P3

HALAMAN PENGESAHAN

Materi : Isolasi Enzim

Kelompok : 3 – Selasa
Anggota : 1. Andrew Christian T.P. 21030117130115
2. Angga Gata Hasega 21030117130107
3. Nurul Latifah 21030117130095
4. Zahra Alifia Bimonov 21030117120030

Telah disetujui dan disahkan oleh asisten pengampu pada:

Hari :
Tanggal :

Semarang,
Mengetahui,

Hansel Milen Santoso

NIM 21030116130153

ii
 P3

RINGKASAN

Enzim adalah katalisator protein untuk reaksi-reaksi kimia pada sistem

biologi Enzim adalah protein yang berfungsi sebagai katalisator untuk reaksi-reaksi
kimia didalam sistem biologi. Katalisator berfungsi untuk mempercepat reaksi kimia.
Laju reaksi kimia di dalam organisme hidup dapat meningkat 10 9 sampai 1020 kali
lebih cepat dengan adanya enzim. Enzim memiliki spesifisitas yang tinggi terhadap
substratnya serta memiliki aktivitas tertinggi pada temperatur dan pH optimumnya
Tujuan dari penelitian ini mengisolasi enzim selulase dari Aspergillus niger dengan
bahan baku kulit jagung dan mengkaji pengaruh pH fermentasi terhadap aktivitas
enzim.
Enzim dapat diisolasi secara ekstraseluler dan intraseluler. Ekstrasi enzim
ekstraseluler lebih mudah dibandingkan ekstrasi enzim intraseluler karena tidak
memerlukan pemecahan sel dan enzim yang dikeluarkan dari sel mudah dipisahkan
dari pengotor lain serta tidak banyak bercampur dengan bahan-bahan sel lain.
Faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim diantaranya temperatur, pH, konsentrasi
enzim dan substrat, serta inhibitor enzim.
Rancangan proses praktikum secara garis besar diawali dengan proses
persiapan bahan baku, dilanjutkan pembuatan starter kemudian proses fermentasi,
hasil fermentasi disentrifugasi dan filtratnya dicampur CMC dengan perbandingan
volume 1:1, kemudian dilakukan uji glukosa sebelum dan sesudah dilakukan inkubasi
selama 1 malam.
Dalam percobaan yang dilakukan, nilai aktivitas enzim terhadap waktu
inkubasi untuk variabel 2 sesuai dengan teori yang ada. Namun untuk variabel 1, 3,
dan 4 tidak sesuai teori yang ada. Dimana seharusnya nilai aktivitas enzim naik
seiring bertambahnya waktu kemudian turun. Data yang diperoleh pada data
variabel 1, 3, dan 4 menghasilkan grafik yang fluktuatif. Hal ini disebabkan karena
adanya inhibitor yang menghambat kerja aktivitas enzim selulase. Glukosa dan
selobiosa adalah inhibitor enzim dalam menghidrolisis selulosa. Sedangkan
hubungan nilai aktivitas enzim dengan pH juga tidak sesuai dengan teori, dimana
seharusnya pH optimum enzim selulase adalah 4, namun pada percobaan ditemukan
pH dengan aktivitas enzim tertinggi adalah variabel 3 dengan pH 7. Hal disebabkan
oleh perbedaan pH optimum pertumbuhan bakteri dengan pH optimum enzim
selulase.
Tutup wadah pemanasan ketika memanaskan campuran kulit jagung dan
larutan NaOH karena uap NaOH berbahaya ketika terhirup. Pada praktikum ini
tidak menggunakan variabel suhu, oleh karena itu di praktikum selanjutnya
diharapkan menggunakan variabel suhu untuk mengetahui suhu optimum yang baik
untuk enzim bekerja. Pembuatan CMC sebaiknya dilakukan dalam kondisi aquades
hangat agar CMC lebih mudah larut.

iii
 P3

PRAKATA

Puji syukur kami panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah
memberikan rahmat serta karunia-Nya kepada kami sehingga dapat menyelesaikan
proposal Isolasi Enzim. Dalam proposal ini, penulis meyakini sepenuhnya bahwa
tidak mungkin menyelesaikan laporan tanpa batuan dan dukungan dari berbagai
pihak. Pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih kepada:

1. Ibu Dr.-Ing Silviana, S.T, M.T. selaku penanggung jawab Laboratorium

Mikrobiologi Industri Universitas Diponegoro.
2. Prof. Dr. Ir. Abdullah, MS selaku dosen pengampu materi isolasi enzim.
3. Diny Dwi Anugrainy selaku koordinator asisten Laboratorium Mikrobiologi
Industri Universitas Diponegoro.
4. Hansel Milen Santoso dan Florence Kharisma, selaku asisten pengampu materi
isolasi enzim Laboratorium Mikrobiologi Industri Universitas Diponegoro.
5. Seluruh aisten Laboratorium Mikrobiologi Industri Universitas Diponegoro.
6. Teman – teman angkatan 2017.
7. Berbagai pihak lainnya yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Kami mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun untuk kesempurnaan
laporan praktikum kami. Sekian kami ucapkan terimakasih.

