LAPORAN

PRAKTIKUM BIOPROSES

MATERI :
PENJERNIHAN AIR DAN PENYARINGAN SECARA ASEPTIK

Disusun oleh :
Kelompok : IV/RABU
Dimas Shihab NIM. 21030118140206
Farah Mulkiyati D NIM. 21030118140142
Nabiilah Salsabiil NIM. 20130118120016

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI INDUSTRI

DEPARTEMEN TEKNIK KIMIA FAKULTAS TEKNIK
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
 HALAMAN PENGESAHAN

Laporan praktikum berjudul PA/PSA yang disusun oleh:

Kelompok : 4/ Rabu
Anggota : Dimas Shihab NIM. 21030118140206
Farah Mulkiyati D. NIM. 21030118140142
Nabiilah Salsabiil NIM. 20130118120016
Telah disetujui oleh asisten pembimbing pengampu materi PA/PSA pada
Hari :
Tanggal :

Semarang, Agustus 2019

Mengetahui,
Asisten Pembimbing

SHULHA AMALIYYATI ISTIKMALA

NIM. 21030116120014

ii
 PRAKATA

Puji dan syukur atas kehadirat Tuhan Yang Maha Esa berkat rahmat-Nya
sehingga dapat terselesaikan laporan praktikum mikrobiologi ini dengan judul
“PA/PSA”.Laporan praktikum mikrobiologi ini merupakan salah satu mata kuliah
yang wajib diambil oleh semua mahasiswa. Dalam penyusunan laporan praktikum
mikrobiologi ini diharapkan mahasiswa mampu melaksanakan tahapan-tahapan
praktikum dengan laporan yang telah dibuat dan disetujui.
Pada kesempatan ini diucapkan terimakasih sebesar-besarnya kepada:
1. Tuhan Yang Maha Esa.
2. Bapak Dr. Siswo Sumardiono, M.T. selaku ketua departemen Teknik Kimia
Universitas Diponegoro.
3. Dr. Ing. Silviana, S.T., M.T. sebagai dosen pembimbing materi PA dan PSA.
4. Asisten Shulha Amaliyyati Istikmala sebagai asisten pembimbing materi PA
dan PSA.
5. Asisten laboratorium mikrobiologi departemen Teknik Kimia Universitas
Diponegoro.
6. Teman-teman dan pihak-pihak yang telah banyak membantu atas
terselesaikannya laporan praktikum ini.
“Tak ada gading yang tak retak” begitulah perumpamaan untuk laporan ini.
Laporan ini masih jauh dari kata sempurna. Oleh karena itu, kami mengharapkan
kritik dan saran yang membangun untuk pelajaran bagi kami kedepannya.

Semarang, September 2018

Penyusun

iii
 DAFTAR ISI

HALAMAN PENGESAHAN .................................................................................. i

PRAKATA ............................................................................................................. iii
DAFTAR ISI .......................................................................................................... iv
DAFTAR TABEL .................................................................................................. vi
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ vii
RINGKASAN ......................................................................................................... 8
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 9
1.1 Latar Belakang ......................................................................................... 9
1.2 Rumusan Masalah .................................................................................... 9
1.3 Tujuan Percobaan ..................................................................................... 9
1.4 Manfaat Percobaan ................................................................................. 10
BAB II TINJAUAN PUSTAKA......................................................................... 11
2.1 Mikroorganisme Air ............................................................................... 11
2.2 Persyaratan Standarisasi Kualitas Air Bersih dan Air Minum ............... 11
2.3 Sifat Koloni ............................................................................................ 15
2.4 Faktor yang Mempengaruhi Pertumbuhan Mikroorganisme ................. 16
2.5 Metode Perhitungan Jumlah Koloni ....................................................... 17
2.6 Growth Rate dan Doubling Time ........................................................... 18
2.7 Fase Pertumbuhan Bakteri...................................................................... 18
2.8 Macam-Macam Desinfektan .................................................................. 19
2.9 Sampel Air .............................................................................................. 20
BAB III METODE PRAKTIKUM ....................................................................... 22
3.1 Rancangan Praktikum............................................................................. 22
3.2 Alat dan Bahan yang Digunakan ............................................................ 22
3.3 Gambar alat ............................................................................................ 22
3.4 Prosedur Praktikum ................................................................................ 23
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 25
BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 27
1.1 Latar Belakang ....................................................................................... 27
1.2 Rumusan Masalah .................................................................................. 27
1.3 Tujuan Percobaan ................................................................................... 27
1.4 Manfaat Percobaan ................................................................................. 28
BAB II TINJAUAN PUSTAKA........................................................................... 29
2.1 Sterilisasi ................................................................................................ 29
2.2 Metode Sterilisasi ................................................................................... 30
2.3 Asperigulus niger ................................................................................... 31
BAB III METODE PERCOBAAN ....................................................................... 33
3.1 Rancangan Praktikum............................................................................. 33

iv
 3.2 Bahan dan Alat yang Digunakan ............................................................ 33
3.3 Gambar Alat ........................................................................................... 34
3.4 Cara Kerja............................................................................................... 34
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 35

v
DAFTAR TABEL

PA

Tabel 2.1 Daftar Persyaratan Kualitas Air Bersih ............................................... 142

Tabel 2.2 Daftar Persyaratan Kualitas Air Minum ............................................. 143

vi
DAFTAR GAMBAR

PA
Gambar 2.1 Contoh perhitungan koloni pada petridish ........................................ 19
Gambar 2.2 Frekuensi waktu generasi berbagai mikroorganisme ........................ 19
Gambar 2.2 Bukti Pengambilan Sampel ............................................................... 21

PSA
Gambar 2.1 Aspergillus niger secara mikroskopis ............................................... 31

vii
 RINGKASAN
Air merupakan zat penting dalam kehidupan manusia yang digunakan
dalam kehidupan sehari-hari, untuk kebutuhan makan, minum, memasak,
mencuci, mandi, membersihkan kotoran yang ada di rumah, rekreasi, industri, dan
lain-lain. Besarnya manfaat air bagi kehidupan manusia maka kualitas air harus
terjamin baik kualitas fisik, kimiawi maupun bakteriologi. Tujuan dari percobaan
ini yaitu mengkaji pengaruh pH media terhadap jumlah koloni, menentukan
growth rate dan doubling time pertembuhan koloni, dan mampu membandingkan
radius perkembangan mikroba dengan konsentrasi desinfektan jeruk lemon, jeruk
manis, jeruk nipis.
Air sumur merupakan salah satu sumber utama air minum bagi
masyarakat, untuk mendapatkan sumber air tersebut umumnya manusia membuat
sumur gali atau sumur pantek. Air tanah merupakan sumber utama untuk
dimanfaatkan sebagai air minum. Kontaminasi patogen dalam air tanah akan
memiliki resiko tinggi dalam kaitannya dengan kesehatan masyarakat. Beberapa
penelitian melaporkan bahwa bakteri patogen Salmonella, E. coli, Salmonella
enterica, Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeruginosa dan enterovirus
relatif lebih stabil di dalam air tanah.
Alat dan bahan yang digunakan saat praktikum yaitu alatnya seperti beaker
glass, petridish, erlenmeyer, pengaduk, kompor listrik, dan pipet tetes. Lalu bahan
yang digunakan yaitu sampel air sumur Baskoro, aquadest, media, dan
desinfektan. Cara kerja dari percobaan ini yaitu dengan uji koloni seperti
sterilisasi peralatan, mengencerkan sampel air sumur Baskoro, menyiapkan media,
menaburi sampel pada media, inkubasi ± 2 hari, dan menghitung jumlah koloni,
grow rate, dan doubling time. Lalu untuk uji desinfektan dengan cara
mensterilisasikan peralatan, menyiapkan media dan menaburi sampel air sumur
baskoro, menabur lubang pada tengah media, meneteskan desinfektan pada lubang
, lalu diinkubasi selama 3 hari, dan kemudian mencatat radius pertumbuhan.

