HALAMAN PENGESAHAN

Judul Penelitian: : Preservasi residual ridge tulang alveolaris melalui

Induksi mangosteen pericarp
Topik Riset Mandat : Kesehatan, Penyakit tropis, Gizi dan obat
Bidang Fokus : Pengembangan vaksin, obat dan obat tradisional
(Bahan alam )
Ketua Peneliti
a. Nama Lengkap : Andra Rizqiawan, drg., PhD., SpBM
b. NIDN : 0023098101
c. Jabatan Fungsional : Lektor
d. Program Studi : Bedah Mulut dan Maksilofasial
e. Nomor HP : 081390909100
f. Alamat surel (e-mail) : andra.ara@gmail.com
Anggota Peneliti (1)
a. Nama Lengkap : Dr. Pratiwi Soesilawati, drg.,MKes.,PA(K)
b. NIDN : 00221169003
c. Perguruan Tinggi : Universitas Airlangga
Anggota Peneliti (2)
d. Nama Lengkap : Gde Djodi Satria Rurus
e. NIM : 02141133045
f. Perguruan Tinggi : Universitas Airlangga
Anggota Peneliti (3)
g. Nama Lengkap : dr. Tobiume Kei Ph.D
h. NIDN :-
i. Perguruan Tinggi : Hiroshima University

Lama Penelitian Keseluruhan : 1 Tahun

Biaya Penelitian Keseluruhan : Rp. 100.000.000,-
Biaya Tahun berjalan :
- Diusulkan ke UNAIR : Rp. 100.000.000,-
- Dana institusi lain :-
- Inkind, sebutkan :-

Mengetahui, Surabaya, 29 Juli 2019

Ketua Lembaga Penelitian dan Inovasi Ketua Peneliti

Prof. Hery Purnobasuki, M.Si., Ph. Andra Rizqiawan, drg., PhD., SpBM
NIP 196705071991021001 NIP. 19810923 200501 1 001

Menyetujui Wakil Rektor 3

Prof. Ir Moch. Amin Alamsjah, M.Si., Ph.D

NIP. 197001161995031002

1
 DAFTAR ISI
Halaman
Halaman Pengesahan ........................................................................................................ 1
Daftar Isi............................................................................................................................ 2
Ringkasan .......................................................................................................................... 5
Bab 1 Pendahuluan ......................................................................................................... 7
1.1 Latar Belakang ............................................................................................................ 7
1.2 Rumusan Masalah ....................................................................................................... 9
1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................................ 9
1.4 Manfaat Penelitian .................................................................................................... 10
1.5 Rencana Target Capaian Tahunan ............................................................................ 11
Bab 2 Tinjauan Pustaka ............................................................................................... 13
2.1 Penyembuhan Luka ................................................................................................... 13
2.2 Penyembuhan luka pasca pencabutan gigi ................................................................ 15
2.3 Angiogenesis ............................................................................................................. 15
2.4 Vascular Endothelial Growth Factor-A (VEGF-A).................................................. 17
2.5 Fibroblast Growth Factor-2 (FGF-2)....................................................................... 18
2.6 Fibroblas ................................................................................................................... 19
2.7 Platelet-derived growth factor -B (PDGF-B) .......................................................... 20
2.8 Transforming Growth Faktor-Beta1 (TGF-β1) ....................................................... 21
2.9 Protein penand/ marker proses inflamasi ................................................................. 21
2.9.1 Interleukin-1 (IL-1) ……………………….………………………..…................ 22
2.9.2 Interleukin-6 (IL-6) …………………………………………………………….. 23
2.9.3 Interleukin-10 (IL-10) ……………………………….………………………….. 23
2.9.4 Tumor Necrosis Factor-Alpha (TNF-α) …………… ………………………….. 23
2.9.5 C-Reactive Protein (CRP) ………………………………………………………. 24
2.10 Penanda / Marker Proses Osteogenesis …………………………………………. 24
2.10.1 Bone Sialoprotein (BSP) ………………………………………………………. 26
2.10.2 Alkali Phospahate(ALP) ………………………………………………………. 27
2.10.3 Run-Related Transcription Factor 2 (RUNX2) ………………………………. 28
2.10.4 Colagen 1 Alpha 1 (Coll1α1) …………………………………………………. 29
2.10.5 Osterix (OSX) ………..………………………………………………….......... 29

2
2.11 Kulit Buah manggis ……………………………………………………………… 30
2.12 Methyl-Thiazol-Tetrazolium atau MTT Assay ………………………………….. 31
2.13 Wound Healing Assay …………………………………………………………... 32
2.14 Polymerase Chain Reaction (PCR) …………………………………………….... 32
2.15 Real-Time PCR …………………………………………………………………. 33
2.16 Osteoblastic Cell Line MC3T3-E1 ……………………………………………… 34
2.17 Lipopolisakarida (LPS) ………….……………………………………………… 34
Bab 3 Metode Penelitian ............................................................................................... 36
3.1 Jenis Penelitian .......................................................................................................... 36
3.2 Rancangan Penelitian ................................................................................................ 36
3.3 Sampel dan Besar Sampel ......................................................................................... 36
3.3.1 Jenis Sampel ........................................................................................................... 36
3.3.2 Besar Sampel .......................................................................................................... 36
3.4 Variabel Penelitian .................................................................................................... 37
3.5 Definisi Operasional.................................................................................................. 38
3.5.1 Human Gingival Fibroblas ..................................................................................... 38
3.5.2 Osteoblastic Cell Lini MC3T3-E1 ……………………………………….………38
3.5.3 Lipopolisakarida ..................................................................................................... 38
3.5.4 Ekstak Kulit manggis ............................................................................................. 38
3.6 Tahapan Penelitian …………………………………………………………..…… 42
3.7 Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................................... 44
3.8 Alat dan Bahan Penelitian ......................................................................................... 44
3.8.1 Alat penelitian ........................................................................................................ 44
3.8.2 Bahan Penelitian .................................................................................................... 45
3.9 Cara Kerja ................................................................................................................ 47
3.9.1 Pembuatan Ekstrak kulit buah Manggis ................................................................ 47
3.9.2 Kultur sel ………………………………………………………….…………… 48
3.10 PCR …………………………………………………………..………………….. 49
3.10.1 Ekstraksi RNA .................................................................................................. 49
3.10.2 Pengukuran kadar dan kemurnian RNA .............................................................. 49

3
3.10.3 Perancangan dan optimasi PCR primer PDGF, FGF, VEGF, TGF-β, IL-1,
IL-6, IL-10, TNF α, CRP, Osterix, ALP, RUNX2, COL1α, dan
BSP……………………………………………………………………..............50
3.10.4 Visualisasi hasil PCR dengan menggunakan elektroforesis pada gel .................. 51
3.11 PCR Real Time………………………………………………………………….. 52
3.12 MTT Assay …………………………………………..………………………….. 54
3.13 Wound healing assay pada kultur Human Gingival Fibroblast ..……………….. 55
3.14 Analisis Data ......................................................................................................... 55
3.15 Luaran Per Tahun .................................................................................................... 55
3.16 Indikator Capaian….……………………………………………………….......... 55
Bab 4 Road Map Penelitian ………………………………………………………….56
Bab 5 Anggaran Biaya dan Jadwal Penelitian ........................................................... 57
5.1 Anggaran Biaya ......................................................................................................... 57
5.2 Jadwal Penelitian....................................................................................................... 58
5.3 Proyeksi Publikasi Hasil penelitian ……………………………………………….. 59
5.4 Indikator Keberhasilan (Target Capaian) …………………………………………..59
Daftar Pustaka ................................................................................................................. 60
Lampiran ....................................................................................................................... 65
Lampiran 1: Biodata Ketua dan Anggota........................................................................ 63
Lampiran 2: Susunan Organisasi Tim Pengusul dan Pembagian Tugas ......................... 95
Lampiran 3: Skema keterkaitan antara isu, strategi dan tema tema penelitian ............... 98
Lampiran 4: Justifikasi Anggaran Penelitian .................................................................. 99
Lampiran 5: Surat pernyataan ketua peneliti dan anggota ............................................ 102
Lampiran 6 : Memorandum Of Agreement ………………………………………….. 108

4
 RINGKASAN

Perawatan dental implant merupakan perawatan ideal untuk menggantikan

gigi yang hilang akibat pencabutan gigi. Pencabutan gigi dikatakan ideal apabila
dilakukan tanpa memberikan trauma yang berlebih terutama kepada prosesus
alveolaris. Pada keadaan yang normal pasca pencabutan gigi terjadi resorbsi
tulang alveolaris dalam arah horizontal dan vertical sehingga mempersulit
pemasangan dental implant. Banyak penelitian yang telah dilakukan mengenai
preservasi soket bekas pencabutan yang memanfaatkan bahan alam salah satunya
adalah kulit dari buah manggis (Garcinia mangostana).

Kulit buah manggis mengandung saponin dan tanin yang dapat

mempercepat proses proliferasi fibroblas dan proses angiogenesis. sehingga dapat
mempercepat proses penyembuhan luka. Indikator untuk penyembuhan luka
adalah dengan pemberian ekstrak kulit buah manggis dapat melibatkan banyak
protein, salah satunya adalah peningkatan jumlah fibroblast dan indikator
pembentukan osteoblast dengan melihat ekspresi PDGF-B, FGF-2, ,VEGF-A,
TGF-β1 dari tingkat mRNA atau protein.

Kulit buah manggis mengandung Xanthone yang mempunyai efek

antiinflamasi sehingga dapat membatasi ekspresi IL-1, IL-6, IL-10, TNF α, dan
CRP pada proses penyembuhan luka, sehingga resorbsi yang berlebihan pada
tulang alveolar bisa teratasi pasca pencabutan gigi. Indikator untuk penyembuhan
tulang adalah, salah satunya adalah peningkatan jumlah indikator pembentukan
osteoblast dengan melihat ekspresi Osterix, ALP, RUNX2, COL1α, dan BSP dari
tingkat mRNA atau protein.

Tujuan jangka panjang peneliti adalah menghasilkan suatu produk Gel

yang berisi ekstrak kulit manggis untuk mengisi soket bekas pencabutan gigi
sehingga dapat mempercepat penyembuhan tulang, mengurangi resiko terjadinya
infeksi dan mempertahankan dimensi vertical dan horizontal tulang alveolar.
Apabila semua tujuan bisa tercapai maka bisa mempermudah klinisi memasang
implant tanpa memikirkan untuk penambahan bahan tulang tandur. Seperti yang
kita ketahui bahwa pemilihan bahan tandur tulang yang berasal dari tubuh sendiri
5
dapat mengakibatkan defek pada tubuh sedangkan penambahan tulang dari tulang
organisme lain dapat mengeluarkan biaya yang tidak sedikit.

6
 BAB 1
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Kehilangan gigi tetap pasca pencabutan gigi tanpa penggantian gigi yang
hilang dapat mengakibatkan gangguan fungsi pengunyahan, estetik dan fonetik.
Selain itu dapat terjadi gangguan keseimbangan organ mastikasi dalam mulut,
seperti migrasi gigi tetangga, ekstrusi gigi antagonis, kehilangan kontak, karies,
resesi gingiva dan poket periodontal yang mengakibatkan masalah kesehatan gigi
dan mulut yang lebih kompleks.

Penggantian gigi yang hilang dapat dilakukan dengan aplikasi gigi tiruan
baik sebagian maupun lengkap, gigi tiruan cekat ( crown dan bridge ) dan dental
implant. Seiring dengan kebutuhan dan keinginan penderita serta perkembangan
tehnologi dalam bidang kedokteran gigi, implant gigi merupakan alternatif
terbaik.

Perawatan dental implant merupakan perawatan ideal untuk menggantikan

gigi yang hilang akibat pencabutan gigi. Pencabutan gigi dikatakan ideal apabila
dilakukan tanpa memberikan trauma yang berlebih terutama kepada prosesus
alveolaris. Keberadaan dimensi vertikal maupun horizontal. Prosesus alveolaris
sangat menunjang dalam pemasangan dental implant. Pada keadaan yang normal
pasca pencabutan gigi terjadi resorbsi tulang alveolaris dalam arah horizontal dan
vertical sehingga mempersulit pemasangan dental implant.

Diperlukan metoda untuk menghambat proses resorpsi tulang alveolaris

sehingga dimensi soket gigi dapat dipertahankan sampai pada saat pemasangan
implant, disebut dengan prosedur socket preservation. Prosedur socket
preservation dilakukan dengan menempatkan bahan yang dapat mempercepat
proses penyembuhan soket pasca pencabutan gigi sehingga diharapkan dapat
menghambat proses resorpsi tulang alveolaris.

Saat ini banyak penelitian yang telah dilakukan mengenai preservasi soket
dan penyembuhan luka yang memanfaatkan bahan alam. Diantaranya digunakan
7
obat tradisional sebagai antiinflamasi. Hal ini dikarenakan kepercayaan
masyarakat terhadap kelebihan dari obat tradisional dibandingkan dengan obat
modern yaitu efek samping obat tradisional relatif kecil jika digunakan secara
tepat (Katno, 2007).
Bahan dari alam yang dapat dimanfaatkan untuk penyembuhan tulang
adalah kulit dari buah manggis (Garcinia mangostana) (Chaovanalikit, 2012). Di
dalam kulit buah manggis mengandung saponin dan tanin yang dapat merangsang
proliferasi fibroblas. Derivat dari senyawa fenol yaitu antosianin, flavonoid dan
tanin memiliki sifat antioksidan dan antimikroba (Sakagami, 2012). Derivat dari
xanthone yaitu α-mangostin memiliki aktivitas sebagai antijamur, antioksidan,
antiviral, antibakteri, serta anti inflamasi (Chaverri, 2008).
Proses penyembuhan luka setelah pemberian ekstrak kulit buah
manggis melibatkan banyak faktor, salah satunya adalah peningkatan jumlah
fibroblast dan proses angiogesis. Angiogenesis merupakan pembentukan
pembuluh darah baru yang terjadi secara alami didalam tubuh baik dalam
kondisi sehat maupun patologi. Pada keadaan terjadi kerusakan jaringan
proses angiogenesis berperan dalam mempertahankan kelangsungan fungsi
berbagai jaringan dan organ yang terkena luka. Hal ini terjadi melalui
terbentuknya pembuluh darah baru yang menggantikan pembuluh darah yang
rusak ( Frisca et al. 2009 )
Ada berbagai macam growth factor yakni PDGF (Platelet Derived Griwth
Factor) , VEGF ( Vascular Endothelial Growth Factor ), TGF-β ( Transforming
Growth Factor Beta ) FGF ( Fibroblast Growth Factor ), Osx ( Osterix ),
RUNX-2 ( Runt Related Transcription Factor -2 ) dan ALP ( Alkali Phosphatase
) yang dapat mempengaruhi proses migrasi fibroblast dan proses osteogenesis
pada proses penyembuhan ulang. Dengan demikian, penelitian ini bertujuan
untuk mengevaluasi pengaruh ekstrak kulit buah manggis terhadap ekspresi
PDGF, FGF, VEGF, TGF-β, Osterix, Runx-2 dan ALP ditingkat DNA dan
Protein kultur sel human gingiva fibroblast sebagai strategi potensial untuk
mempercepat penyembuhan tulang. Dari penelitian ini dapat dilanjutkan dengan
membuat gel ekstrak kulit buah manggis yang diaplikasikan kepada soket pasca
pencabutan gigi untuk mempercepat penyembuhan luka dan mengurangi infeksi.
8
 Proses penyembuhan luka setelah pemberian ekstrak kulit buah manggis
melibatkan banyak faktor, salah satunya adalah peningkatan jumlah Osteoblast
dan proses Osteogenesis. Osteogenesis merupakan proses perkembangan yang
melibatkan pembentukan fibrocartilago dan aktivitas osteogenik dari sel tulang
utama ( Solomon et al, 2010 ). Proses osteogenesis terdiri dari 5 fase, yaitu fase
hematoma, fase inlamasi dan proliferasi seluler, pembentukan callus,
konsolidasi, remodeling (Shapiro, 2008)
Ada berbagai macam marker osteogenesis yaitu Osterix, ALP, RUNX2,
COL1α, dan BSP yang dapat mempengaruhi proses osteogenesis pada proses
penyembuhan tulang. Dan selain itu ada berbagai macam marker inflamasi yaitu
IL-1, IL-6, IL-10, TNF α, dan CRP yang berperan dalam proses inflamasi.
Dengan demikian, penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi pengaruh ekstrak
kulit buah manggis terhadap ekspresi Osterix, ALP, RUNX2, COL1α, dan BSP
serta marker inflamasi IL-1, IL-6, IL-10, TNF α, dan CRP pada media
Osteoblastic Cell Line MC3T3-E1 sebagai strategi potensial untuk menghambat
resorpsi tulang pada proses inflamasi post ekstraksi gigi. Dari penelitian ini
dapat dilanjutkan dengan membuat gel ekstrak kulit buah manggis yang
diaplikasikan kepada soket pasca pencabutan gigi untuk mempercepat
penyembuhan luka, dan menghambat proses resorpsi tulang.

1.2 Rumusan Masalah

a. Apakah aplikasi ekstrak kulit buah manggis dapat meningkatkan ekspresi
PDGF, FGF, VEGF, TGF-β secara seluler dan wound healing assay pada
human gingiva fibroblast?
b. Apakah aplikasi ekstrak kulit buah manggis dapat meningkatkan ekspresi
Osterix, ALP, RUNX2, COL1α, dan BSP serta menurunkan marker
inflamasi IL-1, IL-6, IL-10, TNF α, dan CRP yang dievaluasi dengan
realtime PCR dengan media Osteoblastic cell line MC3T3-E1?

1.3 Tujuan Penelitian

a. Mengetahui dosis optimal ekstrak kulit buah manggis pada kultur sel
human gingiva fibroblast.

9
 b. Membuktikan bahwa ekstrak kulit buah manggis dapat mempercepat
wound healing assay pada kultur sel human gingiva fibroblast
c. Membuktikan bahwa ekstrak kulit buah manggis dapat meningkatkan
ekspresi RNA dan protein PDGF-B pada kultur sel human gingiva
fibroblast.
d. Membuktikan bahwa ekstrak kulit buah manggis dapat meningkatkan
ekspresi RNA dan protein FGF-2 pada kultur sel human gingiva
fibroblast.
e. Membuktikan bahwa ekstrak kulit buah manggis dapat meningkatkan
ekspresi RNA dan protein VEGF-A pada kultur sel human gingiva
fibroblast.
f. Membuktikan bahwa ekstrak kulit buah manggis dapat meningkatkan
ekspresi RNA dan protein TGF-β1 pada kultur sel human gingiva
fibroblast.
g. Mengetahui dosis optimal ekstrak kulit buah manggis pada Osteoblastic
cell line MC3T3-E1
h. Membuktikan bahwa ekstrak kulit buah manggis dapat meningkatkan
Ekspresi gen Osterix, ALP, RUNX2, COL1α, dan BSP pada Osteoblastic
cell line MC3T3-E1
i. Membuktikan bahwa ekstrak kulit buah manggis dapat menurunkan IL-1,
IL-6, IL-10, TNF α, dan CRP pada Osteoblastic cell line MC3T3-E1

1.4 Manfaat Penelitian

Manfaat dari penelitian ini adalah :
1. Sebagai model penyembuhan luka untuk memperbaiki atau
mempercepat proses penyembuhan luka pasca pencabutan gigi melalui
migrasi fibroblast, proses jalur pencegahan keradangan dan aktivasi
proses angiogenesis.
2. Meningkatkan efektifitas pendayagunaan ekstrak kulit buah manggis
sebagai bio-produk yang baik sebagai bahan alternatif untuk
mempercepat penyembuhan luka pasca pencabutan gigi dan
mengurangi terjadi resiko terjadi infeksi.

10
 3. Sebagai model penyembuhan luka untuk memperbaiki atau
mempercepat proses penyembuhan luka pasca pencabutan gigi melalui
proses jalur pencegahan keradangan dan aktivasi proses osteogenesis.
4. Meningkatkan efektifitas pendayagunaan ekstrak kulit buah manggis
sebagai bio-produk yang baik sebagai bahan alternatif untuk
mempercepat penyembuhan luka dan mengurangi terjadinya resorpsi
tulang alveolar pasca pencabutan gigi.

