PEMERIKSAAN BAKTERI KOLIFORM MENGGUNAKAN

METODE MOST PROBABLE NUMBER (MPN) PADA AIR

BERSIH DI LABORATORIUM KESEHATAN PROVINSI
SUMATERA UTARA

TUGAS AKHIR

OLEH:

FATIYA ADITA SYAHPUTRI

NIM 132410075

PROGRAM STUDI DIPLOMA III

ANALIS FARMASI DAN MAKANAN
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2016

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara
 KATA PENGANTAR

Assalamu’alaikum Wr. Wb.

Puji dan syukur atas kehadirat Allah SWT yang telah memberikan rahmat

dan karunia-Nya, sehingga kami dapat menyelesaikan tugas akhir yang berjudul

“Pemeriksaan Bakteri Koliform Menggunakan Metode Most Probable Number

(MPN) Pada Air Bersih Di Laboratorium Kesehatan Provinsi Sumatera Utara”.

Tugas akhir ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Ahli

Madya Analis Farmasi dan Makanan pada Fakultas Farmasi Universitas Sumatera

Utara.

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak,

penulis tidak akan dapat menyelesaikan tugas akhir ini sebagaimana mestinya.

Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya

kepada berbagai pihak antara lain:

1. Ibu Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas

Sumatera Utara.

2. Bapak Prof. Dr. Jansen Silalahi, M.App.Sc., Apt., selaku Ketua Program Studi

Diploma III Analis Farmasi dan Makanan.

3. Bapak Prof. Dr. rer.nat. Effendy De Lux Putra, S.U., Apt., selaku Dosen

Pembimbing tugas akhir yang telah banyak memberikan bimbingan dan arahan

dengan penuh perhatian hingga tugas akhir ini selesai.

4. Bapak Drs. Syahniman, M.Si., Apt., selaku Koordinator Pembimbing Praktek

Kerja Lapangan di Laboratorium Kesehatan Provinsi Sumatera Utara.

Universitas Sumatera Utara

5. Ibu Dra. Juanita Tanuwijaya, M.Si., Apt., selaku Dosen Penasihat Akademik di

Fakultas Farmasi.

6. Bapak dan Ibu dosen beserta seluruh staff di Fakultas Farmasi USU yang telah

mendidik penulis selama masa perkuliahan.

7. Bapak dan Ibu beserta seluruh staff di Laboratorium Kesehatan Provinsi

Sumatera Utara.

8. Serta teman-teman D3 Analis Farmasi dan Makanan yang tidak dapat saya

sebutkan satu per satu.

Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada kedua

orang tua penulis yaitu Ayahanda Drs. Edi Sahputra, Ibunda Dra. Efnita Damanik

dan Adinda Dhiya Khairunnisa serta seluruh keluarga besar yang telah

mencurahkan perhatian serta memberikan dukungan baik moril maupun materil

dan segenap doa kepada penulis sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir

ini.

Dalam menulis Tugas Akhir ini penulis menyadari bahwa tulisan ini

tidaklah sempurna. Kritik dan saran yang bersifat membangun sangat diharapkan

penulis demi kesempurnaan tulisan ini. Akhir kata penulis berharap semoga Tugas

Akhir ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

Wassalamu’alaikum Wr. Wb

Medan, Agustus 2016

Penulis

Fatiya Adita Syahputri

NIM 132410075

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara
 PEMERIKSAAN BAKTERI KOLIFORM MENGGUNAKAN METODE
MOST PROBABLE NUMBER (MPN) PADA AIR BERSIH DI
LABORATORIUM KESEHATAN PROVINSI SUMATERA UTARA

ABSTRAK

Air bersih adalah air yang digunakan untuk keperluan sehari-hari yang
kualitasnya memenuhi syarat kesehatan. Ciri-ciri air bersih adalah kandungan
mineralnya tidak terlalu banyak, warnanya jernih, tidak berbau dan tidak berasa.
Tujuan penulisan Tugas Akhir ini adalah untuk mengetahui jumlah bakteri
koliform yang terdapat pada air bersih apakah telah memenuhi persyaratan yang
telah ditetapkan oleh Peraturan Menteri Kesehatan RI No. 416/PER/IX/1990.
Pemeriksaan bakteri koliform dilakukan dengan beberapa tahap pengujian
yaitu uji pendugaan (presumptive test) dan uji penguat (confirmed test) yang dapat
dilihat dengan menggunakan Tabel Most Probable Number (MPN). Pada hasil
pengujian, terdapat bakteri koliform di dalam sampel yang melebihi standar yaitu
210. Hasil ini tidak memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan oleh Peraturan
Menteri Kesehatan RI No. 416/PER/IX/1990 bahwa kadar maksimum yang
diperbolehkan untuk parameter koliform pada air bersih adalah 50 per 100 mL.
Kata kunci:Air bersih, bakteri koliform, Most Probable Number.