8
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Air merupakan zat penting dalam kehidupan manusia yang digunakan
dalam kehidupan sehari-hari, untuk kebutuhan makan, minum, memasak,
mencuci, mandi, membersihkan kotoran yang ada di rumah, rekreasi,
industri, dan lain-lain. Besarnya manfaat air bagi kehidupan manusia maka
kualitas air harus terjamin baik kualitas fisik, kimiawi maupun bakteriologi.
Mutu dan kualitas air dipengaruhi oleh sifat-sifat bahan yang
terkandung di dalam air. Bahan-bahan tersebut dapat berupa zat padat, cair
maupun gas yang terlarut maupun tidak terlarut atau secara alamiah
mungkin sudah terdapat dalam air atau akibat kontaminasi bahan tercemar.
Selain bahan kimia, bakteri yang bersifat patogenik juga dapat mencemari
sumber air akibat kontaminasi limbah manusia (Nurhalina, 2015).
Masalah utama yang harus dihadapi dalam pengolahan air adalah
semakin tingginya tingkat pencemaran air, baik pencemaran yang berasal
dari air limbah rumah tangga maupun limbah industri, sehingga upaya-
upaya baru terus dilakukan untuk mendapatkan sumber air, khususnya untuk
pemenuhan akan air minum yang memenuhi persyaratan yang telah
ditetapkan (Radji, dkk, 2008).

1.2. Rumusan Masalah

Mikroorganisme patogen telah lama diketahui mencemari air. Patogen
dalam air menyebabkan pandemi penyakit melalui transmisi air (waterborne
disease). Beberapa penelitian melaporkan bahwa bakteri patogen
Salmonella, E. coli, Salmonella enterica, Salmonella typhimurium,
Pseudomonas aeruginosa dan enterovirus relatif lebih stabil di dalam air
tanah. Perumusan masalah yang didapatkan dalam praktikum ini adalah
mengenai bagaimana pengaruh pH terhadap jumlah koloni, menentukan
growth rate dan doubling time pertumbuhan koloni, dan membandingkan
radius perkembangan mikroba dengan jenis desinfektan yang berbeda.

1.3. Tujuan Percobaan

1. Mengkaji pengaruh pH mediadengan pH 4, pH 7, pH 9 terhadap jumlah
koloni
2. Menentukan growth rate dan doubling time pertembuhan koloni

9
 3. Mampu membandingkan radius perkembangan mikroba dengan
konsentrasi desinfektan jeruk lemon, jeruk manis, jeruk nipis.

1.4. Manfaat Percobaan

1. Mahasiswa mampu mengetahui pengaruh pH media dengan pH 4, pH 7,
pH 9 terhadap jumlah koloni dalam air.
2. Mahasiswa mampu menentukan growth rate dan doubling time
pertumbuhan koloni.
3. Mahasiswa mampu membandingkan radius perkembangan mikroba
dengan konsentrasi desinfektan jeruk lemon, jeruk manis, jeruk nipis.

10
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Mikroorganisme Air

Air merupakan zat penting dalam kehidupan manusia yang
digunakan dalam kehidupan sehari-hari, untuk kebutuhan makan, minum,
memasak, mencuci, mandi, membersihkan kotoran yang ada di rumah,
rekreasi, industri, dan lain-lain. Besarnya manfaat air bagi kehidupan
manusia maka kualitas air harus terjamin baik kualitas fisik, kimiawi
maupun bakteriologi.
Mutu dan kualitas air dipengaruhi oleh sifat-sifat bahan yang
terkandung di dalam air. Bahan-bahan tersebut dapat berupa zat padat, cair
maupun gas yang terlarut maupun tidak terlarut atau secara alamiah
mungkin sudah terdapat dalam air atau akibat kontaminasi bahan tercemar.
Selain bahan kimia, bakteri yang bersifat patogenik juga dapat mencemari
sumber air akibat kontaminasi limbah manusia (Nurhalina, 2015).
Air sumur merupakan salah satu sumber utama air minum bagi
masyarakat, untuk mendapatkan sumber air tersebut umumnya manusia
membuat sumur gali atau sumur pantek. Air tanah sering mengandung zat
besi (Fe) dan Mangan (Mn) yang jumlahnya cukup besar. Adanya
kandungan Fe dan Mn dalam air menyebabkan warna air tersebut berubah
menjadi kuning-coklat setelah beberapa saat kontak dengan udara.
Disamping dapat mengganggu kesehatan, juga dapat menimbulkan bau yang
kurang sedap serta menyebabkan warna kuning pada dinding bak serta
bercak-bercak kuning pada pakaian (Indrawati, 2016).
Air tanah merupakan sumber utama untuk dimanfaatkan sebagai air
minum. Kontaminasi patogen dalam air tanah akan memiliki resiko tinggi
dalam kaitannya dengan kesehatan masyarakat. Beberapa penelitian
melaporkan bahwa bakteri patogen Salmonella, E. coli, Salmonella enterica,
Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeruginosadan enterovirus relatif
lebih stabil di dalam air tanah (Setyaningrum, 2015).

2.2 Persyaratan Standarisasi Kualitas Air Bersih dan Air Minum

Persyaratan standardisasi kualitas air bersih menurut peraturan
menteri Kesehatan Republik Indonesia nomor : 416/menkes/Per/IX/1990
dan air minum menurut peraturan menteri Kesehatan Republik Indonesia
nomor: 492/menkes/Per/IV/2010 yang dapat ditinjau dari parameter fisika,

11
parameter kimia, dan parameter mikrobiologi yang terdapat di dalam air,
yaitu:
 Parameter fisik, secara fisik air bersih harus jernih, tidak berbau dan tidak
berasa. Selain itu juga, suhu air bersih sebaiknya sama dengan suhu udara
atau ±25°C. Apabila terjadi perbedaan maka batas yang diperbolehkan
adalah 25°C ± 3°C.
 Parameter kimiawi, air bersih tidak boleh mengandung bahan-bahan
kimia dalam jumlah yang melampaui batas. Beberapa persyaratan kimia
antara lain adalah: pH, total suspended solid, kesadahan (CaCO3),
kalsium (Ca), besi (Fe), mangan (Mn), tembaga (Cu), seng (Zn), chlorida
(Cl), nitrit (NO2), nitrat (NO3), flourida (F), serta logam berat yaitu
kadmium (Cd), timbal (Pb), arsen (As), khrom (Cr) dan air raksa (Hg).
 Parameter mikrobiologi, air bersih tidak boleh mengandung kuman
patogen dan parasitik yang mengganggu kesehatan. Persyaratan
bakteriologis ini ditandai dengan tidak adanya bakteri E. coli atau fecal
coli dalam air.
Tabel 2.1 Daftar Persyaratan Kualitas Air Bersih
No PARAMETER Satuan Kadar Maksimum Keterangan
yang
diperbolehkan
1 2 3 4 5
A. FISIKA
1. Bau. - - Tidak berbau
2. Jumlah zat Padat mg/L 1.500 -
terlarut(TDS) Skala NTU
3. Kekeruhan – 25 -
o
4. Rasa C - Tidak berasa
5. Suhu Skala Suhu udara ±3oC -
6. Warna TCU 15
B. .KIMIA
Kimia Anorganik
1. Air raksa mg/L 0,001
2. Arsen mg/L 0,05
3. Besi mg/L 1,0
4. Fluorida mg/L 1,5
5. Kadnium mg/L 0,005

