basa dan berada di antara toroid protamin
DNA yang terikat Selain
denganDNAhiston.
spermatozoa yang terikat dengan
Histon terutama protamin dan toroid
yang menempelkan histon dibentuk terakhir
tempatnya disebut
organisasi spermatozoa adalah
berikatan di daerah promotor gen. Seluruh famili matrix attachment region (MAR). MAR merupakan
toroid linker. Toroid linker berisi histon dan sangat
bagian DNA yang melekat di lingkaran domain kromatin matriks inti kaya protein. MAR
berukuran tidak lebih dari 1000 pasang basa dan berada di antara toroid protamin yang
154
menempelkan toroid di tempatnya disebut toroid linker. Toroid linker berisi histon dan
 sitoplasma yang sedikit. Kondisi tersebut mengakibatkan spermatozoa menj
terhadap stress oksidatif yang disebabkan reactive oxygen species (ROS).
plasma membran spermatozoa yang kaya asam lemak tak jenuh untuk menjag
Vol. 3, No. 2, Agustus 2015 Fragmentasi DNA Spermatozoa
membran mengakibatkan spermatozoa mudah berikatan dengan ROS. M
tersebut menimbulkan stres oksidatif sebagai hasil peroksidasi plasma
sensitif terhadap aktivitas nuklease. MAR
sehingga juga
menyebabkanmembran
kerusakansel spermatozoa
spermatozoa dengan kemampuan
dan mekanisme pertahananny
berperan sebagai tempat pemeriksaan integritas antioksidan terbatas
Proses pengemasan DNA spermatozoa membuat sel sangat rentan
unik dan memiliki mekanis
DNA spermatozoa setelah fertilisasi. MAR bersama terhadap stres oksidatif.6
Kerumitan tersebut dapatLekositospermia
histon terikat DNA lain, langsung berasal dari
memaparkan DNA danpada kerusakan
varikokel yang dapat te
memiliki
tahap ke
materi genetik paternal yang diturunkan apapun.
embrio Sebagai contoh
korelasi langsungproses
denganprotaminasi tidak ROS
peningkatan kadar teratur meng
dan penting untuk perkembangan. 6
dalam sehingga
peningkatan stres torsional semen. Varikokel
menimbulkandapat mempengaruhi
kerusakan tambahan yang
tingkat kerusakan DNA spermatozoa melalui
pada integritas DNA, produksi protein, dan perkembangan embrio.6
Penyebab Fragmentasi DNA Spermatozoa dua mekanisme, yaitu secara langsung
Kerusakan DNA spermatozoa atau struktur dengan meningkatkan suhu skrotum atau tidak
Stres
kromatinnya dapat terjadi pada tahap manapun Oksidatif langsung dengan meningkatkan produksi ROS.
pada spermatogenesis. Korelasi positif Stres antara IFD dan
oksidatif terjadi ketikakadar ROS ROS
produksi pada berlebih
penderitamelampaui
varikokel kemamp
parameter spermatozoa yangantioksidan jelek dengan lebih tinggi dibandingkan yang normal. Pada
untuk menetralkannya. Sebanyak 25-40% laki-laki
lekositospermia terjadi peningkatan pelepasan infertil memi
kerusakan DNA pada spermatozoa yang matur
dengan jumlah
menunjuk pada masalah spermatogenesis padaROS meningkat akibat proses