Universitas Sumatera Utara

 DAFTAR ISI

Halaman

LEMBAR JUDUL .................................................................................... i

LEMBAR PENGESAHAN ...................................................................... ii

KATA PENGANTAR .............................................................................. iii

SURAT PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT .......................................... v

ABSTRAK ................................................................................................ vi

DAFTAR ISI ............................................................................................. vii

DAFTAR TABEL ..................................................................................... ix

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. x

DAFTAR GAMBAR ................................................................................ xi

BAB I PENDAHULUAN ......................................................................... 1

1.1 Latar belakang ......................................................................... 1

1.2 Tujuan ..................................................................................... 2

1.3 Manfaat ................................................................................... 3

BAB IITINJAUAN PUSTAKA................................................................ 4

2.1 Air ........................................................................................... 4

2.1.1 Sumber Air ..................................................................... 4

2.1.2 Standar Mutu Air ........................................................... 6

2.1.3 Parameter Kualitas Air ................................................... 7

2.2 Air Bersih ................................................................................ 9

2.3 Bakteri Koliform ..................................................................... 9

2.4 Metode Most Probable Number (MPN) ................................. 10

Universitas Sumatera Utara

 2.5 Media Pengujian ..................................................................... 12

2.5.1 Komposisi Media .......................................................... 13

2.5.1.1 Media Lactose Broth ........................................ 13

2.5.1.2 Media Brilliant Green Lactose Broth ............... 13

BAB III METODE PENELITIAN ........................................................... 14

3.1 Tempat .................................................................................. 14

3.2 Sampel................................................................................... 14

3.3 Alat ...................................................................................... 14

3.4 Bahan .................................................................................... 14

3.5 Prosedur ................................................................................ 15

3.5.1 Pembuatan Media ........................................................ 15

3.5.1.1 Media Lactose Broth ...................................... 15

a. Pembuatan Media Lactose Broth Single ..... 15

b. pembuatan MediaLactose Broth Double .... 15

3.5.1.2 Media Brilliant Green Lactose Broth ............. 15

3.5.2 Uji Perkiraan (Presumptive Test) ................................ 15

3.5.3 Uji Penegasan (Confirmed Test) ................................. 16

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................. 18

4.1 Hasil ...................................................................................... 18

4.2 Pembahasan........................................................................... 18

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN.................................................... 20

5.1 Kesimpulan ........................................................................... 20

5.2 Saran ..................................................................................... 20

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................... 21

Universitas Sumatera Utara

 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

4.1 Tabel Hasil Pengujian ................................................................. 18

Universitas Sumatera Utara

 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1 Tabel Most Probable Numbet (MPN) ...................................... 22

2 Permenkes RI No. 416/PER/IX/1990 ....................................... 23

3 Gambar Media dan Alat ........................................................... 24

Universitas Sumatera Utara

 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1 Lactose Broth .............................................................................. 24

2 Media Lactose Broth ................................................................... 24

3 Brilliant Green Lactose Broth .................................................... 24

4 Media Brilliant Green Lactose Broth ........................................ 24

5 Autoklaf ..................................................................................... 25

6 Laminar Air Flow ....................................................................... 25

7 Inkubator dengan suhu 37°C...................................................... 25

8 Inkubator dengan suhu 44°C....................................................... 25

Universitas Sumatera Utara

 BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Air merupakan kebutuhan dasar dan bagian dari kehidupan, tubuh manusia

sebagian besar terdiri dari air. Sebagai kebutuhan dasar, air dimanfaatkan untuk

keperluan rumah tangga, misalnya mandi, mencuci, air minum dan keperluan

masak lainnya. Anggapan dari sebagian orang bahwa air bening adalah air bersih

dan air bersih itu adalah air sehat serta layak dikonsumsi merupakan anggapan

yang salah dan perlu diluruskan. Air yang kelihatan bening belum tentu bersih dan

air yang kelihatan bersih pun belum tentu memenuhi syarat air sehat hingga

langsung dapat dikonsumsi (Suparman, 2006).

Air bersih adalah air yang digunakan untuk keperluan sehari-hari yang

kualitasnya memenuhi syarat kesehatan. Ciri-ciri air bersih adalah kandungan

tidak terlalu banyak mineral yang memungkinkan mengganggu kesehatan,

warnanya jernih dan tidak berbau, tidak berasa (Suparman, 2006).

Menurunnya kualitas air, baik air permukaan maupun air tanah, dapat

disebabkan oleh dua masalah, yaitu adanya pencemaran dan rusaknya lingkungan

sumber air. Kedua masalah tersebut akan menurunkan kemampuan alam dalam

menyediakan air bersih yang layak untuk berbagai keperluan, terutama untuk

kebutuhan hidup sehari-hari (Suparman, 2006).

Pemeriksaan air secara mikrobiologis sangat penting dan dapat dilakukan

terhadap semua jenis air yang ada, terutama untuk menentukan standar kualitas

Universitas Sumatera Utara

air. Air merupakan sumber kehidupan yang utama bagi semua makhluk hidup.