12
6. Kesadahan (CaCO3) mg/L 500
7. Klorida mg/L 600
8. Kromium,Valensi 6 mg/L 0,05
9. Mangan mg/L 0,5
10. Nitrat, sebagai N mg/L 10
11. Nitrit, sebagai N mg/L 1,0
Merupakan
12. pH mg/L 6,5 – 9,0
batas
13. Selenium mg/L 0,01 minimum dan
maksimum
14. Seng mg/L 15
15. Sianida mg/L 0,1
16. Sulfat - 400
17 Timbal mg/L 0,05
b. Kimia Organik
1. Aldrin dan Dieldrin mg/L 0,0007
2. Benzena mg/L 0,01
3. Benzo (a) pyrene mg/L 0,00001
4. Chlordane (total mg/L 0,0007
isomer)
5. Coloroform mg/L 0,03
6. 2,4 D mg/L 0,10
7. DDT mg/L 0,03
8. Detergen mg/L 0,5
9. 1,2 Discloroethane mg/L 0,01
10. 1,1 Discloroethene mg/L 0,0003
11. Heptaclor dan mg/L 0,003
heptaclor epoxide
12. Hexachlorobenzene mg/L 0,00001
13. Gamma-HCH 0,004
(Lindane)
14. Methoxychlor mg/L 0,10
15. Pentachlorophanol mg/L 0,01
16. Pestisida Total mg/L 0,10
17. 2,4,6 urichlorophenol mg/L 0,01
18. Zat organik (KMnO4) mg/L 10
C. MIKROBIOLOGI Bukan air
Kaliform Tinja Jumlah per 50 perpiaan

13
 100 ml
Total Kaliform Jumlah per 10
100 ml Air perpipaan

Tabel 2.1 Daftar Persyaratan Kualitas Air Minum

No PARAMETER Satuan Kadar Maksimum Keterangan
yang
diperbolehkan
1 2 3 4 5
A. FISIKA
1. Bau. - - Tidak berbau
2. Jumlah zat Padat mg/L 1.000 -
terlarut(TDS) Skala NTU
3. Kekeruhan – 5 -
o
4. Rasa C - Tidak berasa
5. Suhu Skala Suhu udara ±3oC -
6. Warna TCU 15
B. .KIMIA
a. Kimia Anorganik
1. Air raksa mg/L 0,001
2. Alumunium mg/L 0,2
3. Arsen mg/L 0,05
4. Barium mg/L 1,0
5. Besi mg/L 0,3
6. Fluorida mg/L 1,5
7. Kadnium mg/L 0,005
8. Kesadahan (CaCO3) mg/L 500
9. Klorida mg/L 250
10. Kromium,Valensi 6 mg/L 0,05
11. Mangan mg/L 0,1
12. Natrium mg/L 200
13. Nitrat, sebagai N mg/L 10
14. Nitrit, sebagai N mg/L 1,0
15. Perak mg/L 0,05
Merupakan
16. pH - 6,5 – 8,5
batas
17. Selenium mg/L 0,01 minimum dan
maksimum

14
18. Seng mg/L 5,0
19. Sianida mg/L 0,1
20. Sulfat mg/L 400
21. Sulfida (sebagai H2S) mg/L 0,05
22. Tembaga mg/L 1,0
23. Timbal mg/L 0,05
b. Kimia Organik
1. Aldrin dan Dieldrin mg/L 0,0007
2. Benzena mg/L 0,01
3. Benzo (a) pyrene mg/L 0,00001
4. Chlordane (total mg/L
isomer) 0,0003
5. Coloroform mg/L 0,03
6. 2,4 D mg/L 0,10
7. DDT mg/L 0,03
8. Detergen mg/L 0,05
9. 1,2 Discloroethane mg/L 0,01
10. 1,1 Discloroethene mg/L 0,0003
11. Heptaclor dan mg/L 0,003
heptaclor epoxide
12. Hexachlorobenzene mg/L 0,00001
13. Gamma-HCH 0,004
(Lindane)
14. Methoxychlor mg/L 0,03
15. Pentachlorophanol mg/L 0,01
16. Pestisida Total mg/L 0,10
17. 2,4,6 urichlorophenol mg/L 0,01
18. Zat organik (KMnO4) mg/L 10
C. MIKROBIOLOGI 95% dari
sampel yang
Kaliform Tinja Jumlah per 0
diperiksa
100 ml selama
setahun.
Total Kaliform Jumlah per 0
Kadang-
100 ml kadang boleh
ada 3 per 100
ml sampel air,
tetapi tidak
berturut-turut

15
2.3 Sifat Koloni
a. Sifat umum koloni
Sifat–sifat yang perlu dipahami/diperhatikan pada koloni yang tumbuh
pada medium adalah :
1. Besar kecilnya koloni, ada koloni yang hanya serupa satu titik, ada
pula yang melebar sampai menutup permukaan medium.
2. Bentuk, ada koloni yang berbentuk bulat, ada yang memanjang, ada
yang tepinya rata, ada yang tepinya tidak rata.
3. Kenaikan permukaan, ada koloni yang rata saja dengan permukaan
medium, ada pula yang timbul, yaitu menjulang tebal di atas
permukaan medium.
4. Halus–kasarnya permukaan, ada koloni yang permukaanya halus saja,
ada yang permukaanya kasar, tidak rata.
5. Wajah permukaan, ada koloni yang permukaannya mengkilat, ada
permukaanya yang suram.
6. Warna, Kebanyakan koloni bakteri berwarna keputihan atau
kekuningkuningan, akan tetapi ada juga koloni yang kemerah-
merahan , coklat, jingga, biru, hijau dan ungu.
7. Kepekatan, ada koloni yang lunak seperti lendir, ada yang lunak
seperti mentega, ada yang keras dan kering.
b. Sifat khusus koloni
 Dalam medium padat
Sifat koloni pada agar-agar lempengan bentuknya titik bulat, terbentang
tidak teratur seperti akar, kumparan. Permukaan koloni dapat datar,
timbul teratur, cembung melengkung, membukit kebawah, yang utuh
dan berombak juga ada.
 Dalam medium cair
Medium cair diperoleh dengan tidak mencampurkan agar-agar gelatin
kepadanya. Dalam medium cair, bakteri akan berbeda-beda. Permukaan
medium dapat memperlihatkan adanya serabut selaput (Dwidjoseputro,
1980).

2.4 Faktor yang Mempengaruhi Pertumbuhan Mikroorganisme

 Suhu
Temperature air sangat berpengaruh terhadap proses kimia dan biologi
perairan. Apabila temperature meningkat, akan semakin rendah daya

16
 kelarutan oksigen di dalam air. Dengan meningkatnya temperature,
konsumsi oksigen lebih meningkat. Mikroba yang hidup di air
mempunyai toleransi yang berbeda terhadap temperature, tergantung
jenis mikrobanya dan tingkat aklimatisasinya. Bakteri dapat tumbuh
dalam rentang suhu -10°C sampai 90°C (Mudatsir, 2007).
 Medium
Medium adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran nutrisi untuk
menumbuhkan mikroorganisme baik dalam mengkultur bakteri, jamur,
dan mikroorganisme lain. Suatu media dapat menumbuhkan
mikroorganisme dengan baik bila memenuhi persyaratan antara lain
kelembapan yang cukup, pH yang sesuai, kadar oksigen yang baik, media
steril, dan media harus mengandung semua nutrisi yang mudah
digunakan mikroorganisme. Media yang umum digunakan untuk
menumbuhkan mikroorganisme di laboratorium seperti bakteri adalah
media (NA) Nutrient agar (Juariah, 2018).
 Derajat keasaman (pH)
Pengaruh pH terhadap pertumbuhan tidak kalah pentingnya dari
pengaruh temperatur. Rentang pH bagi pertumbuhan bakteri antara 4–9
dengan pH optimum 6,5–7,5. Jamur lebih menyukai pH asam, rentang
pH pertumbuhan jamur dari 1–9 dan pH optimumnya 4–6. Selama
pertumbuhan pH dapat berubah, naik atau turun, bergantung kepada
komposisi medium yang diuraikan. Bila ingin pH konstan selama
pertumbuhan harus diberikan larutan penyangga atau buffer yang sesuai
dengan media dan jenis mikroorganisme (Hamdiyati, 2010).
 Pengaruh Sinar
Radiasi sinar ultra violet dapat membunuh mikroorganisme dengan
panjang gelombang antara 220 - 290 nm dan radiasi yang paling efektif
adalah 253,7 nm. Absorsi radiasi ultra violet menyebabkan modifikasi
modifikasi kimiawi dari nucleoprotein serta menimbulkan hubungan
silang antara pasangan - pasangan molekul. Hubungan ini dapat
menyebabkan salah baca dari genetic code yang akan menghasilkan
mutasi sehingga akan merusak atau memperlemah fungsi fungsi vital
organisme dan kemudian akan membunuhnya (Ariyadi, 2009).
 Pengaruh Mekanik
Menurut (Ramaswamy, 2006), getaran mekanis dapat merusakkan
dinding sel dan membran sel mikroorganisme. Efek mekanik yang
diterima oleh mikroorganisme terjadi sebagai akibat dari pemberian

17
 tegangan tinggi dan menimbulkan getaran. Pemberian kejut listrik
tegangan tinggi sama dengan pemberian bentuk energi mekanik yang
diteruskan ke dalam jaringan biologis sel dan merusak susunan
molekulnya sehingga menimbulkan terganggunya proses metabolisme di
dalam sel.
 Faktor Kimia
Aktivitas mikroorganisme dapat terhambat oleh senyawa antimikroba/
antibakteri dan antiseptik yang berasal dari bahan-bahan kimia sintetik.
Secara umum adanya kerja suatu bahan kimia sebagai zat antibakteri
dapat mengakibatkan terjadinya perubahan-perubahan yang mengarah
pada kerusakan hingga terhambatnya pertumbuhan sel bakteri tersebut
(Retnowati, dkk., 2011).