1.5 Rencana Target Capaian Tahunan

No Indikator Capaian
Jenis Luaran
. TS1) TS+1 TS+2 TS+3
Internasional ada ada ada ada
Publikasi
1. Nasional Tidak
ilmiah2) Draf Submitted Published
Terakreditasi ada
Sudah Sudah
Pemakalah Internasional Draf Terdaftar
dilaksanakan dilaksanakan
2. dalam temu
Sudah Sudah
ilmiah3) Nasional Draf Terdaftar
dilaksanakan dilaksanakan
Sudah Sudah
Invited speaker Internasional Draf Terdaftar
dilaksanakan dilaksanakan
3. dalam temu
Sudah Sudah
ilmiah4) Nasional Draf Terdaftar
dilaksanakan dilaksanakan
Visiting Sudah Sudah
4. Internasional Draf Terdaftar
Lecturer5) dilaksanakan dilaksanakan
Tidak
Paten Draf Terdaftar Terdaftar
ada
Paten Tidak
Draf Terdaftar Terdaftar
sederhana ada
Tidak
Hak Cipta Draf Terdaftar Terdaftar
ada
Merek Tidak
Draf Terdaftar Terdaftar
Hak Kekayaan dagang ada
5. Intelektual Tidak
Rahasia Tidak Tidak ada Tidak ada
(HKI)6) ada
dagang ada
Desain Tidak
Tidak Tidak ada Tidak ada
Produk ada
ada
Industri
Tidak
Indikasi Tidak Tidak ada Tidak ada
Geografis ada ada

11
 Perlindungan Tidak
Tidak Tidak ada Tidak ada
Varietas ada
ada
Tanaman
Perlindungan
Topografi Tidak Tidak
Tidak ada Tidak ada
Sirkuit ada ada
Terpadu
Tidak
6. Teknologi Tepat Guna 7) Draf Produk Penerapan
ada
Model/Purwarupa/Desain/Kary Tidak
7. Draf Produk Penerapan
a seni/Rekayasa Sosial8) ada
Tidak Tidak
8. Buku Ajar (ISBN)9) Tidak ada Tidak ada
ada ada
Tingkat Kesiapan Teknologi
9. 1 2 3 4
(TKT)10)

12
 BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Penyembuhan Luka

Penyembuhan luka merupakan suatu proses penggantian jaringan yang
mati/rusak dengan jaringan baru yang sehat oleh tubuh melalui proses regenerasi.
Luka dikatakan sembuh apabila permukaannya dapat bersatu kembali dan
didapatkan kekuatan jaringan yang mencapai optimal.
Penyembuhan luka meliputi 2 kategori yaitu regenerasi dan reparasi.
Regenerasi merupakan pemulihan jaringan seperti semula baik struktur maupun
fungsinya. Reparasi merupakan pemulihan atau penggantian oleh jaringan ikat.
Tahapan proses penyembuhan meliputi proses inflamasi, proliferasi,
reepitelisasi, pembentukan jaringan granulasi, angiogenesis interaksi antara
berbagai sel dan matriks, serta remodeling jaringan. Tujuan proses ini adalah
untuk mengembalikan keadaan jaringan seperti semula (Cockbill, 2002). Suatu
proses penyembuhan dimulai segera setelah terjadinya luka, akan tetapi
mekanisme, kecepatan penyembuhan dan jaringan baru yang menyusun luka
bergantung pada tipe dari luka tersebut (Cockbill, 2002). Proses penyembuhan
dimulai setelah terjadi luka memiliki 3 tahap utama yaitu keradangan, perbaikan
jaringan, dan maturasi jaringan. Beberapa menit setelah terjadi trauma pada
jaringan, biasanya juga melibatkan pembuluh darah, terbentuknya gumpalan
darah yang menutup daerah tersebut (Goepel, 1992).
Tiga tahapan proses penyembuhan luka meliputi (Goepel, 1992):
1) Tahap Inflamasi (Inflamatory phase)
Tahap inflamasi dari suatu proses penyembuhan luka secara klinis
dapat dikarakteristikkan melalui tanda-tanda kardinal radang yaitu kemerahan
(rubor), panas (kalor), ada pembesaran (tumor), terdapat rasa sakit (dolor),
dan hilangnya fungsi (function laesa) (Jorge, 2006).
Tahap keradangan berlangsung pada 72 jam pertama setelah terjadi
luka. Berbagai sel termasuk sel darah putih dan sel radang segera menuju ke
daerah luka untuk memulai proses pembersihan debris (Clark, 2001). Sel
darah putih yaitu neutrofil akan menginvasi daerah tersebut. Neutrofil akan

13
 menghancurkan semua debris dan bakteri yang ada pada daerah tersebut.
Adanya neutrofil menandakan mulai terjadinya respon inflamasi yang
ditandai dengan peningkatan aliran darah dan permeabilitas pembuluh darah,
aktivasi reseptor nyeri, dan aktivitas neutrofil dan sel darah putih lain yang
mengeliminasi debris dan bakteri. 48 jam setelah terbentuknya luka, sel
makrofag akan menggantikan peran utama sel neutrofil dalam proses
inflamasi. Makrofag berfungsi menghancurkan neutrofil yang mati dan
eksudat lain yang ada pada daerah tersebut (Goepel, 1992).
Sel-sel makrofag kemudian memproduksi senyawa yang
menyebabkan fibroblast menggandakan diri, fibroblast merupakan sel yang
berperan penting dalam memproduksi protein untuk memperbaiki jaringan,
terutama kolagen (Clark, 2001).
2) Tahapan perbaikan jaringan (Proliferasi)

Perbaikan dan regenerasi jaringan bergantung pada tiga faktor utama

yaitu: eliminasi debris, regenerasi sel-sel endotelial dan produksi fibroblas
yang menyusun jaringan penghubung di seluruh tubuh dan sebagai dasar
dari jaringan parut (Clark, 2001). Fibroblas dan sel endotel merupakan sel
utama yang berperan penting dalam tahap proliferasi pada proses
penyembuhan luka.
Fibroblas mulai muncul ketika terjadi penurunan jumlah neutrofil
dan terjadi peningkatan jumlah makrofag. Fibroblas berimigrasi dari
jaringan sekitar ke daerah luka dimulai 72 jam setelah terjadi luka dan
menggandakan diri oleh karena respon cytokines dan growth factors yang
dilepas pada tahap awal proses penyembuhan luka (Ibelgaufts, 2002).
3) Tahap maturasi jaringan (Remodelling)
Remodeling / fase maturasi dapat berlangsung selama beberapa tahun
dan melibatkan keseimbangan antar degradasi dan pembentukan matriks.
Kebutuhan metabolik penyembuhan luka mengalami penurunan, sehingga
jaringan kapiler mulai berkurang. Matriks kolagen yang dipengaruhi oleh
sitokin dan faktor pertumbuhan terus terdegradasi, resintesis, reorganisasi,
dan distabilkan oleh ikatan silang (cross-link). Fibroblas mulai menghilang

14
 secara bertahap. Tensile strength dari jaringan parut bertahap meningkat dan
akhirnya mendekati sekitar 80% dari kekuatan aslinya. Homeostasis kolagen
dan Extra Cellular Matrix (ECM) diatur oleh serine proteases dan matrix
metalloproteinases (MMPs). Inhibitor jaringan dari MMPs mengontrol
aktvitas proteolitik dalam jaringan parut. Setiap gangguan dapat
menyebabkan degradasi matriks yang berlebihan sehingga menghasilkan
bekas luka (Shetty & Bertolami 2004, p.5-6).

2.2 Penyembuhan Luka Pasca Ekstraksi Gigi

Penyembuhan soket setelah ekstraksi gigi merupakan contoh
penyembuhan dengan second intention. Segera setelah pencabutan gigi dari
soket, darah mengisi soket. Bekuan dimulai dalam 24 sampai 48 jam dengan
pembengkakan dan pelebaran pembuluh darah di dalam sisa-sisa ligamen
periodontal, diikuti oleh migrasi leukosit dan pembentukan lapisan fibrin.
Pada minggu pertama bekuan membentuk kerangka (scaffold) sementara dimana
sel-sel inflamasi bermigrasi. Epitel di pinggiran luka tumbuh di atas permukaan
bekuan. Osteoklas yang ada di sepanjang puncak tulang alveolar mulai aktif
meresorpsi. Angiogenesis berlangsung di sisa-sisa ligamen periodontal. Pada
minggu kedua bekuan terus terorganisir melalui fibroplasia dan angiogenesis
yang mulai menembus ke tengah bekuan darah. Pada minggu ketiga soket diisi
dengan jaringan granulasi dan tulang yang sedikit terkalsifikasi. Permukaan luka
sudah mengalami re-epitelisasi dengan pembentukan jaringan parut yang
minimal atau tanpa pembentukan jaringan parut. Remodeling tulang aktif.
Berdasarkan hasil radiografi, pembentukan tulang mulai tampak nyata pada
minggu keenam sampai minggu kedelapan setelah pencabutan gigi (Shetty &
Bertolami 2004, pp.7-8).

2.3 Angiogenesis
Angiogenesis merupakan pertumbuhan pembuluh darah baru yang terjadi
secara alami didalam tubuh, baik dalam kondisi sehat maupun sakit. Proses
angiogenesis terdiri dari beberapa tahapan yang dimulai dari proses inisiasi, yaitu
dilepaskannya enzim protease dari sel endotel yang teraktivasi, pembentukan

15
pembuluh darah vaskular, antara lain terjadinya degradasi matriks ekstraseluler
(Extra Cellular Matrix, ECM), migrasi dan proliferasi sel endotel, serta
pembentukan ECM baru yang kemudian dilanjutkan dengan maturasi atau
stabilisasi pembuluh darah yang terkontrol dan dimodulasi untuk memenuhi
kebutuhan jaringan (Plank, 2004).

Tahapan-tahapan angiogenesis dapat dijelaskan sebagai berikut:

a) Pelepasan faktor stimulus angiogenik
Kumpulan sel pada jaringan yang mengalami kerusakan atau mengalami
hipoksia, akan melepaskan faktor angiogenik berupa faktor pertumbuhan dan
protein rantai pendek lainnya, yang dapat berdifusi ke sel-sel pada jaringan
sekitarnya kemudian disusul dengan terjadinya proses inflamasi. Pada proses
inflamasi, pembuluh darah kecil yang terdapat secara lokal sel endotel akan
berinteraksi dengan faktor peradangan dan angiogenik. Faktor-faktor angiogenik
ini dapat menarik dan mendorong proliferasi sel endotel dan sel radang.
Menjelang proses migrasi, sel-sel radang juga mensekresi molekul yang juga
berperan sebagai stimulus angiogenik (Carmeliet, 2000).
b) Pelepasan enzim protease dari sel endotel yang teraktivasi
Faktor angiogenik berupa growth factor kemudian berikatan dengan
reseptor spesifik yang terdapat pada reseptor sel endotel (EC) di sekitar lokasi
pembuluh darah lama. Ketika faktor angiogenik berikatan dengan reseptornya,
sel endotel akan teraktivasi dan menghasilkan signal yang kemudian dikirim dari
permukaan sel ke nukleus. Organel-organel sel endotel kemudian mulai
memproduksi molekul baru antara lain adalah enzim protease yang berperan
penting dalam degradasi matriks ekstraseluler untuk mengakomodasi percabngan
pembuluh darah (Lieken et al, 2008).
c) Disosiasi sel endotel dan degradasi ECM yang melapisis pembuluh darah
lama.
Disosiasi sel endotel dari sel-sel sekitarnya, distimulasi oleh faktor
pertumbuhan angiopoietin serta aktivitas enzim yang dihasilkan oleh sel endotel
yang teraktivasi, seperti urokinase-plasminogen activator (uPA) dan matrix
metalloproteinases (MMPs), dibutuhkan untuk menginisiasi terbentuknya
pembuluh darah baru (Polverini, 2002). Pada sistem enzimatik tersebut, sel

16
endotel dari pembuluh darah lama akan mendegradasi ECM dan menginvasi
stroma dari jaringan disekitarnya sehingga sel endotel yang terlepas dari ECM ini
akan sangat responsif terhadap signal angiogenik (Frisca dkk, 2009).
d) Migrasi dan proliferasi sel endotel
Degradasi proteolitik dari ECM segera diikuti dengan migrasinya sel
endotel ke matriks yang terdegradasi. Proses tersebut kemudian diikuti dengan
proliferasi sel endotel yang distimulasi oleh faktor angiogenik, yang beberapa di
antaranya dilepaskan dari hasil degradasi ECM, seperti fragmen peptide, fibrin
atau asam hialuronik (Kleinsmith et al, 2008).
e) Pembentukan lumen dan pembuatan ECM baru
Sel endotel yang bermigrasi tersebut kemudian mengalami elongasi dan
saling mensejajarkan diri dengan sel endotel lain untuk membuat struktur
percabangan pembuluh darah yang kuat. Proliferasi sel endotel meningkat
sepanjang percabangan vaskular. Lumen kemudian terbentuk dengan
pembengkokan dari sel endotel. Pada tahap ini kontak antar sel endotel mutlak
dibutuhkan (Frisca dkk, 2009).
f) Fusi pembuluh darah baru dan inisiasi aliran darah
Struktur pembuluh darah yang terhubung satu sama lain akan membentuk
rangkaian pembuluh darah untuk memediasi terjadinya sirkulasi darah. Pada
tahap akhir, pembentukan struktur pembuluh darah baru akan distabilkan oleh sel
mural (sel otot polos dan pericytes) sebagai jaringan penyangga dari pembuluh
darah yang baru terbentuk. Tanpa adanya sel mural, struktur dan jaringan antar
pembuluh darah sangat rentan dan mudah rusak (Frisca dkk, 2009).

2.4 Vascular Endothelial Growth Factor - A (VEGF-A)

VEGF merupakan glikoprotein pengikat heparin yang disekresi dalam
bentuk homodimer. Salah satu fungsi VEGF yang pertama kali diketahui adalah
memediasi peningkatan permeabilitas pembuluh darah pada mikrovaskular
tumor. Oleh karena itu VEGF disebut juga Vascular Permeability Factor (VPF)
(Berman dkk, 2000).
Dalam keadaan normal, VEGF diekspresikan dalam kadar yang bervariasi
oleh berbagai jaringan, termasuk diantaranya otak, ginjal, hati, dan limpa.

17
Tekanan oksigen dapat berfungsi sebagai regulator VEGF. Paparan kondisi
hipoksia menginduksi ekspresi VEGF dengan cepat. Sebaliknya, dalam
kondisi kadar oksigen normal, ekspresi VEGF menurun dan mengalami
stabilisasi. Tingkat ekspresi VEGF juga bergantung pada jumlah sitokin
inflamatori dan hormon pertumbuhan, termasuk diantaranya Epidermal Growth
Factor (EGF), Interleukin-1β (IL-1β), plateled derived growth factor (PDGF),
Tumor Necrosis Factor (TNF-α), dan transforming growth factor (TGF- β1)
(Goepel. 1992). VEGF beraksi sebagai mitogen yang terbatas pada sel endotel
vaskular dan terlibat dalam banyak tahap respon angiogenik, antara lain
menstimulasi degradasi matriks ekstraseluler disekitar sel endotel, meningkatkan
proliferasi dan migrasi sel endotel, membantu pembentukan struktur pembuluh
darah.

2.5 Fibroblast Growth Factor-2 (FGF-2)

Fibroblast Growth Factor-2 (FGF) merupakan faktor angiogenik yang
juga dapat membentuk kompleks dengan heparin. Kompleks heparin-FGF
membentuk suatu struktur yang tahan terhadap panas dan protease. Ikatan
dengan heparin juga menyababkan terjadinya bentuk dimer dan oligomer dari
FGF, yang akan meningkatkan efisiensi aktivitas sel menyusul terjadinya ikatan
antar FGF dengan reseptornya (Frisca dkk, 2009).
FGFs sebetulnya merupakan sebuah keluarga yang terdiri dari 28
anggota. FGF ditemukan pada kelenjar pituitari, otak, hipotalamus, mata,
kartilago, tulang, corpus luteum, ginjal, plasenta, makrofag, kondrosarkoma, dan
sel hepatoma. Dua struktur primer asam amino dari FGF ditemukan pada tahun
1985, antara lain acid FGF atau a-FGF (tersusun dari 140 asam amino) dan basic
FGF atau b-FGF (tersusun dari 146 asam amino). a-FGF merupakan hasil
faksinasi FGF pada kondisi pH asam, sedangkan b-FGF merupakan hasil
faksinasi FGF pada kondisi basa. Dalam kondisi normal, a-FGF dan b-FGF
terdapat dalam bentuk monomer. Kedua protein ini memiliki homologi asam
amino yang cukup tinggi (53%). Meskipun a-FGF dan b-FGF memiliki reseptor
yang sama (FGFR-1 sampai FGFR-4) namun keduanya memiliki tingkat afinitas
yang berbeda. Afinitas a-FGF dalam pengikatan terhadap reseptornya (FGFR1-4)

18
lebih tinggi dibandingkan b-FGF. a-FGF banyak terdapat pada otak dan retina
dan diketahui berperan dalam menjaga kondisi fisik tubuh, termasuk diantaranya
menjaga homeostasis tubuh seperti pertumbuhan pembuluh darah menjelang
regenarsi jaringan dan penyembuhan luka. Sedangkan b-FGF berperan dalam
pembentukan tumor, memediasi proses angiogenesis dan juga penyambuhan luka
(Frisca dkk, 2009).
Spesifitas a-FGF dan b-FGF cukup luas pada sejumlah sel target,
termasuk diantaranya adalah sel endotel dan sel otot polos, fibroblas dan sel
epitel. Diketahui bahwa faktor angiogenik ini tidak hanya menstimulasi
proliferasi sel endotel secara in vitro (pada konsentrasi 1 sampai 10 mg/ml)
namun juga pada proses angiogenik in vivo. Diantaranya adalah pertumbuhan
pembuluh darah baru pada proses penyembuhan luka dengan meningkatkan
proses reendotelialisasi pada pembuluh darah yang mengalami kehilangan atau
kerusakan sel endotel dan pembentukan pembuluh darah pada vaskularisasi
jantung (Frisca dkk, 2009).

2.6 Fibroblas
Fibroblas adalah sel dominan pada jaringan ikat. Sel ini bertanggung
jawab untuk pembentukan dan pemeliharaan komponen berserat dan substansi
dasar jaringan ikat. Fibroblas biasanya dikenali dengan ciri khas hubungan sel ini
dengan kumpulan serat kolagen. Sel fibroblas dalam kondisi tidak aktif adalah
sel memanjang dengan sedikit sitoplasma dan gelap, inti pipih mengandung
kromatin kental. Fibroblas aktif memiliki bentuk oval, nukleus dan sejumlah
besar sitoplasma berwarna lebih pucat. Tingkat kapasitas sintetis dan sekresi
fibroblas ini dibuktikan dengan jumlah retikulum endoplasma yang kasar, butiran
sekresi, dan mitokondria, dan sejauh mana kompleks Golgi di sitoplasma (Nanci,
2013).
Sel paling dominan yang ditemukan pada jaringan ikat adalah sel
fibroblas. Fibroblas yang penting dalam proses perkembangan, struktur dan
fungsi gigi. Fungsi utama dari fibroblas adalah pembentukan serat ekstraseluler
pada jaringan ikat. Serat yang dibentuk adalah kolagen, elastis, dan oxytalan.
Selain ini, fibroblas melakukan berbagai fungsi lainnya (Chandra et al, 2010).

19
Fibroblas merupakan sasaran dari banyak golongan protein yang disebut growth
factors yang mempengaruhi pertumbuhan sel dan diferensiasi. Pada orang
dewasa, jaringan ikat fibroblas jarang melakukan pembelahan sel. Namun,
fibroblas akan bermitosis dan melanjutkan siklus sel ketika jaringan
membutuhkan fibroblas tambahan yang dirangsang oleh growth factors yang
dilepaskan secara lokal misalnya, untuk memperbaiki organ yang rusak.
Fibroblas yang terlibat dalam penyembuhan luka kadang-kadang disebut
myofibroblasts (Junqueira & Mescher, 2013).
Migrasi fibroblas ke daerah yang cedera didorong oleh chemokines, TNF,
PDGF, TGF-b, dan FGF. Proliferasi fibroblas selanjutnya juga dipicu oleh
beberapa growth factor, termasuk PDGF, EGF, TGF-b, FGF, dan sitokin IL-1
dan TNF. Makrofag adalah sumber utama untuk zat-zat faktor ini, meskipun sel
inflamasi lain dan trombosit juga dapat menghasilkan zat – zat tersebut (Kumar
et al, 2010).
Fibroblas yang pertama yang masuk ke daerah luka mengandung aktin
melimpah, myosin dan memiliki sifat kontraktil, sehingga sering disebut
contractile fibroblasts atau myofibroblasts. Sel-sel ini menyambung satu sama
lain dan dengan fibril jaringan ikat. Dan ketika berkontraksi, myofibroblasts
dapat menarik tepi luka bersama-sama, sehingga mengurangi luas permukaan
dan memudahkan penyembuhan (Nanci, 2012).

2.7 Platelet-derived growth factor - B ( PDGF-B )

Platelet-derived growth factor (PDGF-B) in vitro merangsang sintesis
DNA dan kemotaksis fibroblas dan sel-sel otot polos dan merangsang kolagen,
glikosaminoglikan, dan produksi kolagenase oleh fibroblas. Sifat-sifat in vitro
menunjukkan bahwa PDGF-B diantarkan oleh trombosit ke cedera in vivo yang
mungkin memainkan peran penting dalam inisiasi proses perbaikan luka.
Penambahan PDGF-B murni dapat mengakibatkan kenaikan yang signifikan
dalam lebar jaringan dan lapisan epidermis. Penambahan PDGF-B dapat
mengakibatkan peningkatan yang signifikan dalam tingkat protein dan sintesis
DNA luka bekas operasi. Efek yang sama diperoleh ketika faktor pertumbuhan
ILGF-1 ditambahkan dalam kombinasi dengan PDGF-B murni. Faktor

20
pertumbuhan insulin-seperti saya sendiri tidak menyebabkan perubahan morfologi
yang signifikan. FGF yang dikombinasi dengan PDGF-B mengakibatkan
penebalan hanya dari epidermis.

2.8 Transforming Growth Faktor – beta1 ( TGF-β1 )

Superfamili Transforming Growth Faktor (TGF-β1) Adalah salah satu
kelompok yang sitokin paling kompleks dengan efek luas pada banyak aspek
pertumbuhan dan perkembangan. Isoform dari TGF-β1 dan anggota keluarga
lainnya, misalnya Activins dan BMP, memiliki efek yang beragam di sejenis
situasi fisiologis dan terlibat dalam proses penyembuhan luka. Manipulasi rasio
TGF-β anggota superfamili, khususnya rasio TGFfil relatif TGFP3, mengurangi
jaringan parut dan fibrosis. Manipulasi tersebut termasuk mengurangi tingkat
TGFβ l / TGFβ-2 menggunakan antibody yang netral atau mencegah aktivasi
dari TGF-β. Pada luka kronis atau gangguan penyembuhan luka dengan
penambahan eksogen anggota superfamili TGF-β1 dapat mempercepat aspek
dari proses penyembuhan. Kumar et al, 2010).

2.9 Protein penanda / marker pada proses inflamasi

Inflamasi atau yang sering dikenal dengan istilah radang merupakan suatu
kejadian normal dari tubuh yang berkaitan dengan sistem kekebalan tubuh.
Inflamasi ini terjadi akibat sistem pertahan yang ada dalam tubuh sudah tidak
mampu lagi melawan paparan benda asing dari tubuh (virus dan bakteri) secara
biologis tempat tempat yang mendapatkan serangan dari luar tersebut akan terjadi
inflamasi atau peradangan. Beberapa produk gen pro-inflamasi telah diidentifikasi
memiliki peran penting pada penekanan apoptosis, proliferasi, angiogenesis,
invasi, dan metastasis. Di antara produk gen tersebut adalah TNF alfa dan anggota
superfamilinya, IL-1, IL-6, IL-10, TNF α, dan CRP (Paulo V, 2015).

21
 Gambar 1. Jalur signal inflamasi ( Paulo V, 2015).

Jalur pro inflammatory signaling dipengaruhi oleh zinc. Mirip dengan

pensinyalan TLR, jalur pensinyalan IL-1, dan TNF-R bertemu pada kompleks IκB
kinase umum yang memfosforilasi protein penghambat NF-κB, menghasilkan
pelepasan NF-κB dan translokasi ke nukleus. Seng mencegah pemisahan NF-κB
dari protein penghambatnya, sehingga mencegah translokasi nuklir NF-κB dan
menghambat peradangan selanjutnya. Seng juga menghambat aktivasi STAT3
yang dimediasi IL-6 ( Kent LW,1996)..