Pencemar biologis mungkin terjadi dalam air, minuman atau makanan, yang

membahayakan jika mikroorganisme yang mengkontaminasi menyebabkan

penyakit (patogen), penghasil racun atau yang dikenal sebagai pencemar

(Hasruddin dan Husna, 2014).

Metode MPN (Most Probable Number), merupakan metode perhitungan

sel terutama untuk perhitungan bakteri koliform berdasarkan jumlah perkiraan

terdekat dan dihitung sebagainilai duga dengan merujuk pada tabel (Harti, 2015).

Bakteri golongan koliform dinyatakan sebagai bakteri indikator pencemar

air. Kehadirannya dalam air terutama air sumber mandi dan cuci sangat tidak

diharapkan. Pemeriksaan bakteri golongan koliform dilakukan terhadap kehadiran

bakteri golongan koliform non fekal dan koliform fekal (Hasruddin dan Husna,

2014).

Untuk mengetahui jumlah koliform biasanya digunakan metode MPN

(Most Probable Number) dengan cara fermentasi ganda. Berdasarkan hal diatas

maka dipilhlah judul tentang “Pemeriksaan Bakteri Koliform Menggunakan

Metode Most Probable Number (MPN) Pada Air Bersih di Laboratorium

Kesehatan Provinsi Sumatera Utara.

1.2 Tujuan

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui jumlah koliform pada

air bersih di Laboratorium Kesehatan Provinsi Sumatera Utara apakah telah

memenuhi persyaratan berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan RI No. 416/ME

NKES/PER/IX/1990.

Universitas Sumatera Utara

1.3 Manfaat

Manfaat dari penelitian ini adalah agar dapat mengetahui jumlah koliform

pada air bersih di Laboratorium Kesehatan Provinsi Sumatera Utara apakah telah

memenuhi persyaratan berdasarkan Peraturan Menteri Kesehatan RI No. 416/ME

NKES/PER/IX/1990.

Universitas Sumatera Utara

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Air

Air merupakan salah satu kebutuhan hidup dan merupakan dasar bagi

perikehidupan dibumi. Tanpa air, berbagai proses kehidupan tidak dapat

berlangsung. Oleh karena itu, penyediaan air merupakan salah satu kebutuhan

utama bagi manusia untuk kelangsungan hidup dan menjadi faktor penentu dalam

kesehatan dan kesejahteraan manusia. Sumber daya air dapat dimanfaatkan untuk

berbagai keperluan antara lain; untuk kepentingan rumah tangga (domestik),

industri, pertanian, perikanan dan sarana pengangkutan air (Sumantri, 2010).

2.1.1 Sumber Air

Air yang diperuntukkan bagi konsumsi manusia harus berasal dari sumber

yang bersih dan aman. Menurut Sumantri (2010),batasan-batasan sumber air yang

bersih dan aman ini, antara lain:

a. Bebas dari kontaminasi kuman atau bibit penyakit

b. Bebas dari substansi kimia yang berbahaya dan beracun

c. Tidak berasa dan berbau

d. Dapat digunakan untuk mencukupi kebutuhan domestik dan rumah tangga

e. Memenuhi standar minimal yang ditentukan oleh WHO atau Departemen

Kesehatan RI.

Air dinyatakan tercemar bila mengandung bibit penyakit, parasit, bahan-

bahan kimia yang berbahaya dan sampah atau limbah industri. Air yang berada di

Universitas Sumatera Utara

permukaan bumi ini dapat berasal dari berbagai sumber. Menurut Sumantri

(2010), berdasarkan letak sumbernya air dapat dibagi menjadi :

a. Air Hujan

Air hujan merupakan sumber utama air di bumi. Walau pada saat presipitasi

merupakan air yang paling bersih, air tersebut cenderung mengalami

pencemaran ketika berada di atmosfer. Pencemaran berlangsung di atmosfer itu

dapat disebabkan partikel debu, mikroorganisme dan gas misalnya karbon

dioksida, nitrogen dan amonia. Air hujan merupakan penyubliman/uap air

menjadi air murni yang ketika turun dan melalui udara akan melarutkan benda-

benda yang terdapat di udara. Jadi setelah mencapai permukaan bumi air hujan

bukan merupakan air murni lagi.

b. Air Permukaan

Air permukaan meliputi badan-badan air semacam sungai, danau, telaga,

waduk, rawa, dan sumur permukaan, sebagian besar berasal dari air hujan yang

jatuh ke permukaan bumi. Air hujan ini kemudian akan mengalami

pencemaran baik oleh tanah, sampah, maupun lainnya. Air permukaan

merupakan salah satu sumber penting bahan baku air bersih. Faktor-faktor

yang diperhatikan, antara lain:

1. Mutu atau kualitas baku

2. Jumlah atau kuantitasnya

3. Kontinuitasnya.

c. Air Tanah

Air tanah dibedakan atas dua macam, air lapisan (layer water) dan air celah

(fissure water). Air lapisan adalah air yang terdapat di dalam ruang antara

Universitas Sumatera Utara

 butir-butir tanah. Adapun air celah adalah air yang terdapat di dalam retak-

retak batuan di dalam tanah. Air tanah (ground water) berasal dari air hujan

yang jatuh ke permukaan bumi yang kemudian mengalami perkolasi atau

penyerapan ke dalam tanah dan mengalami proses filtrasi secara alamiah. Air

tanah dapat dimanfaatkan untuk kepentingan manusia dengan cara membuat

sumur atau pompa air. Sumur ini dibagi menjadi dua macam yaitu:

1. Sumur Dangkal

2. Sumur Dalam

2.1.2 Standar Mutu Air

Standar mutu air ditetapkan untuk melindungi masyarakat dari pengaruh

negatif pada kesehatan, baik dalam jangka pendek maupun panjang. Standar mutu

air ditetapkan untuk masing-masing kontaminan secara individual. Standar ini

didasarkan pada banyak faktor, termasuk kejadian di lingkungan, paparan manusia

dan risiko kesehatan pada populasi secara umum dan subpopulasi sensitif, batas

deteksi metode analisis, kelayakan secara teknis, serta dampak regulasi pada

sistem penyediaan air, ekonomi, dan kesehatan (Suprihatin dan Suparno, 2013).

Kualitas air untuk keperluan minum berbeda dengan keperluan industri.

Menurut Gintings (1992), kegunaan air dirinci menjadi golongan sebagai berikut:

Golongan I : air minum yang dapat digunakan langsung tanpa pengolahan.

Golongan II : air untuk minum rumah tangga dan keperluan lainnya tapi tidak

untuk golongan I.

Golongan III : air untuk keperluan perikanan, peternakan dan keperluan lainnya

tetapi tidak sesuai golongan I dan II.

Universitas Sumatera Utara

Golongan IV : air untuk keperluan pertanian, usaha industri listrik tenaga air,

lalu lintas air dan keperluan lainnya tapi tidak sesuai golongan I,

II dan III.

Golongan V : air yang tidak sesuai untuk golongan I, II, III dan IV.

2.1.3Parameter Kualitas Air

Menurut Rejeki (2015), parameter-parameter kualitas air yang harus

terpenuhi meliputi:

1. Parameter fisika meliputi: bau, rasa, warna, zat padat terlarut dan suhu.

2. Parameter kimia meliputi: kimia anorganik seperti air raksa, arsen, fluorida,

kadmium, kesadahan (CaCO3), klorida, kromium valensi-6, mangan, nitrat,

nitrit, pH, selenium, seng, sianida, sulfat dan timbal.

3. Parameter mikrobiologi meliputi: total koliform (MPN).

4. Parameter radioaktifitas meliputi: aktifitas alpha, aktifitas beta.

Faktor-faktor yang mempengaruhi kualitas air, yaitu:

1. Kedalaman Permukaan Air Tanah

Kedalaman permukaaan air tanah merupakan permukaan tertinggidari air

yang naik ke atas suatu sumuran atau tempat yang rendah. Ketinggian air

tanah antara lain dipengaruhi oleh jenis tanah, curah hujan, penguapan dan

kedalam aliran permukaan terbuka (sungai). Kedalaman permukaan air tanah

akan berpengaruh pada penyebaran bakteri koliform (Rejeki, 2015).

2. Curah Hujan

Air hujan yang mengalir di permukaan tanah dapat menyebabkan bakteri

koliform yang ada di permukaan tanah terlarut dalam air tersebut.

Meresapnya air hujan ke dalam lapisan tanah mempengaruhi bergeraknya

Universitas Sumatera Utara

 bakteri koliform di dalam lapisan tanah. Semakin banyak air hujan yang

meresap ke dalam lapisan tanah semakin besar kemungkinan terjadinya

pencemaran (Rejeki, 2015).

3. Jenis Tanah

Jenis tanah berbeda mempunyai daya kandung air dan daya melewatkan air

yang berbeda pula. Daya kandung atau kemampuan tanah untuk menyimpan

air disebut porositas, yaitu rasio antara pori-pori tanah dengan volume total

tanah dan biasanya dinyatakan dalam persen, sedangkan kemampuan tanah

untuk melewatkan air disebut permeabilitas, yaitu jumlah air yang dapat

dilewatkan oleh tanah dalam satuan luas penampang. Porositas dan

permeabilitas akan berpengaruh pada penyebaran bakteri koliform, mengingat

air merupakan transportasi bakteri dalam tanah. Makin besar permeabilitas

tanah makin besar kemampuan melewatkan air yang berarti jumlah bakteri

yang dapat bergerak mengikuti aliran makin besar (Rejeki, 2015).