2.5 Metode Perhitungan Jumlah Koloni

a. Perhitungan dengan SPC

Standart Plate Count (SPC) digunakan untuk menemukan
kepadatan bakteri heterotroph dan fakultatif aerob. Dalam percobaan ini
pengukuran secara empiris karena bakteri dapat membentuk koloni
rantai kelompok. Dasar SPC adalah membuat suatu seri pengenceran
bahan dengan kelipatan 10. Setelah inkubasi, dilihat jumlah koloni tiap
periode dapat digunakan coloni encounter yang dilengkapi dengan
register. Perhitungan dan pencatatan koloni pada plate dilakukan
sesegera mungkin setelah periode ini sampai selesai. Bila perhitungan
ditunda, plate harus disimpan pada suhu 5-10°C dan tidak boleh lebih
dari 21 jam.
b. Perhitungan Manual
Perhitungan Jumlah koloni secara manual dilakukan dengan
menghitung jumlah koloni terbanyak dan tersedikit.Sampel diencerkan
hingga 4x pengenceran, setelah waktu inkubasi, jumlah koloni dalam
petridish dapat dihitung secara manual (dihitung biasa), jumlah koloni
terbanyak dan tersedikit, kemudian dicari rata-ratanya.

Rata-Rata jumlah koloni = (terbanyak + tersedikit) / 2

Jumlah koloni dalam petridish = rata-rata jumlah koloni x luas
petridish x fp
Keterangan : Luas petridish = 63,585 cm2
Fp = 104

18
 Gambar 2.1 Contoh perhitungan koloni pada petridish

2.6 Growth Rate dan Doubling Time

Pengetahuan mengenai kecepatan pertumbuhan bersifat penting dalam
menentukan keadaan atau status kultur sebagai kesatuan (Hamdiyati, 2010).
 Kecepatan pertumbuhan (µ )
Growth rate atau kecepatan pertumbuhan adalah perubahan jumlah atau
massa sel per satuanwaktu,

ln X−ln Xo
μ= 𝑡

n0 = jumlah sel / ml awal

n = jumlah sel / ml setelah waktu t
t0 = waktu awal
t = waktu akhir
 Doubling Time (waktu generasi) adalah Waktu yang dibutuhkan oleh
suatu kultur untuk memperbanyak jumlah / massa / komponen sel
sebanyak 2x lipat
ln 2
td = 𝜇

Gambar 2.2 Frekuensi waktu generasi berbagai mikroorganisme

2.7 Fase Pertumbuhan Bakteri

Fase pertumbuhan bakteri dapat dibagi menjadi 4 fase, yaitu fase lag,
fase logaritma (eksponensial), fase stasioner dan fase kematian.

19
  Fase lag merupakan fase penyesuaian bakteri dengan lingkungan yang
baru. Lama fase lag pada bakteri sangat bervariasi, tergantung pada
komposisi media, pH, suhu, aerasi, jumlah sel pada inokulum awal dan
sifat fisiologis mikroorganisme pada media sebelumnya.
 Fase eksponensial ditandai dengan terjadinya periode pertumbuhan yang
cepat. Variasi derajat pertumbuhan bakteri pada fase eksponensial ini
sangat dipengaruhi oleh sifat genetik yang diturunkannya. Selain itu,
derajat pertumbuhan juga dipengaruhi oleh kadar nutrien dalam media,
suhu inkubasi, kondisi pH dan aerasi. Ketika derajat pertumbuhan bakteri
telah menghasilkan populasi yang maksimum, maka akan terjadi
keseimbangan antara jumlah sel yang mati dan jumlah sel yang hidup.
 Fase stasioner merupakan saat laju pertumbuhan bakteri sama dengan
laju kematiannya, sehingga jumlah bakteri keseluruhan akan tetap.
Keseimbangan jumlah keseluruhan bakteri ini terjadi karena adanya
pengurangan derajat pembelahan sel. Hal ini disebabkan oleh kadar
nutrisi yang berkurang dan terjadi akumulasi produk toksik sehingga
mengganggu pembelahan sel. Fase stasioner ini dilanjutkan dengan
 Fase kematian yang ditandai dengan peningkatan laju kematian yang
melampaui laju pertumbuhan (Volk dan Wheeler, 1993).

2.8 Macam-Macam Desinfektan

1. Jeruk Nipis

Menurut Afifah dalam Khanifah (2015), jeruk nipis mengandung

senyawa flavonoid, saponin dan fenol. Dan menurut Rahardjo dalam
Khanifah (2015), jeruk nipis mengandung senyawa asam organik yang
memiliki aktivitas antibakteri seperti asam sitrat yang merupakan
komponen utama kemudian asam malat, asam laktat dan asam tartarat.
Secara empiris jeruk nipis (Citrus aurantifolia) juga telah lama
digunakan untuk mengobati berbagai penyakit yang disebabkan oleh
bakteri seperti batuk, demam, disentri, jerawat dan menangani bau
badan. Jeruk nipis memiliki kandungan asam sitrat sebanyak 8,7%
(Sarwono dalam Mala, 2010).
2. Jeruk Manis
Jeruk manis (Citrus sinensis) merupakan komoditi hasil
pertanian Indonesia yang sangat diminati konsumen dari dalam dan

20
 luar negeri. Jeruk mengandung beragam zat gizi dan non gizi yang
bermanfaat dalam mencegah kanker dan meningkatkan kesehatan.
Masyarakat yang mengkonsumsi buah jeruk dalam jumlah relatif
banyak dalam makanan sehari-hari memiliki risiko penyakit
degeneratif yang rendah. Salah satu komponen yang berkhasiat dalam
buah jeruk adalah Minyak atsiri. Minyak atsiri dari jeruk manis
memiliki aktivitas biologis sebagai antiseptik, antispasmodik, sedatif,
bipnotik dan tonik (Agusta, 1999). Selain itu, jeruk manis
mengandung asam sitrat sebanyak 1,4% (Sarwono dalam Mala, 2010).
3. Jeruk Lemon
Menurut Tomotake et al. dalam Indriani (2015), zat yang memiliki
kemampuan sebagai antibakteri dalam buah jeruk lemon adalah asam
sitrat yang merupakan asam organik utama yang terkandung dalam air
perasan lemon. Dalam buah jeruk lemon terdapat kandungan asam
sitrat sebanyak 7- 8% (Sarwono dalam Mala, 2010).

2.9 Sampel Air

Tempat pengambilan : Air sumur Baskoro
Waktu Pengambilan : Jumat 23 Agustus 2019
Foto Bukti :

Gambar 2.2 Bukti Pengambilan Sampel

Pengamatan :
Sampel air yang digunakan untuk praktikum ini diambil dari air
sumur Baskoro. Air ini diambil langsung dari kran tanpa melakukan
penyaringan. Dilihat secara fisik air tersebut bersih, tidak berwarna dan
tidak berbau. Tetapi jika dilihat secara biologi air tersebut belum dapat
dikatakan layak untuk dikonsumsi karena belum melakukan analisa untuk
mengetahui jumlah dan keberadaan mikroorganisme yang terkandung
dalam air tersebut.