2.9.1 Interleukin-1 (IL-1)

Merupakan mediator inflamasi yang berikatan dengan IL-8 yang berperan

pada pada reseptor inflamasi pada pembentukan osteoblast pada proses
osteogenesis (Germolec DR, 2010).

22
 Gambar 2. Peran Interleukin-1 pada proses osteogenesis (Germolec DR, 2010).

2.9.2 Interleukin-6 (IL-6)

Merupakan mediator inflamasi yang berkembang pada hiperinsulinemia yang

berperan dalam metabolisme karbohidrat dan lemak untuk meningkatkan lipolysis
dengan menghambat lipase (LPL) (Kent LW,1996).

2.9.3 Interleukin-10 (IL-10)

Merupakan mediator inflamasi yang diproduksi oleh sel T-helper , limfosit, B-

limfosit, monosit dan makrofag, dimana dapat menjadi anti inflamasi yang
meregulasi system imun.

2.9.4 Tumor necrosis factor- alpha (TNF-α)

Merupakan mediator inflamasi yang memiliki autokrin, parakrin, dan akssi

endokrin. Dimana sel adiposite memberikan peranan pentingdalam regulasi
akumulasi lemak tubuh.

23
2.9.5 C-Reactive Protein (CRP)
Merupakan marker protein pada fase akut inflamasi, terdiri dari level
serum fibrinogen yang berhubungan dengan pembentukan fibrin, agregrasi
platelet dan viskositas plasma.

2.10 Penanda / marker proses osteogenesis

Metabolisme tulang juga dipengaruhi oleh beberapa protein dan faktor

pertumbuhan, yang dilepaskan dari platelets, makrofag, dan fibroblast. Protein-
protein ini membantu tulang untuk membentuk vaskularisasi baru, menjadi padat,
bergabung dan berfungsi secara mekanis. Protein ini juga menginduksi sel-sel dari
mesenkimal seperti monosit dan fibroblast, untuk bermigrasi, berproliferasi dan
berdifferensiasi di dalam tulang. Protein yang meningkatkan penyembuhan tulang
meliputi BMP, insulin-like growth faktor, faktor pertumbuhan transformasi, faktor
pertumbuhan yang diturunkan dari platelet dan faktor pertumbuhan dari fibroblast
(Lauing et al. 2013).
Protein yang cukup dikenal adalah BMP, derivat glikoprotein yang berasal
dari matriks tulang. Bone Morphogenesis Proteins (BMP) menginduksi sel-sel
mesenkimal untuk berdiferensiasi menjadi sel-sel tulang. Meskipun biasanya hadir
dalam beberapa saat di dalam tubuh, beberapa BMP telah disintesis menggunakan
teknologi DNA rekombinan dan saat ini sedang menjalani uji klinik untuk menilai
potensinya dalam penyembuhan tulang pada manusia. Protein-protein yang lain
mempengaruhi penyembuhan tulang dengan cara yang berbeda. Transforming
Growth Factor Beta (TGF-β) mengatur angiogenesis, pembentukan tulang,
sintesis matriks ekstraseluler. Osteonectin, fibronectin dan osteocalsin
berpengaruh pada perlekatan sel, memfasilitasi migrasi sel dan mengaktifkan sel.
(Bellahcene, 2000).

Osteoblas dan osteoklas terdapat pada permukaan tulang kompak dan

tulang kanselus untuk membentuk dan menyerap tulang. Sel-sel progenitor
multipoten di periosteum dapat berdiferensiasi menjadi sel-sel tulang dan tulang
rawan, yang penting ketika cedera terhadap tulang. Dua jenis sel utama langsung

24
bertanggung jawab untuk pemeliharaan massa tulang adalah osteoklas
(penyerapan tulang) dan osteoblas (pembentuk tulang) (Sharaway, 2001)

Gambar 3. Proses remodelling tulang. (Lauing et al. 2013).

Pada remodelling tulang dimulai oleh perubahan muatan mekanis yang

terdiri dari 4 langkah berturut-turut, yaitu aktivasi, resorpsi, pembalikan, dan
pembentukan. Aktivasib osteoklas dikendalikan melalui jalur
RANK/RANKL/OPG. Setelah deposisi tulang osteoblast dapat berdiferensiasi
menjadi osteosit (osteositogenesis), beralih ke sel-sel yang melapisi tulang, atau
memasuki apoptosis (Bellahcene, 2000).

Sel ini diatur dalam bone remodelling units (BRU) atau basic multicellular
units (BMU), yang mempertahankan aktivasi yang berkesinambungan dari
osteoklas diikuti oleh osteoblas yaitu resorpsi diikuti pembentukan tulang.
Osteoblas mensekresikan matriks organik unmineralized yaitu osteoid, yang
sebagian besar terdiri dari kolagen tipe I, selain proteoglikan, glikoprotein, dan
protein noncollagenous lainnya seperti osteocalcin (Lauing et al. 2013).

25
 Gambar 4. Proses Osteogenesis (Kalfas, Iain 2001).

Pada proses sel progenitor (MSC) berpotensi proliferasi dan diferensiasi

menjadi osteosit, termasuk garis keturunan osteogenik dan adipogenik
berdasarkan stimulasi dengan pertumbuhan yang berbeda dan isyarat diferensiasi.
Diferensiasi garis keturunan spesifik adalah proses multi tahap dan terkoordinasi
dengan baik yang diatur oleh master regulator, seperti PPARγ dan EBPβ untuk
adipogenesis dan Runx2 dan osterix untuk osteogenesis. Diferensiasi osteogenik
dapat dipentaskan dengan mengukur alkaline phosphatase (penanda awal) dan
osteocalcin dan osteopontin (penanda akhir) (Lauing et al, 2013).

2.10.1 Bone Sialoprotein (BSP)

Ekspresi gen BSP, yang diinduksi dalam osteoblas yang baru terbentuk,
diatur oleh hormon dan sitokin yang meningkatkan pembentukan tulang dan
diatur oleh faktor-faktor yang menekan pembentukan tulang. Dengan demikian,
BSP memiliki sifat biofisik dan kimia dari nukleator, dan ekspresi temporo-
spasialnya bertepatan dengan mineralisasi de novo di tulang dan sementum.
Namun, kemampuan BSP untuk memediasi perlekatan sel dan memberi sinyal
melalui titik motif RGD untuk fungsi alternatif untuk BSP yang perlu diselidiki
lebih lanjut. Dalam kombinasi, sekuens asam poliglutamat pengikat hidroksiapatit
dan RGD memberikan entitas bi-fungsional yang melaluinya BSP dapat
menengahi penargetan dan perlekatan sel normal dan metastasis pada permukaan
tulang. Bone Sialoprotein (BSP) adalah glikoprotein asam, terfosforilasi yang
disintesis oleh osteoblas dan sel-sel yang menyerupai osteoklastik dalam kultur.
Ini memiliki massa tanpa glukosilasi 33 kDa (glikosilasi, 70-80 kDa). Meskipun

26
fungsi BSP masih belum sepenuhnya dipahami, BSP merangsang pembentukan
hidroksiapatit in vitro dan tampaknya memediasi interaksi sel-sel melalui situs
pengikatan integrin. BSP relatif terbatas pada tulang tetapi juga diekspresikan oleh
trofoblas dan sangat diregulasi oleh banyak tumor ganas (mis. Kanker payudara
dan prostat). Baru-baru ini, telah disarankan bahwa BSP dapat berperan dalam
angiogenesis yang terkait dengan pembentukan tulang, pertumbuhan tumor, dan
metastasis (Bellahcene, 2000). Sejumlah kecil BSP ditemukan dalam sirkulasi
dan dengan demikian merupakan penanda potensial pergantian tulang (Shaarawy,
2001).

Kadar BSP serum dilaporkan meningkat pada penyakit tulang ganas (Diel,
1999; Woitge, 2001) dan osteoporosis pascamenopause, dan menurun dengan
pengobatan antiresorptif (Seibel, 1996; Shaarawy, 2001). BSP stabil pada −80 ° C
tetapi sedikit yang diketahui tentang kinetika dan metabolisme BSP dalam serum.
Penanda dapat berguna dalam deteksi dini metastasis tulang dan gangguan tulang
lainnya, dan pengujian baru dan lebih baik untuk imunoreaktif BSP saat ini
sedang dikembangkan ( Seibel M.J, 1996).

Osteoblas yang telah dewasa/matang secara metabolik aktif merupakan

bone forming cells. Osteoblas mensekresikan osteoid yang merupakan
unmineralized organic matrix yang kemudian mengalami proses mineralisasi yang
menyebabkan tulang menjadi keras dan kaku. Sebagian dari osteoblas berubah
menjadi osteosit, sedangkan sebagian lainnya tetap berada di permukaan
periosteum dan endosteum (Kalfas, Iain 2001).

2.10.2 Alkali Phosphatase (ALP)

Alkali fosfatase (ALP) adalah grup enzim yang dihasilkan oleh hepar,
tulang, usus, plasenta, dan ginjal (tubulus proksimal). ALP akan meningkat dalam
plasma pada keadaan obstruksi saluran empedu, kolestatik intrahepatik, sirosis
hepatis, fatty liver, tumor hepar, metastase hepar, hepatitis, dan intoksikasi obat
(Sherlock, 1979). Alkaline phosphatase (ALP) merupakan enzim yang banyak
ditemukan di hepar (isoenzim ALP-1) dan tulang (isoenzim ALP-2), serta sedikit
diproduksi oleh sel-sel pada saluran pencernaan, plasenta, dan ginjal. ALP sering

27
digunakan untuk mendeteksi penyakit yang berhubungan dengan organ-organ
tersebut.

Kadar ALP dalam darah sangat bervariasi tergantung dari jenis kelamin, usia,
kehamilan, morfometrik tubuh, serta obat-obatan. Peningkatan kadar ALP dapat
terjadi antara lain karena :

1. Obat-obatan seperti glukokortikoid dan antikonvulsan.

2. Pengaruh usia. Kadar ALP tertinggi terdapat pada bayi yang baru lahir,
pada usia 10-11 tahun untuk anak perempuan dan 13-14 tahun untuk anak
laki-laki.
3. Penyakit-penyakit seperti gangguan hepatobilier, hyperadrenocorticism,
dan peningkatan aktivitas osteoblas.

2.10.3 Run-related transcription factor 2 (RUNX2)

Protein runx2 pertama kali terdeteksi pada preosteoblas, dan ekspresi

diregulasi dalam osteoblas imatur, tetapi diturunkan regulasi pada osteoblas
dewasa. Runx2 adalah faktor transkripsi pertama yang diperlukan untuk
penentuan garis turunan osteoblast. Runx2 menginduksi diferensiasi sel
mesenkimal multipoten menjadi osteoblas yang belum matang, mengarahkan
pembentukan tulang yang belum matang, tetapi Runx2 menghambat pematangan
osteoblas dan pembentukan tulang yang matang. Biasanya, tingkat protein Runx2
dalam osteoblas berkurang selama perkembangan tulang, dan osteoblas
memperoleh fenotipe matang, yang diperlukan untuk pembentukan tulang matang.
Lebih jauh, Runx2 memicu ekspresi gen matriks tulang utama selama tahap awal
diferensiasi osteoblas, tetapi Runx2 tidak penting untuk pemeliharaan ekspresi
gen ini dalam osteoblas dewasa (Bruderer M, et al, 2014).

Mekanisme yang bertanggung jawab atas regulasi gen Runx2 sendiri baru
saja mulai dipahami. Sebelumnya diasumsikan bahwa Runx2 mengatur gen
osteogenik dimediasi semata-mata oleh kadar protein Runx2, dan karenanya kadar
mRNA. Asumsi ini didasarkan pada data yang dikumpulkan dari model non-
manusia (biasanya tikus). Studi terbaru miliki menunjukkan bahwa kadar Runx2

28
selama in vitro diferensiasi osteoblas manusia primer tidak menunjukkan
perubahan besar, sedangkan kadar gen hilir seperti sialoprotein tulang dan alkaline
phosphatase meningkat secara dramatis. Data menunjukkan itu Level runx2
mRNA diekspresikan secara konstitutif, dengan kurangnya korelasi antara Runx2
mRNA / tingkat protein dan perolehan fenotip osteoblas (Kirkham GR and
Cartmell SH, 2007).

2.10.4 Collagen 1 Alpha 1 (Coll11)

Gen Coll11 memberikan instruksi untuk membuat bagian dari molekul

besar yang disebut kolagen tipe I. Kolagen adalah keluarga protein yang
memperkuat dan mendukung banyak jaringan dalam tubuh, termasuk tulang
rawan, tulang, tendon, kulit, dan bagian putih mata (sklera). Kolagen tipe I adalah
bentuk kolagen paling melimpah di tubuh manusia. Komponen kolagen tipe I
yang disebut rantai pro-α1 (I) diproduksi dari gen Coll11. Kolagen dimulai
sebagai molekul prokolagen seperti tali yang masing-masing terdiri dari tiga
rantai. Kolagen tipe I terdiri dari dua rantai pro-α1 (I) dan satu rantai pro-α2 (I)
(yang dihasilkan dari gen Coll12). Molekul prokolagen tiga-untai diproses oleh
enzim di luar sel untuk membuat kolagen dewasa. Molekul-molekul kolagen
kemudian mengatur diri mereka sendiri menjadi fibril-fibril panjang dan tipis
yang membentuk interaksi stabil (ikatan silang) satu sama lain dalam ruang-ruang
di antara sel-sel. Cross-link menghasilkan pembentukan serat kolagen tipe I yang
sangat kuat (Gastelbondo,2018).

2.10.5 OSTERIX (OSX)

Osterix(OSX) adalah factor transkripsi yang mengandung zinc finger yang
penting untuk diferensiasi osteoblast dan pembentukan tulang, terutama di
ekspresikan pada semua tulang dalam masa perkembangan. Jika tidak ada osterix
maka tidak ada tulang kortikal dan trabekula yang terbentuk melalui
intramembran atau osifikasi endochondral. Selama pembentukan tulang
endochondral yang normal, degradasi matriks tulang rawan yang termineralisasi
oleh osteoclast dan deposisi dari matriks tulang terjadi dengan koordinasi ketat.
Pada kondisi tidak ada OSX, sel mesenkim dari periosteum dengan pembuluh

29
darah menginvasi matriks mineral dari daerah kondrosit yang mengalami
hipertrofi. Sel mesenkimal yang bermigrasi dengan osteoclast dan pembuluh
darah tidak dapat mendeposit matriks tulang, sehingga tidak terjadi penulangan
pada matriks dengan mesenkim (Kazuhisa et al, 2012).
Penelitian yang dilakukan oleh Ying Cao.,Et al.2008 menunjukan adanya
down regulasi pada level transkripsional oleh OSX terhadap ekspresi dan produksi
dari IL-1α, suatu sitokin yang menstimulasi pembentukan osteoklas dengan
memproduksi RANKL oleh sel stromal sumsum tulang dan osteoblast. Sitokin
seperti IL-1α, IL-6, IL-11, dan prostaglandin E2 menunjukan partisipasi dalam
proses bone remodelling dengan menginduksi RANKL dan pembentukan
osteoklas. Karena itu perubahan dari kadar sitokin ini dapat mempengaruhi bone
lysis (Ying Cao et al, 2008)

2.11 Kulit Buah Manggis

Manggis merupakan tanaman buah berupa pohon yang berasal dari hutan
tropis yang teduh dikawasan Asia Tenggara, yaitu hutan belantara Malaysia atau
Indonesia. Manggis memiliki nama latin Garcinia mangostana L dan termasuk ke
dalam keluarga Clusiaceae. Buah manggis dikenal dengan sebutan Queen fruit
atau ratunya buah. Hasil penampisan fitokimia ekstrak kulit buah manggis
menunjukkan bahwa ekstrak tersebut mengandung komponen kimia alkaloid,
saponin, tanin, fenolik, flavonoid, triterpenoid, steroid dan glikosida.
Dibandingkan dengan buah yang lainnya, kandungan antioksidan dalam kulit
manggis juga jauh lebih tinggi. Kulit manggis pun dapat dipakai untuk kemoterapi
dan untuk mengurangi dampak dari kemoterapi (Lih-Geeng et al, 2008).
Komponen aktif utama dari buah manggis disebut xanthones. Xanthone
adalah sejenis senyawa polifenol yang secara biologis aktif dan secara struktural
mirip dengan bioflavanoids. Senyawa ini jarang terdapat di alam, paling banyak
ditemukan hanya dalam dua keluarga tanaman. 200 jenis xanthones alami yang
sejauh ini telah diidentifikasi. Sekitar 40 jenis diantaranya telah ditemukan dalam
buah manggis. Xanthone dan turunannya telah terbukti memiliki beberapa
manfaat, termasuk anti-inflamasi dan anti-alergi (Cui et al, 2010). Berdasarkan
studi literatur penelitian Garcinia mangostana L mempunyai aktivitas anti

30
inflamasi adalah -mangosten dan -mangosten yang merupakan senyawa utama
dari xanthone yang menghambat produksi enzim siklooksigenase(COX) yang
merupakan penyebab radang (Jung dkk, 200. Beberapa uji pra-klinik pada hewan
coba tikus menunjukkan zat aktif gamma mangostin (derivat xanthone) secara
langsung menghambat aktivitas enzim Ikappa B kinase mencegah proses
transkripsi gen COX-2 (gen target NF-kappaB), menurunkan produksi PGE2
dalam proses inflamasi (Middleton, 2000). Penelitian sebelumnya membuktikan
bahwa xanthone dalam ekstrak kulit manggis menghambat aktivitas ROS
intraselular. Inhibisi aktivitas ROS intraselular akan menghambat aktivitas enzim
yang mengaktifkan nuclear factor kappa B (NF-kB) untuk translokasi ke dalam
nukleus dan meregulasi mediator pro-inflamasi seperti IL-1, IL-6, TNF-alpha
(Ibrahim, 2014).

2.12 Methyl-Thiazol-Tetrazolium atau MTT Assay

MTT assay merupakan alat yang berfungsi untuk melihat viabilitas sel.
NAD(P)H MTT assay merupakan Methyl-Thiazol-Tetrazolium suatu metode 3-
(4,5-dimethylthiazol-2-il)-2,5-diphenyltetrazolium bromide. Metode ini
merupakan metode menggunakan uji enzimatik yang bertujuan untuk mengukur
kemampuan sel hidup berdasarkan aktivitas mitokondria dari kultur sel. Prinsip
dari metode MTT adalah terjadinya reduksi garam kuning tetrazolium oleh sistem
reduktase. Suksinat tetrazolium yang termasuk dalam rantai respirasi dalam
mitokondria sel-sel yang hidup membentuk Kristal formazan berbentuk Kristal
formazan berbentuk Kristal formazan berwarna ungu dan tidak larut air.
Penambahan reagen stopper bersifat detergenik akan melarutkan Kristal berwarna
ini yang kemudian diukur absorbansinya menggunakan ELISA Reader.
Pengukuran menggunakan alat spectrophotometer menghasilkan data
berupa angka-angka optical density. Angka optical density tersebut merupakan
nilai dari kepekaan yang ditunjukkan dengan warna ungu pada kultur sel tersebut.
Semakin pekat warna yang dihasilkan, maka semakin tinggi angka optical density
nya. Intensitas warna ungu yang terbentuk merupakan gambaran proporsional
dengan jumlah sel hidup. Sehingga jika intensitas warna ungu semakin besar,
maka diartikan bahwa jumlah sel hidup semakin banyak.

31
2.13 Wound Healing Assay
Uji scratch assay secara in vitro adalah metode yang mudah, murah dan
dikembangkan untuk mengukur migrasi sel secara in vitro. Langkah awal dengan
membuat "goresan" dalam sel monolayer, mendokumentasikan gambar di awal
scratch dan secara berkala selama migrasi sel untuk menutup goresan, dan
membandingkan gambar untuk mengukur tingkat migrasi sel. Dibandingkan
dengan metode lain, uji ini sangat sesuai untuk mempelajari tentang efek interaksi
sel-matriks dan sel-sel pada migrasi sel, melihat pola migrasi sel selama
penyembuhan luka secara in vivo dan kompatibel dengan pencitraan sel hidup
selama migrasi secara intraselular. Selain memonitor migrasi populasi sel
homogen, metode ini juga telah diadopsi untuk mengukur migrasi sel individual di
tepi awal goresan. Uji ini biasanya menggunakan waktu yang beragam mulai dari
beberapa jam setelah goresan sampai 24 jam.( Chi Liang et al,2007)

2.14 Polymerase Chain Reaction (PCR)

PCR adalah suatu metode enzimatis untuk melipatgandakan suatu sekuen
nukleotida tertentu secara in vitro. Metode PCR sangat sensitif, sehingga dapat
digunakan untuk melipatgandakan satu molekul DNA spesifik. Metode PCR dapat
melipatgandakan suatu fragmen DNA sebesar 200.000 kali setelah dilakukan 20
siklus reaksi selama 220 menit. Empat komponen utama pada proses PCR adalah
(1) Template DNA, yaitu fragmen DNA yang akan dilipatgandakan, (2)
oligonukleotida primer, yaitu suatu sekuen oligonukleotida pendek (25 – 25 basa
nukleotida) yang digunakan untuk mengawali sintesis rantai DNA, (3)
deoksiribonukleotida trifosfat (dNTP), terdiri atas dATP, dCTP, dGTP, dTTP, dan
(4) enzim DNA polymerase, yaitu enzim yang melakukan katalisis reaksi rantai
DNA. Komponen lain yang juga penting adalah senyawa buffer (Yuwono, 2006).
Reaksi melipatgandakan suatu fragmen DNA dimulai dengan melakukan
denaturasi template DNA sehingga rantai DNA rantai ganda (double stranded)
akan terpisah menjadi rantai tunggal (single stranded). Denaturasi DNA dilakukan
dengan menggunakan panas (95oC) selama 1–2 menit, kemudian suhu diturunkan
menjadi 55oC sehingga primer akan “menempel” (annealing) pada cetakan yang
telah terpisah menjadi rantai tunggal. Primer akan membentuk jembatan hidrogen

32
dengan cetakan pada daerah sekuen yang komplementer dengan sekuen primer.
Proses annealing biasanya dilakukan selama 1 – 2 menit. Suhu inkubasi kemudian
dinaikkan menjadi 72oC selama 1,5 menit, pada suhu ini DNA polymerase akan
melakukan proses polimerisasi rantai DNA yang baru berdasarkan informasi yang
ada pada daerah cetakan. DNA rantai ganda yang terbentuk selajutnya akan 20
didenaturasi lagi dengan menaikan suhu inkubasi menjadi 95oC. Rantai DNA
yang baru terbentuk selanjutnya akan berfungsi sebagai cetakan bagi reaksi
polimerisasi berikut. Reaksi-reaksi diulang sampai 25–30 siklus. Banyaknya
siklus amplifikasi tergantung dari konsentrasi DNA target di dalam campuran
reaksi, akan tetapi, pada umumnya konsentrasi DNA Taq polimerisasi terbatas
setelah 25–30 siklus (Yuwono, 2006.; Sambrook et al., 1989).