mediator proinflamasi yangkaskade
menggangguperoksidasi
regulasilipid dan d
makromolekul.
individu tertentu.6,8 Faktor penyebab spermiogenesis
fragmentasi Komposisi umum membran dan berhubungan
sel spermatozoa dengan dengan ke
kerusakan DNA spermatozoa. 6
DNA spermatozoa, terbagi menjadi antioksidan terbatas membuat sel sangat rentan terhadap stres oksidatif.6
faktor internal
dan eksternal. Faktor internal terdiri atas defek pada Kerusakan DNA spermatozoa akibat stres
Lekositospermia oksidatif
dan varikokel
ditandaimemiliki
dengan korelasi
deteksi langsung
8-hidroksi-2- dengan pe
proses maturasi spermatozoa, stress oksidatif dan
apoptosis abortif kadar ROS dalam semen. Varikokel
deoksiguanosin dapat yang
(8-OhdG) mempengaruhi tingkat kerusa
berperan sebagai
penanda biologi pada DNA
spermatozoa melalui dua mekanisme, yaitu secara langsung dengan yang rusak dan meningka
Defek pada Proses Maturasi Spermatozoa menggambarkan gangguan struktur DNA yang
skrotum atau tidak langsung dengan meningkatkan produksi ROS. IFD dan k
berpotensi menjadi kerusakan. 8-OHdG dapat
Spermatozoa memiliki antioksidan dalam
pada penderita varikokel lebih tinggi dibandingkan
digunakan sebagai penanda yang normal.
kerusakan DNA Pada lekos
jumlah terbatas sesuai dengan volume sitoplasma
terjadi peningkatan spermatozoa
yang sedikit. Kondisi tersebut mengakibatkan
pelepasan mediator proinflamasi
dan kadarnya yang
berkorelasi mengganggu
terbalik
dengan kemungkinan terjadinya kehamilan dalam
DNA spermatozoa.6
spermatozoa menjadi rentan spermiogenesis
terhadap stress dan berhubungan dengan kerusakan
siklus menstruasi tunggal. 6
oksidatif yang disebabkan reactive oxygen species DNA spermatozoa akibat stres oksidatif ditandai dengan
Kerusakan
(ROS). Selain itu, plasma membran spermatozoa
hidroksi-2-deoksiguanosin (8-OhdG) yang
yang kaya asam lemak tak jenuh untuk menjaga
fluiditas membran mengakibatkan sebagai penanda biologi
spermatozoa pada DNA yang
mudah berikatan dengan ROS. menggambarkan
Mekanisme gangguan struktur DNA
tersebut menimbulkan stres oksidatif
berpotensi sebagai menjadi kerusakan. 8-OH
hasil peroksidasi plasma membran sehingga
digunakan
menyebabkan kerusakan spermatozoa dan
sebagai penanda kerusa
mekanisme pertahanannya.6 spermatozoa dan kadarnya berkorelasi terba
kemungkinanunik terjadinya
Proses pengemasan DNA spermatozoa kehamilan dala
dan memiliki mekanisme rumit. Kerumitan tersebut
menstruasi tunggal. 6
dapat memaparkan DNA pada kerusakan yang
dapat terjadi pada tahap apapun. Sebagai contoh
proses protaminasi tidak teratur mengakibatkan
peningkatan stres torsional sehingga menimbulkan
kerusakan tambahan yang berimbas pada integritas
DNA, produksi protein, dan perkembangan embrio.6