Semarang,

Penyusun

iv
 P3

DAFTAR ISI

HALAMAN PENGESAHAN.....................................................................................ii
RINGKASAN.............................................................................................................iii
PRAKATA..................................................................................................................iv
DAFTAR ISI................................................................................................................v
DAFTAR TABEL...................................................................................................... vi
DAFTAR GAMBAR.................................................................................................vii
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................................viii
BAB I PENDAHULUAN............................................................................................1
1.1 Latar Belakang............................................................................................1
1.2 Rumusan Masalah.......................................................................................2
1.3 Tujuan Percobaan........................................................................................2
1.4 Manfaat Percobaan......................................................................................2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA................................................................................3
2.1 Pengertian Isolasi.......................................................................................3
2.2 Pengertian Enzim......................................................................................3
2.3 Penggolongan Enzim................................................................................4
2.4 Metode Isolasi Enzim................................................................................4
2.5 Faktor yang Mempengaruhi Isolasi Enzim...............................................6
2.6 Perhitungan Aktivitas Enzim....................................................................7
BAB III METODE PRAKTIKUM............................................................................9
3.1 Rancangan Praktikum...............................................................................9
3.2 Alat dan Bahan yang Digunakan.............................................................10
3.3 Gambar Alat ...........................................................................................10
3.4 Prosedur Praktikum.................................................................................11
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN..................................................................14
4.1 Pengaruh Waktu Inkubasi Terhadap Aktivitas Enzim Selulase...............14
4.2 Pengaruh pH Terhadap Aktivitas Enzim.................................................16
BAB V PENUTUP.....................................................................................................18
5.1 Kesimpulan...............................................................................................18
5.2 Saran..........................................................................................................18
DAFTAR PUSTAKA................................................................................................19

v
 P3

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Penggolongan Enzim....................................................................................3

Tabel 4.1 Data Waktu Inkubasi dengan Aktivitas Enzim...........................................14

vi
 P3

DAFTAR GAMBAR

Gambar 3.1 Skema Rancangan Praktikum Isolasi Enzim............................................9

Gambar 3.2 Beaker Glass...........................................................................................10
Gambar 3.3 Thermometer...........................................................................................10
Gambar 3.4 Gelas Ukur..............................................................................................10
Gambar 3.5 Pengaduk.................................................................................................10
Gambar 3.6 Inkubator.................................................................................................10
Gambar 3.7 Timbangan..............................................................................................10
Gambar 3.8 Indikator pH............................................................................................10
Gambar 3.9 Kompor Listrik........................................................................................10
Gambar 3.10 Buret......................................................................................................10
Gambar 3.11 Statif & Klem.......................................................................................11
Gambar 3.12 Tabung Sentrifugasi..............................................................................11
Gambar 3.13 Kertas Saring.........................................................................................11
Gambar 3.14 Corong Buchner...................................................................................11
Gambar 3.15 Shaker....................................................................................................11
Gambar 3.16 Pompa Vacuum.....................................................................................11
Gambar 3. 17 Erlenmeyer Penghisap..........................................................................11
Gambar 4.1 Hubungan Waktu Inkubasi vs Aktivitas Enzim......................................14

vii
 P3

DAFTAR LAMPIRAN

LEMBAR DATA HASIL PRAKTIKUM ...............................................................A-1

LEMBAR PERHITUNGAN DATA .......................................................................B-1
LEMBAR KUANTITAS REAGEN ........................................................................C-1
LEMBAR PERHITUNGAN REAGEN ..................................................................D-1
REFERENSI
LEMBAR ASISTENSI

viii
 P3

BAB I
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Enzim adalah protein yang berfungsi sebagai katalisator untuk reaksi-reaksi
kimia didalam sistem biologi. Katalisator berfungsi untuk mempercepat reaksi
kimia. Walaupun katalisator ikut serta dalam reaksi, ia kembali ke keadaan
semula bila reaksi telah selesai. Enzim adalah katalisator protein untuk reaksi-
reaksi kimia pada sistem biologi (Indah, 2004). Laju reaksi kimia di dalam
organisme hidup dapat meningkat 109 sampai 1020 kali lebih cepat dengan adanya
enzim. Enzim memiliki spesifisitas yang tinggi terhadap substratnya serta
memiliki aktivitas tertinggi pada temperatur dan pH optimumnya (Budiman,
2011). Menurut Kombong (2011), mikroba sebagai mesin hayati yang dapat
mensintesis banyak enzim yang dapat berfungsi dalam pertumbuhan,
metabolisme, dan autolisis. Penggunaan mikroba sebagai penghasil enzim
memiliki beberapa keuntungan, yaitu di antaranya biaya produksi relatif murah,
dapat diproduksi dalam waktu singkat sesuai dengan permintan, memiliki
kecepatan tumbuh yang tinggi serta mudah dikontrol.
Salah satu jenis enzim adalah enzim selulase. Menurut Chellapandi dan
Jani (2008) dalam Acharya, dkk (2008), selulase adalah enzim sinergis yang
digunakan untuk memecah selulosa menjadi glukosa atau oligosakarida lainnya.
Sistem enzim pada jamur dianggap terdiri dari tiga enzim hidrolitik, yaitu endo-
(1,4)-β-D-glukanase, β–glucosidase, dan exo-(1,4)-β-D-glucanase. Enzim
selulase memiliki penggunaan yang luas pada industri dan aplikasi komersial.
Aplikasi potensial selulase adalah pada bidang makanan, pakan ternak, tekstil,
bahan bakar, industri kimia, industri kertas dan pulp, pengelolaan limbah, medis /
industri farmasi, dan produksi protoplas (Kumar, 2011).
Kulit jagung merupakan bagian tanaman yang melindungi biji jagung,
Tongkol jagung merupakan bagian tanaman tempat melekatnya biji jagung.
Limbah kulit dan tongkol jagung sudah digunakan sebagai pakan ternak oleh
masyarakat, akan tetapi pemanfaatannya belum maksimal. Kedua limbah tersebut
masih memiliki nilai ekonomis yang rendah dan akan menimbulkan pencemaran
lingkungan saat dibakar. Kulit dan tongkol jagung memiliki kandungan serat
selulosa yang tinggi. Komposisi kimia kulit jagung meliputi 15% lignin ; 5,09%
abu ; 4,57% alkohol-sikloheksana ; dan 44,08% selulosa (Prasetyawati, 2015).
Tanaman jagung merupakan salah satu makanan pokok di Indonesia yang
cukup banyak dikonsumsi sehingga menghasilkan limbah alami dalam jumlah