Menurut Rejeki (2015), kualitas air yang memenuhi syarat kesehatan pada

umumnya berkaitan dengan hal-hal sebagai berikut:

a) Secara alamiah memang air tersebut tidak memenuhi syarat, misalnya, keruh,

berwarna, berbau dan mengandung besi atau mangan dalam kadar yang

berlebihan/tinggi.

b) Lingkungan sekitar sarana air bersih yang dapat mencemari air, misalnya

terdapat jamban, pembuangan sampah, kandang ternak dan genangan air

kotor pada jarak kurang 11 meter.

Universitas Sumatera Utara

c) Konstruksi sarana air bersih yang tidak memenuhi persyaratan teknis seperti

sumur gali tanpa dilengkapi bibir, dinding, lantai dan saluran pembuangan air

bekas yang kedap air.

2.2 Air Bersih

Air bersih adalah air yang digunakan untuk keperluan sehari-hari yang

kualitasnya memenuhi syarat kesehatan.Menurut Suparman (2006), ciri-ciri air

bersih adalah sebagai berikut:

1. Kandungan tidak terlalu banyak mineral yang memungkinkan mengganggu

kesehatan,

2. Warnanya jernih dan tidak berbau,

3. Tidak berasa.

Mutu air bersih harus memenuhi syarat kesehatan yang meliputi

persyaratan mikrobiologi, fisika, kimia dan radioaktif. Persyaratan mutu air bersih

ditetapkan dalam Permenkes No. 416/PER/IX/1990 (Suprihatin dan Suparno,

2013).

2.3 Bakteri Koliform

Koliform adalah kelompok bakteri indikator untuk menentukan

kualitas/mutu dari lingkungan air, tanah atau makanan. Kelompok bakteri ini

berasal dari sistem pencernaan binatang, termasuk manusia dan juga pada tinja

(Novel, dkk., 2010).

Bakteri koliform dapat dibedakan atas dua yaitu:

Universitas Sumatera Utara

1. Koliform fekal, misalnya Escherichia coli. Escherichia coli merupakan

bakteri yang berasal dari kotoran hewan maupun manusia.Escherichia coli

adalah grup koliform yang mempunyai sifat dapat memfermentasi laktose dan

memproduksi asam dan gas pada suhu 37ºC maupun suhu 44,5ºC dalam

waktu 48 jam. Escherichia coliadalah bakteri yang termasuk dalam famili

Enterobacteriaceae, bersifat gram negatif, berbentuk batang dan tidak

membentuk spora (Fardiaz, 1992).

2. Koliform non fekal, misalnya Enterobacter aerogenes. Enterobacter

aerogenes biasanya ditemukan pada hewan atau tanaman-tanamanyang sudah

mati. Enterobacter aerogenes tidak dapat membentuk laktose pada suhu

44,5ºC (Fardiaz, 1993).

2.4 Metode Most Probable Number (MPN)

Metode Most Probable Number (MPN) adalah suatu metode untuk

menaksir populasi mikrobial di lahan, perairan dan produk agrikultur. Metode ini

digunakan untuk menaksir populasi mikroba berdasarkan pada ukuran kualitatif

spesifik dari jasad renik yang sedang terhitung. Menetapkan adanya bakteri

koliform dalam contoh air dan memperoleh indeks berdasarkan tabel MPNuntuk

menyatakan perkiraan jumlah koliform dalam sampel (Novel, dkk., 2010).

Metode Most Probable Number (MPN) menggunakan pendekatan

“pengenceran berganda hingga punah” telah dibuktikan sangat baik untuk

memperkirakan populasi mikroba, terutama jika mikroba ada dalam jumlah yang

sangat sedikit dalam makanan atau sampel air. Metode MPN didasarkan pada

pembagian sampel menjadi tiga macam pengenceran. Akurasi dari satu kali

Universitas Sumatera Utara

pengujian tergantung dari jumlah tabung yang digunakan untuk tiap pengenceran.

Lazimnya, digunakan sistem 5 tabung atau 3 tabung untuk setiap pengenceran.

Informasi yang sangat memuaskan akan diperoleh apabila semua tabung dengan

pengenceran rendah menunjukkan pertumbuhan dan tabung-tabung dengan

pengenceran tinggi menunjukkan tidak adanya pertumbuhan (Nugroho, 2006).

Metode MPN biasanya dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba di

dalam contoh yang berbentuk cair, meskipun dapat pula digunakan untuk contoh

padat dengan terlebih dahulu membuat suspensi 1:10 dari contoh tersebut. Grup

mikroba yang dapat dihitung dengan metode MPNjuga bervariasi tergantung dari

medium yang digunakan untuk pertumbuhan. Metode MPN dapat digunakan

untuk menghitung jumlah mikroba jenis tertentu yang terdapat di antara mikroba-

mikroba lainnya. Sebagai contoh penggunaan Lactose Broth dan tabung Durham

dapat digunakan untuk menghitung jumlah bakteri yang dapat memfermentasi

laktosamembentuk gas, misalnya bakteri koliform (Fardiaz, 1993).

Prinsip dari metode ini adalah fermentasi laktosa selama 24 jam oleh

bakteri koliform yang akan menghasilkan asam dan gas yang tertangkap oleh

tabung Durham dalam tabung uji (Hasruddin dan Husna, 2014).