Stres Oksidatif
Stres oksidatif terjadi ketika produksi ROS
berlebih melampaui kemampuan alami antioksidan
untuk menetralkannya. Sebanyak 25-40% laki-
laki infertil memiliki semen dengan jumlah ROS
meningkat akibat proses kaskade peroksidasi lipid Gambar 3. Hipotesis Asal Usul Kerusakan DNA
dan degenerasi makromolekul. Komposisi umum Spermatozoa8

155
Silvia W Lestari, Triyana Sari
Apoptosis Abortif
Apoptosis dalam spermatogenesis merupakan
proses alami yang diperlukan untuk menghilangkan
spermatozoa tua dan rusak. Selama spermiogenesis,
apoptosis berperan penting untuk menyesuaikan
jumlah tepat dari sel germinal yang berproliferasi.
Protein permukaan sel, yakni Fas membantu
mengatur apoptosis di spermatozoa. Protein dan
ligand yang berkaitan dengan Fas dapat berperan
sebagai penanda tingkat apoptosis.6
Pada laki-laki dengan parameter semen
abnormal, persentase spermatozoa dengan
Fas positif dapat melebihi 50%. Kondisi tersebut
berperan terhadap ketidakmampuan sel sertoli untuk
merangsang produksi Fas-ligand dan menghasilkan
apoptosis. Akibatnya, spermatozoa tersebut dapat
menghindari apoptosis, berhasil matang dan
membawa kelainan DNA.6 Selain itu, dapat terjadi
defek di jalur apoptosis itu sendiri seperti aktivasi
kaspase yang salah. Kaspase merupakan famili dari
protease sistein yang berperan dalam tahap awal
jalur apoptosis. Kaspase akan memulai kaskade
yang mengarah pada kematian sel terprogram.
Jika jalur C8/9 ke C3 ke caspase-activated
deoxyribonuclease (CAD) dilalui dengan benar, maka
apoptosis spermatozoa akan dihambat. Mekanisme
tersebut mungkin penyebab apoptosis abortif dan
meningkatkan proporsi spermatozoa dengan DNA
rusak yang seharusnya diarahkan untuk mati.6
Faktor Eksternal
Faktor eksternal juga terlibat sebagai faktor
predisposisi untuk kerusakan DNA spermatozoa.
Gaya hidup, radiasi, paparan panas, pengobatan
dan penggunaan zat terlarang merupakan
beberapa contohnya. Gaya hidup seperti merokok,
pengobatan dan kafein memiliki dampak terhadap
kerusakan DNA spermatozoa.6
Merokok merupakan salah satu contoh faktor
eksternal yang menyebabkan kerusakan DNA
melalui stres oksidatif.6 Rokok memiliki komponen
mutagenik yang dikaitkan dengan penurunan
kualitas spermatozoa secara keseluruhan terutama
penurunan jumlah dan motilitas spermatozoa
serta peningkatan jumlah spermatozoa abnormal.
Dilaporkan bahwa terdapat peningkatan indeks
fragmentasi DNA spermatozoa (IFD) pada laki-laki
infertil yang merokok.6,9,10 Penjelasannya adalah
banyaknya metabolit dalam asap rokok yang
merangsang pelepasan mediator inflamasi seperti
interleukin-6 dan interleukin-8. Mediator tersebut
dapat merekrut lekosit sehingga meningkatkan
pembentukan ROS di semen. Metabolit rokok juga
156
eJKI
berperan dalam mismatched pairs, replikasi DNA
yang tidak tepat, dan kesalahan sintesis protein.6
Lekosit yang terdapat di ejakulat berperan
penting untuk imunitas dan fagositosis
spermatozoa yang abnormal. Pada keadaan
lekositospermia, peningkatan konsentrasi lekosit
di semen menandakan infeksi atau peradangan
saluran genital dan berkaitan dengan peningkatan
konsentrasi sel germinal yang imatur.9
Banyak pengobatan telah menunjukkan efek
negatif terhadap parameter DNA sel-sel di semen.
Alkylating agents dalam kemoterapi telah diketahui
sebagai sumber kerusakan DNA spermatozoa dan
efeknya menetap beberapa bulan setelah selesai
terapi. Obat seperti fludarabine, cyclophosphamide
dan busulphan memiliki efek bervariasi yaitu
oligozoospermia, menurunkan volume testis dan
kadar testosteron, serta meningkatkan produksi
FSH dan LH.6,9 Kokain dan kafein juga mendegradasi
DNA spermatozoa. Paparan kokain meningkatkan
kerusakan untai DNA sehingga terjadi apoptosis.
Konsumsi kafein berkaitan dengan peningkatan
kerusakan DNA untai ganda spermatozoa.6
Dalam keadaan normal, plasma semen
mengandung faktor yang memiliki berat molekul
tinggi dan rendah yang melindungi spermatozoa
dari toksisitas radikal bebas. Molekul tersebut
termasuk scavenger enzimatik dari ROS seperti
Cu, Zn, superoxide dismutase (SOD) dan katalase.
Oleh karena itu, plasma semen memegang peranan
penting sebagai pelindung terhadap ROS dan
pembuangannya selama preparasi spermatozoa
dapat merusak integritas DNA. Bentuk lain dari
pengaruh iatrogenik adalah metoda simpan beku yang
digunakan dalam program TRB. Walaupun sesekali
terbukti tidak meningkatkan tingkat kerusakan
DNA, namun studi lain menemukan bahwa metode
simpan beku-pencairan pada TRB secara signifikan
merusak DNA spermatozoa laki-laki infertil. Selain itu,
beberapa protokol preparasi spermatozoa juga dapat
menurunkan integritas kromatin spermatozoa.6,9,10
Penyakit yang menyebabkan demam dapat
meningkatkan rasio histon protamin dan kerusakan
DNA spermatozoa di semen. Varikokel dikaitkan
dengan kerusakan DNA spermatozoa. Tingkat
kerusakan DNA spermatozoa dikaitkan dengan
tingginya stres oksidatif yang ditemukan pada
semen laki-laki infertil. Varikokel juga dihubungkan
dengan retensi abnormal droplet sitoplasma
spermatozoa yang berkorelasi dengan kerusakan
DNA spermatozoa pria infertil akan tetapi integritas
DNA spermatozoa akan kembali setelah operasi
varikokel.9
 Vol. 3, No. 2, Agustus 2015 Fragmentasi DNA Spermatozoa