21
 BAB 3
METODE PRAKTIKUM

3.1.Rancangan Praktikum
3.1.1. Skema Rancangan Percobaan
3.1.1.1. Uji Koloni
Sterilisasi Mengencerkan
Sampel air sumur Menyiapkan
Peralatan
Baskoro media

Menghitung
jumlah koloni, Inkubasi Menaburi Sampel pada
growth rate, dan ±2 hari media
doubling time

Gambar 3.1 Skema rancangan uji koloni

3.1.1.2. Uji Desinfektan
Menyiapkan media
Sterilisasi dan menaburi Sampel Membuat lubang
Peralatan air sumur Baskoro pada tengah media

Mencatat radius Inkubasi Meneteskan

Pertumbuhan 3 hari desinfektan
pada lubang
Gambar 3.2 skema rancangan uji desinfektan

3.1.2. Variabel Operasi

 Sampel Uji Koloni : Air sumur Baskoro
 Media Uji Koloni : PDA (Potato Destroksa Agar)
 Uji Desinfektan : jeruk lemon, jeruk nipis, jeruk
manis, jeruk basis 2 tetes.

3.2. Bahan dan Alat yang Digunakan

3.2.1. Bahan:
1. Sampel air sumur Baskoro 10 ml
2. Aquadest 80 ml
3. Media PDA (Potato Destroksa Agar) 3,9 gr
4. Desinfektan (Jeruk nipis, jeruk lemon, dan jeruk manis) @2 tetes

22
 3.2.2. Alat:
1. Beaker glass
2. Petridish
3. Erlenmeyer
4. Pengaduk
5. Kompor listrik
6. Pipet tetes

3.3. Gambar Alat

1. Beaker glass 2. Petridish 3. Erlenmeyer

4. Pengaduk 5. Kompor listrik 6. Pipet tetes

3.4. Prosedur Praktikum

Langkah-langka hpendahuluan:
1. Menyiapkan petridish yang sudah disterilisasi
2. Mengencerkan sampel air sumur baskorodengan cara mengambil 10 ml
air sumur Baskoro kemudian diencerkan 100 ml, dan dari 100 ml diambil
10 ml lalu diencerkan lagi menjadi 100 ml.
3. Lanjutkan sampai didapatkan 4 kali pengenceran.
4. Menyiapkan media PDA, mengambil 3,9 gram media kemudian
tambahkan aquadest kurang lebih 80 ml.
5. Panaskan media PDA hingga mendidih.
6. Membagi media PDA ke dalam petridish secara merata.
Langkah-langkah percobaan PA :
1. Uji Koloni
a. Biarkan media PDA dalam petridish sampai setengah padat kemudian
taburi dengan sampel air sumur Baskoro yang sudah diencerkan
secara merata ke permukaan media menggunakan pipet tetes yang
sudah disterilisasi.

23
 b. Simpan dalam ruang inkubasi dengan cara dibalik peletakannya
selama waktu inkubasi yaitu 2 hari.
c. Menghitung jumlah koloni terbanyak dan tersedikit (dihitung biasa),
kemudian dicari rata-ratanya.

Rata-Rata jumlah koloni = (terbanyak + tersedikit) / 2

Jumlah koloni dalam petridish= rata-rata jumlah koloni x luas petridish x fp
Keterangan : Luas petridish = 63,585 cm2
Fp = 104

d. Menghitung growth rate atau nilai laju pertumbuhan spesifik (μ)

dengan menggunakan persamaan :
ln X−ln Xo
μ= 𝑡

Keterangan :
μ = laju pertumbuhan spesifik
x = konsentrasi sel pada t tertentu
xo = konsentrasi sel awal
t = waktu yang dibutuhkan
sedangkan doubling time tersebut dapat dirumuskan menjadi :
ln 2
td = 𝜇
Keterangan :
td = doubling time
μ = laju pertumbuhan spesifik
ln 2 = konsentrasi sel (saat penggandaan)

2. Uji Desinfektan
a. Biarkan media PDA dalam petridish sampai setengah padat kemudian
taburi dengan sampel air sumur Baskoro yang sudah diencerkan
secara merata ke permukaan media menguunakan pipet tetes yang
sudah disterilisasi.
b. Biarkan media PDA dalam petridish memadat kemudian buat lubang
kecil pada tengah-tengah media tersebut. Kemudian teteskan contoh
desinfektan jeruk nipis, jeruk lemon, dan jeruk manis.
c. Simpan dalam ruang inkubasi selama 5 hari
d. Mencatat radius pertumbuhan diukur dari lubang yang dibuat ( radius
terjauh, radius terdekat, dan rata-rata).

24
 BAB IV
HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN

4.1 Pengaruh pH Media Terhadap Jumlah Koloni

10000000 8901900
9000000
8000000
Jumlah Koloni 7000000
6000000
5000000 4133025 4133025
4000000 3179250 3497175
3000000
2000000
1000000 317925
0
Hari 1 Hari 2

pH 4 pH 7 pH 9

Gambar 4.1 Grafik Pengaruh pH Media terhadap Jumlah Koloni

Gambar 4.1 menunjukkan hubungan pengaruh berbagai pH media
terhadap jumlah koloni yang tumbuh selama waktu pengamatan yaitu 3 hari.
Dari grafik tersebut dapat dilihat bahwa pada pH 4 terdapat koloni pada hari
pertama yakni sebanyak 3.179.250, kemudian hari ke dua sebanyak
4.133.025. Pada pH 7 di hari pertama terdapat koloni sebanyak 317.925, hari
ke dua sebanyak 3.497.175. Pada pH 9 di hari pertama terdapat koloni
sebanyak 4.133.025, kemudian naik pada hari ke dua yakni menjadi
8.901.900. Dalam gambar 4.1, dapat dilihat bahwa fenomena hubungan
waktu terhadap pertumbuhan jumlah koloni adalah semakin lama waktu
inkubasi maka semakin banyak bakteri yang tumbuh.
Dari hasil percobaan tersebut dapat diketahui bahwa jumlah koloni
terbanyak yaitu ada pada pH media 9. Hal ini dapat disebabkan karena
mikroorganisme umumnya tumbuh pada pH netral, sehingga pada pH 8
terdapat jumlah koloni terbanyak. Bakteri coliform merupakan
mikroorganisme yang sering tumbuh di air. Coliform adalah indikator kualitas
air. Makin sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas air semakin baik.
Untuk pertumbuhan koloni dalam air (khususnya coliform), pH optimumnya
antara 7,0 sampai 7,5 (Suprapto, 2013). Sementara pada pH 11 terhitung
jumlah mikroorganisme yang tumbuh paling sedikit. Suasana yang terlalu
basa (pH 11) menggangu lingkungannya. Suasana basa berarti banyak
kandungan OH-. Ion OH- tersebut menjadi OH radikal yang akan membunuh
semua mikroorganisme (koloni), sehingga pada pH 11 jumlah koloni yang
dihasilkan paling sedikit di antara pH-pH lainnya (Isyuniarto, 2007).

25
 Sementara pada pH 4 terhitung jumlah mikroorganisme yang tumbuh
lebih sedikit dibanding pH 8. Hal ini dikarenakan pada pH yang rendah,
membran sel menjadi jenuh oleh ion hidrogen sehingga membatasi transport
membran. Keracunan yang terjadi pada pH rendah adalah karena sebagian
substansi asam yang tidak terurai meresap ke dalam sel, sehingga terjadi
ionisasi dan pH sel berubah. Perubahan ini menyebabkan proses pengiriman
asam-asam amino dari RNA terhambat sehingga menghambat pertumbuhan
dan bahkan dapat membunuh mikroba (Agustiyani et al., 2004).