Uji koliform dilakukan dengan tahapan-tahapan sebagai berikut, yaitu:

1. Uji Pendugaan (Presumptive Test)

Medium yang digunakan adalah kaldu laktosa. Baketri koliform

menggunakan laktosa sebagai sumber karbonnya. Tes ini dikatakan positif

jika setelah diinkubasi pada suhu 37ºC selama 48 jam laktosa yang telah

difermentasi akan berubah warna dan terbentuk gas yang diletakkan terbalik

(Nugroho, 2006).

Universitas Sumatera Utara

2. Uji Penguat (Confirmed Test)

Merupakan tes lanjutan dari tes pendugaan. Dari tabung yang positif pada tes

pendugaan, dilakukan tes menggunakan medium BGLB (Brilliant Green

Lactose Broth) yangdapat menghambat pertumbuhan bakteri Gram postif dan

sebaliknya, yaitu menstimulasi pertumbuhan bakteri Gram negatif seperti

koliform (Nugroho,2006).

3. Uji Penentu atauPelengkap (Completed Test)

Untuk menentukan hasil benar-benar positif, maka mikroba dari hasil tes

konfirmasi/penguat yang positif diinokulasikan pada kaldu laktosa kembali.

Selain itu ditumbuhkan pada agar miring. Jika timbul gas pada kaldu laktosa,

maka tes penentu dinyatakan positif. Jumlah koliform dapat dihitung dengan

menggunkan tabel MPN (Most Probable Number) (Nugroho, 2006).

Pengambilan sampel, pengiriman dan pemeriksaan sampel air harus

dilakukan dengan cara aseptis dan dapat mewakili air yang diperiksa. Penggunaan

alat-alat, media dan reagensia serta pelaksanaan pengujian harus sesuai dengan

jenis bakteri yang akan ditentukan (Nugroho, 2006).

2.5 Media Pengujian

Berdasarkan konsistensinya, media dikelompokkan menjadi dua macam

yaitu media cair (liquid media) dan media padat (solid media). Apabila media cair

merupakan ekstrak kompleks material biologis, maka media tersebut dinamakan

rich media atau broth. Menurut Pratiwi (2008), kandungan nutrisi media dapat

dibedakan menjadi beberapa macam, yaitu:

1. Defined media (synthetic media)

Universitas Sumatera Utara

2. Media kompleks (complex media)

3. Media umum (general media)

4. Media penyubur (enrichment media)

5. Media selektif (selective media)

6. Media diferensial (differential media)

7. Media khusus

2.5.1 Komposisi Media

2.5.1.1 Media Lactose Broth

Komposisi media Lactose Broth menurut Irianto (2013) adalah sebagai

berikut:

Ekstrak sapi 3g

Pepton 5g

Laktosa 5g

Air destilasi 1000 mL

pH 6,7

2.5.1.2 Media Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB)

Komposisi media Brilliant Green Lactose Bile Broth menurut Irianto (2013)

adalah sebagai berikut:

Peptom 10 g

Laktosa 10 g

Oxgall 20 g

Hijau brilian 0,0133 g

Air destilasi 1000 mL

Universitas Sumatera Utara

 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Tempat

Pemeriksaan bakteri koliform pada air bersih dilakukan di Laboratorium

Kesehatan Provinsi Sumatera Utara yang bertempat di Jalan Williem Iskandar

Pasar V Barat No. 4 Medan.

3.2 Sampel

Jenis sampel : air bersih

Kode sampel : 1498

Bau : tidak berbau

Rasa : tidak berasa

Warna : tidak berwarna

3.3 Alat

Alat yang digunakan adalah autoklaf, beaker glass, bola karet, bunsen,

erlenmeyer, hot plate, inkubator, jarum ose, Laminar Air Flow, kapas, magnetic

stirrer, neraca analitik, pipet volume, rak tabung, tabung Durham, dan tabung

reaksi.

3.4 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan adalah media Lactose Broth dan Brilliant

Green Lactose Broth.

Universitas Sumatera Utara

3.5 Prosedur

3.5.1 Pembuatan Media

3.5.1.1 Media Lactose Broth

a. Pembuatan Media Lactose Broth Single

Ditimbang media Lactose Broth sebanyak 13 gram lalu dimasukkan ke

dalam beaker glass. Dilarutkan dalam 1 liter akuades. Dimasukkan magnetic

stirrer. Dipanaskan di atas hot plate sampai larut. Dimasukkan 10 mL ke dalam

tabung reaksi yang telah berisi tabung Durham. Disterilkan di dalam autoklaf

pada suhu 121ºC selama 15 menit.

b. Pembuatan MediaLactose Broth Double

Ditimbang media Lactose Broth sebanyak 26 gram lalu dimasukkan ke

dalam beaker glass. Dilarutkan dalam 1 liter akuades. Dimasukkan magnetic

stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut. Dimasukkan 10 mL kedalam

tabung reaksi yang telah berisi tabung Durham. Disterilkan di dalam autoklaf

pada suhu 121ºC selama 15 menit.