2.15 Real-Time PCR

Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) merupakan salah satu
teknik yang paling banyak digunakan dalam biologi molekuler modern. RT-PCR
memiliki berbagai keunggulan untuk amplifikasi atau perbanyak DNA fragmen
yang dapat diamati secara tepat untuk menentukan konsentrasi DNA yang
terdapat dalam sampel (Higuchi, 1993).
Prinsip proses amplifikasi menggunakan real-time PCR dengan cara
mengukur peningkatan pewarna (dye) fluoresen yang berpendar ketika terikat
dengan double-stranded DNA. Oleh karena sifat inilah pertumbuhan fragmen
DNA hasil amplifikasi sapat diikuti secara seketika, semakin banyak DNA yang
terbentuk semakin tinggi pula intensitas fluoresensi yang dihasilkan Quantitative
PCR dimungkinkan dapat mendeteksi secara akurat konsentrasi DNA hingga
hitungan pictogram atau setara dengan sel tunggal karena sensitifitas dye yang
sangat tinggi. Hasil peningkatan fluoresensi digambarkan melalui kurva
amplifikasi yang menunjukkan 3 fasa yaitu fase awal, fase eksponensial atau
puncak dan fasa plateau atau stabil (Hoongbao et al, 2016).
Terdapat tiga komponen utama dalam instrument RT-PCR yaitu thermal
block cycler sebagai akurasi data, optical system sebagai deteksi data, dan
software sebagai analisis data. Real-time PCR juga dapat menganalisis banyak

33
sampel dalam waktu bersamaan menggunakan multiwell plates (Soong R et al,
2001).

2.16. Osteoblastic cell line MC3T3-E1

MC3T3-E1 mewakili garis sel osteoblast popular mewakili fenotip pra
osteoblastik. Beberapa sub-klon telah dibentuk dari yang baru lahir ini garis sel
klonal calvaria tikus. Terdapat 5 diantaranya subklon 4,8,11,14, dan 26. Sub-klon
mineralisasi menyatakan tingkat tinggi mRNA untuk BSP, osteocalcin, dan
reseptor PTH/ PTHrP. Dari klon-klon ini hanya sub-klon 4 dan 14 yang
ditunjukkan untuk membuat mineral matriks ekstraseluler kolagen dan mirip
dengan osteogenesis intramembran in vivo.

2.17 Lipopolisakarida (LPS)

Lipopolisakarida merupakan memberan luar bakteri gram negative, yang

terdiri dari kompossi endotoksin terdiri ata rantai polisakarida (Rantai O).
Endotoksin bakteri gram negative mangikat larutan LPS-Binding protein atau
membrane luar sel mononukleus. Pengaruh interaksi antara monosit, makrofag
dan netrofil melepas mediator inflamasi seperti Interleukin (IL), Interferon (IF),
Platelet activating factor (PAF) dan Tumor necrosis factor (Naqvi, 2015).

Gambar 5. Komponen Membran luar gram negative (LPS) (Naqvi, 2015).

Metabolit bakteri dan produk toksik dapat merusak jaringan dan

merangsang terjadinya inflamasi, di antaranya lipopolisakarida endotoksin (LPS)

34
yang dikandung dinding sel bakteri gram negatif dan dikeluarkan ketika bakteri
mati.8 Bakteri agresif penyebab periodontitis terutama adaMetabolit bakteri dan
produk toksik dapat merusak jaringan dan merangsang terjadinya inflamasi, di
antaranya lipopolisakarida endotoksin (LPS) yang dikandung dinding sel bakteri
gram negatif dan dikeluarkan ketika bakteri mati. Bakteri agresif penyebab
periodontitis terutama adalah Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis).
P.gingivalis (viable atau konstituennya) teridentifikasi pada plak aterosklerotik
manusialah Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis). P.gingivalis (viable atau
konstituennya) teridentifikasi pada plak aterosklerotik manusia (Harazy, 2000).

35
 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Jenis penelitian merupakan penelitian experimental laboratories.

3.2 Rancangan Penelitian

Rancangan penelitian yang digunakan adalah post test only control group

design.

3.3 Sampel dan Besar Sampel

3.3.1 Jenis Sampel

Sampel penelitian menggunakan kultur sel human gingival fibroblast yang

diperoleh dari laboratorium Tropical Disease Center Universitas Airlangga
Surabaya dan Kultur sel Osteoblastic cells line MC3T3-E1 yang didapatkan dari
Universitas Hiroshima Jepang

3.3.2 Besar Sampel

Pengambilan sampel dilakukan secara purposive sampling. Penentuan besar

sampel penelitian ditentukan dengan menggunakan rumus Lemeshow:

2
2𝛿 2 (𝑍1−𝛼 + 𝑍1−𝛽 )
𝑛=
(𝜇1 − 𝜇2 )2

n:2

Keterangan:

𝑛 : banyaknya sampel tiap kelompok

𝛿 : standar deviasi kelompok kontrol

36
𝑍1−𝛼 : nilai pada distribusi normal standar yang sama denga tingkat kemaknaan

(untuk = 0.05 adalah 1.64)

𝑍1−𝛽 : nilai pada distribusi normal standar yang sama dengan power test sebesar

yang diinginkan (untuk β= 0.10 adalah 1.282)

(𝜇1 − 𝜇2 )2 : beda rata-rata masing-masing kelompok

Dalam rumus ini diperoleh besar sampel minimal adalah 2.

3.4 Variabel Penelitian

a. Variabel Bebas

Ekstrak kulit manggis

b. Variable Tergantung

Ekspresi IL-1, IL-6, IL-10, TNF α, dan CRP

Ekspresi Col1α, Osterix, Runx-2, Bsp dan ALP.

Ekspresi PDGF, FGF, VEGF, TGF-β

c. Variable Terkendali

- Kultur sel Human Gingiva Fibroblast

- Kultur sel Osteoblastic cells line MC3T3-E1
- Kriteria sampel
- Volume pemberian ekstrak kulit manggis
- Tempat pemeliharaan kultur sel dalam kondisi yang sama
- Lingkungan dengan temperature, suhu kamar (25o-27o C)
- Pemeriksaan dengan menggunakan RT-PCR dan Realtime-PCR

37
3.5 Definisi operasional

3.5.1 Human gingival fibroblast

Human gingival fibroblast (HGnF) adalah sel yang diisolasi dari human gingiva, di

cryopreserved pada passage one dan dalam kondisi beku. Bebas dari HIV-1, HBV, HCV,

mycoplasma, bakteri, yeast dan fungi.

3.5.2 Osteoblastic cells line MC3T3-E1

MC3T3-E1 Adalah sel precursor osteoblast yang berasal dari tulang Calvaria Mus

Musculus ( Mouse C57BL/6 calvaria). Dengan medium MEM α + 2mM Glutamine + 10%

Foetal Bovine Serum (FBS)

3.5.3 LPS

Lipopolisaccharides ( LPS ) adalah komponen karakteristik dari dinding sel bakteri gram

negative, terlokalisasi di lapisan luar membrane dan termasuk dalam golongan tidak

berkapsul, terpapar pada permukaan sel. LPS berkontribusi pada integritas membrane luar,

dan melindungi sel terhadap garam empedu dan antibiotic lipofilik.

3.5.4 Ekstrak Kulit manggis

Ekstrak kulit manggis adalah ekstrak yang dibuat dengan 200gram serbuk kulit manggis

(Garcinia mangostana L.) yang dibasahi dengan pelarut DMSO 0,1% dan dishacker selama

2x24 jam, disaring dengan 3x penyaringan menggunakan kain saring, dan di rotary

evaporator dengan waktu 12 jam menjadi 40cc ekstrak.

38
3.5.5 Ekspresi marker penanda inflamasi

3.5.5.1 IL-1

Interleukin-1A Mouse Recombinant yang diproduksi di E.Coli adalah rantai Polipeptida

tunggal, non-glikosilasi yang mengandung 156 asam amino dan memiliki massa molekul

17,9 kDa. IL-1A dimurnikan dengan teknik kromatografi eksklusif. Interleukin 1 alpha

(IL1α) juga dikenal sebagai hematopoietin 1 adalah sitokin dari keluarga interleukin 1

yang pada manusia dikodekan oleh gen IL1A. IL1α diproduksi terutama oleh makrofag

teraktivasi, serta neutrofil, sel epitel, dan sel endotel. Memiliki aktivitas metabolik,

fisiologis, hematopoietik, dan memainkan salah satu peran sentral dalam pengaturan

respons imun. Ia berikatan dengan reseptor interleukin-1 dan di jalur yang mengaktifkan

tumor necrosis factor-alpha

3.5.5.2 IL-6

Interleukin-6 Mouse Recombinant yang diproduksi di E.Coli adalah rantai polipeptida non-

glikosilasi tunggal yang mengandung 187 asam amino dan memiliki massa molekul 21709 Dalton.

IL-6 dimurnikan dengan teknik kromatografi eksklusif. Interleukin-6 adalah sitokin proinflamasi

yang kuat, utamanya diproduksi oleh sel T teraktivasi dan bermacam sel lainnya termasuk sel

endotel dan makrofag. IL-6 mempengaruhi limfosit B dan T dan telah terbukti memiliki peran

dalam pertahanan inang, reaksi fase akut, respon imun dan hematopoiesis.

3.5.5.3 IL-10

IL10 adalah sitokin yang diproduksi terutama oleh monosit dan pada tingkat lebih rendah oleh

limfosit. Sitokin ini memiliki efek pleiotropik dalam imunoregulasi dan peradangan. Mendown-

regulasi ekspresi sitokin Th1, MHC kelas II Ags, dan molekul costimulatory pada makrofag. Ini

juga meningkatkan kelangsungan hidup sel B, proliferasi, dan produksi antibodi. Sitokin ini dapat

memblokir aktivitas NF-kappa B, dan terlibat dalam regulasi jalur pensinyalan JAK-STAT.

39
3.5.5.3 TNF α

Tumor necrosis factor-α (TNF-α) adalah sitokin proinflamasi yang kuat yang memainkan peran

sentral dalam aktivitas antitumor, modulasi imun, peradangan, anoreksia, cachexia, syok septik,

replikasi virus, dan hematopoiesis.

TNF-α diekspresikan oleh beragam sel, dengan banyak agen induktif dan supresif. Terutama, TNF-

α diproduksi oleh makrofag dalam menanggapi tantangan imunologis seperti bakteri

(lipopolysaccharides), virus, parasit, mitogen dan sitokin lainnya

3.5.5.4 CRP

C-Reactive Protein (CRP), juga dikenal sebagai Pentraxin 1, adalah protein pentamerik yang

disekresikan yang berfungsi sebagai sensor dan aktivator untuk respon imun bawaan. Pada

manusia, itu adalah protein fase akut utama; konsentrasinya yang beredar meningkat secara

dramatis pada permulaan peradangan.

3.5.6 Ekspresi marker penanda osteogenesis

3.5.6.1 Osterix

Osterix (Osx) adalah faktor transkripsi khusus osteoblas yang penting untuk diferensiasi osteoblas

dan pembentukan tulang. Tikus knock-out Osx kekurangan tulang sepenuhnya. Satb2 sangat

penting untuk diferensiasi osteoblas sebagai faktor transkripsi pengikatan kaya AT

3.5.6.2 Coll1α

Kolagen tipe I bertanggung jawab untuk stabilitas mekanik, elastisitas, kekuatan dan

ketangguhan, diamati pada tendon, ligamen, kulit, kornea, tulang, dentin dan banyak

jaringan lainnya. Kolagen tipe 1 memiliki peran struktural dalam matriks ekstraseluler

dengan memberikan dukungan mekanis dan ketahanan terhadap ketegangan. Beberapa

40
penyakit genetik yang lebih penting, secara langsung atau tidak langsung melibatkan jenis

kolagen ini termasuk sebagian besar kasus osteogenesis. Kolagen tipe I berkontribusi

maksimal pada kandungan protein berserat pada mamalia. Protein ini memiliki struktur

silinder memanjang dengan ujung meruncing, memiliki heliks tangan kiri dengan tiga

helai polipeptida tipe-poliproline II.

3.5.6.3Runx-2

Faktor transkripsi yang terlibat dalam diferensiasi osteoblastik dan morfogenesis kerangka.

Penting untuk pematangan osteoblas dan osifikasi intramembran dan endokhondral. CBF

berikatan dengan situs inti, 5'-PYGPYGGT-3 ', dari sejumlah peningkat dan promotor,

termasuk virus leukemia murine, penambah poliamavirus, peningkat reseptor sel-T,

osteocalcin, osteopontin, sialoprotein tulang, alfa 1 (I) kolagen , Promotor LCK, IL-3 dan

GM-CSF. Menghambat aktivasi transkripsi tergantung KAT6B (Dengan kesamaan).

Dalam osteoblas, mendukung aktivasi transkripsi: bersinergi dengan SPEN / MINT untuk

meningkatkan aktivasi yang dimediasi FGFR2 dari elemen responsif FGF osteocalcin FGF

(OCFRE)

3.5.6.4 BSP

BSP (Bone Sialoprotein) adalah komponen dari jaringan mineral seperti tulang, dentin,

sementum dan kartilago terkalsifikasi. BSP adalah komponen signifikan dari matriks

ekstraseluler tulang dan telah disarankan untuk membentuk sekitar 8% dari semua protein

non-kolagen yang ditemukan dalam tulang dan sementum. sebagian besar spesifik untuk

jaringan mineral dan diekspresikan selama pembentukan awal tulang dan sementum.

41
3.5.6.5 ALP

ALP (Alkaline phosphatase) adalah enzim yang ditemukan di beberapa jaringan di seluruh

tubuh. Konsentrasi ALP tertinggi hadir dalam sel -sel yang terdiri dari tulang dan hati.

Peningkatan kadar ALP dalam darah paling sering disebabkan oleh penyakit hati atau

gangguan tulang. Tes ini mengukur tingkat ALP dalam darah.

3.6 Tahapan Penelitian

Ekstrak yang didapatkan dari proses ekstraksi kulit buah manggis jenis Garcinia

mangostana dengan metode maserasi yang dilarutkan dalam larutan DMSO 0,1%

(Poelongan & Praptiwi, 2010)

1. Pemeliharaan kultur sel thowing human gingival fibroblast dilakukan mulai dari

membangunkan sel (selama ± 2 minggu).

1. Sel thawing human gingival fibroblast dilakukan multiple scratch dan diinkubasi

selama 24 jam

2. Masing-masing sampel diberi ekstrak kulit manggis sebanyak 800 µg/ml pada

kelompok treatment dan diinkubasi selama 24 jam di dalam inkubator 37ºC

3. Setelah 24 jam maka setiap sampel dilakukan ekstraksi RNA dan protein.

4. Dilakukan RT-PCR dengan primer PDGF, FGF, VEGF dan TGF-β.

5. Dilakukan pemeriksaan western blotting dengan antibody PDGF, FGF, VEGF,

TGF-β, Osterix, Runx-2 dan ALP.

6. Dilakukan Immunohistokimia pada tepi guratan wound healing assay dengan

antibody PDGF, FGF, VEGF, TGF-β, Osterix, Runx-2 dan ALP

7. Dilakukan penelitian wound healing assay dan dilihat wound closure setiap 24 jam,

48 jam dan 72 jam.

42
 8. Hasil dari RT-PCR kemudian dilakukan elektroforesis dengan menggunakan gel

elektroforesis dan dilihat dengan bantuan sinar ultraviolet untuk melihat katebalan

dari band.

9. Hasil dari immunohistokimia akan dihitung setiap sel yang memancarkan protein

PDGF, FGF, VEGF, TGF-β, Osterix, Runx-2 dan ALP

Ekstrak yang didapatkan dari proses ekstraksi kulit buah manggis jenis Garcinia

mangostana dengan metode maserasi yang dilarutkan dalam larutan DMSO 0,1%

(Poelongan & Praptiwi, 2010)

1. kultur sel Osteoblastic cells line MC3T3-E1 dilakukan mulai dari membangunkan

sel (selama ± 2 minggu)

2. Kultur sel Osteoblastic cells line MC3T3-E1 diberi perlakuan LPS

(Lipopolisakarida) sehingga terjadi respon inflamasi selama 24 jam.

3. Masing-masing sampel diberi ekstrak kulit manggis sebanyak 800 µg/ml pada

kelompok treatment dan diinkubasi selama 48 jam di dalam inkubator 37ºC

4. Setelah 72 jam maka setiap sampel dilakukan ekstraksi RNA

5. Kultur sel Osteoblastic cells line MC3T3-E1 dilakukan RT-PCR dengan untuk

melihat marker osteogenesis: Osterix, Col1α, Runx-2, Bsp dan ALP

6. Kultur sel Osteoblastic cells line MC3T3-E1 dilakukan RT-PCR dengan untuk

dmelihat marker inflamasi: IL-1, IL-6, IL-10, TNF α, dan CRP.

7. Dilakukan penelitian dengan waktu perlakuan pada sampel setiap 6 jam, 12 jam,

24 jam, 48 jam dan 72 jam.

8. Hasil dari RT-PCR kemudian dilakukan elektroforesis dengan menggunakan gel

elektroforesis dan dilihat dengan bantuan sinar ultraviolet untuk melihat katebalan

dari band.

43
3.7 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan pada tahun 2019 mulai bulan Agustus sampai Desember, dengan

rincian tempat penelitiannya, adalah:

a. Pembuatan ekstrak di Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas

Airlangga.

b. Pemeliharaan, pemberian perlakuan serta analisis hasil pada kultur sel thowing

human gingival fibroblast dilakukan di Tropical Disease Center Universitas

Airlangga.

c. Pemeliharaan, pemberian perlakuan serta analisis hasil pada kultur sel osteoblastic

cells line MC3T3-E1 dilakukan di Hiroshima University Japan

3.8 Alat dan Bahan penelitian

3.8.1 Alat Penelitian

a. PCR cycle (Gene Amp, PCR System 2400, Perkin Elmer)

b. Spectrophotometer (UV-Visible Spectrophometer, Shimatzu)

c. Electrophoresis

d. Centrifuge (Himac SCR 20B, Hitachi)

e. Ependorf micropipette White tips (0,5-10µl), yellow tips (10-100µl) dan blue

tips (100-1000 µl)

f. Tips Micropipet White, Yellow dan Blue

g. Transluminator UV

h. Kamera digital dengan resulusi 3,2 megapixel atau diatasnya

i. Transsonic 310 (Elma)

j. Spinator (Millipore)

k. Tabung eppendorf 0,5cc dan 1,5cc

l. Timbangan elektrik (Libror EB-3200B,Shimadzu)

44
3.8.2 Bahan Penelitian

A. Bahan untuk ekstraksi RNA:

a. DNAzol® Reagent (Organic method) 1 ml

b. larutan 100% ethanol 0,5 ml

c. larutan 75% ethanol 0,8 – 1 ml

d. Distilled water (Sigma) 25 – 30 µl

B. Bahan untuk PCR:

a. PCR Mix (12,5 µl) yang terdiri: dNTP (ATP, CTP, TTP, GTP), MgCl2 dan

Taq Polimerase.

b. DW sigma (Nuclease Free water)

c. Primer forward dan Reverse

PDGF ( 489 bp ) :

Forward : 5’ –CTGGGCACGTGAGGGCAGCGTCT-3’

Reverse :5’ –TGCCGGAAGTCCATCCTCACAGTC-3’

FGF ( 453 bp ) :

Forward : 5’ –CCTAGTGGATGATAAGAATAATCAGTATG-3’

Reverse :5’ –GGACAGATGATAAATACATAGGATGGATGG-3’

VEGF ( 478 bp ) :

Forward : 5’‐UGUAGCAGCCAGGGCCUAGAGAAGG‐3’

Reverse :5’‐TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’

TGF-β ( 455 bp ) :

Forward : 5’‐ACCACAGTCCATGCCATCAC‐3’

Reverse : 5’‐TGGAGGACCTGGTAGAGGAA‐3’

ALP ( 97 bp ) :

45
Forward : GGCTTCTTCTTGCTGGTGGAA

Reverse : CCTGGTCCATCTCCACTGCT

Coll1 α (137 bp):

Forward : GCTTCTACCTCAGCCGCAT

Reverse : TTTCACCACATCAGACACGCT

BSP (128 bp):

Forward : TTTGGAGAGTCCAGAGCGAC

Reverse : TAAAGGCCATTCCACCACCA

RUNX2 (168 bp):

Forward : ATCCCCATCCATCCACTCCA

Reverse : AGTTCTGAAGCACCTGCCTG

Osterix ( 131 bp)

Forward : 5′-GCCTACTTACCCGTCTGACTTT-3′

Reverse : 5′-GCCCACTATTGCCAACTGC-3′

IL-1 ( 152 bp )
Forward : CAA CCA ACA AGT GAT ATT CTC CAT G

Reverse : GAT CCA CAC TCT CCA GCT GCA

IL-6 (141 bp )
Forward : CAG AAT TGC CAT CGT ACA ACT CTT TTC TCA

Reverse : AAG TGC ATC ATC GTT GTT CAT ACA

IL-10 ( 190 bp )
Forward : GGT TGC CAA GCC TTA TCG GA

Reverse : ACC TGC TCC ACT GCC TTG CT

TNF α ( 155 bp )
Forward : GGGGCCACCACGCTCTTCTGTC

Reverse : TGGGCTACGGGCTTGTCACTCG

46
 CRP (440 )
Forward : TCGTATGCCACCAAGAGACAAGACA

Reverse : AACACTTCGCCTTGCACTTCATACT

C. Bahan Elektroforesis

a. 40% acrylamide:bis (19:1)

b. TEMED

c. TBE 0,5%

d. Marker 100 bp

e. Urea

f. Bind silane (methacryloxypropyltrimethoxysilane)

g. Distilled water (Sigma)

h. 10% Amonium Persulfat (APS)

i. Gel Slick®

j. 0,5% asam asetat dalam 95% ethanol

3.9 Cara Kerja

3.9.1 Pembuatan Ekstrak Kulit Buah Manggis

Kulit buah manggis yang baru diambil dari pohonnya ditimbang sebanyak 2500

gram, dikuliti, ditinggal batangnya saja dan ditimbang lagi hingga 1000 gram. Kemudian

diblender hingga halus dan ditimbang lagi hingga tinggal 850 gram. Ditambahkan

aquadest steril sebanyak 150 cc, kemudian disaring menggunakan alat Bugner yang

dihubungkan dengan Vacuum pump (Gast, USA) hingga tinggal 820 cc ekstrak kulit buah

manggis. Dari hasil freeze dryed, bubuk ekstrak kulit buah manggis ditimbang kembali

hingga tinggal 2.7 gram. Hasil dari freeze dryed kulit buah manggis diambil sebanyak 0.5

47
gram kemudian dihaluskan untuk digunakan dalam penelitian ini. Sedangkan sisanya

disimpan di dalam botol dan ditutup menggunakan kertas perak (Farmakope, 1995).