4.2 Pengaruh pH Media Terhadap Grow Rate dan Doubling Time

1.4 1.198
1.2
Grow Rate

1
0.8
0.6 0.383
0.4 0.131
0.2
0
Ph 4 pH 7 pH 9
pH Media

Gambar 4.2 Grafik Pengaruh pH Media terhadap Growth Rate

6 5.291
5
Doubling Time

4
3
1.809
2
1 0.578
0
Ph 4 pH 7 pH 9
pH Media

Gambar 4.3 Grafik Pengaruh pH Media terhadap Doubling Time

Gambar 4.2 menunjukan bahwa nilai growth rate pada pH media 4,7
dan 9 adalah masing- masing 0,131; 1,198; dan 0,383. Sedangkan Gambar
4.3 menunjukan bahwa nilai doubling time pada pH media 4,7, dan 9 adalah
masing- masing 5,291; 0,578; dan 1,809. Nilai growth rate tertinggi terjadi
saat pH media 7 dan nilai doubling time tertinggi (terlama) terjadi saat pH
media 4.
Nilai growth rate tertinggi terjadi saat pH media 7 karena bakteri atau
mikroba lebih menyukai lingkungan yang netral dengan tingkat pH optimal
7 (Suriani, 2013). Pertumbuhan lebih cepat pada keadaan pH optimal,
sehingga jumlahnya pun lebih banyak pada keadaan netral (pH 7) dengan
pH optimal (Asmirandah dkk., 2016). Nilai doubling time tertinggi (terlama)

26
 terjadi saat pH media 4 karena pada pH asam (pH 4) membran sel menjadi
jenuh oleh ion hidrogen sehingga membatasi transport membran dan
berkemungkinan adanya sebagian substansi asam yang tidak terurai meresap
ke dalam sel, sehingga terjadi ionisasi dan pH sel berubah. Perubahan ini
menyebabkan proses pengiriman asam-asam amino dari RNA terhambat
sehingga menghambat pertumbuhan mikroba (Agustiyani dkk., 2004).
Sehingga pada pH asam (pH 4) nilai doubling time mikroba tidak setinggi
pH netral (pH 7). Dan pada saat pH media 9 nilai doubling time mikroba
dibawah nilai doubling time mikroba pH 7 karena bakteri atau mikroba
sukar tumbuh pada lingkungan yang basa (pH 9)
Dari grafik, dapat disimpulkan bahwa pH media berpengaruh terhadap
nilai growth rate dan doubling time. Nilai growth rate tertinggi terjadi saat
pH media 7 dan nilai doubling time tertinggi (terlama) terjadi saat pH media
4.

4.3 Pengaruh Jenis Desinfektan Terhadap Radius Perkembangan Mikroba

4 3.5
3
3 2.5
Radius (cm)

0
Jeruk nipis Jeruk lemon Jeruk Manis
Jenis Desinfektan

Gambar 4.4 Grafik Pengaruh Jenis Desinfektan terhadap Radius

Pertumbuhan Mikroba
Gambar 4.4 menunjukan bahwa radius pertumbuhan mikroba
dengan desinfektan jeruk nipis , jeruk lemon, dan jeruk manis adalah
masing- masing 3,5 cm, 3 cm, dan 2,5 cm. Radius pertumbuhan mikroba
terjauh didapatkan pada desinfektan jeruk nipis, kemudian jeruk lemon, dan
yang terdekat adalah jeruk manis.
Radius pertumbuhan mikroba yang didapatkan berbeda karena
masing- masing desinfektan memiliki nilai pH yang berbeda. Pada Sari buah
jeruk mengandung asam sitrat. Kandungan asam sitrat jeruk lemon 7-8 %,
jeruk nipis 8,7 %, jeruk manis 1,4 %. Kadungan asam sitrat mempengaruhi
pH dari masing–masing desinfektan semakin banyak mengandung asam
sitrat berarti semakin asam pH jeruk tersebut (Sarwono,1991). Pengaruh pH
desinfektan terhadap pertumbuhan mikroba berkaitan dengan aktifitas enzim

27
apabila pH dalam suatu medium tidak optimal maka akan memperlambat
pertumbuhan mikroba itu sendiri. Mikroba memiliki pH pertumbuhan
optimal 6,5-7 (Suriani, 2013). Maka data percobaan sesuai karena semakin
banyak kandungan asam sitrat pada jeruk (pH semakin rendah) radius
pertumbuhan mikroba semakin jauh dari desinfektan.
Jadi hasil percobaan sesuai dengan teori dimana semakin jauh pH dari
keadaan optimum semakin lambat pertumbuhan mikroba. Dimana
desinfektan dari mulai yang efektif adalah jeruk nipis, jeruk lemon, jeruk
manis.

BAB V
PENUTUP

28
5.1. Kesimpulan
1. pH media berpengaruh terhadap jumlah koloni. Dimana jumlah koloni
dapat tumbuh pesat pada pH optimum yaitu pH netral (pH 7). Jumlah
koloni juga selalu bertambah seiring bertambahnya waktu sebagai
indikasi adanya pertumbuhan pada koloni tersebut.
2. pH media berpengaruh terhadap nilai growth rate dan doubling time.
Nilai growth rate tertinggi terjadi saat pH media 7 karena bakteri atau
mikroba lebih menyukai lingkungan yang netral dengan tingkat pH
optimal (pH 7). Nilai doubling time tertinggi (terlama) terjadi saat pH
media 4 karena sel menjadi jenuh oleh ion hidrogen sehingga membatasi
transport membran dan berkemungkinan adanya sebagian substansi asam
yang tidak terurai meresap ke dalam sel, sehingga terjadi ionisasi dan pH
sel berubahproses pengiriman asam-asam amino dari RNA terhambat
sehingga menghambat pertumbuhan mikroba
3. Semakin banyak kandungan asam sitrat pada jeruk (pH semakin rendah)
maka radius pertumbuhan mikroba semakin jauh dari desinfektan.
Desinfektan yang paling efektif adalah mulai dari jeruk nipis, jeruk
lemon, dan jeruk manis.

5.2 Saran
1. Menurunkan suhu media hingga suhu ruang sebelum diletakkan secara
terbalik dalam tempat penyimpanan untuk mencegah terbentuknya uap air
pada uji koloni.
2. Memanaskan petridish pada saat menuang media ke dalam petridish agar
meminimalkan bakteri lain masuk ke dalam petridish.
3. Menjaga sampel air agar tidak terkontaminasi dengan bakteri lain.

DAFTAR PUSTAKA

29
Agusta, A dan Jamal, Y. 1999. Komposisi Minyak Atsiri Dari Tiga Jenis
Tumbuhan Rutaceae. Berita Birologi, Vol.5, No.5.
Ariyadi, T dan Dewi, S. Sinto. 2009. Pengaruh Sinar Ultraviolet Terhadap
Pertumbuhan Bakteri Bacillus sp. Sebagai Bakteri Kontaminan. Jurnal
Kesehatan, Vol. 2, No.2
Hamdiyanti, Yati. 2010. Pertumbuhan dan Pengendalian mikroorganisme II.
Indrawati1, Fakhrudin. 2016. Isolasi Dan Identifikasi Jamur Patogen Pada Air
Sumur Dan Air Sungai Di Pemukiman Warga Desa Karangwangi, Cianjur,
Jawa Barat. Jurnal Biodjati, 27-38, Vol. 1, No. 1.
Indriani, Mulqie, dan Hazar. 2015. Uji Aktivitas Anti Bakteri Air Perasan Jeruk
Lemon (Citruslemon(L.) osbeck) dan Madu Hutan Terhadap
Propionibacterium Acne. Bandung : Prodi Farmasi, Fakultas MIPA, Unisba.
Khanifah, Firda. 2015. Efek Pemberian Air Perasan Jeruk Nipis Terhadap
Pembentukan, Pertumbuhan,dan Penghancuran Biofilm secara In Vitro.
Jakarta : Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Program Studi Farmasi,
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
Mudatsir.2007. Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Kehidupan Mikroba Dalam
Air. Jurnal Kedokteran Syiah Kuala, Vol. 7, No. I.
Nurhalina, Windarto, Gunawan, T. 2015. Gambaran Mpn Coliform Dan Coli
Tinja pada Air Sumur Bor di Perumahan Cahaya Borneo Kota Palangka
Raya Tahun 2015 Jurnal Surya Medika ,Vol. 1, No. 1.
Radji, Maksum, dkk. 2008. Pemeriksaan Bakteriologis Air Minum Isi Ulang di
Beberapa Depo Air Minum Isi Ulang di Daerah Lenteng Agung dan
Srengseng Sawah Jakarta Selatan. Majalah Ilmu Kefarmasian, Vol. V, No.
2, 101 – 109.
Ramaswamy, R., Tony, J., Balasubramaniam, Howard Zhang. 2006. Pulsed
Electric Field Processing Fact Sheet for Food Processor. Journal of Food
Processing and Preservation 37. 581-587.
Retnowati Yuliana, dkk. 2011. Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aures pada
Media yang Diekspos dengan Infus Daun Sambiloto (Andrographis
paniculata). Jurnal Saintek, Vol. 6, No.2.
Sarwono, B. 2001). Khasiat dan manfaat jeruk nipis. AgroMedia.
Setyaninrum, Sinta. 2015. Kontaminasi Patogen pada SumberAir dan Upaya
Penyisihan Patogen dalam Proses Produksi Air Bersih.Bandung : Jurusan
Teknik Kimia, Fakultas Teknologi Industri, Institut Teknologi Bandung.
RINGKASAN