1
 P3

yang cukup berlimpah. Hasil bulir jagung yang dimanfaatkan dalam bidang
pangan hanya mewakili 5% dari keseluruhan tanaman jagung, sedangkan 95%
sisa dari tanaman jagung masuk dalam kategori limbah alami yaitu batang, daun,
kulit dan tongkol jagung. Salah satu limbah yang dari tanaman jagung yang
belum termanfaatkan secara optimal adalah kulit jagung (Ginting, 2015).
Menurut Meryandini (2009), penanganan limbah pertanian secara biologi dapat
dilakukan dengan menggunakan enzim misalnya selulase. Selulase merupakan
enzim ekstraseluler yang terdiri atas kompleks endo-β-1,4-glukonase (CMCase,
Cx selulase endoselulase, atau carboxymethyl cellulase), kompleks ekso-β-1,4-
glukonase (aviselase, selobiohidrolase, C1 selulase), dan β-1,4-glukosidase atau
selobiase. Beberapa dekomposer seperti bakteri dan cendawan mampu
menghasilkan selulase, contohnya Aspergillus niger dan Trichodema viride
(Safari, 2017).
1.2 Rumusan Masalah
Enzim merupakan senyawa protein yang berfungsi untuk menurunkan
energi aktivasi suatu reaksi dan mengarahkan hasil reaksi tersebut ke arah yang
diinginkan. Enzim juga merupakan suatu senyawa yang terdenaturisasi pada suhu
tinggi. Terdapat faktor faktor yang mempengaruhi aktivitas enzim seperti
konsentrasi enzim, konsentrasi substrat, suhu, pH, dan inhibitor. Pada praktikum
ini akan dilakukan isolasi enzim dari kulit jagung, menghitung aktivitas enzim,
membandingkan aktivitas enzim dengan perbedaan variabel pH awal untuk
fermentasi.
1.3 Tujuan Praktikum
1. Mengisolasi enzim selulase dari Aspergillus niger dengan bahan baku kulit
jagung.
2. Mengkaji pengaruh pH fermentasi terhadap aktivitas enzim.
1.4 Manfaat Praktikum
1. Mengisolasi enzim dari kulit jagung sehingga kebutuhan akan enzim yang
masih mahal dapat terpenuhi.
2. Mengurangi limbah kulit jagung.
3. Dapat mengubah nilai limbah kulit jagung menjadi lebih ekonomis.

2
 P3

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Pengertian Isolasi

Pada dasarnya isolasi senyawa kimia dari bahan alam itu adalah sebuah
cara untuk memisahkan senyawa yang bercampur sehingga dapat menghasilkan
senyawa tunggal yang murni. Pada tumbuhan terkandung ribuan bahkan jutaan
senyawa, baik yang dikategorikan sebagai metabolit primer ataupun metabolit
sekunder. Pada kebanyakan kasus proses isolasi senyawa dari bahan alam
mentargetkan untuk mengisolasi senyawa metabolit sekunder, karena senyawa
metabolit sekunder pada umumnya memberi manfaat terhadap kehidupan
manusia (Lestari, 2014).
Beberapa tahapan isolasi adalah sebagai berikut : (Lestari, 2014)
a. Melakukan ekstraksi dengan menggunakan pelarut organik.
b. Melakukan pemisahan dengan berbagai metoda kromatografi antara
lain menggunakan metoda partisi, kromatografi kolom, Kromatografi
planar, kromatografi radial, HPLC dll.
c. Elusidasi struktur senyawa yang telah diisolasi dengan menggunakan
berbagai metoda spectroskopi seperti Inframerah, spektum massa,
NMR dll
d. Ujikan aktivitas farmakologis senyawa yang telah berhasil diisolasi

2.2. Pengertian Enzim

Enzim atau biokatalisator adalah katalisator organik yang dihasilkan oleh
sel. Enzim sangat penting dalam kehidupan, karena semua reaksi metabolisme
dikatalis oleh enzim. Jika tidak ada enzim, atau aktivitas enzim terganggu maka
reaksi metabolisme sel akan terhambat hingga pertumbuhan sel juga terganggu.
Reaktan dari suatu reaksi yang dikatalisis oleh enzim disebut substrat dan tiap
enzim memiliki sifat yang cukup spesifik, dimana enzim hanya bereaksi dengan
substrat tertentu atau menghasilkan produk tertentu dari suatu substrat (Risma,
2012).
Menurut Risma (2012), Komponen utama dari suatu enzim adalah protein.
Tanpa kehadiran suatu komponen non-protein, yang disebut kofaktor, banyak
protein enzim kehilangan aktivitas. Komponen selain protein pada enzim
dinamakan kofaktor. Koenzim dapat merupakan ion logam/metal, atau molekul
organik yang dinamakan koenzim. Gabungan antara bagian protein enzim
(apoenzim) dan kofaktor dinamakan holoenzim. Ketika suatu kofaktor terikat

3
 P3

sangat kuat sehingga sulit dipisahkan tanpa merusak enzim maka disebut gugus
prostetik.