Gambar 4. Hasil pemeriksaan metode TUNEL dengan mikroskop cahaya

Pemeriksaan Fragmentasi DNA SpermatozoaTanda bintang Pemeriksaan
merahdengan Metode COMET
menunjukkan spermatozoa yang
12
Terdapat berbagai metode pemeriksaan untuk Metode COMET menggunakan elektroforesis
terfragmentasi
menganalisis kerusakan DNA spermatozoa.6 gel untuk menganalisis fragmentasi DNA
Kerusakan DNA spermatozoa dapat dianalisis spermatozoa. Metode tersebut dapat digunakan
Pemeriksaan dengan Metode COMET
menggunakan metode terminal deoxynucleotidyl untuk melihat perbedaan berbagai penyebab
Metode COMET menggunakan
transferase mediated deoxyuridine triphosphate nick
elektroforesis gel untuk menganalisis fragm
fragmentasi DNA, contoh apoptosis atau nekrosis.
DNA
end labelling (TUNEL), single cellspermatozoa. Metode Sel
gel electrophoresis tersebut dapatakan
apoptosis digunakan
membentukuntukkomet
melihat perbedaan be
karena
penyebab fragmentasi
assay (COMET), in situ nick translation (ISNT), DNA,
migrasi dan akumulasi fragmen DNA yang pendek. apoptosis
contoh apoptosis atau nekrosis. Sel
sperm chromatin structure membentuk
assay (SCSA),komet dan
karena migrasi danekor
Intensitas akumulasi
komet fragmen DNA yang
menunjukkan pendek. Int
tingkat
9,13
sperm chromatin dispersion (SCD).
ekor 6,9
komet menunjukkan tingkat fragmentasi DNA (Gambar
fragmentasi 5).9,13
DNA (Gambar 5).

Pemeriksaan dengan Metode TUNEL

Pada metode TUNEL terjadi penempelan
biotinylated deoxyuridine (dUTP) ke ujung 3’-OH
di untai DNA tunggal dan ganda yang pecah untuk
menimbulkan sinyal yang akan meningkat seiring
bertambahnya untai DNA yang pecah. Pada metode
TUNEL ujung 3’-OH DNA yang terfragmentasi akan
dilabel dengan biotinylated dUTP menggunakan
13
enzim recombinant terminal Gambar deoxynucleotidyl
5. Hasil Pemeriksaan dengan Metoda COMET. Intensitas ekor k
transferase (TdT). Nukleotida yang terlabel dapat Gambar 5. Hasil Pemeriksaan dengan Metoda
menunjukkan
COMET. tingkat
13 fragmentasi
Intensitas ekor DNA. (A)
komet spermatozoa deng
menunjukkan
dideteksi di spermatozoa dengan flowsitometri,
DNA terfragmentasi, (B) spermatozoa
tingkat fragmentasi dengandengan
DNA. (A) spermatozoa DNA tidak
mikroskop fluoresens atau mikroskop cahaya. Pada
deteksi menggunakan mikroskop fluoresens, DNA
terfragmentasi
DNA terfragmentasi, (B) spermatozoa dengan
Pemeriksaan dengan
spermatozoa normal memiliki kepala telomer di ujung DNAISNT
Metode tidak terfragmentasi
3’ OH yang tidak berfluoresensISNT
sedangkan DNA yang
menghitung inkorpoorasi biotinylated-dUTP di potongan DNA untai tungg
terfragmentasi berfluoresens (Gambar
reaksi 4).11,12
katalisasi oleh enzimPemeriksaan denganI.Metode
DNA polimerase ISNT
Pemeriksaan tersebut mengiden
ISNT menghitung
spermatozoa yang memiliki tingkat kerusakan inkorpoorasi biotinylated-
bervariasi namun memiliki nila
di potongan
dUTP korelasi
terbatas karena tidak terdapat DNA fertilisasi
dengan untai tunggal
pada pada
studi in vivo
reaksi katalisasi
sensitivitas yang rendah dibandingkan oleh enzim
pemeriksaan lain.9DNA polimerase
I. Pemeriksaan tersebut mengidentifikasi
spermatozoa yang memiliki tingkat kerusakan
Pemeriksaan dengan Metode SCSAnamun memiliki nilai klinis terbatas
bervariasi
SCSA merupakan teknikkarena
untuktidak
mengukur
terdapattingkat denaturasi
korelasi DNA akibat pana
dengan fertilisasi
zat asam. Panas atau zat asam akaninmengubah
pada studi metakromatik
vivo serta sensitivitas yangfluoresens
rendah hijau d
dibandingkan
menambahkan acridine orange ke dalampemeriksaan
asam nukleatlain. rantai ganda, menjadi fluo
9