3.9.2 Kultur sel

3.9.2.1 Human gingival Fibroblast

Kultur sel Human Gingiva Fibroblast dibangunkan dari keadaan beku. Sel kemudian di

kultur kedalam medium DMEM + 10% FBS + 1% Streptomycin dan di inkubasi kedalam

inkubator 37ºC selama 1 bulan untuk mendapatkan hasil yang maksimal.

3.9.2.2 Osteoblastic clls line MC3T3-E1

Kultur sel Osteoblastic clls line MC3T3-E1 dibangunkan dari keadaan beku. Sel kemudian

di kultur kedalam medium DMEM + 10% FBS + 1% Streptomycin dan di inkubasi

kedalam inkubator 37ºC selama 1 bulan untuk mendapatkan hasil yang maksimal.

3.9.2.3 Pemberian Ekstrak Kulit Buah Manggis Pada Kultur sel Human gingival

Fibroblast dan Osteoblastic cells line MC3T3-E1.

Ekstrak kulit buah manggis sebanyak 600 µg/ml di campur dengan medium yang

berisi sel Human gingival Fibroblast dan Osteoblastic cells line MC3T3-E1

pada 6 wells dish dan di inkubasi selama 24 jam didalam inkubator 37ºC.

3.10 Polymerase Chain Reaction ( PCR )

3.10.1 Ekstraksi RNA

1. Hasil irigasi ditambah 1 ml RNAzol® Reagent, keduanya dicampur dengan cara

di-vortex, kemudian inkubasi selama 5 menit pada suhu kamar. Selanjutnya di

48
 centrifuge 10.000 rpm selama 10 menit temperatur 4 0C, diambil viscous

supernatant dan dipindahkan tabung baru.

2. Pada tabung baru tersebut ditambahkan 0,5 ml 100% ethanol (absolute), di bolak-

balik, di inkubasi pada suhu kamar selama 1-3 menit, centrifuge 4000 rpm selama

1-2 menit temperatur 40C. Supernatant dibuang dengan hati-hati agar RNA

(pelet) tidak ikut terbuang.

3. Pelet dicuci dengan 0,8-1 ml 75% ethanol sebanyak 2 kali dan setiap kali

pencucian tabung dibolak-balik sebanyak 3-6 kali.

4. Tabung diletakkan pada posisi tegak selama 0,5-1 menit, setelah itu ethanol 75%

dibuang dengan cara pipeting atau decanting. Pelet dikeringkan dengan cara

membiarkan tabung terbuka selama 5-15 detik.

5. Pelet yang berisi RNA tersebut dilarutkan dengan 25-30 µl DW, di-vortex

secukupnya, kemudian di simpan pada suhu -20º C.

3.10.2 Pengukuran kadar dan kemurnian RNA

Pengukuran kadar dan kemurnian RNA pada sampel penelitian yang sebelumnya

telah diekstraksi RNAnya menggunakan UV-spectrophotometer. Kemurnian RNA ini

diukur dengan nilai perbandingan serapan pada panjang gelombang 260 nm dan 280 nm.

Nilai panjang gelombang 260 nm digunakan untuk pengukuran kuantitas atau kadar RNA

dengan rumus berikut:

Kadar RNA = (A260 x faktor pengenceran x 50) μg/mL

Keterangan :

A260: nilai absorbansi sampel RNA pada panjang gelombang 260 nm

50 (Konversi Spectrophotometer): Nilai satu dalam satuan absorbansi gelombang 260 nm

sama dengan 50 µg/ml RNA.

49
Idealnya, nilai ratio (λ260 : λ280) yang didapatkan seharusnya berkisar antara 1.8 – 2.0

(RNA dikatakan murni atau kualitas RNA baik). Jika nilai ratio lebih kecil dari 1.8, berarti

RNA tersebut telah terkontaminasi dengan protein lain. Namun bila nilai ratio lebih besar

dari 2.0, ada RNA dalam sampel tersebut (QIAGEN, 2001; Jain, 2004; Moore et al, 2004;

Saili dkk., 2010).

3.10.3 Perancangan PCR primer PDGF-B, FGF-2, VEGF-A dan TGF-β1, IL-1, IL-6,

IL-10, TNF α, CRP, Col1α, Osterix, Runx-2, Bsp dan ALP.

Program PCR (Promega Corporation, 2010):

PCR Mix sebanyak 12,5 µl ditambah dengan kedua primer (masingmasing 2,5 µl).

Kemudian DNA dari lokus yang akan diperiksa (vWA). Setelah itu, tambahkan nuclease

free water sehingga volume total sebesar 25µl.

tahap I: - initial denaturation 96ºC selama 2 menit

- subsequent denaturation 94ºC selama 1 menit

- annealing 60ºC selama 1 menit - extension 70ºC selama 1 menit 30

detik

- cycle: 10 cycles

tahap II: - denaturation 90ºC selama 1 menit

- annealing 60ºC selama 1 menit ( Tergantung pada masing-masing

primer )

- extension 70ºC selama 1 menit 30 detik

50
3.10.4 Visualisasi hasil PCR dengan menggunakan elektroforesis pada gel

A. Pembuatan Gel Poliacrylamide

1. Masing-masing plat kaca dietsa pada satu sisi kemudian ditandai. Cuci dengan

ethanol 95% dan Kimwipes® sebanyak 2x pada bagian plat kaca yang panjang dan

yang pendek.

2. Aplikasikan 3ml larutan Gel slick® pada bagian plat kaca yang lebih panjang yang

telah dietsa kemudian diratakan pada seluruh permukaan dengan gerakan memutar

menggunakan lap kering.

3. Tunggu 5 menit sampai larutan Gel slick® mengering. Bersihkan kelebihan larutan

Gel Slick® yang masih tersisa dengan lap yang telah diberi distilled water, lalu

keringkan dengan Kimwipes® tissue.

4. Persiapkan larutan fresh binding dengan menambahkan 3µl silane kedalam 1 ml

asam asetat 0,5% didalam 95% ethanol pada tabung 1,5ml. Usap bagian plat kaca

pendek dengan Kimwipes® tissue yang telah disaturasi dengan larutan fresh

binding.

5. Tunggu 5 menit sampai larutan kering. Usap dengan ethanol 95% dan Kimwipes®

tissue 3-4x untuk membersihkan kelebihan larutan.

6. Hindari kontak antara 2 bagian plat kaca yang telah diberi perlakuan dengan

menempatkan spacer 0,4 mm.

7. Siapkan larutan acrylamide 6% dengan mencampurkan : Urea 31,50 gr ditambah

dengan distilled water 36,25 ml + 10x TBE buffer 3,75 ml+ 40 % acrylamide:bis

(19:1) 11,25 ml sehingga hasil akhir volume larutan sebesar 75 ml.

8. Saring larutan acrylamide dengan filter 0,2 micron.

9. Campurkan larutan acrylamide dengan TEMED 50µl dan 10% ammonium

persulfate 500µl.

51
 10. Tuangkan perlahan larutan acrylamide diantara plat kaca, hindari terbentuknya

gelembung udara dengan cara menuangkan perlahan dan konstan pada satu sisi.

11. Berikan cetakan atau comb pada gel diantara plat kaca (yang dipakai berisi 9

cetakan).

B. Running gel elektroforesis

1. Pindahkan comb dan spacer yang dipasang pada gel.

2. Tambahkan 0,5x TBE pada ruangan dibagian bawah alat elektroforesis.

3. Masukkan sampel DNA hasil PCR pada bagian cetakan di gel sebesar masing-

masing 10 µl.

4. Masukkan larutan marker sebesar 3 µl pada sumuran yang dikehendaki.

5. Running gel elektroforesis dengan listrik kekuatan 100 volt sampai larutan turun

kebawah seluruhnya.

3.11 PCR Real Time

1. Pengambilan ekstraksi RNA kultur sel dilakukan pada 24, 48 dan 72 jam, dengan cara:
a. Buang medium dari dish
b. Cuci dengan PBS steril
c. Ditambahkan Isogen II (250 µL) sebagai langkah awal ekstraksi RNA
d. Resuspensi untuk melepaskan sel dari dasar plate, kemudian diambil dan
dimasukkan ke microtube.
e. Microtube digoyang dengan shaker selama 15 detik.
f. Ditambahkan ddH2O (100 µL)
g. Microtube digoyang dengan shaker selama 15 detik.
h. Inkubasi 5 menit dalam suhu ruangan
i. Centrifuge 15.000 rpm selama 15 menit dengan suhu 4°C.
j. Didapatkan dua lapis cairan dalam microtube: lapisan bawah merupakan
Isogen II, lapisan atas berwarna jernih (aquaeous phase) merupakan sel.

52
 k. Ambil bagian lapisan yang jernih (280 µL) dan dipindahkan ke microtube
baru.
l. Ditambahkan isopropanol 230 µL.
m. Microtube digoyang dengan tangan selama 15 detik.
n. Inkubasi 10 menit dalam suhu ruangan.
o. Centrifuge 15.000 rpm selama 10 menit dengan suhu 4°C
p. Didapatkan pellet dan supernatan, buang supernatantnya.
q. Cuci pellet RNA dengan ethanol 75% 500 µL.
r. Centrifuge 15.000 rpm selama 3 menit dengan suhu 4°C
s. Keringkan pellet RNA di suhu ruangan selama 10 menit (tidak boleh terlalu
kering).
t. Ditambahkan RNAse free water 30µL.
u. Simpan dalam suhu -80°C.
2. Mengukur konsentrasi dan kemurnian RNA:
a. Teteskan 1.5 µL RNA pada bagian detektor RNA biodrop machine.
b. Catat kemurnian dan konsentrasi RNA yang terlihat pada monitor.
3. Proses Two Step Reverse Transcriptase PCR Konvensional menggunakan PCR kit
RiverTra Ace (Toyobo, Tokyo, Japan)
a. Membuat template cDNA dari masing-masing sampel:
- Membuat reverse transcription reaction mix dalam microtube berisi: Nuclease-
Free Water 9.75µl, RiverTra 5X Reaction Buffer 4µl, dNTPs 2µl, OligoDT 1µl,
ReverTra Ace 1µl, Recombinat RNasin Ribonuclease Inhibitor 0,25 µl untuk tiap
1 sampel. Pembuatan total master mix didapatkan dengan mengalikan jumlah
sample dengan tiap-tiap reagen.
- Mencampurkan 2µl RNA dan 18µl reverse transcription reaction mix dalam
microtube.
- Anneal dengan suhu 25°C selama 5 menit
- Extend dengan suhu 42°C selama 60 menit
- Inactivate Reverse Transcriptase dengan suhu 90°C selama 5 menit.
4. Running Real-Time Reverse Transcriptase PCR:
cDNA diamplifikasi dalam volume 10 l dengan 0.11 x SYBR Green I (CAMBREX,
Rockland, ME, USA), 0.2 mM/satuan dNTPs, 0.5 M/satuan tiap pasangan primer, dan
0.5unit Dream Taq Hot Start DNA polymerase (Thermo Fisher Scientific, Waltham,
MA) dalam kondisi sebagai berikut: 95°C selama 5 menit, dilanjutkan 55 PCR siklus

53
 pada 95°C selama 30 detik, 60°C selama 20 detik, dan 72°C selama 40 detik. Sinyal
fluorescent diukur secara real time, dan kemudian tiap sample dikuantifikasi menurut
petunjuk dari pabrik. Sekuens primer yang digunakan pada studi ini dapat dilihat pada
table 1. Untuk penghitungan normalisasi dari perbedaan tiap sampel total RNA di tiap
reaksi, Ribosomal protein L13a (Rpl13a) digunakan sebagai kontrol endogenous. Unit
arbitrary ditentukan dengan membagi konsentrasi tiap produk PCR dengan konsentrasi
produk PCR dari Rpl13a. Tiap reaksi real-time PCR analysis dibuat dalam triplikasi,
dan diulang setidaknya 3 kali untuk memastikan hasil yang konsisten.

3.12 MTT assay

1. Sel Human Gingiva Fibroblast dilakukan splitting dan dicuci dengan larutan PBS dan

diberi tripsin sebanyak 2-2,5 ml dan diinkubasi selama 5 menit

2. Dilakukan resuspensi dengan DMEM untuk menghilangkan tripsin

3. Dilakukan splitting dan dipindahkan dalam mikroplate 96 sumuran dan setiap sumuran

di beri sel sebanyak 5x104 + DMEM 100µl dan diinkubasi sampai sel kondisi 80 %

4. Setelah sel dalam kondisi 80% diberi perlakuan dengan Ekstrak kulit buah manggis

bertingkat ( 200 µg/ml, 400 µg/ml, 600 µg/ml, 800 µg/ml, 1000 µg/ml dan 1200 µg/ml )

+ DMEM 50 µl dan diinkubasi selama 24 jam.

5. Setelah 24 jam diberi reagen MTT pada setiap sumuran sebanyak 25 µl dan diinkubasi

selama 4 jam.

6. Setelah 4 jam medium pada mikroplate dipindahkan ke mikroplate reader yang baru

7. Dibaca dengan menggunakan ELISA reader.

3.13 Wound Healing Assay pada kultur Human Gingival Fibroblast

Sel Human Gingival Fibroblast dengan jumlah 1x105 dikultur pada 6

sumuran. Scratch yang linier dibuat pada sel yang confluent monolayer dengan

menggunakan pipet 200 µl. Debris sel di bilas dengan menggunakan medium

54
 DMEM. Gap scratch diobservasi menggunakan kamera mikroskop cahaya dengan

berbagai macam perbedaan waktu.

3.14 Analisis Data

Data yang diperoleh dilakukan pengamatan langsung hasil band hasil RT-PCR ,

ekspresi protein imunositokimia antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan.

3.15 Luaran per tahun

Hasil penelitian ini akan ditulis jurnal dan di masukkan ke dalam jurnal international

scopus dengan minimal grade Q3 sebanyak 2 jurnal. Dan setelah hasil ini dicapai maka

peneliti akan membuat gel ekstrak kulit manggis yang akan dipatenkan ke HAKI.

3.16. Indikator Capaian

Indikator capian dapat tercapai setelah 2 jurnal dapat diterima pada jurnal international

scopus minimal grade Q3.

55
 BAB 4
ROAD MAP PENELITIAN

MC3T3-E1 Osteogenesis

TNFα OSTERIX

CRP Runx2

IL-1 ALP
Xanthone Inflamasi
IL-6 BSP
IL- 10 Coll1α1
Mangosteen
Pericarp

LPS Keterangan :
: menginduksi
: menghambat
: Kandungan / penanda

56
 BAB 5
ANGGARAN BIAYA DAN JADWAL PENELITIAN

5.1 Ringkasan Anggaran Biaya Penelitian Unggulan Perguruan Tinggi

Biaya yang Diusulkan

No. Jenis Pengeluaran
Tahun I

Honorarium untuk pelaksana,

petugas laboratorium,
1. pengumpul data, pengolah data, Rp. 25.000.000,-
penganalisis data dan honor
operator

Primer PCR 4 pasang, Antibodi

monoklonal/poliklonal 7
protein, Bahan habis pakai,
ATK, fotocopy, surat menyurat,
2. Rp. 25.000.000,-
penyusunan laporan, cetak,
penjilidan laporan, publikasi,
pulsa, internet, bahan
laboratorium, langganan jurnal

Perjalanan untuk biaya survey

/sampling data,
3. seminar/workshop DN-LN, Rp. 30.000.000,-
biaya akomodasi-konsumsi,
lumpsum, transport
Administrasi, Publikasi 5 jurnal
terindeks scopus min Q4,
4. Rp. 20.000.000,-
Pembuatan laporan, Seminar
Luar negeri

Total Rp. 100.000.000,-

57
 5.2 Jadwal Penelitian

Tahun 2019 - 2020

No. Jenis Kegiatan
8 9 10 11 12 1 2 3 4 5 6 7 8
1. Persiapan bahan-bahan
2. Sintesis kulit buah manggis
3. Pengujian kulit buah manggis
4. Kultur sel Human Gingiva Fibroblast
5. MTT assay
6. Ekstraksi RNA
7. Pembuatan cDNA
8. Proses PCR dan elektroforesis
9. Kultur sel Osteoblast
11. Ekstraksi RNA
12. Pembuatan cDNA
13. Proses realtime PCR dan elektroforesis
14. Analisis data
Persiapan laporan dan seminar hasil
15.
penelitian
16. Laporan hasil penelitian
17. Publikasi Jurnal indeks Scopus min Q4

58
5.3 Proyeksi Publikasi Hasil Penelitian

NO JUDUL ARTIKEL JURNAL YANG DITUJU QUARTIL

1. Effect of Mangosteen Pericarp Saudi Dental Journal 3

Extract (Gracinia mangostana
L.) on the Expression of
Human Gingival Fibroblast
Cell Culture Growth Factor

2. Mangosteen Pericarp Extract Iranian Journal of Medical Science 3

(Gracinia mangostana L.) pre
treatment reversed LPS
induced inhibition of osteoblast
differentiation in MC3T3

5.4 Indikator Keberhasilan (Target Capaian)

NO INDIKATOR KEBERHASILAN JUMLAH DESKRIPSI

1 Menghasilkan 2 paper terindeks Scopus dengan 2
Quartil 3
2 Memberikan informasi tentang manfaat 1
tentang kulit manggis
3 Memperkenalkan potensi tropical fruit sebagai
salah satu bahan untuk mepercepat
penyembuhan luka pasca ekstraksi gigi.
4 Mengirim mahasiswa untuk pendidikan di 1
Hirosima
5 Tobiume kei dr Associated professor Hiroshima 1
University
6 Dilakukan penandatanganan MOU antara 1
Universitas Airlangga dan Hiroshima Universiy

59
 DAFTAR PUSTAKA

Arabski M, Weglerek-Cluk A, Czerwonka G, Lankoff A, Kaca W. 2012. Effects of

Saponins Againts Clinical E. coli Strains and Eukayotic Cell Line. J. of Biomedicine
and Biotechnology. pp: 1-7.
Barrientos S, Stojadinovic O, Golinko MS, Brem H, Tomic-Canic M. 2008. Growth
Factors and Cytokines in Wound Healing. Wound Rep Reg. 16: 585-601.
Butler M. 2005. Animal Cell Culture and Technology. 2nd ed. London and New York.
BIOS Scientific Publisher.
Carson SN. 2005. Basics of Wound Healing and Treatment. Available from:
http://www.Baybutt.net/pubs/wound. Accessed at: 30th Desember 2011.
Chaovanalikit A, Mingmuang A, Kitbunluewit T, Choldumrongkool N, Sondee J,
Chupratum S. 2012. Anthosyanin and Total Phenolics Content of Mangosteen and
Effect of Processing on the Quality of Mangosteen Products. Int Food Rsch J. Vol 19
(3). pp: 1047-1053.
Chaverri JP, Rodriguez NM, Ibarra MO, Rojas JMP. 2008. Medicinal Properties of
Mangosteen. J. Food and Chemical Toxicology. (46): 3227-3239.
Diegelmann RF, Evans MC. 2004. Wound Healig: An Overview of Acute Fibrotic, and
Delayed Healing. Frontiers in Bioscience. 9:283-289
Freshney RI. 2010. Culture animal cells : a manual of basic technique and
specialized applications 6th. New Jersey : John Wiley & Sons, Inc. Pp 1-8,
111-114, 187-206, 365-377.
Gao Y, Li D, Han T, Sun Y, Zhang J. 2009. TGF-ß1 and TGFBR1 are Expressed in
Ameloblast and Promote MMP20 Expression. Weifang, Shandong, China. Wiley-
Liss, Inc. Pp: 886.
Guo F, Carter DE, Mukhopadhyay A, Leask A. 2011. Gingival fibroblasts display reduced
adhesion and spreading on extracellular matrix: a possible basis for scarless tissue
repair. USA. PloS ONE.
Hayyu NS. 2013. Sitotoksisitas Ekstrak Kulit Garcinia mangostana Linn terhadap Sel
Fibroblas Gingiva Manusia. Surabaya. Fakultas Kedokteran Gigi Universitas
Airlangga
Hoffman D. 2003. Medical Herbalism: The Science and Practice of Herbal Medicine.
Rochester, Vermont. Healing Art Press. p: 116.
Harazy VI., Zambon JJ., Trevisan M., Zeid M., Genco RJ. 2000. Identification of
Periodontal Pathogens in Atheromathous Plaques. J. Periodontal. 71:1554-60.

Hunt KT. 2003. Wound Healing: Current Surgical Diagnosis and Treatment. 12th Ed.,
McGraw-Hills, USA. In: Doherty MG. p75-87

60
Ibelgaufts H. 2002. Wound Healing. Cytokins and Cells Online Pathfinder Encyclopedia.
www.cope.cgi.htm. Accessed on 16 April 2014.
Innis MA, Gelfand DH. 1990. PCR Protocols a Guide to Methods and Applications.
California. Academic Press.
Naqvi AR, Fordham JB, Khan A, Nares S. 2015. microRNAs responsive t o A . a c tin o m
y c e m c o mit a n s a n d P.gingivalis LPS modulate expression of genes regulating
innate immunity in human macrophages. HHS Public Access. I n n a t e I m m u n .
Author manuscript : 540-551. 21

Kent LW, Rahemtulla F, Hockett Jr. RD, Gilleland RC, Michalek SM. 1998. Effect of
Lipopolysaccharide and Inflammatory Cytokines on Interleukin-6 Production by
Healty Human Gingival Fibroblast. U.S. America. American Society for
Microbiology. 66(2) p: 608-614.
Liska-yunitasari. 2011. Gempur 41 Penyakit dengan Buah Manggis : Khasiat dan Cara
Pengolahannya untuk Pengobatan. Yogyakarta: Pustaka Baru Press. Hal 24-34.