2.3. Penggolongan Enzim

Enzyme Commission menggolongkan enzim ke dalam enam golongan
utama sesuai dengan reaksi yang dikatalisis, yaitu :
Tabel 2.1 Penggolongan Enzim

Kelas Jenis Enzim Jenis Reaksi yang Dikatalisis

1 Oksireduktase
2 Transferase
3 Hidrolase
4 Liase
5 Isomerase
6 Ligase
7 Selulase
Reduksi - Oksidasi
Transfer atom atau gugus
Hidrolisis
Adisi atau pembentukan rangkap
Isomerasi
Kondensasi
Pemecahan selulosa menjadi glukosa
(Budiman, Arief., 2011)

2.4. Metode Isolasi Enzim

Metode dalam isolasi enzim secara umum dibagi menjadi 3, yaitu :
1. Sentrifugasi
Proses sentrifugasi digunakan untuk memisahkan campuran padat cair
atau caircair. Bahan-bahan yang dimasukkan ke dalam alat diputar dengan
kecepatan tinggi sehingga terkena pengaruh gaya sentrifugal, akibatnya
butiran-butiran padat tertinggal pada dinding sekitar alat (Vollrath, 1984
dalam Simbolon, 2015).
Sentrifugasi merupakan metode yang dapat digunakan untuk memisahkan
enzim ekstraseluler dari sisa-sisa sel. Sentrifugasi akan menghasilkan enzim
terlarut dalam bentuk filtrat yang jernih dan sisa - sisa sel lain serta pengotor
dalam bentuk endapan yang terikat kuat pada dasar tabung. Sel-sel mikroba
biasanya mengalami sedimentasi pada kecepatan 5000 rpm selama 15 menit
(Scopes, 1982; Walsh and Headon, 1994 dalam Dimyathi, 2014).
Prinsip sentrifugasi berdasarkan pada kenyataan bahwa setiap partikel
yang berputar pada laju sudut yang konstan akan memperoleh gaya keluar (F).
Besar gaya ini bergantung pada laju sudut ω (radian/detik) dan radius
pertukarannya (sentimeter) (Cooper, 1997 dalam Dimyathi, 2014).

2. Fraksinasi menggunakan ammonium sulfat [(NH4)2SO4]

4
 P3

Fraksinasi merupakan proses pengendapan protein atau enzim dengan

penambahan senyawa elektrolit seperti garam ammonium sulfat, natrium
klorida atau natrium sulfat. Sebagian besar enzim berada dalam cairan sel
sebagai protein terlarut. Enzim larut dalam larutan garam dengan konsentrasi
0,15 - 0,20 M dan pH netral. Kelarutan enzim tersebut merupakan hasil
interaksi polar dengan pelarut dan gaya tolak-menolak antara molekul yang
bermuatan sama (Simbolon, 2015).
Menurut Suhartono (1989), penambahan senyawa elektrolit ke dalam
larutan yang mengandung protein dapat menyebabkan terjadinya proses
pengendapan protein. Proses pengendapan protein tersebut dipengaruhi oleh
kekuatan ion dalam larutan. Dengan meningkatnya kekuatan ion, kelarutan
enzim akan semakin besar atau disebut dengan peristiwa salting in, setelah
mencapai suatu titik tertentu, dimana kandungan garam semakin tinggi akan
menyebabkan kelarutan protein semakin menurun dan terjadi proses
pengendapan protein. Peristiwa pengendapan protein ini disebut salting out
(Wirahadikusumah, 1989 dalam Dimyathi, 2014).
Kelebihan ammonium sulfat dengan dibandingkan dengan senyawa-
senyawa elektrolit lain ialah memiliki kelarutan yang tinggi, tidak
mempengaruhi aktivitas enzim, mempunyai daya pengendap yang efektif,
efek penstabil terhadap kebanyakan enzim, dapat digunakan pada berbagai pH
dan harganya murah (Scopes, 1982 dalam Dimyathi, 2014).
3. Dialisis
Dialisis merupakan metode yang digunakan untuk memurnikan larutan
protein atau enzim yang mengandung garam setelah proses fraksinasi
berdasarkan pada sifat semipermeabel membran yang dapat menahan
molekul-molekul kecil seperti garam. Proses dialisis berlangsung karena
adanya perbedaan konsentrasi zat terlarut di dalam dan di luar membran.
Difusi zat bergantung pada temperatur dan viskositas larutan. Meskipun
temperatur tinggi dapat meningkatkan laju difusi, namun sebagian besar
protein dan enzim stabil pada temperatur 4-8°C sehingga dialisis harus
dilakukan di dalam ruang dingin (Pohl, 1990 dalam Simbolon, 2014)).
Proses dialisis dilakukan dengan memasukkan larutan enzim ke dalam
kantung dialisis yang terbuat dari membran semipermeabel (selofan).
Selanjutnya, kantung yang berisi larutan protein atau enzim dimasukkan ke
dalam larutan bufer sambil diputar-putar. Selama proses tersebut, molekul
kecil yang ada di dalam larutan protein atau enzim seperti garam anorganik
akan keluar melewati pori-pori membran, sedangkan molekul protein atau

5
 P3

enzim yang berukuran besar tetap tertahan dalam kantung dialisis. Keluarnya
molekul menyebabkan distribusi ion-ion yang ada di dalam dan di luar
kantung dialisis tidak seimbang. Untuk memperkecil pengaruh ini digunakan
larutan bufer dengan konsentrasi rendah di luar kantung dialisis (Lehninger,
1982). Setelah tercapai keseimbangan, larutan di luar kantung dialisis diganti
dengan larutan yang baru agar konsentrasi ion-ion di dalam kantung dialisis
dapat dikurangi. Proses ini dapat dilakukan secara terus menerus sampai ion-
ion di dalam kantung dialisis dapat diabaikan (Mc Phie, 1971 dalam Boyer
1993 dalam Dimyathi, 2014).