merah yakni acridine orange berasosiasi dengan DNA untai tunggal. Metode te
Pemeriksaan dengan Metode SCSA
SCSA merupakan teknik untuk mengukur
tingkat denaturasi DNA akibat panas atau zat asam.
Panas atau zat asam akan mengubah metakromatik
Gambar 4. Hasil pemeriksaan metode TUNEL dengan mikroskop cahaya. fluoresens hijau dengan menambahkan acridine
Gambar Tanda
4. Hasil Pemeriksaan
bintang Metode
merah menunjukkan TUNEL
spermatozoa yang orange ke dalam asam nukleat rantai ganda,
dengan Mikroskop
terfragmentasiCahaya. Tanda bintang merah
12

menjadi fluoresens merah yakni acridine orange

menunjukkan spermatozoa yang terfragmentasi12
Pemeriksaan dengan Metode COMET berasosiasi dengan DNA untai tunggal. Metode
tersebut dideteksi dengan flowsitometri.11 Hasil
Metode COMET menggunakan elektroforesis gel untuk menganalisis fragmentasi
DNA spermatozoa. Metode tersebut dapat digunakan untuk melihat perbedaan berbagai
pemeriksaan dengan metode SCSA seperti pada
penyebab fragmentasi DNA, contoh apoptosis atau nekrosis. Sel apoptosis akan
Gambar 6.14
membentuk komet karena migrasi dan akumulasi fragmen DNA yang pendek. Intensitas
ekor komet menunjukkan tingkat fragmentasi DNA (Gambar 5).9,13

157
13
Gambar 5. Hasil Pemeriksaan dengan Metoda COMET. Intensitas ekor komet
menunjukkan tingkat fragmentasi DNA. (A) spermatozoa dengan
DNA terfragmentasi, (B) spermatozoa dengan DNA tidak
 (Gambar 7).16 Spermatozoa dengan halo yang berukura
dalam spermatozoa dengan DNA yang tidak rusak. S
engan flowsitometri.11 Hasil pemeriksaan berukuran
dengan metode
kecil, SCSA seperti pada
tidak berhalo dan terdegradasi
4 Silvia W Lestari, Triyana Sari eJKI termas
16,17
DNA yang rusak.

Gambar 6. Hasil Pemeriksaan SCSA.14 Fluoresens

14
mbar 6. Hasil Pemeriksaan
hijau DNA untai ganda SCSA.
dan merahFluoresens
DNA untai hijau DNA untai ganda
tunggal
dan merah DNA untai tunggal

an dengan Metode dengan

Pemeriksaan SCD Metode SCD
memeriksa SCD memeriksa dekondensasi
dekondensasi diferensial diferensial
kromosom. Gambar 7. Ukuran Halo dengan
Spermatozoa pada Pemeriksaan SCD.16 16
kromosom. Spermatozoa dengan
Gambar
fragmentasi
7. Ukuran Halo pada
Tanda bintang merah menunjukkan Pemeriksaan SCD. Ta
spermatozoa
DNA akan terlihat lebih kecil dibandingkan spermatozoa DNA yang
yang menunjukkan
terfragmentasi intak
spermatozoa yang terfragm
DNA akan terlihat lebih kecil dibandingkan 15
kan terlihat halo diDNA
spermatozoa sekeliling
yang intakkepala
sehinggaspermatozoa.
akan Tujuan pemeriksaan
etode SCD terlihat adalah mengukur
halo di sekeliling kepala spermatozoa
spermatozoa.15 dengan Hasil DNA yang tidak
pemeriksaan fragmentasi DNA
Tujuan pemeriksaan dengan metode SCD adalah
asi atau tidak rusak (non-fragmented) dengan DNA yang terfragmentasi atauspermatozoa disebut indeks fragmentasi DNA
mengukur spermatozoa dengan DNA yang tidak spermatozoa (IFD). IFD diperoleh dari persentase
mented)terfragmentasi
berdasarkan ukuran
atau tidak rusak halo. Ukuran halototalyang
(non-fragmented) terbentuk pada
spermatozoa dengan DNA yang rusak
n ini terbagi
denganmenjadi
DNA yang limaterfragmentasi
yaitu: (1) halo atau besar,
rusak memiliki
dibandingkanukuran yang
jumlah lebih yang diamati.
spermatozoa
(fragmented) berdasarkan ukuran halo. Ukuran
ama dengan ukuran diameter terkecil dari inti spermatozoa; (2) halo sedang,total spermatozoa
Menurut protokol Fernandez,
halo yang terbentuk pada pemeriksaan ini terbagi yang diamati minimal 500 sel.17 Pengamatan
kuran antara
menjadi limasepertiga hingga
yaitu: (1) halo setengah
besar, memiliki ukuran diameter terkecil dari inti
sebaiknya dilakukan secara triplet per hari selama
a; (3) halo kecil,
yang lebih memiliki
dari atau ukuran
sama dengan kurang
ukuran diameteratau dua
sama dengan
hari atau sepertiga
dilakukan oleh dua pengamat yang
terkecil
rkecil dari dari inti spermatozoa;
inti spermatozoa; (2) halohalo;
(4) tanpa sedang,
(5) tanpa haloIFD
berbeda. dan terdegradasi
spermatozoa diklasifikasikan menjadi
16 memiliki ukuran antara sepertiga hingga setengah tiga dan
yaitu: sedang
baik (IFD 0-15%), sedang (IFD >15 - <
. Spermatozoa dengan halo yang berukuran besar
diameter terkecil dari inti spermatozoa; (3) halo
termasuk
30%) dan buruk (IFD >30%).18
matozoakecil,dengan
memilikiDNA ukuranyang
kurangtidak rusak.
atau sama Spermatozoa dengan halo yang
dengan
sepertiga
kecil, tidak berhalodiameter
danterkecil dari inti spermatozoa;
terdegradasi termasuk dalam spermatozoa
Implikasi Fragmentasidengan
DNA
usak. (4)
16,17 tanpa halo; (5) tanpa halo dan terdegradasi Spermatozoa terhadap Infertilitas Laki-Laki
(Gambar 7). Spermatozoa dengan halo yang
16