Mann A, Breuhahn K, Schirmacher P, Blessing M. 2001. Keratinocyte-Drived

Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor Accelerates Wound Healing:
Stimulation of Keratinocyte Proliferation, Granulation Tissue Formation, and
Vascularization. J. Invest Dermatol. 117:1382-1390.
Massague, J. 1998. Tgf-beta signal transduction [Review]. Annual Review of
Biochemistry, 67: 753-791.
Miryanti, YIPA, Sapei L, Budiono K, Indra S. 2011. Ekstraksi Antioksidan dari Kulit Buah
Manggis. Karya Tulis Ilmiah. Universitas Katolik Parahyangan Bandung. Hal: 11.
Putra ATW, Ade W, Hamidy MY. 2010. Tingkat Kepadatan Fibroblas pada Luka Sayat
Mencit dengan Pemberian Gel Lidah Buaya (Aloe chinensis Baker). Hal: 1-8.
Ryan John. 2008. Introduction to Animal Cell Culture. Technical bulletin. Available from :
www.corning.com/lifesciences. Acces :24 Maret 2012.
Sakagami H, Kushida T, Makino T, Hatano T, Shirataki Y, Matsua T, Matsuo Y, Mimaki
Y. 2012. Functional Analysis of Natural Polyphenols and Saponins as Alternative
Medicines. Availabe at www.Intechopen.com. Accessed at 6 April 2014.
Shibata MA, Matoba Y, Tosa H, Iinuma M. 2013. Effects of Mangosteen Pericarp Extract
Againts Mammary Canceri. Altern Integ Med. Vol. 2. pp: 139.
Tjahjaningtyas. 2011. Manggis Ratu Buah Kaya Manfaat: Khasiat Dahsyat dan Tips
Mengkonsumsinya. Surabaya. Stomata. Hal 23-88.
Tukiran, Suyanto, Hidayanti N. 2015. Uji Awal Fitokimia Ekstrak Kulit Buah Manggis
(Garcinia mangostana L.). Surabaya. Universitas Negeri Surabaya. C-82.
Werner S. Dan Grose R. 2003. Regulation of wound healing by growth factor and
cytokines. London. Physiol Rev 83, p: 835-70.

61
Kazuhisa Nakashima,2 Xin Zhou,2 Gary Kunkel,3 Zhaoping Zhang, Jian Min Deng,
Richard R. Behringer, and Benoit de Crombrugghe1. The Novel Zinc Finger-
Containing Transcription Factor Osterix Is Required for Osteoblast Differentiation
and Bone Formation. Cell, Vol. 108, 17–29, January 11, 2002.

Yatman E. 2012. Kulit Buah Manggis Mengandung Xanton yang Berkhasiat Tinggi.
Jakarta. Univesitas Borobudur. No. 324. Hal: 2-3.
Ying Cao1, Shu-Fang Jia1, Geetika Chakravarty2, Benoit de Crombrugghe3, and Eugenie
S. Kleinerman1 . 2008. The Osterix Transcription Factor Down-Regulates
Interleukin-1α Expression in Mouse Osteosarcoma Cells. Mol Cancer Res. 2008
January ; 6(1): 119–126. doi:10.1158/1541-7786

Bruderer M, et al. Role and Regulation of RunX2 in Osteogenesis. European Cells and
Materials Vol.282014 (pages 269 - 286) DOI :10.22203/eCM.v028a19) 2014

Kirkham GR and Cartmell SH. Genes and Proteins Involved in the Regulation of
Osteogenesis. Topics in Tissue Engineering, Vol. 3, 2007. Eds. N Ashammakhi, R
Reis & E Chiellini.

Gastelbondo B. Gene expression of collagen type I alpha 2 and its relationship with dental
fluorosis. Journal Oral and Craniofacial Sciences. 2018; 7(6):172-175.
doi:10.17126/joral res.2018.056

Soong R et al (2001) Quantitative Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction

Detection of Cytokeratin 20 in Noncolorectal Lymph Nodes. Clinical Cancer
Research, 7: 3423–3429.

Hoongbao M et al, Application of Real-time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). The

Journal of American Science, 2(3), 2006, Ma, et al., Real-time Polymerase Chain
Reaction. P 1-14

Higuchi R, Fockler C, Dollinger G, Watson R. Kinetic PCR analysis: real-time monitoring

of DNA amplification reactions. Biotechnology (NY). 1993;11(9):1026-30.
Yuwono dan Tribowo, 2006. Teori dan Aplikasi Polymerase Chain Reaction, Panduan
Eksperimen PCR untuk Memecahkan Masalah Biologi Terkini, Penerbit Andi,
Yogyakarta

62
 Lampiran 1. Biodata Ketua Pengusul
A. Identitas diri

1. Nama Lengkap Andra Rizqiawan, drg., SpBM., Ph.D

2. Jenis Kelamin
3. Jabatan fungsional
4. NIP/NIK/Identitas lainnya
5. NIDN
6. Tempat dan Tanggal Lahir
7. E-mail
8. Nomor Telepon/HP
9. Alamat Kantor
10. Nomor Telepon/Faks
11. Lulusan yang telah
dihasilkan
12. Mata kuliah yang diampu
Laki-laki
Lektor
19810923200501001
0023098101
Surabaya, 23 September 1981
andra.ara@gmail.com
(031) 5352577 / 0859 3113 0100
Jl. Prof. Dr. Moestopo No. 47 Surabaya
(031)-5030255/5030256
S-1= 89 orang; S-2= - orang; S-3= - orang
1. Ilmu Bedah Mulut I
2. Ilmu Bedah Mulut II
3. Skills Lab Bedah Mulut dan Maksilofasial
4. Ilmu Bedah Mulut I Pendidikan Dokter Gigi
Spesialis Bedah Mulut dan Maksilofasial
5. Ilmu Bedah Mulut II Pendidikan Dokter Gigi
Spesialis Bedah Mulut dan Maksilofasial

B. Riwayat Pendidikan
S-1 Spesialis S-3
Nama Perguruan Universitas Universitas Airlangga Hiroshima
Tinggi Airlangga University
Bidang Ilmu Pendidikan Spesialis Bedah Mulut Oral Health
Dokter Gigi dan Maksilofasial Promotion and
Developmental
Dentistry
Tahun masuk-lulus 1999-2004 2004-2015 2010-2013
Judul Kekuatan Tarik Pengaruh paparan Snail-dependent
skripsi/Thesis/Disertasi Diametral pada rekombinasi protein upregulation of
GIC yang telah Galectin-1 terhadap Galectin-1
kadaluarsa proliferasi sel OM-1 promoted to
complete EMT
process in Snail
Expressing cells
Nama Drg Edhi Arief Prof. Coen Pramono, Prof. Nobuyuki
pembimbing/promotor Sp.KG drg., Sp.BM(K) Kamata

63
C. Pengalaman Penelitian Dalam 5 Tahun Terakhir
No. Tahun Judul Penelitian Pendanaan
Sumber Jml (Juta
Rp)
1 2015 Rancang bangun kit diagnostik DIPA DIT-
oseointegrasi implant dental berbasis LITABMAS
DNA melalui analisis polimorfisme gen
MMP-1

D. Pengalaman Pengabdian Kepada Masyarakat dalam 5 Tahun Terakhir

No. Tahun Judul Pengabdian Kepada Masyarakat Pendanaan
Sumber Jml (Juta Rp)
1 2013 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 66,989,200
Dompu + BOPTN

2 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 67,219,200

Lombok Timur + BOPTN

3 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 50,412,800

Sitobondo + BOPTN

4 2014 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 58,845,600

Dompu

5 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 44,546,480

Pare, Kediri + BOPTN

6 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 37,723,120

RSUD Tongas - Probolinggo

7 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 12,765,920

Besuki, Situbondo

8 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 74,201,600

RSUD Dr. Soedjono -Lombok Timur

9 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RS SPONSOR 85,380,000

Tk. III dr. R. Soeharsono – Banjarmasin

10 2015 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 18,736,000

Situbondo

11 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 120,150,640

RSUD Dr. Soedjono -Lombok Timur

64
 12 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 148,320,000
RSUD Tongas - Probolinggo

13 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RS. SPONSOR 82,258,000

Tentara Tk. IV Wirasakti – Kupang

14 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 121,551,440

Bima

15 2016 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RS. SPONSOR 97,143,581

Tentara Tk. IV Wirasakti – Kupang

16 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 139,800,000

Bima

17 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 120,143,007

RSUD Dr. Soedjono -Lombok Timur

E. Publikasi Artikel Ilmiah Dalam Jurnal dalam 5 Tahun Terakhir

No. Tahun Judul Artikel Ilmiah Nama Jurnal Volume/Nomor/Tahun
1 2013 Snail promotes Cyr61 to Cancer Letter
prime collective cell Journal
migration and form
329 : 243-252 (2013)
invasive tumor nests in
squamous cell
carcinoma

2 2013 AKT primes snail- Journal of

induced EMT Cellular
concomitanly with the Biochemistry
114: 2039-2049 (2013)
collective migration of
squamous cell
carcinoma cell

3 2013 Autocrine galectin-1 Biochemical and

promotose collective Biophysical
cell migration of Research
squamous cell Communications 441 : 904-910 (2013)
carcinoma cell through
up-regulation of distinct
integrins

4. 2011 PGE2 targets squamous

cell carcinoma cell with 307 : 227-236 (2011)
the activated epidermal

65
 growth factor receptor
family for survival
against 5-fluorouracil Cancer Letters
through NR4A2
induction

5. 2018 Demineralized Freeze- International

Dried Bovine Cortical Journal
Bone : Its potential for 2017;2017:5149675
Dentistry
Guided Bone
Regeneration
Membrane

F. Pemakalah Seminar Ilmiah dalam 5 Tahun Terakhir

No. Nama Temu Judul Artikel Ilmiah Waktu dan
Ilmiah/Seminar Tempat
1. The 58th Congress of the Snail-dependent upregulation of Fukuoka, Japan
Japanese Society of Oral Galectin-1 promoted in complete 11-13 Oktober 2013
and Maxillofacial EMT process in snail-expressing
Surgeons squamous cell carcinomans cells
2. The 57th Congress of the Galectin-1 involved in cell Yokohama, Japan
Japanese Society of Oral migration and invasion by 19-21 Oktober 2012
and Maxillofacial upregulation integrin alpha 2 in
Surgeons SCC correlated with EMT
3. 3rd Continuing Education Bagaimana menanggulangi Surabaya, Indonesia
In Oral and Maxillofacial perdarahan pada pencabutan gigi 14 – 15 Agustus
Surgery 2015

G. Karya Buku dalam 5 Tahun Terakhir

No. Judul Buku Tahun Jumlah Halaman Penerbit
1

H. Perolehan HKI dalam 10 Tahun Terakhir

No. Judul/Tema HKI Tahun Jenis Nomor P/ID
1

66
I. Pengalaman Merumuskan Kebijakan Publik/Rekayasa Sosial lainnya dalam 10
Tahun Terakhir
No. Judul/Tema/Jenis Rekayasa Sosial Tahun Tempat Respon
lainnya yang Telah Ditetapkan Penerapan Masyarakat
1

J. Penghargaan dalam 10 Tahun Terakhir (dari pemerintah, asosiasi atau institusi

lainnya)
No. Jenis Penghargaan Institusi Pemberi Penghargaan Tahun
1

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidak
sesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya. Demikian biodata ini saya buat
dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan Proposal Riset
Mandat Universitas airlangga 2019

Surabaya, 29 Juli 2019

Andra Rizqiawan, drg., Ph.D., Sp.BM

67
BIODATA ANGGOTA PENELITI

A. Identitas diri

1. Nama Lengkap Dr. Pratiwi Soesilawati, drg.,MKes.,PA(K)

2. Jenis kelamin P
3. Jabatan fungsional Lektor
4. Jabatan struktural -
5. NIP 196911221996012001
6. NIDN 00221169003
7. Tempat,tgl lahir 22 november 1969
8. E-mail Pratiwi_gunawan@yahoo.com
9. No tlp/fax/hp 031-71003623 / 08123240605
10. Alamat Kantor Prof. Moestopo 47 Surabaya
11. No tlp/fax 031-5030255
12. Lulusan yang telah s-1= 16 org. S-2= 4org. S-3= org
dihasilkan
13. Mata kuliah yang 1. Histologi Kedokteran gigi ( Kuliah )
14. diampu 2. Histologi kedokteran gigi ( Praktikum )
15. 3. Biologi Oral I ( Kuliah )
16. 4. Biologi Oral I ( Praktikum )
17. 5. Biologi Oral II ( Kuliah )
18. 6. Biologi Oral II ( Praktikum )
19. 7. Research instrumentation (Kuliah S2)
20. 8. Patobiologi molekuler (Kuliah S2)
21. 9. Genetika Molekuler (Kuliah S2)
22. 10. Proteomik oral (Kuliah S2)
23. 11. Imunologi ( Kuliah Program Pendidikan Dokter gigi
Spesialias)

B. Riwayat Pendidikan
S-1 S-2 S-3
Nama Perguruan Universitas Universitas Universitas
Tinggi Airlangga Airlangga Airlangga
Bidang Ilmu Kedokteran Gigi Ilmu Kesehatan Gigi Ilmu Kedokteran
Tahun masuk-lulus 1989-1995 2001-2004 2007-2011
Judul Pengaruh daya tekan Peran gigi untuk Analisis varian HLA-
skripsi/Thesis/Disertasi hancur pada semen deteksi jenis kelamin DRB1 pada jalur
gypsum Bonded melalui PCR dan imunogenetik sekresi
penentuan usia sIgA saliva sebagai
melalui RST risiko karies gigi
Nama Bob Subijantoro, drg Prof. Indrayana N, Prof. Dr. Harianto
pembimbing/promotor dr.,MS., Notopuro, drg.,MS
SpF(K),DVM

C. Pengalaman Penelitian dalam 5 tahun terakhir

No Tahun Judul penelitian Pendanaan
Sumber Jumlah(Rp)
1 2007 Efektifitas penggunaan mini primer Medical Research 7
Amelogenin pada amplifikasi Unit, fak Kedokteran

68
 DNA odontoblas, Unair
Medical Research Unit, Fakultas
Kedokteran, Universitas Airlangga.
2 2008 : Penentuan usia pada tubulus DIP A PNBP 7
dentin dengan metode Ratio Of Universitas Airlangga.
Sclerosis to Tubulus
sebagai penunjang odontology
forensik.
3 2009 Analisis genotip HLA-DRB1 pada Riset Binaan Ilmu 125
etnis Jawa di Surabaya Pengetahuan dan
Teknologi Kedokteran,
Badan Penelitian Dan
Pengembangan
Penelitian, Departemen
Kesehatan RI
4 2010 Peran Polimorfisme HLA-DRB1 Penelitian Multi Tahun 32,5
Pada Kerentanan Genetik Karies Hibah Bersaing I,
Gigi Melalui Analisis Single Direktorat Pendidikan
Nucleotide Polymorphism ( analisis Tinggi, Departemen
genomik ) Pendidikan Nasional
5 2011 Peran Polimorfisme HLA-DRB1 Penelitian Multi Tahun 35
Pada Kerentanan Genetik Karies Hibah Bersaing II,
Gigi Melalui Analisis Single Direktorat Pendidikan
Nucleotide Polymorphism ( analisis Tinggi, Departemen
proteomik ) Pendidikan Nasional
6 2011 Pemanfaatan Teknologi Phytosome Riset Insentif 200
untuk meningkatkan Kementrian Riset dan
Bioavailabilitas Produk Obat Teknologi.
Herbal
7 2013 Desain Metode diagnosa pre- Penelitian Unggulan 50
symptomatik karies gigi melalui Perguruan Tinggi
analisis jalur imunogenetik sekresi Tahun I
sIgA pada berbagai varian HLA-
DRB1
8 2013 Modulasi Fase Proliferasi Ekstrak Riset Kolaborasi 10
Teripang Emas (Stichopus Dosen-Mahasiswa
Hermanii) Sebagai Terapi FKG UA
Ulkus Mukosa Oral
9 2014 Desain Metode diagnosa pre- Penelitian Unggulan 50
symptomatik karies gigi melalui Perguruan Tinggi
analisis jalur imunogenetik sekresi Tahun II
sIgA pada berbagai varian HLA-
DRB1
10 2014 Efek Anti Inflamasi Ekstrak Riset Kolaborasi 10
Teripang Emas (Stichopus Dosen-Mahasiswa
Hermanii) Sebagai Terapi Ulkus FKG UA
Mukosa Oral
11 2014 Deteksi Α-Amylase Stain Saliva Hibah Penelitian dasar 20
Sebagai FKG UA
Materi Ekstraksi Dna Genomik
Pada
Odontologi Forensik Molekuler

69
12 2016 Rancang Bangun Kit Diagnostik Penelitian Unggulan 65
Karies Gigi Perguruan Tinggi
Berbasis Imunogenetik Melalui
Deteksi Mutasi HLA-DRB1 Ekson
2 Dengan ASO-PCR

12 2016 Desain Kit Diagnostik Hibah Airlangga 50

Imunogenetik Karies Gigi Melalui Health Science
Hibridisasi Mikro Dot-Blot Institute
Berlabel Non-Radioaktif Dengan
Probe Oligonukleotida HLA-DRB1
13 2017 Uji Stabilitas Prototype Kit Penelitian Terapan 90
Diagnostik Hla-Drb1 Untuk Unggulan Perguruan
Deteksi Presymptomatik Karies Tinggi
Gigi Pada Anak

14 2017 Rancang Bangun Kit Diagnostik Research Frame Work 100

Oligoprobe Interleukin 10 Untuk FKG Unair1
Penderita Periodontitis Kronis
Dengan Risiko Preeklamsia

15 2018 Uji Stabilitas Prototype Kit Penelitian Terapan 100

Diagnostik Hla-Drb1 Untuk Unggulan Perguruan
Deteksi Presymptomatik Karies Tinggi
Gigi Pada Anak

16 2018 Analisis Respon Jaringan Pasca Hibah Penelitian AHS 50

Penanaman Sub Cutan Universitas Airlangga
Demineralized Dentin Matrix
Membrane (DDMM) Sebagai
Biomaterial Guided Bone
Regeneration

D. Pengalaman Pengabdian masyarakat dalam 5 Tahun terakhir

No Tahun Judul pengabdian Masyarakat Pendanaan
Sumber Jumlah(juta Rp)
1 2011 Bulan Kesehatan Gigi Indonesia Unilever -
2 2012 Bulan Kesehatan Gigi Indonesia Unilever -
3 2012 Pelatihan DHE dlm rangka DIES BOPTN FKG 5
Natalis Universitas Airlangga UA
4 2013 Dentistry Charity-Lombok Timur BOPTN FKG 5
UA
5 2014 Bulan Kesehatan Gigi Indonesia Unilever -
6 2015 Iptek bagi Masyarakat Layanan Dikti 37

70
 Kesehatan Dan Peningkatan
Ketrampilan Wirausaha Jamur
Tiram
Kelompok Anak-Anak Tunanetra
7 2016 Pelatihan wirausaha produk pangan BOPTN 30
fungsional Yoghurt Probiotik bagi
Kelompok Lansia Sehat
8 2016 Pelatiahan dan Penyuluhan BPPTNBH 8
Kesehatan Gigi di Pondok
Pesantren Qomarudin Gresik
(Pelatihan dan Penyuluhan
9 2016 Peringatan Dies Natalis UNAIR BPPTNBH 15
tahun 2016
10 2017 Bulan Kesehatan Gigi Indonesia Unilever -
11 2017 Operasi katarak di Kecamatan Kemenko PMK 60
Kedungpring Kab lamongan
12 2017 Operasi katarak di Kecamatan Kemenko PMK 25
Sambeng Kab lamongan
13 2018 Forum Grup Discussion Potensi air Kemenko PMK 25
bersih di Kab Lamongan
14 2018 Revitalisasi Bumi Perkemahan di Kemenko PMK 25
Desa Candisari sambeng lamongan
15 2018 Pendampingan Telemedicine Mandiri 30
Proyek Citarum Harum Sektor 7
Kab Bandung

E. Pengalaman Penulisan artikel ilmiah dalam jurnal dalam 5 tahun terakhir

N Judul Artikel Vol/No/Thn Nama jurnal
o Ilmiah
1 Peran TGF-β1 vol 13 no 3,2011 Jurnal
sebagai http://journal.unair.ac.id/download-fullpapers- Biosains
Regulator Vol%2013%20No%203%20September%202011- Pascasarjana
Switching 1.pdf Univ
Isotype sekresi Airlangga
sIgA

2 Cytotoxicity Vol 44 no 1, 2011 Dental

study of http://journal.unair.ac.id/DENTJ@cytotoxicity-study- Journal
reconstruction of-reconstruction-plate-made-of-stainless-steel-316l-
plate made of compared-to-commercially-pure-titanium-on-baby-
Stainless steel hamster-kidney-21-fibroblast-culture-article-3294-
316L compared media-2-category-0.html
to Commercially
pure titanium on
babby hamster
kidney-
21 fibroblast
culture.
3 Human SNP Vol 5 no 24, January 2014 Science and
resulting in https://ejournals.ph/article.php?id=2769 clinical
novel mutation laboratory
of HLA-DRB1 int journal
71
 gen for salivary
sIgA secretion
4 The effects of Vol 48, No 2 , June 2015 Dental
golden sea journal
cucumber DOI: 10.20473/j.djmkg.v48.i2.p100-103 · License: Majalah
extract CC BY-SA 4.0 Kedokteran
(Stichopus Gigi
hermanii) on
the number of
lymphocytes
during the
healing process
of traumatic
ulcer on wistar
rat’s oral
mucous
5 Acceleration of Vol 49, No 3. September 2016 Dental
fibroblast
number and DOI: 10.20473/j.djmkg.v49.i3.p125-132 · License: journal
FGF-2 CC BY-SA 4.0
expression Majalah
using Channa
striata extract Kedoktera
induction
during wound n Gigi
healing process:
in vivo studies
in wistar rats
6 Cytotoxicity Vol 41, No 3, September 2008 Dental
test of 40, 50
and 60% citric DOI: 10.20473/j.djmkg.v41.i3.p103-106 journal
acid as dentin
conditioner by https://e-journal.unair.ac.id/MKG/article/view/992 Majalah
using MTT
assay on culture Kedoktera
cell line
n Gigi