2.5. Faktor yang Mempengaruhi Isolasi Enzim

Ada beberapa faktor yang dapat mempengaruhi aktivitas isolasi enzim,
antara lain:
1. Konsentrasi Enzim
Kecepatan suatu reaksi oleh bantuan enzim tergantung pada konsentrasi
enzim itu. Pada suatu konsentrasi substrat tertentu kecepatan reaksi enzimatis
bertambah pada saat bertambahnya konsentrasi enzim (Irawati, 2016).
2. Konsentrasi Substrat
Pada saat konsentrasi enzim konstan bertambahnya konsentrasi substrat
meningkatkan kecepatan reaksi enzimatis. Akan tetapi pada konsentrasi
tertentu tidak terjadi peningkatan kecepatan reaksi walaupun konsentrasi
substrat ditambah. Keadaan ini disebabkan karena terbentuk kompleks enzim-
substrat. Kontak ini terjadi pada sisi aktif enzim. Pada konsentrasi substrat
rendah, sisi aktif enzim hanya akan menampung substrat sedikit. Bila
konsentrasi diperbesar, maka banyak substrat akan bergabung dengan sisi
aktif enzim tersebut menyebabkan kecepatan reaksi semakin cepat. Namun
pada suatu batas konsentrasi tertentu, semua sisi aktif enzim telah dipenuhi
substrat, dimana dalam keadaan ini bertambahnya konsentrasi substrat tidak
menyebabkan bertambah besarnya konsentrasi kompleks enzim-substrat,
sehingga hasil reaksinya tidak bertambah besar (Irawati, 2016).
3. Suhu
Pada suhu rendah reaksi kimia berlangsung lambat, pada suhu tinggi
secara umum reaksi kimia berlangsung cepat. Pada suhu optimum kecepatan
reaksi enzimatis adalah maksimum. Pada suhu melewati suhu optimumnya
dapat menyebabkan terjadinya denaturasi enzim sehingga menurunkan
kecepatan reaksi karena sisi aktif enzim terganggu (Irawati, 2016).
4. Derajat Keasamaan (pH)

6
 P3

Seperti protein pada umumnya, struktur ion enzim tergantung pada pH

lingkungannya. Enzim dapat bermuatan positif, negatif atau bermuatan ganda
(zwitter ion). Pengaruh perubahan pH lingkungan berpengaruh pada
efektivitas sisi aktif dari enzim. Nilai pH yang rendah atau pH tinggi juga
menyebabkan terjadinya proses denaturasi yang mengakibatkan menurunnya
aktivitas enzim, oleh karena itu enzim memiliki pH optimum yang berbeda-
beda (Irawati, 2016).
Enzim menyediakan banyak tempat untuk pengikatan proton karena
enzim adalah protein yang tersusun oleh asam amino yang dapat mengikat
proton pada gugus amino, karboksil, dan gugus fungsional lain. Gugus
fungsional pada sisi aktif yang dapat terionisasi yang dikatalisa oleh enzim
(Suhartono, 1989 dalam Faizah, 2017). Menurut Faizah (2017), pada skala
deviasi yang besar, perubahan pH akan mengakibatkan enzim mengalami
denaturasi karena adanya gangguan terhadap berbagai interaksi non-kovalen
yang menjaga kestabilan struktur 3 dimensi enzim
5. Inhibitor
Keberadaan inhibitor akan menurunkan kecepatan reaksi enzimatis.
Inhibitor dapat membentuk kompleks dengan enzim baik pada sisi aktif enzim
maupun bagian lain dari sisi aktif enzim. Terbentuknya komplek enzim
inhibitor akan menurunkan aktivitas enzim terhadap substratnya (Wuryati,
2004).

2.6. Perhitungan Aktivitas Enzim

a. Rumus Asal Perhitungan Aktivitas Enzim
Aktivitas enzim dapat dinyatakan dalam unit. Satu Unit aktivitas enzim
adalah banyaknya μg gula pereduksi yang dihasilkan oleh 1 mL enzim dalam
setiap menit. Pengukuran aktivitas enzim dilakukan dengan mengkonversikan
nilai absorbansi yang diperoleh ke dalam persamaan linier kurva standar gula
pereduksi, yang dapat dihitung dengan rumus sebagai berikut : (Lehninger,
1997 dalam Sutrisno, 2007)

dimana
AE = aktivitas enzim (µg/mL.menit)
x = konsentrasi gula pereduksi (µg/mL)
V = volume total sampel tiap tabung (mL)
p = jumlah enzim (mL)

7
 P3

q = waktu reaksi (menit)

fp = faktor pengenceran
b. Aplikasi Perhitungan Aktivitas Enzim
Aplikasi perhitungan aktivitas enzim diantaranya adalah pengujian
aktivitas enzim α-amilase untuk mengetahui kemampuan hidrolisis enzim α-
amilase sebelum akhirnya digunakan dalam skala besar di industri. Enzim
amilase merupakan enzim yang mampu bertindak sebagai katalis dalam reaksi
hidrolisis pati oleh air membentuk gula. Gula merupakan produk konstituen
utama dalam industri makanan dan minuman. Kemampuan enzim dalam
memproduksi gula dipengaruhi terutama oleh kemampuan enzim sebagai
katalis proses produksi, yang dapat dikuantifikasi melalui pengujian aktivitas
enzim (Wahyuni, 2015).

8
 P3

BAB III
METODE PRAKTIKUM

1. Rancangan Praktikum
1. Skema Rancangan Praktikum

(Sari, 2017)
Gambar 3.1 Skema Rancangan Praktikum Isolasi Enzim
2. Variabel Operasi
A. Variabel Bebas :
1. pH fermentasi : 3 (variabel 1), 5 (variabel 2), 7 (variabel 3), 9
(variabel 4)
B. Variabel Kontrol :
2. Perbandingan volume filtrat : CMC 1:1 (semua variabel)
3. Penambahan volume starter : 10%V (semua variabel)
2. Penambahan Urea : 0,5 gram (semua variabel)
3. Rasio Sampel/air : 10% b/v (semua variabel)
3. Variabel Terikat
1. Kadar Glukosa

9
 P3

2. Aktivitas Enzim
3.2. Alat dan Bahan yang Digunakan
3.2.1. Bahan
1. Kulit Jagung 100gr 7. KH2PO4 0,3 gram
2. NaOH 30 gr 8. CaCl2 0,03 gram
3. HCl 10 mL 9. NaCl 0,15 gram
4. Aspergillus niger 10. Urea 2,2 gram
5. Glukosa 1,5 gram 11. Aquades 1000 ml
6. MgSO4 0,255 gram 12. CMC 1 gram