berukuran besar dan sedang termasuk dalam
spermatozoa dengan DNA yang tidak rusak.
Spermatozoa dengan halo yang berukuran kecil,
tidak berhalo dan terdegradasi termasuk dalam
spermatozoa dengan DNA yang rusak.16,17
Analisis semen konvensional merupakan
pemeriksaan infertilitas laki-laki yang sederhana
dan tidak mahal, akan tetapi memiliki variabilitas
yang tinggi dan kurang terstandar.3 Pada
tatalaksana infertilitas laki-laki, parameter analisis
semen konvensional tidak dapat memprediksi

158
Vol. 3, No. 2, Agustus 2015
tingkat fertilitas laki-laki setelah terapi. Oleh
karena itu, dikembangkan metode lain yang dapat
memprediksi fertilitas laki-laki dengan manfaat klinik
yang lebih baik yaitu fragmentasi DNA spermatozoa.
Hubungan kerusakan DNA spermatozoa
dengan luaran program TRB mengarahkan uji
integritas DNA spermatozoa sebagai metode
pemeriksaan infertilitas laki-laki. Integritas DNA
spermatozoa penting dalam transmisi informasi
genetik.4 Fragmentasi DNA spermatozoa sebagai
akibat gangguan spermatogenesis, maturasi
spermatozoa, stres oksidatif dan infeksi dapat
menyebabkan infertilitas laki-laki.
Metode fragmentasi DNA spermatozoa adalah
pemeriksaan kualitas spermatozoa independen
yang menghasilkan diagnosis dan pendekatan
prognosis lebih baik dibandingkan parameter
analisis semen konvensional (jumlah, motilitas,
morfologi).5 Walaupun demikian, kisaran hasil
pemeriksaan fragmentasi DNA spermatozoa
masih bervariasi karena perbedaan metoda dan
populasi.19-21 Terdapat korelasi antara faktor-faktor
klinik dengan kerusakan DNA spermatozoa. Di
antara faktor gaya hidup, merokok merupakan faktor
yang menginduksi kerusakan DNA spermatozoa
dan menyebabkan penurunan kualitas DNA
spermatozoa.22,23 Selain merokok, konsumsi kafein,
alkohol dan kokain juga meningkatkan kerusakan
DNA spermatozoa.6,24
Metode TUNEL dan SCSA merupakan metode
fragmentasi DNA spermatozoa paling kompleks,
akurat dan paling banyak digunakan, sehingga
dijadikan metode pilihan namun metode SCD
merupakan metode sederhana, cepat, akurat,
tidak mahal dan tersedia paling banyak.25 Oleh
karena itu, metode SCD cukup potensial dikerjakan
secara rutin untuk memeriksa fragmentasi DNA
spermatozoa di laboratorium andrologi.
IFD sebagai luaran pemeriksaan fragmentasi
DNA spermatozoa telah banyak diteliti pada
populasi laki-laki fertil dan infertil. Hasil penelitian
Fernandez et al26 menunjukkan bahwa kualitas
spermatozoa pada laki-laki infertil lebih rendah
dibandingkan laki-laki fertil, terutama dari segi
integritas DNA spermatozoa. Kondisi tersebut
terlihat hampir pada semua metode pemeriksaan
fragmentasi DNA spermatozoa yaitu SCSA,
TUNEL dan SCD. Fenomena itu juga menjelaskan
bahwa pada infertilitas yang tak terjelaskan dengan
hasil analisis semen normal namun infertilitas tetap
terjadi mungkin berkaitan dengan tingginya IFD.
Dengan kata lain, dapat diasumsikan bahwa bila
seorang laki-laki memiliki spermatozoa dengan
159
Fragmentasi DNA Spermatozoa
jumlah yang cukup, motilitas cepat dengan
morfologi yang normal, tetapi IFD tinggi maka
perkembangan embrio, implantasi atau bahkan
fertilisasi dapat terganggu atau tidak terwujud.
Selain itu, terdapat pula penelitian fragmentasi DNA