7 Characterizatio Vol 47, No 3, Januari 2014 Dental

n of lactoferrin journal
in gingival DOI: 10.20473/j.djmkg.v47.i3.p141-145 · License: Majalah
crevicular fluid CC BY-SA 4.0 Kedokteran
of chronic Gigi
periodontitis
patient
8 Demineralized vol. 2017, Article ID 5149675, 10 pages, 2017. Internationa
Freeze-Dried doi:10.1155/2017/5149675 l Journal of
Bovine Cortical https://www.hindawi.com/journals/ijd/2017/514967 Dentistry
Bone: Its 5
Potential for

72
 Guided Bone
Regeneration
Membrane
9 The influence Vol 11 No 1 ISSN 1309-100X Journal of
of moderate http://www.jidmr.com Internationa
Exercise on l Dental and
Caspase-3 Medical
Expression In research
Inhibiting
Transformation
of Oral
Squamous
Epithelial Cells
10 Gambaran Vol 3, No 3 (2017): December Majalah
histopatologi https://doi.org/10.22146/majkedgiind.17454 Kedokteran
penyembuhkan Gigi
luka pencabutan Indonesia
gigi pada
makrofag dan
neovaskular
dengan
pemberian
getah batang
pisang ambon

F. Pengalaman Penyampaian Makalah Secara Oral Pada Pertemuan / Seminar Ilmiah Dalam 5
Tahun Terakhir
No Nama Pertemuan Ilmih Judul Artikel Waktu&tempat
1 Hiroshima Confference, Faculty Varian Analysis HLA- 9-10 Oktober 2011
of Dentistry, Hiroshima DRB1 on Hiroshima University,
University Immunogenetic Japan
Pathway of sIgA
Secretion in Saliva as
Dental Caries Risk
2 Seminar Nasional Penelitian Peran Polimorfisme 11 Mei 2011
Hibah Bersaing Direktur Jenderal HLA-DRB1 Pada Surabaya
Pendidikan Tinggi Kementrian Kerentanan Genetik
Pendidikan Nasional Karies Gigi Melalui
Analisis Single
Nucleotide
Polymorphism, ,
3 Asian Conference on Human SNP resulting Manila,Phillpines,Novem
Multidisciplinary Research in in novel mutation of ber 2013
Higher Education 2013 HLA-DRB1 gen for
salivary sIgA secretion
4 East Java Association of Genetic susceptibility Surabaya, 7 Desember
Periodontist Scientific Meeting influencing 2013
osseointegrated dental
implant failure
Scientific Meeting Airlangga – Variant Analysis Of Surabaya, 22 november
5 Kagoshima University HLA-DRB 1 On 2012

73
 Immunogenetic
Pathway Of sIga
Secretion In Saliva As
Dental Caries Risk
6 Joint Scientific meeting In Effect Of Dental Surabaya, 2-3 Oktober
Dentistry Health Education 2015
With Audio Media For
Improving
Knowledge And
Attitude Of Dental
Caries On The
Foundation For The
Education Of Blind
Children Surabaya

7 Thailand International HLA-DRB1 Genetic Bangkok, 17-18

Concerence on Oral Biology susceptibility November 2016
influencing dental
caries in Indonesian
children

8 Thailand International Stain Detection α- Bangkok, 17-18

Concerence on Oral Biology Amylase Saliva as A November 2016
genomic source in
Molecular Forensic
Odonthology

9 Thailand International Effect of MMP-1 Bangkok, 17-18

Concerence on Oral Biology Level on Inflammation November 2016
Phase Post Dental
Implant Surgery

10 Thailand International The Role of probiotic Bangkok, 17-18

Concerence on Oral Biology Yoghurt to Regulate November 2016
Body Weight and
Viral Load of HIV
Patiens
11 Pekan Ilmiah Nasional Pengaruh Mutasi Surabaya, 29-30 Juli 2016
Persatuan Ahli Anatomi Ekson 2 HLA-DRB1
Indonesia Terhadap Presentasi
Antigen: Analisis
Doking Molekuler
HLA-DRB1 dan TCR

12 Lokakarya Translational Perkembangan Riset Surabaya, 7 Desember

Research Translasional di 2016
Bidang Kedokteran
Gigi
13 Temu Ilmiah Nasional and Joint Prevalence Of Dental Surabaya, 5-7 Oktober
scientific Meeting in Dentistry Caries And Its 2017
Correlation With The
Immunological

74
 Assessment Of
Cytokine Profile Of
Cd4+ Cells In Patients
With Different Hla-
Drb1 Variants
( Study In Javanesse
Population-Surabaya
Indonesia)
nd
141 2 regional oral biology scientific Deteksi amelogenin Bandung, 3-4 November
meeting dan D21S11 melalui 2017
α-amylase stain saliva
sebagai materi
ekstraksi dna genomic
pada odontology
forensic molekuler
15 Joint Scientific Meeting in Examining The Surabaya, 2-3 Oktober
Dentistry Caries Risk With The 2018
Characteristics Of
Hla Drb1 Gene

G. Pengalaman Penulisan Buku dalam 5 Tahun Terakhir

No Judul tahun Jenis No
1 Histologi Kedokteran Gigi 2017 Buku referensi
2 Atlas Histologi Kedokteran 2017 Buku referensi
Gigi
3 Histologi rongga mulut 2017 Buku referensi
4 Imunogenetik karies gigi 2017 Buku referensi

H. Pengalaman Perolehan HKI Dalam 5 – 10 Tahun Terakhir

No Judul tahun Jenis No
1 Formula Herba Pegagan 2012 Paten (co- No Permohonan
tunggal dan campuran inventor) Paten
dengan rimpang Kencur P00201200109
sebagai Obat Herbal
terstandar untuk
Mempercepat
Penyembuhan Luka
Ekstraksi Gigi
2 Metode penentuan 2015 Paten(inventor) No Permohonan
usiaAnte Mortem Paten
Berdasarkan Ratio P 00201502157
Schlerosis to Tubulus
3 Metode Isolasi DNA Sel 2015 Paten(inventor) No Permohonan
Odontoblas Sebagai Materi Paten
Identifikasi jenis Kelamin P 00201502158
Ante Mortem

75
4 Formula Fitosom dan 2016 Paten(co- No Permohonan
Lipososm Ekstrak Daun inventor) Paten
Ungu Untuk Terapi P 00201608362
Hemorhoid Oral dan
Topikal
5 Varian HLA-DRB1 Pada 2016 Paten (Inventor) No Permohonan
Populasi Jawa di Surabaya Paten
P 00201608899
6 Isolasi DNA genomik dari 2016 Paten(inventor) No Permohonan
stain saliva melalui Paten
pengenalan enzim a- P 00201608900
amilase

I. Pengalaman Merumuskan Kebijakan Publik/Rekayasa Sosial Lainnya Dalam 5 Tahun

Terakhir
No Jenis kebijakan Institusi Tahun No
1 Pembangunan instalasi Pemda 2018
penyaringan air bersih di kabupaten
dusun Nongko ds Candisari Lamongan
Kec Sambeng Kab
Lamongan

J. Penghargaan yang Pernah Diraih dalam 10 tahun Terakhir (dari pemerintah, asosiasi atau
institusi lainnya)

No Jenis penghargaan Institusi Tahun

1 Poster Terbaik I Seminar nasional Hibah Bersaing 2012 2012
2 Konsultan Persatuan Ahli Anatomi Indonesia 2011
3 Presentasi oral Research Expo Universitas Airlangga 2015
terbaik 4
4 Dosen Terbaik 3 Fakultas Kedokteran Gigi Universitas 2017
FKG Unair 2017 airlangga

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidak
sesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya. Demikian biodata ini saya buat
dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan Proposal Riset
Mandat Universitas airlangga 2019

Surabaya, 29 Juli 2019

Dr Pratiwi Soesilawati, drg.,MKes, PA(K)

76
BIODATA ANGGOTA PENELITI

A. Identitas diri

13. Nama Lengkap Indra Mulyawan, drg., Sp.BM., FICS

14. Jabatan fungsional
15. Jabatan struktural
16. NIP
17. NIDN
18. Tempat,tgl lahir
19. Alamat rumah
20. No tlp/fax/hp
21. Alamat Kantor
22. No tlp/fax
23. Alamat E-mail
24. Lulusan yang telah
dihasilkan
25. Mata kuliah yang
diampu
L
Tenaga Pengajar
-
1984122920140410002
0029128404
29 Desember 1984
Manyar Tirtoasri 12 no. 44
08175232323
Prof. Moestopo 47 Surabaya
031-5030255
indramlywn@gmail.com
s-1= org. S-2= org. S-3= org
- Ilmu Bedah Mulut I
- Ilmu Bedah Mulut II
- Skills Lab 6

B. Riwayat Pendidikan
S-1 Spesialis S-3
Nama Perguruan Universitas Universitas Airlangga -
Tinggi Airlangga
Bidang Ilmu Kedokteran Gigi Ilmu Bedah Mulut -
dan Maksilofasial
Tahun masuk-lulus
Judul
skripsi/Thesis/Disertasi
Nama
pembimbing/promotor

C. Pengalaman Penelitian dalam 5 tahun terakhir

No Tahun Judul penelitian Pendanaan
Sumber Jumlah(juta Rp)
1 The Difference of Actual Length
and Length on The Panoramic
2006
Radiography in Vertical
Dimension
2 Ekspresi tumor necrosis factor - α
dan matrix metalloproteinase -13
2016 pasca implantasi subkutan
demineralized freeze dried bovine
cortical bone membrane

77
D. Pengalaman Pengabdian masyarakat dalam 5 Tahun terakhir

No Tahun Judul Kegiatan Pengabdian kepada Sumber Dana Jumlah Dana

Masyarakat
(dalam Juta
Rupiah)

(1) (2) (3) (4) (5)

1 2013 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR + 66,989,200

Dompu BOPTN

2 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR + 67,219,200

Lombok Timur BOPTN

3 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR + 50,412,800

Sitobondo BOPTN

4 2014 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 58,845,600

Dompu

5 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di Pare, SPONSOR + 44,546,480

Kediri BOPTN

6 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RSUD SPONSOR 37,723,120

Tongas - Probolinggo

7 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 12,765,920

Besuki, Situbondo

8 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RSUD SPONSOR 74,201,600

Dr. Soedjono -Lombok Timur

9 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RS Tk. SPONSOR 85,380,000

III dr. R. Soeharsono – Banjarmasin

10 2015 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 18,736,000

Situbondo

11 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RSUD SPONSOR 120,150,640

Dr. Soedjono -Lombok Timur

78
12 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RSUD SPONSOR 148,320,000
Tongas - Probolinggo

13 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RS. SPONSOR 82,258,000

Tentara Tk. IV Wirasakti – Kupang

14 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di Bima SPONSOR 121,551,440

15 2016 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RS. SPONSOR 97,143,581

Tentara Tk. IV Wirasakti – Kupang

16 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di Bima SPONSOR 139,800,000

17 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RSUD SPONSOR 120,143,007

Dr. Soedjono -Lombok Timur

18 2017 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RST SPONSOR 135.174.747

Tk. IV Wirasakti - Kupang

19 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RSUD SPONSOR 153.664.700

Dr. Soedjono -Lombok Timur

20 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 42.606.424

Situbondo

21 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di SPONSOR 57.181.621

Rumah Sakit Fathma Medica Gresik

22 2018 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RSUD SPONSOR 130.998.000

Dr. Soedjono -Lombok Timur

23 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di RST SPONSOR 130.000.000

Tk. IV Wirasakti - Kupang

24 Bakti Sosial Operasi Bibir Sumbing di Bima DIPA 166.419.817

Kemenristekdikti
+

SPONSOR

79
E. Pengalaman Penulisan artikel ilmiah dalam jurnal dalam 5 tahun terakhir

Judul Tahun Nama Jurnal

Costochondral Reconstruction 2013

of The Mandibular Condyle
After Hemimandibulectomy Due
to Ameloblastoma

F. Pengalaman Penyampaian Makalah Secara Oral Pada Pertemuan / Seminar Ilmiah Dalam 5
Tahun Terakhir

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidak
sesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya. Demikian biodata ini saya buat
dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan Proposal Riset
Mandat Universitas airlangga 2019

Surabaya, 29 Juli 2019

Indra Mulyawan, drg., Sp.BM., FICS

80
 BIODATA ANGGOTA PENELITI

A. Identitas diri

1. Nama Lengkap Matsuguchi tetsuya

2. Jenis Kelamin Laki-laki
3. Jabatan fungsional Associate Professor
4. NIP/NIK/Identitas
lainnya
5. NIDN
6. Tempat dan Tanggal
Lahir
7. E-mail Tetsuya.M kagoshima-u.ac.jp
8. Nomor Telepon/HP
9. Alamat Kantor
10. Nomor Telepon/Faks
11. Lulusan yang telah
dihasilkan
12. Mata kuliah yang diampu 6.
7.
8.
9.
10.

B. Riwayat Pendidikan
S-1 Spesialis S-3

K. Pengalaman Penelitian Dalam 5 Tahun Terakhir

No. Tahun Judul Penelitian Pendanaan
Sumber Jml (Juta
Rp)
1

L. Pengalaman Pengabdian Kepada Masyarakat dalam 5 Tahun Terakhir

No. Tahun Judul Pengabdian Kepada Masyarakat Pendanaan
Sumber Jml (Juta
Rp)
1

81
M. Publikasi Artikel Ilmiah Dalam Jurnal dalam 5 Tahun Terakhir
No. Tahun Judul Artikel Ilmiah Nama Jurnal Volume/Nomor/Tahun
1 2010 Biochemistry 5/11/2010
Functional roles of 402(1):1-6
biophys res
Cot/Tpl2 in mast cell
commun
responses to
lipopolysaccharide and
FcεRI-clustering.

2. 2010 Biochemistry 26/11/2010

Molecular mechanisms 402(4):755-61
biophys res
of the inhibitory effect
commun
of lipopolysaccharide
(LPS) on osteoblast
differentiation.
3. 2011 Journal biology 15/7/2011
Functional involvement 286(28):24896-905
chemistry
of dual specificity
phosphatase 16
(DUSP16), a c-Jun N-
terminal kinase-specific
phosphatase, in the
regulation of T helper
cell differentiation.

4. 2012 Current medical

Mast cells as critical
chemistry 26/2/2012
effectors of host immune
defense against Gram- 19(10): 1432-42
negative bacteria
5. 2012 Magn Reson
Bleomycin-induced lung
medicine 6/2/2012
injury in mice
67(2):499-509
investigated by MRI:
model assessment for
target analysis.
6 2012 FEBS Lett 21/5/2012
LPS-induced chemokine
586(10):1540-6.
expression in both
MyD88-dependent and -
independent manners is
regulated by Cot/Tpl2-
ERK axis in
macrophages.

82
7. 2013 Aging journal
QTL mapping of
1/9/203
leukocyte telomere 5(9):704-16
length in American
Indians: the Strong
Heart Family Study.

8. 2014 Journal
Low intensity pulsed
ultrasound (LIPUS) biological
influences the Chemistry
multilineage
differentiation of 11/4/2014
289(15)/10330-4
mesenchymal stem and
progenitor cell lines
through ROCK-Cot/Tpl2-
MEK-ERK signaling
pathway.

9. 2014 Aging journal

Short leukocyte
telomere length predicts
incidence and
progression of carotid 23/5/2014
atherosclerosis in 6(5):414-27.
American Indians: the
Strong Heart Family
Study.

10. 2014 PLOS genetics

Rosa26-GFP direct
journal
repeat (RaDR-GFP) mice
reveal tissue- and age-
dependence of 5/6/2014
homologous
recombination in 843-853
mammals in vivo.

11. 2014 Aging journal

Metabolic profiles of
biological aging in 12/5/2014
American Indians: the 6(3): 176-86
Strong Heart Family
Study.

83
12. 2014 PLOS one
MAP3K8 (TPL2/COT)
journal
affects obesity-induced
adipose tissue 24/5/2014
inflammation without 9(2):e89615
systemic effects in
humans and in mice.

13. 2015 Molleculer cell

A High Through-put
Platform for proteomics
12/10/2015
Recombinant Antibodies
14(10):2833-47
to Folded Proteins.

14 2015 Journal of bone

AMP-activated protein 7/5/2015
74:125-33.
kinase (AMPK) activity
negatively regulates
chondrogenic
differentiation

15. 2015 Journal Vis Exp

Scalable high
throughput selection
17/1/2017
from phage-displayed (95):51492.
synthetic antibody
libraries.

16. 2015 Genetics journal

Automated Assay of
Telomere Length
Measurement and
Informatics for 100,000
Subjects in the Genetic 4/8/2018
Epidemiology Research 200(4):1061-72.

on Adult Health and

Aging (GERA) Cohort.

17. 2016 Journal

Low-Intensity Pulsed
orthopedic 23/8/2016
Ultrasound (LIPUS)
Stimulation Helps to trauma 30(8): s4-5
Maintain the

84
 Differentiation Potency
of Mesenchymal Stem
Cells by Induction in
Nanog Protein
Transcript Levels and
Phosphorylation.

18. 2016 Journal of lipid

CXCL3 positively
rresearch
regulates adipogenic 30/10/2016
differentiation 57(10): 1806-1820

19. 2016 Journal of aging

Investigating the
associations between
adiposity, life course 18/9/2016
overweight trajectories, 8(11):2689-2701
and telomere length.

20. 2016 FEBS Lett

Hepatocyte growth
factor reduces CXCL10
expression in 14/10/2016
90(20):3595-3605
keratinocytes.

21. 2016 Peer Journal

The yeast telomerase
RNA, TLC1, participates
in two distinct modes of 4/1/2016
TLC1-TLC1 association 4:e1534.
processes in vivo.

22. 2016 Aging journal

Investigating the
associations between
adiposity, life course 18/9/2014
8(11):2689-2701.
overweight trajectories,
and telomere length

23. 2017 Prostate journal 7/1/2017

Circulating Prostate- 77(1):22-32
Specific Antigen and

85
 Telomere Length in a
Nationally
Representative Sample
of Men Without History
of Prostate Cancer.

24. 2017 Journal of 15/5/2017

Osteopontin inhibits
osteoblast Molleculer 28(10):1326-1336

responsiveness through biology cell

the down-regulation of
focal adhesion kinase
mediated by the
induction of low-
molecular weight
protein tyrosine
phosphatase.
25. 2017 Biochemistry
Constitutive activation 5/10/2017
journal
of p46JNK2 is 474(20):3421-3437
indispensable for
C/EBPδ induction in the
initial stage of
adipogenic
differentiation
26. 2018 Journal cell
Spleen tyrosine kinase
physiology
influences the early
stages of multilineage
differentiation of bone
marrow stromal cell 3/5/2018
233(3):2549-2559
lines by regulating
phospholipase C gamma
activities.

27. 2019 FASEB journal 19/6/2019

JNK inactivation 33(6):7331-7347
suppresses osteogenic
differentiation, but
robustly induces
osteopontin expression
in osteoblasts through
the induction of
inhibitor of DNA binding
4 (Id4)

86
 28. 2019 Journal of Cell 13/9/2019
Low-intensity pulsed
biochemistry 120(9):14657-14669.
ultrasound promotes
bone morphogenic
protein 9-induced
osteogenesis and
suppresses inhibitory
effects of inflammatory
cytokines on cellular
responses via Rho-
associated kinase 1 in
human periodontal
ligament fibroblasts.
29. 2019 Journal of cell
Low intensity pulsed 19/6/2019
ultrasound (LIPUS) signal 62:109345.
maintains osteogenic
potency by the
increased expression
and stability of Nanog
through spleen tyrosine
kinase (Syk) activation.
30. 2019 Candida albicans β- Infection and
Glucan-Containing Immunity 22/5/2019
86(4). pii: e00575-17
Particles Increase HO-1
Expression in Oral
Keratinocytes via a
Reactive Oxygen
Species/p38 Mitogen-
Activated Protein
Kinase/Nrf2 Pathway

N. Pemakalah Seminar Ilmiah dalam 5 Tahun Terakhir

No. Nama Temu Judul Artikel Ilmiah Waktu dan
Ilmiah/Seminar Tempat
1.

87
O. Karya Buku dalam 5 Tahun Terakhir
No. Judul Buku Tahun Jumlah Halaman Penerbit
1

P. Perolehan HKI dalam 10 Tahun Terakhir

No. Judul/Tema HKI Tahun Jenis Nomor P/ID
1

Q. Pengalaman Merumuskan Kebijakan Publik/Rekayasa Sosial lainnya dalam 10

Tahun Terakhir
No. Judul/Tema/Jenis Rekayasa Sosial Tahun Tempat Respon
lainnya yang Telah Ditetapkan Penerapan Masyarakat
1

R. Penghargaan dalam 10 Tahun Terakhir (dari pemerintah, asosiasi atau institusi

lainnya)
No. Jenis Penghargaan Institusi Pemberi Penghargaan Tahun
1

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidak
sesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya. Demikian biodata ini saya buat
dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan Proposal Riset
Mandat Universitas airlangga 2019

Surabaya, 29 Juli 2019

Prof. Tetsuya Matsuguchi., MD., PhD

88
BIODATA ANGGOTA PENELITI

A. Identitas diri

1. Nama Lengkap Muh Subhan Amir drg., Ph.D

2. Jenis Kelamin Laki-laki

3. Jabatan Mahasiswa PPDGS Bedah Mulut dan Maksilofasial
4. NIM 020980103
5. NIDN -
6. Tempat dan Tanggal Jakarta, 14 Desember 1979
Lahir
7. E-mail Subhan.fkgunair@gmail.com
8. Nomor Telepon/HP 082264793464
9. Fakultas Fakultas Kedokteran Gigi
10. Universitas Universitas Airlangga
9. Alamat Kantor Jl. Prof. Dr. Moestopo No. 47 Surabaya
10 Nomor Telepon/Faks (031)-5030255/5030256

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidak
sesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya. Demikian biodata ini saya buat
dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan Proposal Riset
Mandat Universitas airlangga 2019

Surabaya, 29 Juli 2019

Muh Subhan Amir drg., Ph.D

89
BIODATA ANGGOTA PENELITI

A. Identitas diri

1. Nama Lengkap Gde Djodi Satria Rurus

2. Jenis Kelamin Laki-laki
3. Jabatan Mahasiswa
4. NIM 02141133045
5. NIDN -
6. Tempat dan Tanggal Surabaya, 23 September 1981
Lahir
7. E-mail jodirurus@gmail.com
8. Nomor Telepon/HP 0812 1678 7819
9. Fakultas Fakultas Kedokteran Gigi
10. Universitas Universitas Airlangga
9. Alamat Kantor Jl. Prof. Dr. Moestopo No. 47 Surabaya
10 Nomor Telepon/Faks (031)-5030255/5030256

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidak
sesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya. Demikian biodata ini saya buat
dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan Proposal Riset
Mandat Universitas airlangga 2019

Surabaya, 29 Juli 2019

Gde Djodi Satria Rurus

90
 BIODATA ANGGOTA PENELITI

A. Identitas diri

13. Nama Lengkap Tobiume Kei

14. Jenis Kelamin Laki-laki
15. Jabatan fungsional Associate Professor
16. NIP/NIK/Identitas
lainnya
17. NIDN
18. Tempat dan Tanggal
Lahir
19. E-mail tobi5651 hiroshima-u.ac.jp
20. Nomor Telepon/HP
21. Alamat Kantor
22. Nomor Telepon/Faks
23. Lulusan yang telah
dihasilkan
24. Mata kuliah yang diampu 11.
12.
13.
14.
15.