3.5.1.2 Media Brilliant Green Lactose Broth (BGLB)

Ditimbang mediaBrilliant Green Lactose Broth sebanyak 40 gram lalu

dimasukkan ke dalam beaker glass. Dilarutkan dalam 1 liter akuades.

Dimasukkan magnetic stirrer. Dipanaskan diatas hot plate sampai larut.

Dimasukkan 10 mL kedalam tabung reaksi yang telah berisi tabung Durham.

Disterilkan di dalam autoklaf pada suhu 121ºC selama 15 menit.

Universitas Sumatera Utara

3.5.2 Uji Perkiraan (Presumptive Test)

1. Disiapkan 9 tabung reaksi, dibuat sebanyak 3 seri yang berisi media Lactose

Brothsiap pakai, yang terdiri dari tiga tabung berisi media Lactose Broth

Double dan enam tabung berisi media Lactose Broth Single yang telah

disterilkan dan berisi tabung Durham. Lalu tabung disusun di rak tabung dan

diberi tanda.

2. Dipipet sampel dengan menggunakan pipet volume, tiga tabung reaksi yang

telah berisi media Lactose Broth Double dimasukkan sampel sebanyak 10

mL, tiga tabung reaksi yang telah berisi media Lactose Broth Single

dimasukkan sampel sebanyak 1 mL dan tiga tabung reaksi yang telah berisi

Lactose Broth Single dimasukkan sampel sebanyak 0,1 mL.

3. Masing-masing tabung dikocok hingga homogen.

4. Dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 37ºC selama 48 jam.

5. Diamati pembentukan gas yang terjadi di dalam tabung Durham.

6. Dicatat tabung yang dinyatakan positif apabila tabung tersebut terlihat keruh

dan terdapat gelembung gas pada tabung Durham, setelah itu dilanjutkan

dengan uji penegasan.

3.5.3 Uji Penegasan (Confirmed Test)

1. Tabung yang dinyatakan postif pada uji perkiraan, di inokulasikan ke dalam

tabung reaksi yang telah berisi mediaBrilliant Green Lactose Broth sebanyak

10 mL, masing-masing tabung diisi satu sampai dua ose yang pengerjaan

dilakukan secara aseptis.

2. Masing-masing tabung dikocok hingga homogen.

3. Diinkubasi pada suhu 37ºC dan 44ºC selama 48 jam.

Universitas Sumatera Utara

4. Lalu, dilakukan pengamatan dengan melihat tabung yang apabila postif akan

terdapat gelembung gas pada tabung Durham dan warna pada tabung terlihat

keruh.

5. Pembacaan hasil dilakukan dengan menghitung jumlah tabung yang positif

dan angka yang diperoleh dicocokkan dengan Tabel MPN.

Universitas Sumatera Utara

 BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil

Dari hasil pengujian yang dilakukan terhadap sampel air bersih diperoleh

hasil sebagai berikut.

Tabel 4.1 Hasil pemeriksaan bakteri koliform dengan metode MPN

Uji Perkiraan Uji Penegasan
Nilai
Kode LB LB LB M
Jenis BGLB 37ºC BGLB 44 ºC
Samp 37ºC 37ºC 37ºC P
Sampel N
el
10 0,1 10 1 0,1 10 1 0,1
1 ml
ml ml ml ml ml ml ml ml
37ºC 44 ºC
Air
1498 3/3 3/3 3/3 3/3 2/3 2/3 3/3 2/3 2/3 210 210
Bersih

Universitas Sumatera Utara

4.2 Pembahasan

Air bersih adalah air yang digunakan untuk keperluan sehari-hari yang

kualitasnya memenuhi syarat kesehatan. Ciri-ciri air bersih adalah kandungan

tidak terlalu banyak mineral yang memungkinkan mengganggu kesehatan,

warnanya jernih dan tidak berbau, tidak berasa (Suparman, 2006).

Bakteri Koliform merupakan suatu grup bakteri yang digunakan sebagai

indikator pencemar terhadap air. Adanya baketri koliform di dalam air

menunjukkan kemungkinan adanya mikroorganisme yang bersifat

enteropatogenik (bakteri penyebab diare) atau toksigenik yang berbahaya bagi

kesehatan (Fardiaz, 1993).

Untuk mengetahui jumlah koliform digunakan metode MPN (Most

Probable Number) dimana bakteri koliform akan memfermentasi laktosa selama

24 jam yang akan menghasilkan asam dan gas yang tertangkap oleh tabung

Durham dalam tabung uji (Hasruddin dan Husna, 2014).