spermatozoa dengan luaran program TRB baik
inseminasi intra uterus, fertilisasi in vitro dan intra
cytoplasmic sperm injection. Penelitian Bungum et
al27 menunjukkan bahwa luaran program TRB, baik
kehamilan maupun persalinan pada kelompok IFD
³ 30% lebih rendah dibandingkan dengan kelompok
IFD £ 30%. Kondisi tersebut menjelaskan bahwa
pada kehamilan alami dan kehamilan dengan
program TRB, laki-laki yang termasuk kelompok
IFD ³ 30% yang memiliki spermatozoa dengan DNA
terfragmentasi dapat tidak mewujudkan kehamilan
pasangannya. Penjelasannya adalah spermatozoa
dengan DNA yang terfragmentasi, kurang atau
gagal mengusahakan perbaikan DNA, mulai dari
spermiogenesis, fertilisasi, implantasi hingga ke
perkembangan embrio.
Kesimpulan
Analisis semen konvensional yang dapat
memprediksi fertilitas laki-laki berupa jumlah,
motilitas dan morfologi spermatozoa, tidak lagi
dianggap prediktor kuat infertilitas laki-laki. Oleh
karena itu, dikembangkan pemeriksaan kualitas
spermatozoa yang lebih kuat yaitu pemeriksaan
fragmentasi DNA spermatozoa. Dari berbagai
pemeriksaan fragmentasi DNA spermatozoa,
SCD merupakan metode sederhana, akurat
dan tidak mahal, sehingga memungkinkan
untuk dilaksanakan di laboratorium andrologi.
Selain menghasilkan diagnosis yang lebih baik,
pemeriksaan fragmentasi DNA spermatozoa juga
menggambarkan prognosis infertilitas berikut
luaran program TRB.
Daftar Pustaka
1. Moeloek N, Ahda Y. Perbandingan kemanjuran dan
keamanan beberapa preparat FSH untuk stimulasi
ovarium perempuan yang mengikuti program reproduksi
berbantu. Maj Kedokt Indon. 2001;51:450-4.
2. Chuang WW, Lo KC, Lipshultz LI, Lamb DJ. Male
infertility. Yen and Jaffe’s reproductive endocrinology:
physiology, pathophysiology, and clinical management.
5th ed. Philadelphia (PA): Elsevier Saunders; 2004.
3. Akashi T, Watanabe A, Komiya A, Fuse H, Evaluation
of the sperm motility analyzer system (SMAS) for the
assessment of sperm quality in infertile men. Systems
biology in reproductive medicine. 2010;56(6):473-7.
Silvia W Lestari, Triyana Sari
4. The Practice Committee of the American Society for
Reproductive Medicine. The clinical utility of sperm
DNA integrity testing: a guideline. Fertility and sterility.
2013;99:673-7.
5. Agarwal A, Said TM. Role of sperm chromatin
abnormalities and DNA damage in male infertility.
Human reproduction update. 2003;9(4):331-45.
6. Singh A, Agarwal A. The role of sperm chromatin
integrity and DNA damage on male infertility. The
Open Reproductive Science Journal. 2011;3:65-71.
7. Chromatin dynamics/Chromatin dynamics during
gametogenesis. http://www.epigam.fr/epigam_
dynamics_chromatin.php. Diakses tanggal 7 Mei
2015.
8. Aitken RJ, Koppers AJ. Apoptosis and DNA damage
in human spermatozoa. Asian Journal of Andrology.
2011;13:36-42.
9. Youssry M, Ozmen B, Orief Y, Zohni K, Al-Haan
S. Human sperm DNA damage in the context of
assisted reproductive techniques. Iranian Journal of
Reproductive Medicine. 2007;5(4):137-50.
10. Hekmatdoost A. Lakpour N, Sadeghi MR. Sperm
chromatin integrity: etiologies and mechanism of
abnormality, assays, clinical importance, preventing
and repairing damage. Avicenna Journal of Medical
Ciotechnology. 2009;1(3):147-60.