3.2.2 Alat
1. Beaker glass 9. Buret
2. Termometer 10. Statif & Klem
3. Gelas ukur 11. Tabung Sentrifugasi
4. Pengaduk 12. Kertas saring
5. Inkubator 13. Corong Buchner
6. Timbangan 14. Shaker
7. Indikator pH 15. Pompa vakum
8. Kompor listrik 16. Erlenmeyer Penghisap

3.3. Gambar Alat

10
 P3

3.4. Prosedur Praktikum

3.4.1 Persiapan Bahan Baku
1. Haluskan kulit jagung, lalu timbang dan ambil 50 gram
2. Masukkan kulit jagung dalam larutan NaOH 0,6 M
3. Campuran dipanaskan pada suhu konstan 90oC selama 1 jam, sambil
diaduk. Keringkan bahan baku menggunakan oven pada suhu 110oC
selama 1 malam
3.4.2 Pembuatan Starter
1. Media inokulum dibuat dengan menyiapkan larutan dengan volume
150 mL dalam erlenmeyer. Media terdiri dari 1,5 gram glukosa, 0,15
gram NaCl, 0,3 gram KH2PO4, 0,03 gram CaCl2, 0,255 gram MgSO4.
Setelah itu tambahkan Aspergillus niger ke dalam campuran. Tutup
erlenmeyer menggunakan aluminium foil
2. Starter diinkubasi menggunakan shaker pada temperatur ruangan
selama 1 malam
3.4.3 Fermentasi
1. Sampel dicampur menggunakan air dengan rasio sampel-air 10% W/V
untuk variabel I, III, dan IV dan 20% W/V untuk variabel 2, kemudian
diaduk

11
 P3

2. Atur pH semua variabel menjadi netral

3. Fermentasi dilakukan secara aerob selama 1 malam
4. Tambahkan 0,5 gram urea ke dalam variabel I, II, dan IV dan 0,7 gram
ke dalam variabel III, lalu tambahkan starter dengan kadar volume
starter 10% untuk variabel I,II, dan III dan volume starter 30% untuk
variabel IV
3.4.4 Panen
1. Hasil dari fermentasi disentrifugasi pada kecepatan 2500 rpm selama
20 menit
2. Setelah sentrifugasi, cairan disaring menggunakan pompa vakuum,
untuk diperoleh filtratnya (crude enzyme)
3. Filtrat yang diperoleh, dicampur CMC dengan perbandingan 1:1
4. Campuran diinkubasi selama 7, 22, 37, 52 dan 67 menit
5. Sebelum dan sesudah inkubasi, dilakukan uji kadar glukosa pada sampel
3.4.5 Uji Kadar Glukosa

1. Membuat larutan glukosa standar dengan melarutkan 1,25 gram

glukosa dalam 500 ml aquades. Ambil 5 ml glukosa standar, kemudian
diencerkan sampai 25 ml dan diambil 5 ml. Lakukan standarisasi
glukosa dengan mencampurkan 5 ml glukosa encer, 5 ml fehling A,
dan 5 fehling B. Campuran ini dipanaskan sampai 60oC, dan dititrasi
dengan larutan glukosa standar sampai warna biru hampir hilang.
Tambahkan dua tetes indikator MB.Lanjutkan titrasi sampai warna
merah bata yang tidak hilang setelah pengocokan.Catat kebutuhan
titran (F).

2. Ambil 5 ml sampel, lalu encerkan hingga 25 ml. Ambil 5 ml sampel

encer, dan tambahkan 5 ml fehling A, 5 ml fehling B, serta 5 ml
glukosa standar. Atur pH campuran hingga netral.Kemudian lakukan
pemanasan campuran sampai 60 derajat celcius dan titrasi dengan
dengan larutan glukosa standar sampai warna biru hampir
hilang.Tambahkan dua tetes indicator MB.Lanjutkan titrasi sampai
warna merah bata yang tidak hilang setelah pengocokan. Catat
kebutuhan titran (M)

Vtotal Vpengenceran
( F−M )× × ×2,5
Vtitrasi Vdiambil
C=
Vtotal

Glukosa standar 2,5 gram dalam 1 liter = 2,5 mg/ml

12
 P3

Semua satuan volume memakai ml

Maka C (konsentrasi glukosa) harus bersatuan mg/ml
C 1000 1unit
Aktivitas Enzim= ×( )×( )
T BM 1 μmol
(Dwismar, 2013)
dimana
C = konsentrasi glukosa per mL ekstrak enzim
T = waktu inkubasi (menit)
1 unit enzim = besarnya aktivitas enzim yang dibutuhkan untuk
membebaskan 1 μmol glukosa per menit per ml enzim

13
 P3

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Pengaruh Waktu Inkubasi Terhadap Aktivitas Enzim Selulase

Tabel 4.1 Data Waktu Inkubasi dengan Aktivitas Enzim

Variabel
Aktivitas Enzim ( mlunit
menit )
t1 t2 t3 t4 t5
1 -14,087 -4,861 0,488 -1,656 0,871
2 -0,992 -0,505 0,113 5,743 2,342
3 2,976 16,098 2,139 5,876 5,079
4 2,976 0,821 8,746 6,490 4,934

20.000

15.000
Aktivitas Enzim (unit/ml menit)

10.000

5.000 Variabel 1 (pH

3)
0.000 Variabel 2 (pH
5)
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 Variabel 3 (pH
-5.000 7)
Variabel 4 (pH
-10.000 9)

-15.000

-20.000
t (menit)