30
 Mikroorganisme dapat menyebabkan banyak kerusakan. Pengendalian
mikroorganisme ditujukan untuk mencegah penyebaran penyakit, membasmi
mikroorganisme pada inang, serta mencegah pembusukan dan kerusakan bahan.
Mikroorganisme dapat dihambat atau dibunuh secara fisik dan kimia. Secara fisik
melalui suhu, tekanan, radiasi dan penyaringan, misalnya sterilisasi, pembakaran
atau sanitasi. Secara kimia melalui perubahan komposisi molekul misalnya
dengan senyawasenyawa fenolik, alkohol, klor, iodium dan etilen oksida.
Sterilisasi adalah proses yang dilakukan untuk mematikan semua bentuk
organisme. Sterilisasi dapat dilakukan dengan banyak cara, yaitu sterilisasi secara
mekanik, fisik dan kimiawi. Macam bentuk sterilisasi secara mekanik adalah
penyaringan. Sedangkan secara fisik menggunakan autoklaf, oven, Sinar UV dan
perebusan. Sterilisasi dengan cara kimiawi adalah menggunakan agen-agen kimia.
Cara kerja yang kita lakukan adalah menyiapkan sampel, A.niger. lalu kawat
osse kita sterilisasi terlebih dahulu dengan HCl dan pembakaran. Lalu jamur
dipindahkan ke petridish. Inkubari selama 3 hari dan diamati kenampakan setelah
masa inkubasi.

31
 BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Mikroorganisme merupakan semua makhluk yang berukuran beberapa
mikron atau lebih kecil lagi. Yang termasuk golongan ini adalah
bakteri,cendawan atau jamur tingkat rendah, ragi yang menurut sistematik
masuk golongan jamur, ganggang, hewan bersel satu atau protozoa, dan virus
yang hanya nampak dengan mikroskop elektron (Dwidjoseputro, 1990).
Mikroorganisme dapat menyebabkan banyak kerusakan. Pengendalian
mikroorganisme ditujukan untuk mencegah penyebaran penyakit, membasmi
mikroorganisme pada inang, serta mencegah pembusukan dan kerusakan
bahan. Mikroorganisme dapat dihambat atau dibunuh secara fisik dan kimia.
Secara fisik melalui suhu, tekanan, radiasi dan penyaringan, misalnya
sterilisasi, pembakaran atau sanitasi. Secara kimia melalui perubahan
komposisi molekul misalnya dengan senyawa-senyawa fenolik, alkohol, klor,
iodium dan etilen oksida.
Teknik aseptik adalah segala upaya yang dilakukan untuk mencegah
masuknya mikroorganisme ke dalam tubuh yang kemungkinan besar akan
mengakibatkan infeksi. Sehingga penerapan teknik aseptik merupakan salah
satu cara untuk mendapatkan kondisi terbebas dari mikroorganisme.

1.2 Rumusan Masalah

Perkembangan industri yang menggunakan bakteri maupun jamur pada era
ini mulai berkembang pesat. Untuk meningkatkan efisiensi dan nilai
ekonomis dari suatu perkembang biakkan mikroorganisme dalam suatu media
yang diinginkan, harus melakukan pemindahan mikroorganisme secara
aseptis (bebas impuritas baik berupa bakteri, jamur atau kuman yang tidak
diinginkan). Proses sterilisasi mutlak diperlukan sebelum melakukan
pemindahan mikroorganisme tersebut. Macam macam dan teknik
pemindahan bakteri dari suatu wadah ke wadah lain secara aseptis inilah
yang menjadi fokus persoalan.

1.3 Tujuan Percobaan

1. Dapat menguasai teknik pemindahan Aspergilus niger dari satu wadah ke
wadah lain.
2. Memahami berbagai macam proses sterilisasi.

32
1.4 Manfaat Percobaan
1. Mahasiswa mampu menghasilkan kultur Aspergillus Niger yang murni
2. Mahasiswa mampu mencegah bakteri merugikan terkonsumsi oleh tubuh

33
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Sterilisasi
Mikroorganisme dapat menyebabkan banyak kerusakan. Pengendalian
mikroorganisme ditujukan untuk mencegah penyebaran penyakit, membasmi
mikroorganisme pada inang, serta mencegah pembusukan dan kerusakan
bahan. Oleh karena itu perlu dilakukan suatu proses yang bernama sterilisasi
(Susilowati dan Listyawanti, 2001). Sterilisasi adalah proses yang dilakukan
untuk mematikan semua bentuk organisme. Sterilisasi dapat dilakukan
dengan banyak cara, yaitu sterilisasi secara mekanik, fisik dan kimiawi.

2.2 Metode Sterilisasi

2.2.1 Secara Mekanik
Menurut buku Elektrobiomedik,2011 Sterilisasi Mekanik adalah
sterilisasi bahan yang tidak tahan panas, seperti misalnya ekstrak
tanaman, media sintetik tertentu, dan antibiotik dilakukan dengan
penyaringan. Dasar metode ini semata - mata ialah proses mekanis
yang membersihkan larutan atau suspensi dari segala organisme hidup
dengan melewatkannya pada suatu saringan, misalnya menggunakan
saringan Seitz (Hidayat,2017).
2.2.2 Secara Fisik
a. Autoklaf
Sterilisasi panas lembap dapat dilakukan dengan penggunaan
autoklaf (uap bertekanan) dan penggunaan uap langsung. Panas
lembab sangat efektif meskipun pada suhu yang tidak begitu tinggi,
karena uap air berkondensasi pada bahan-bahan yang disterilikan,
dilepaskan panas sebanyak 636 kalori per gram uap air pada suhu 121-
0
C.Panas ini mendenaturasikan atau mengkoagulasikan protein pada
organisme hidup dan dengan demikian mematikannya (Cahyani,
2009).
b. Oven
Oven digunakan untuk sterilisasi Panas kering. Panas kering kurang
efisien dan membutuhkan suhu lebih tinggi serta waktu lebih lama
untuk sterilisasi. Hal ini ini disebabkan karena tanpa kelembaban tidak
ada panas laten (Cahyani, 2009).

34
 c. Ultraviolet
Sinar ultraviolet umumnya digunakan untuk membantu
mengurangi kontaminasi di udara dan pemusnahan selama proses di
lingkungan. Sinar yang bersifat membunuh mikroorganisme
(germisida) diproduksi oleh lampu kabut merkuri yang dipancarkan
secara eksklusif pada 253,7 nm . Sinar UV menembus udara bersih dan
air murni dengan baik, tetapi suatu penambahan garam atau bahan
tersuspensi dalam air atau udara menyebabakan penurunan derajat
penetrasi dengan cepat. Untuk kebanyakan pemakaian lama penetrasi
dihindarkan dan setiap tindakan membunuh mikroorganisme dibatasi
pada permukaan yang dipaparkan (Leon et al., 1998).
d. Pendidihan
Cara ini merupakan pilihan terakhir ketika tidak ada cara lain yang
dapat dilakukan. Gunakan panci pendidih khusus atau gunakan panci
bergagang (saucepan). Isi panci dengan air (lebih baik air
demineralisasi) dan panaskan di atas tungku. Peralatan gelas harus
dimasukkan ke dalam panci sewaktu air masih dingin. Peralatan logam
(bevel yang dapat dipakai ulang, pinset) harus dimasukkan sewaktu air
mendidih. Rendam peralatan tersebut selama 30 menit (Chairlan,
2012).