Berdasarkan pengujian yang dilakukan pada air bersih diperoleh hasil 210

per 100 mL dimana angka MPN untuk bakteri koliform ditetapkan dalam

Peraturan Menteri Kesehatan RI No. 416/PER/IX/1990 sebagai persyaratan mutu

air bersih yaitu 50 per 100 mL. Dengan demikian, air bersih yang diuji tidak

memenuhi persyaratan sesuai dengan yang ditetapkan dalam Peraturan Menteri

Kesehatan RI No. 416/PER/IX/1990 mengenai persyaratan mutu air bersih.

Universitas Sumatera Utara

 BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Dari hasil pemeriksaan bakteri pada air bersih diperoleh jumlah bakteri

koliform adalah 210 per 100 mL. Hasil tersebut menunjukkan bahwa sampel

tersebut tidak memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan oleh Peraturan Menteri

Kesehatan RI No. 416/MENKES/PER/IX/1990 karena hasil yang didapat

melebihi batas maksimum yang diperbolehkan yaitu 50 per 100 mL.

5.2 Saran

Sebaiknya pada pengujian selanjutnya digunakan metode lain seperti

metode TPC (Total Plate Count) agar dapat membuat perbandingan dan

didapatkan hasil yang akurat.

Universitas Sumatera Utara

 DAFTAR PUSTAKA

Departemen Kesehatan RI. (1990). Peraturan Menteri Kesehatan No. 416

Tentang Persyaratan Kualitas Air Bersih.
Fardiaz, S. (1992). Polusi Air dan Udara. Yogyakarta: Kanisius. Halaman 44.

Fardiaz, S. (1993). Analisis Mikrobiologi Pangan. Jakarta: PT Raja Grafindo

Persada. Halaman 68, 73.

Gintings, P. (1992). Mencegah dan Mengendalikan Pencemaran Industri. Jakarta:

Pustaka Sinar Harapan. Halaman 38.

Harti, A. S. (2015). Mikrobiologi Kesehatan. Yogyakarta: Andi. Halaman 112.

Hasruddin dan Husna, R. (2014). Mini Riset Mikrobiologi Terapan. Yogyakarta:

Graha Ilmu. Halaman 56, 58-59.

Irianto, K. (2013). Mikrobiologi Medis. Bandung: Alfabeta. Halaman 421.

Novel, S. S., Wulandari, A. P., dan Safitri, R. (2010). Praktikum Mikrobiologi

Dasar. Jakarta: Trans Info Media. Halaman 120.

Nugroho, A. (2006). Bioindikator Kualitas Air. Jakarta: Universitas Trisakti.

Halaman 23.

Pratiwi, S. T. (2008). Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Erlangga. Halaman 116-117.

Rejeki, S. (2015). Sanitas,i Hygiene dan Keselamatan Kerja (K3). Bandung:

Rekayasa Sains. Halaman 10-12.

Sumantri, H. A. (2010). Kesehatan Lingkungan. Jakarta: Kencana. Halaman 19,

26-31.

Suparman, A. (2006). Sistem Penjernihan Air Tradisional. Jakarta: Azka Press.

Halaman 2, 4, 11-12.

Suprihatin dan Suparno, O. (2013). Teknologi Proses Pengolahan Air. Bogor: IPB
Press. Halaman 40, 44.

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 1. Tabel Most Probable Number (MPN) Koliform

Tabel 1.TabelMost Probable Number (MPN) Koliform

TABUNG YANG POSITIF INDEKS 95% BATAS
MPN KEPERCAYAAN
10 ml 1 ml 0,1 ml PER 100 Terendah Tertinggi
ml
0 0 1 3 <0,5 9
0 1 0 3 <0,5 13
1 0 0 4 <0,5 20
1 0 1 7 1 21
1 1 0 7 1 23
1 1 1 11 3 36
1 2 0 11 3 36
2 0 0 9 1 36
2 0 1 14 3 37
2 1 0 15 3 44
2 1 1 20 7 89
2 2 0 21 4 47
2 2 1 28 10 150
3 0 0 23 4 120
3 0 1 39 7 130
3 0 2 64 15 380
3 1 0 43 7 210
3 1 1 75 14 230
3 1 2 120 30 380
3 2 0 93 15 380
3 2 1 150 30 440
3 2 2 210 35 470
3 3 0 240 36 1300
3 3 1 460 71 2400
3 3 2 1100 150 4800

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 2. Persyaratan Mutu Air Bersih

Tabel 2. Persyaratan Mutu Air Bersih Sesuai Peraturan Menteri Kesehatan

Republik Indonesia No. 416/PER/IX/1990
NO PARAMETER SATUAN STANDAR
MIKROBIOLOGIK

1 MPN (golongan koliform) per 100 ml 50

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 3. Gambar Media dan Alat

Gambar 1. Lactose Broth Gambar 2.Media Lactose Broth

Gambar 3. Brilliant Green Lactose Broth Gambar 4. Media Brilliant Green

Lactose Broth

Universitas Sumatera Utara

Gambar 5.Autoklaf Gambar 6.Laminar Air Flow

Gambar 7. Inkubator dengan suhu 37oC Gambar 7. Inkubator dengan suhu

44oC

Universitas Sumatera Utara