Gambar 4.1 Hubungan Waktu Inkubasi vs Aktivitas Enzim

Pada tabel 4.1 dan gambar 4.1, aktivitas enzim saat t = 7 menit pada
variabel 1 sebesar -14,087 unit/mL menit; variabel 2 sebesar -0,992 unit/mL
menit; variabel 3 sebesar 2,976 unit/mL menit dan variabel 4 sebesar 2,976
unit/mL menit. Aktivitas enzim saat t = 22 menit pada variabel 1 sebesar -4,861
unit/mL menit; variabel 2 sebesar -0,505 unit/mL menit; variabel 3 sebesar
16,098 unit/mL menit dan variabel 4 sebesar 0,821 unit/mL menit. Aktivitas
enzim saat t = 37 menit pada variabel 1 sebesar 0,488 unit/mL menit; variabel 2
sebesar 0,113 unit/mL menit; variabel 3 sebesar 2,139 unit/mL menit dan
variabel 4 sebesar 8,746 unit/mL menit. Aktivitas enzim saat t = 52 menit pada
variabel 1 sebesar -1,656 unit/mL menit; variabel 2 sebesar 5,743 unit/mL menit;
variabel 3 sebesar 5,876 unit/mL menit dan variabel 4 sebesar 6,490 unit/mL
menit. Aktivitas enzim saat t = 67 menit pada variabel 1 sebesar 0,871 unit/mL
menit; variabel 2 sebesar 2,342 unit/mL menit; variabel 3 sebesar 5,079 unit/mL
menit dan variabel 4 sebesar 4,934 unit/mL menit.

14
 P3

Dari hasil percobaan diperoleh data bahwa pada menit ke-8 hingga menit
ke-67 untuk semua variabel nilai aktivitas enzimnya masing-masing cenderung
fluktuatif. Menurut Respati (2012), pertumbuhan mikroba terdiri dari tiga fase,
yaitu :
a. Fase Lag
Fase lag disebut periode penyesuaian pada lingkungan, biasanya
ditandai dengan tidak adanya penambahan jumlah sel atau massa sel dan
lama waktu fase ini dapat berlangsung cepat dalam hitungan menit
hingga jam tergantung macam bakteri, umur biakan, dan nutrisi yang
terdapat pada media.
b. Fase Log / Eksponensial
Pada fase eksponensial atau logaritmik, sel berada dalam keadaan
pertumbuhan yang seimbang. Selama fase ini, masa dan volume sel
meningkat oleh faktor yang sama dalam arti rata-rata komposisi sel dan
konsentrasi relatif metabolit tetap konstan. Selama periode ini
pertumbuhan seimbang, kecepatan peningkatan dapat diekspresikan
dengan fungsi eksponensial alami. Sel membelah dengan kecepatan
konstan yang ditentukan oleh sifat intrinsik bakteri dan kondisi
lingkungan. Dalam hal ini terdapat keragaman kecepatan pertumban
berbagai mikroorganisme.
c. Fase Stationer
Selama fase ini, jumlah sel yang hidup tetap konstan untuk periode
yang berbeda, bergantung pada bakteri, tetapi akhirnya menuju periode
penurunan populasi. Dalam beberapa kasus, sel yang terdapat dalam
suatu biakan yang populasi selnya tidak tumbuh dapat memanjang,
membengkak secara abnormal, atau mengalami penyimpangan, suatu
manifestasi pertumbuhan yang tidak seimbang.
d. Fase Kematian
Fase kematian terjadi karena nutrien yang sebelumnya tersedia
sudah habis. Pertumbuhan sel mulai terhenti dan bakteri telah
menghabiskan energi cadangan (ATP) untuk respirasinya, sehingga
populasi bakteri akan menurun jumlahnya. Pada saat ini jumlah sel yang
mati lebih banyak daripada sel yang hidup.
Sehingga aktivitas enzim yang diperoleh akan meningkat seiring waktu
ketika mikroba berada pada fase eksponen karena pertambahan jumlah sel
mikroba dan kemudian menurun seiring penambahan waktu ketika mikroba
memasuki fase kematian karena jumlah mikroba semakin sedikit. Pada data