11. Shamsi MB, Kumar R, Dada R. Evaluation of
nuclear damage in human spematozoa in men
opting for assisted reproduction. Indian J Med Res.
2008;127:115-23.
12. Diunduh dari http:/iinoprot.com/en_productos.
asp?idsf=55&id=13&idp=121. Diakses tanggal 4 Juni
2015
13. Shamsi MB, Imam SN, Dada R. Sperma DNA integrity
assays: diagnostic and prognostic challenges and
implications in management of infertility. J Assist
Reprod Genet. 2011;28:1073-85.
14. Fertility & pregnancy channel. Diunduh dari http:/
www.ivanhoe.com/channel/p_channelstoroy.cfm?
storyid=5126. Diakses tanggal 4 Juni 2015.
15. Lewis SEM, Aitken RJ, Conner SJ, De luliis G,
Evenson DP, Henkel R, et al The impact of sperm DNA
damage in assisted conception and beyond: recent
advances in diagnosis and treatment. Reproductive
BioMedicine Online: 2013;27:325-37.
16. Fernandez JL. Simple analysis of DNA fragmentation
in human sperm cells: the sperm chromatin dispersion
test. Diunduh dari www.elai.upm.es/webantigua/
spain/Publicaciones/pub04/testSCD_ Paris04.pdf.
Diakses tanggal 4 Juni 2015.
160
eJKI
17. Fernandez JL, Muriel L, Goyanes V, Segrelles E,
Gosalvez J, Enciso M, et al Simple determination of
human sperm DNA fragmentation with an improved
sperm chromatin dispersion test. Fertility and sterility.
2005;84(4).
18. Mathwig A, Topfer F, Pfeiffer L, Belitz B. Detection of
DNA damage in human spermatozoa with Halosperm
Test. Halosperm Poster, 2010.
19. Zini A, Boman JM, Belzile E, Ciampi A. Sperm
DNA damage is associated with an increased risk
of pregnancy loss after IVF and ICSI: systematic
review and meta-analysis. Human Reproduction.
2008;23(12):2663-8.
20. Wang YJ, Zhang RQ, Lin YJ, Zhang RG, Zhang
WL. Relationship between varicocele and sperm
DNA damage and the effect of varicocele repair: a
meta-analysis. Reproductive BioMedicine Online.
2012;25(3):307-14.
21. Ribas-Maynou J, García-Peiró A, Fernández-
Encinas A. Comprehensive analysis of sperm DNA
fragmentation by five different assays: TUNEL assay,
SCSA, SCD test and alkaline and neutral Comet
assay. Andrology. 2013;1(5):715-22.
22. Shen HM, Chia SE, Ong CN. Evaluation of oxidative
DNA damage in human sperm and its association with
male infertility. Journal of Andrology. 1999;20(6):718-
23.
23. Zenzes MT. Smoking and reproduction: gene
damage to human gametes and embryos. Human
Reproduction Update. 2000;6(2):122-1.
24. Hansen ML, Thulstrup AM, Bonde JP, Olsen J,
Håkonsen LB, Ramlau-Hansen CH. Does last week’s
alcohol intake affect semen quality or reproductive
hormones? A cross-sectional study among healthy
young Danish men. Reproductive Toxicology.
2012;34(3):457-62.
25. Komiya A, Kato T, Kawauchi Y, Watanabe A, Hideki
F. Clinical factor associated with sperm DNA
fragmentation in male patient with infertility. The
scientific world journal. 2014;1-13.
26. Crohan KR, Griffin JT, Lafromboise, De jonge CJ,
Carrel DT. Comparison of chromatin assays for DNA
fragmentation evaluation in human sperm. Journal of
Andrology. 2006;27(1):53-9.
27. Bungum M, Humaidan O, Axmon A, Spano A, Bungum
L, Erenpreiss J et al Sperma DNA integrity assessment
in prediction of assisted reproduction technology
outcome. Human reproduction. 2006;22(1):174-9.