B. Riwayat Pendidikan
S-1 Spesialis S-3

B. Pengalaman Penelitian Dalam 5 Tahun Terakhir

No. Tahun Judul Penelitian Pendanaan
Sumber Jml (Juta
Rp)
1 2015 DIPA DIT-
LITABMAS

C. Pengalaman Pengabdian Kepada Masyarakat dalam 5 Tahun Terakhir

No. Tahun Judul Pengabdian Kepada Masyarakat Pendanaan
Sumber Jml (Juta
Rp)
1

91
D. Publikasi Artikel Ilmiah Dalam Jurnal dalam 5 Tahun Terakhir
No. Tahu Judul Artikel Ilmiah Nama Jurnal Volume/Nomor/Tahu
n n
1. 2007 Apoptosis Signal- Journal of
regulating Kinase (ASK) Biological
2 Functions as a Chemistry
Mitogen-activated 282/10/2007
Protein Kinase Kinase 7522-7531
Kinase in a Heteromeric
Complex with ASK1*

2. 2007 Suppression of AP-1 Biological and

Activity by Pharmaceutical 30/9/2007
Cycloprodigiosin Bulletin 1792-1795
Hydrochloride
3. 2008 Bioscience,
CD44high/ALDH1high hea
Biotechnology,
d and neck squamous
and
cell carcinoma cells
Biochemistry
exhibit mesenchymal 72/6/2008
characteristics and 1564-1570
GSK3β‐dependent
cancer stem cell
properties

4. 2009 ASK1 and ASK2 The Embo

differentially regulate the Journal
counteracting roles of
apoptosis and 28/7/2009
inflammation in
843-853
tumorigenesis

5. 2009 International
ΔNp63α‐dependent
Journal of
expression of Id‐3
Cancer
distinctively suppresses
the invasiveness of 124/12/2009
human squamous cell 2837-2844
carcinoma

92
6. 2010 RHAMM/ERK Laboratory
interaction induces Investigation
proliferative activities
of cementifying fibroma
cells through a 91 : 379-391 (2011)
mechanism based on the
CD44–EGFR

7. 2011 PGE2 targets squamous Cancer Letters

cell carcinoma cell with
the activated epidermal
growth factor receptor
307/2/202011
family for survival
227-236
against 5-fluorouracil
through NR4A2
induction

8. 2011 Blocking of sodium European

and potassium ion- Journal of
Pharmacology
dependent adenosine
triphosphatase-α1
with ouabain and
vanadate suppresses
670/2-3/2011
cell–cell fusion 409-4018
during RANKL-
mediated
osteoclastogenesis

9. 2012 Overexpression of Journal of Bone

receptor for hyaluronan- and Mineral
mediated motility Metabolism
(RHAMM) in MC3T3-
E1 cells induces
proliferation and 30/3/2012
differentiation through 293-303
phosphorylation of
ERK1/2

93
10. 2013 Microbiology
Interleukin‐8 and
and
CXCL10 expression in
Immunology
oral keratinocytes and 57/3/2013
fibroblasts via Toll‐like 198-206
receptors

11. 2013 Journal of

AKT primes snail‐
Cellular
induced EMT
Biochemistry
concomitantly with the
collective migration of 114/9/2013
squamous cell carcinoma 2039-2049
cells

13. 2013 Autocrine galectin-1 Biochemical

promotes collective cell and Biophysical
migration of squamous Research
cell carcinoma cells Communication 441/4/2013
through up-regulation s 904-910
of distinct integrins

14. 2013 Snail promotes Cyr61 Cancer Letters

secretion to prime
collective cell migration
and form invasive tumor 329/2/2013
243-252
nests in squamous cell
carcinoma

15 2014 Journal of
TMEM16E (GDD1)
. Cellular
Exhibits Protein
Physiology
Instability and Distinct 229/2/2014
Characteristics in 181-190
Chloride Channel/Pore
Forming Ability

16 2014 Cellular 34/5/2014

Expression and Function
Physiology and 1556-1565
of RIG-I in Oral

94
 Keratinocytes and Chemistry
Fibroblasts

17 2016 Journal of Oral

CD44high/ALDH1high hea
. Pathology and
d and neck squamous
Medicine
cell carcinoma cells
exhibit mesenchymal
characteristics and 45/3/2016
GSK3β‐dependent 180-188
cancer stem cell
properties

18 2016 Snail-induced CD44high Int J Clin Exp

. cells in HNSCC with Pathology
high ABC transporter
9/8/2016
capacity exhibit potent 790807918
resistance to cisplatin
and docetaxel

19 2018 Candida albicans β- Infection and

. Glucan-Containing Immunity
Particles Increase HO-1
Expression in Oral
Keratinocytes via a
Reactive Oxygen
Species/p38 Mitogen-
Activated Protein
Kinase/Nrf2 Pathway

E. Pemakalah Seminar Ilmiah dalam 5 Tahun Terakhir

No. Nama Temu Judul Artikel Ilmiah Waktu dan
Ilmiah/Seminar Tempat
1.

95
F. Karya Buku dalam 5 Tahun Terakhir
No. Judul Buku Tahun Jumlah Halaman Penerbit
1

G. Perolehan HKI dalam 10 Tahun Terakhir

No. Judul/Tema HKI Tahun Jenis Nomor P/ID
1

H. Pengalaman Merumuskan Kebijakan Publik/Rekayasa Sosial lainnya dalam 10

Tahun Terakhir
No. Judul/Tema/Jenis Rekayasa Sosial Tahun Tempat Respon
lainnya yang Telah Ditetapkan Penerapan Masyarakat
1

I. Penghargaan dalam 10 Tahun Terakhir (dari pemerintah, asosiasi atau institusi

lainnya)
No. Jenis Penghargaan Institusi Pemberi Penghargaan Tahun
1

Semua data yang saya isikan dan tercantum dalam biodata ini adalah benar dan dapat
dipertanggungjawabkan secara hukum. Apabila di kemudian hari ternyata dijumpai ketidak
sesuaian dengan kenyataan, saya sanggup menerima risikonya. Demikian biodata ini saya buat
dengan sebenarnya untuk memenuhi salah satu persyaratan dalam pengajuan Proposal Riset
Mandat Universitas airlangga 2019

Surabaya, 29 Juli 2019

Dr. Tobiume Kei Ph.D

96
Lampiran 2. Susunan Organisasi Tim Pengusul dan Pembagian Tugas

No Nama/NID Instansi Bidang Ilmu Alokasi Waktu Uraian Tugas

. N Asal (Jam/Minggu)
1. Andra Fakultas Bedah Mulut 10 Jam/minggu a. Pembuatan
Ekstrak kulit
Rizqiawan, Kedokteran dan
buah manggis
drg., PhD., Gigi Maksilofasial b. Pemesanan
primer IL-1, IL-
SpBM / Universitas
6, IL-10, TNF,
002309810 Airlangga CRP, RUNX2,
OSX, BSP,
1
ALP, Coll 1
c. Uji in-vivo
d. Pemeriksaan
PCR
e. Analisis data
f. Pembuatan
laporan
2. Dr. Pratiwi Fakultas Patologi 10 Jam/min a. Pemeriksaan
Realtime PCR
Kedokteran Anatomi ggu
b. Analisis data
Gigi c. Pembuatan
laporan
Universitas
Airlangga
3. Gde Jodi Fakultas Mahasiswa 10 Jam/minggu a. Pemesanan
Primer PDGF,
Satria Kedokteran Kedokteran
FGF, VEGF
Rurus Gigi gigi dan TGF-β
b. Uji in-vitro
Universitas Universitas
c. Analisis data
Airlangga Airlanga d. Pembuatan
laporan
4. Dr. Hiroshima Bedah Mulut 5 jam/ minggu a. Konsultasi
hasil
Tobiume University dan
Penelitian
Kei Ph.D Maksilofasial b. Konsultasi
Jurnal
Publikasi

97
Lampiran 3. Skema Keterkaitan antara isu, strategi dan tema-tema
penelitian

PRESERVASI RESIDUAL RIDGE TULANG ALVEOLARIS MELALUI

INDUKSI MANGOSTEEN PERICARP

Resorbsi tulang alvelaris yang berlebihan mengakibatkan pemasangan dental implant

menjadi tergangu dan sering gagal

TEMA

1. Perbedaan Ekspresi growth Hormon pada Human Gingival Fibroblast dengan

pemberian ekstrak kulit manggis pada wound healing assay
2. Ekstrak Mangosteen Pericarp (Gracinia mangostana L.) sebelum perawatan
membalikkan LPS yang diinduksi penghambatan diferensiasi osteoblas pada
MC3T3
OUTPUT

Pembuatan Gel Eksrak kulit manggis yang diaplikasikan pada soket bekas pencabutan gigi

OUTCOME

Dapat mengurangi terjadinya resorbsi pada tulang alveolaris yang dapat mendukung
untuk pemasangan dental implan

98
Lampiran 4. Justifikasi Anggaran Penelitian

1. Honorarium
Honor Honor/jam Waktu Minggu Honor per Tahun
(Rp) (Jam/minggu) (Rp)
Tahun ke-1
Ketua 12.270 10 48 5.890.000
Anggota 1 12.270 10 48 3.927.000
Anggota 2 12.270 10 48 3.927.000
Anggota 3 12.270 10 48 3.927.000
Anggota 4 12.270 10 48 3.927.000
Anggota 5 8.166 10 24 1.960.000
Anggota 6 8.166 10 24 1.960.000
Laborat 5.000 10 48 2.400.000
Analis data 5.000 10 7 359.000
Subtotal (Rp) 24.350.000
2. Pembelian bahan habis pakai
Hara Peralatan
Justifikasi Harga
Material Kuantitas Penunjang (Rp)
Pembelian Satuan (Rp)
Tahun ke-1
Pembuatan kulit
Sebagai
buah manggis 5000 gram 500.000 500.000
perlakuan
gel
Kultur Human Jenis sel
Gingival yang 5x 500.000 3.500.000
Fibroblast digunakan
Primer PDGF-B Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer FGF-2 Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer VEGF-A Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer TGF-β1 Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Kultur Jenis sel
5x 500.000 3.500.000
Osteoblast Cell yang

99
 digunakan
Primer IL-1 Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer IL-6 Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer IL-10 Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer TNF-α Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer CRP Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer RunX2 Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer OSX Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer BSP Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer ALP Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Primer Col1α Untuk PCR 2 buah 200.000 400.000
Pemeriksaan
PCR 4x2 reaksi 500.000 4.000.000
PCR
Medium
DMEM 8 liter 500.000
untuk sel 4.000.000
Nutrisi untuk
FBS 5% 400 ml 6.000.000 6.000.000
medium
Washing
PBS PH 7,4 4 liter 100.000 400.000
Agent
Antibiotik Antibiotik
Penicillin untuk 50 ml 300.000 300.000
Streptomycin medium
Pemeriksaan
Rneasy mini kit 1 – kit 17.000.000 17.000.000
PCR
Pemeriksaan
PCR kit 1- kit 3.000.000 3.000.000
PCR
Gel Pemeriksaan
500.000 500.000
Elektroforesis PCR
dH2O Sterile water 10 liter 100.000 100.000
Glass dan Cover
Kultur sel 200 biji 10.000 2.000.000
glass
Subtotal (Rp) 50.400.000
Perjalanan Justifikasi Kuantitas Harga

100
 Perjalanan Satuan (Rp) Tahun ke-1
Perjalanan 2 orang 7.500.000 15.000.000
Administrasi 2.000.000 2.000.000
Etical Clearence 1.500.000 1.500.000
Akomodasi 1.500.000 1.500.000
Konsumsi 1.00.000 1.000.000
Pengolahan data 750.000 750.000
Laporan dan
500.000 500.000
penggandaan
Publikasi 3.000.000 3.000.000
Subtotal (Rp) 25.250.000
TOTAL ANGGARAN YANG DIPERLUKAN 100.000.000
SETIAP TAHUN (Rp)
TOTAL ANGGARAN YANG DIPERLUKAN
100.000.000
SELURUHNYA (Rp)

101
Lampiran 5: Surat Pernyataan Ketua Peneliti

SURAT PERNYATAAN KETUA PENELITI

Yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama :Andra Rizqiawan, drg., PhD., SpBM
NIDN : 0023098101
Fakultas : Kedokteran Gigi
Pangkat/Golongan : Penata / (III/c)
Jabatan Fungsional : Lektor

Dengan ini Mengajukan Proposal Hibah Riset Mandat Universitas Airlangga dengan judul:
“ Preservasi residual ridge tulang alveolaris melalui induksi mangosteen pericarp “
saya sebagai Ketua peneliti menyatakan bahwa :
1. Saya bersedia menjadi Ketua/anggota peneliti dengan meluangkan waktu selama
200 jam / bulan untuk melakukan riset termasuk mpnev dan presentasi hasilnya
2. Saya bersedia menyerahkan bukti submit ke Jurnal Internasional terindeks
SCOPUS selambat-lambatnya tanggal 29 Desember 2019 dan paling lambat 15
Agustus 2020 bukti Accepted 5 paper
3. Proposal riset yang saya ajukan diatas belum pernah dibiayai dan tidak sedang
diajukan untuk dibiayai oleh instansi lain.
4. Proposal riset yang saya ajukan diatas tidak mengandung plagiasi atau autoplagiasi
serta pengulangan riset yang telah dilakukan.

Demikianlah pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya dan bersedia mengembalikan
dana riset yang telah saya gunakan apabila terbukti bahwa pernyataan saya diatas tidak
benar.

Surabaya, 29 Juli 2019

Yang Menyatakan,

meterai
Materai 6000

Andra Rizqiawan, drg., PhD., SpBM

NIP.19810923 200501 1 001

102
 SURAT PERNYATAAN ANGGOTA PENELITI

Yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Dr. Pratiwi Soesilawati, drg., M.Kes., PA(K)

NIDN : 00221169003

Fakultas : Kedokteran Gigi

Pangkat/Golongan : Penata / IIId

Jabatan Fungsional :Lektor
Dengan ini Mengajukan Proposal Hibah Riset Mandat Universitas Airlangga dengan judul:
“ Preservasi residual ridge tulang alveolaris melalui induksi mangosteen pericarp “
saya sebagai Ketua peneliti menyatakan bahwa :
1. Saya bersedia menjadi anggota peneliti dengan meluangkan waktu selama 200 jam
/ bulan untuk melakukan riset termasuk mpnev dan presentasi hasilnya
2. Saya bersedia menyerahkan bukti submit ke Jurnal Internasional terindeks
SCOPUS selambat-lambatnya tanggal 29 Desember 2019 dan paling lambat 15
Agustus 2020 bukti Accepted 5 paper
3. Proposal riset yang saya ajukan diatas belum pernah dibiayai dan tidak sedang
diajukan untuk dibiayai oleh instansi lain.
4. Proposal riset yang saya ajukan diatas tidak mengandung plagiasi atau autoplagiasi
serta pengulangan riset yang telah dilakukan.

Demikianlah pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya dan bersedia mengembalikan
dana riset yang telah saya gunakan apabila terbukti bahwa pernyataan saya diatas tidak
benar.
Surabaya, 29 Juli 2019
Yang Menyatakan,

meterai
Materai 6000

Dr. Pratiwi Soesilawati, drg., M.Kes., PA(K)

NIP.196911221996012001

103
 SURAT PERNYATAAN ANGGOTA PENELITI

Yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Indra Mulyawan, drg., Sp.BM., FICS

NIDN : 0029128404

Fakultas : Kedokteran Gigi` `, `

Pangkat/Golongan : Penata / (III/c)

Jabatan Fungsional : Lektor

Dengan ini Mengajukan Proposal Hibah Riset Mandat Universitas Airlangga dengan judul:
“ Preservasi residual ridge tulang alveolaris melalui induksi mangosteen pericarp “
saya sebagai peneliti menyatakan bahwa :
1. Saya bersedia menjadi anggota peneliti dengan meluangkan waktu selama 200 jam
/ bulan untuk melakukan riset termasuk mpnev dan presentasi hasilnya
2. Saya bersedia menyerahkan bukti submit ke Jurnal Internasional terindeks
SCOPUS selambat-lambatnya tanggal 29 Desember 2019 dan paling lambat 15
Agustus 2020 bukti Accepted 5 paper
3. Proposal riset yang saya ajukan diatas belum pernah dibiayai dan tidak sedang
diajukan untuk dibiayai oleh instansi lain.
4. Proposal riset yang saya ajukan diatas tidak mengandung plagiasi atau autoplagiasi
serta pengulangan riset yang telah dilakukan.

Demikianlah pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya dan bersedia mengembalikan
dana riset yang telah saya gunakan apabila terbukti bahwa pernyataan saya diatas tidak
benar.

Surabaya, 29 Juli 2019

Yang Menyatakan,

meterai
Materai 6000

Indra Mulyawan, drg., Sp.BM., FICS

104
 SURAT PERNYATAAN ANGGOTA PENELITI

Yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Muh Subhan Amir drg., Ph.D

NIDN : 00221169003

Fakultas : Kedokteran Gigi` `, `

Jabatan : Mahasiswa

Dengan ini Mengajukan Proposal Hibah Riset Mandat Universitas Airlangga dengan judul:
“ Preservasi residual ridge tulang alveolaris melalui induksi mangosteen pericarp “
saya sebagai peneliti menyatakan bahwa :
1. Saya bersedia menjadi anggota peneliti dengan meluangkan waktu selama 200 jam
/ bulan untuk melakukan riset termasuk mpnev dan presentasi hasilnya
2. Saya bersedia menyerahkan bukti submit ke Jurnal Internasional terindeks
SCOPUS selambat-lambatnya tanggal 29 Desember 2019 dan paling lambat 15
Agustus 2020 bukti Accepted 5 paper
3. Proposal riset yang saya ajukan diatas belum pernah dibiayai dan tidak sedang
diajukan untuk dibiayai oleh instansi lain.
4. Proposal riset yang saya ajukan diatas tidak mengandung plagiasi atau autoplagiasi
serta pengulangan riset yang telah dilakukan.

Demikianlah pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya dan bersedia mengembalikan
dana riset yang telah saya gunakan apabila terbukti bahwa pernyataan saya diatas tidak
benar.

Surabaya, 29 Juli 2019

Yang Menyatakan,

meterai
Materai 6000

Muh Subhan Amir drg., Ph.D

105
 SURAT PERNYATAAN ANGGOTA PENELITI

Yang bertanda tangan di bawah ini:

Nama : Gde Djodi Satria Rurus

NIDN : 02141133045

Fakultas : Kedokteran Gigi

Jabatan : Mahasiswa

Dengan ini Mengajukan Proposal Hibah Riset Mandat Universitas Airlangga dengan judul:
“ Preservasi residual ridge tulang alveolaris melalui induksi mangosteen pericarp “
saya menyatakan bahwa :
1. Saya bersedia menjadi anggota peneliti dengan meluangkan waktu selama 200 jam
/ bulan untuk melakukan riset termasuk mpnev dan presentasi hasilnya
2. Saya bersedia menyerahkan bukti submit ke Jurnal Internasional terindeks
SCOPUS selambat-lambatnya tanggal 29 Desember 2019 dan paling lambat 15
Agustus 2020 bukti Accepted 5 paper
3. Proposal riset yang saya ajukan diatas belum pernah dibiayai dan tidak sedang
diajukan untuk dibiayai oleh instansi lain.
4. Proposal riset yang saya ajukan diatas tidak mengandung plagiasi atau autoplagiasi
serta pengulangan riset yang telah dilakukan.

Demikianlah pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya dan bersedia mengembalikan
dana riset yang telah saya gunakan apabila terbukti bahwa pernyataan saya diatas tidak
benar.

Surabaya, 29 Juli 2019

Yang Menyatakan,

meterai
Materai 6000

Gde Djodi Satria Rurus

106
 SURAT PERNYATAAN ORIGINILITAS

Yang bertanda tangan dibwah ini saya :

Nama :Andra Rizqiawan, drg., PhD., SpBM

NIDN : 0023098101
Fakultas : Kedokteran Gigi
Pangkat/Golongan : Penata / (III/c)
Jabatan Fungsional : Lektor

Menyatakan bahwa saya tidak melakukan plagiat dalam penelitan saya yang berjudul :

Judul Penelitian: : Preservasi residual ridge tulang alveolaris melalui Induksi

mangosteen pericarp
Topik Riset Mandat : Kesehatan, Penyakit tropis, Gizi dan obat
Bidang Fokus : Pengembangan vaksin, obat dan obat tradisional (Bahan
alam )

Apabila suatu saat nanti terbukti melakukan plagiat maka saya akan menerima sanksi yang
telah ditetapkan.
Demikian surat pernyataan ini saya buat dengan sebenar-benarnya

Surabaya, 29 Juli 2019

Yang Menyatakan,

meterai

Materai 6000

Andra Rizqiawan, drg., PhD., SpBM

NIP.19810923 200501 1 001

107