2.2.3 Secara Kimiawi

Sterilisasi kimia dilakukan dengan menggunakan agen-agen kimia.
Cara kimiawi yang sederhana adalah mengusapkan larutan 60%+40%
air suling dengan menggunakan kapas, kemudian benda tersebut
dikeringkan dalam oven dengan suhu 60Oc selama 0.5-1 jam
(Cahyani, 2009).

2.3 Aspergillus Niger

a. Gambar Mikroskopik

Gambar 2.1 Aspergillus niger secara mikroskopis

35
b. Kondisi tumbuh
 Temperatur
Aspergillus niger dapat tumbuh optimum pada suhu 35-37
°C, dengan suhu minimum 6-8 °C, dan suhu maksimum 45-47 °C.
Aspergillus niger memiliki warna dasar berwarna putih atau kuning
dengan lapisan konidiospora tebal berwarna coklat gelap sampai
hitam (Putra, 2013).
 Medium
Aspergillus niger mempunyai koloni pada medium
Cxapek’s Dox mencapai diameter 4-5 cm dalam 7 hari dan dapat
tumbuh pada kelembaban nisbi 80 (Chafida dkk., 2013).
 Faktor kimia
Banyak enzim yang berguna yang dihasilkan dan
digunakan pada industri fermentasi. Misalnya, Aspergillus niger
glukoamilase digunakan dalam produksi sirup jagung fruktosa
tinggi, dan pectinases digunakan dalam sari anggur dan klarifikasi.
Alpha-galaktosidase, sebuah enzim yang memecah gula kompleks
tertentu (Putra, 2013).

 pH
pH lingkungan yang dibutuhkan sekitar 2-8,5 dengan
nutrisi yang cukup untuk pertumbuhan (Frazier, 1958 dalam
Mudah, 2013).
 Aerob
Dalam proses pertumbuhannya fungi ini memerlukan
oksigen yang cukup (aerobik) (Putra, 2013).

c. Ciri-ciri fisik
Aspergilus niger merupakan fungi dari filum ascomyce es yang
berfilamen, mempunyai hifa berseptat, dan dapat ditemukan melimpah di
alam. Fungi ini biasanya diisolasi dari tanah, sisa tumbuhan, dan udara di
dalam ruangan. Koloninya berwarna putih pada Agar Dekstrosa Kentang
(PDA) 25 °C dan berubah menjadi hitam ketika konidia dibentuk. Kepala
konidia dari Aspergillus niger berwarna hitam, bulat, cenderung memisah
menjadi bagian-bagian yang lebih longgar seiring dengan bertambahnya
umur (Putra, 2013).

36
d. Aplikasi

 Aspergillus niger adalah agen utama dalam fermentasi teh Pu-erh,

Okinawa Awamori semangat, dan beberapa varietas shochu.

 Pada tahun 2006, dilaporkan bahwa RNase disekresikan oleh

Aspergillus niger disebut actibind memiliki karakteristik
antiangiogenic dan antikarsinogenik.

 Aspergillus niger juga dibudibudayakan untuk ekstraksi enzim

glukosa oksidase (GO) dan Alpha-galaktosidase (AGS). Glukosa
oksidase digunakan dalam desain biosensor glukosa, karena afinitas
tinggi untuk β-D-glukos. Alpha-galaktosidase dapat diproduksi
oleh fermentasi Aspergillus niger. Digunakan untuk menghidrolisis
ikatan alfa 1-6 ditemukan di melibiose, raffinose, dan stachyose.

 Publikasi penelitian tahun 2006-2008 menyeselidiki Aspergillus

niger endoprotease prolyl (AN-PEP), sebuah endoprotease mikroba
yang diturunkan prolyl yang memotong gluten. Hal ini memiliki
implikasi yang kuat dalam pengobatan penyakit celiac atau
sensitivitas gluten proses penyakit metabolik. Sebuah plasebo
terkontrol, studi double blind (Putra, 2013).

37
 BAB III
METODE PERCOBAAN

3.1 Rancangan Praktikum

3.1.1 Skema Rancangan Percobaan

Menyiapkan
Menyiapkan Bunsen, Kawat Memindahkan
media osse, dan HCl Aspergillus niger

Mengamati kenampakan
setelah masa inkubasi Inkubasi 3 hari

3.1.2 Variabel Operasi

a. Dengan penutupan HCl dan pembakaran
b. Tanpa penutup HCl dan pembakaran
3.2 Bahan dan Alat yang Digunakan
3.2.1 Bahan:
1) Aspergillus niger
2) PDA (Potato Destroksi Agar)
3.2.2 Alat:
1) Tabung reaksi
2) Inokulum
3) Beaker glass
4) Pipet tetes
5) Gelas ukur
6) Kompor listrik
7) Petridish

3.3 Gambar Alat

1. Beaker glass 2. Petridish 3. Tabung Reaksi

38
 4. Gelas Ukur 5. Kompor listrik 6. Pipet tetes

3.4 Cara Kerja

Langkah-langkah percobaan PSA :
1. Masukkan media PDA ke dalam petridish kemudian biarkan sampai
menjadi padat.
2. Menyiapkan kawat osse, Bunsen dan HCl
3. Mensterilkan kawat osse : Panaskan kawat osse menggunakan bunsen
kemudian memasukkan ke larutan HCl kemudian panaskan kawat osse lagi.
4. Memindahkan mikroorganisme dari biakan murni yang tersedia
menggunakan kawat osse yang sudah di sterilisasi ke media baru petridish.
5. Tutup media dalam petridish dengan penutup.
6. Simpan dalam ruang inkubasi selama waktu inkubasi yang telah ditentukan
7. Mengamati kenampakan setelah waktu inkubasi.

39
 DAFTAR PUSTAKA

Cahyani, Vita Ratri. 2009.Pengaruh Beberapa Metode Sterilisasi Tana Terhadap

Hara, Populasi Mikrobiota, Potensi Infeksi Mikorisa dan Pertumbuhan
Tanaman’.Ilmu Tanah Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Chafida, dkk. 2013. Aspergillus Niger. Malang: Universitas Brawijaya
Chairlan. 2012. Pedoman Teknik Dasar untuk Laboratorium Kesehatan. Jakarta:
Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Hidayat, Maulida. 2017. Pengaruh Penambahan Berbagai Jenis SusuTerhadap
Kadar Asam Laktatpada Pembuatan Susu PrebiotikUbi Jalar (Ipomoea batatas
L) oleh Bakteri Lactobacillus bulgaricus Mengguanakan Autoklav (The Effect
of Additional Types of Milk to Lactic Acid Levels in The Making for Prebiotic
Milk Sweet Potato by Lactobacillus bulgaricus Using The Autoclave). U
ndergraduate thesis, Undip.
Leon, Lachmann,et al. 1998. Teori dan Praktek Farmasi Industri(terjemahan). Jakarta
: UI-Press Mulya, Rendi. 2015. Aspergillus niger.
http://www.academia.edu/11287558/Aspergilus_niger. Diakses pada 29 April
2017.
Putra, Pazza Patriansyah. 2013. Aspergillus Niger. Palembang: Universitas Sriwijaya
Susilowati dan Listyawanti. 2001. Keanekaragaman Jenis Mikroorganisme Sumber
Kontaminasi Kultur In vitro di Sub-Lab. Biologi Laboratorium MIPA Pusat
UNS. Jurusan Biologi Universitas Sebelas Maret, Surakarta.

40