15
 P3

grafik, variabel yang sesuai dengan teori adalah variabel 2 dengan perlakuan pH
5, dimana pada menit ke 7, 22, dan 37 aktivitas enzim meningkat seiring waktu
dan mencapai aktivitas enzim tertinggi pada menit ke-52. Kemudian aktivitas
enzim menurun pada menit ke-67. Sedangkan pada variabel 1, 3, dan 4 data
grafik tidak sesuai teori. Pada variabel 1, 3, dan 4 membentuk grafik yang
fluktuatif. Nilai aktivitas enzim dipengaruhi oleh jumlah Aspergillus niger yang
memproduksi enzim selulase dan aktivitas enzim itu sendiri. Ketika mikroba
memasuki fase pertumbuhan eksponen, maka jumlah mikroba akan meningkat
dimana akan meningkatkan jumlah dan aktivitas enzim selulase. Namun pada
grafik variabel 1, 3, dan 4 setelah aktivitas enzim meningkat, terjadi penurunan
aktivitas enzim. Hal ini disebabkan karena adanya inhibitor yang menghambat
kerja aktivitas enzim selulase. Glukosa dan selobiosa adalah inhibitor enzim
dalam menghidrolisis selulosa. Selobiosa menghambat enzim eksoglukanase atau
selobiohidrolase pada kompleks enzim selulase. Glukosa menghambat enzim
penghidrolisis selobiosa atau β-glukosidase (Ambriyanto, 2010 dalam Idiawati,
2014). Sehingga dapat dikatakan bahwa akumulasi glukosa yang terbentuk
menyebabkan penghambatan bagi enzim selulase. Produk dari hidrolisis selulosa,
berupa glukosa dapat menjadi inhibitor bagi aktivitas enzim selulase
(Ambriyanto, 2010 dalam Idiawati, 2014). Inhibitor yang menghambat kerja
aktivitas enzim selulase ketika fase eksponen Aspergillus niger sedang
berlangsung menyebabkan grafik yang terbentuk menjadi fluktuatif.
Sehingga pada grafik, variabel 2 sudah sesuai dengan teori yang ada
dimana nilai aktivitas enzim meningkat seiring waktu kemudian turun akibat
Aspergillus niger memasuki fase kematian. Menurut Purkan (2015), fase lag
terjadi pada jam 0 hingga 4 jam. Setelah 4 jam, sel Aspergillus niger mulai
mengalami pertumbuhan yang signifikan mengalami penurunan secara bertahap
hingga mencapai jam 36. Penurunan tersebut membuktikan bahwa sel mulai
memasuki fase kematian hingga 24 jam. Selanjutnya kurva mulai memasuki fase
kematian. Hal ini menyebabkan jumlah dan aktivitas enzim selulase menurun.
Sedangkan pada grafik, variabel 1, 3, dan 4 grafik yang didapat bersifat
fluktuatif. Hal ini disebabkan adanya inhibitor yang menghambat kerja aktivitas
enzim selulase ketika fase eksponen mikroba sedang berlangsung.
4.2. Pengaruh pH Terhadap Aktivitas Enzim
Pada data percobaan, aktivitas enzim saat t = 7 menit pada variabel 1
sebesar -14,087 unit/mL menit; variabel 2 sebesar -0,992 unit/mL menit; variabel
3 sebesar 2,976 unit/mL menit dan variabel 4 sebesar 2,976 unit/mL menit.
Aktivitas enzim saat t = 22 menit pada variabel 1 sebesar -4,861 unit/mL menit;

16
 P3

variabel 2 sebesar -0,505 unit/mL menit; variabel 3 sebesar 16,098 unit/mL menit
dan variabel 4 sebesar 0,821 unit/mL menit. Aktivitas enzim saat t = 37 menit
pada variabel 1 sebesar 0,488 unit/mL menit; variabel 2 sebesar 0,113 unit/mL
menit; variabel 3 sebesar 2,139 unit/mL menit dan variabel 4 sebesar 8,746
unit/mL menit. Aktivitas enzim saat t = 52 menit pada variabel 1 sebesar -1,656
unit/mL menit; variabel 2 sebesar 5,743 unit/mL menit; variabel 3 sebesar 5,876
unit/mL menit dan variabel 4 sebesar 6,490 unit/mL menit. Aktivitas enzim saat t
= 67 menit pada variabel 1 sebesar 0,871 unit/mL menit; variabel 2 sebesar 2,342
unit/mL menit; variabel 3 sebesar 5,079 unit/mL menit dan variabel 4 sebesar
4,934 unit/mL menit.
Menurut penelitian yang dilakukan Purkan (2015), pH optimum dari enzim
selulase adalah pH 4-5. Data yang diperoleh tidak sesuai dengan teori karena
pada data yang diperoleh menunjukkan nilai aktivitas enzim selulase tertinggi
diperoleh pada variabel pH 7 pada t = 22 menit. Hal ini disebabkan karena
perbedaan pH optimum pertumbuhan Aspergillus niger dengan pH optimum
enzim selulase yang mempengaruhi aktivitas enzim yang dihasilkan. Menurut
Kanti (2017), pH optimum pertumbuhan Aspergillus niger adalah 6-7. Oleh
karena itu pada pH 7, pertumbuhan Aspergillus niger meningkat lebih cepat.
Apabila jumlah mikroba meningkat, maka jumlah dan aktivitas enzim selulase
yang dihasilkan akan semakin besar. Hal ini menyebabkan pada variabel 3 (pH 7)
memiliki nilai aktivitas enzim yang lebih besar dibandingkan variabel yang
lainnya. Sedangkan pada variabel 2 (pH 5), memiliki nilai aktivitas enzim yang
lebih kecil dibandingkan variabel 3 (pH 7), karena pH 5 bukan merupakan pH
optimum pertumbuhan Aspergillus niger, sehingga produksi enzim selulase
menurun dan menyebabkan nilai aktivitas enzim menurun juga.

17
 P3

BAB V
PENUTUP

5.1. Kesimpulan
1. Dalam percobaan yang dilakukan, nilai aktivitas enzim untuk variabel 1, 3,
dan 4 cenderung fluktuatif dan pada variabel 2 nilai aktivitas enzimnya
cenderung naik hingga waktu optimumnya kemudian nilai aktivitas enzim
akan menurun. Percobaan untuk variabel 2 sudah sesuai teori yang ada,
namun variabel 1, 3, dan 4 tidak sesuai dengan teori. Hal ini disebabkan
karena adanya inhibitor yang menghambat kerja aktivitas enzim selulase.
Glukosa dan selobiosa adalah inhibitor enzim dalam menghidrolisis selulosa.
Selobiosa menghambat enzim eksoglukanase atau selobiohidrolase pada
kompleks enzim selulase. Glukosa menghambat enzim penghidrolisis
selobiosa atau β-glukosidase.
2. Kinetika reaksi enzim selulase dari bakteri selulolitik hasil isolasi dari kulit
jagung mempunyai kondisi optimum pada pH 4-5, dimana variabel yang
mendekati pH optimum adalah variabel 2 dengan pH 5. Namun percobaan
yang dilakukan tidak sesuai teori karena aktivitas enzim tertinggi terdapat
pada variabel 3 dengan pH 7. Hal ini disebabkan oleh perbedaan pH
optimum pertumbuhan Aspergillus niger dengan enzim selulase.

5.2. Saran
1. Tutup wadah pemanasan ketika memanaskan campuran kulit jagung dan
larutan NaOH karena uap NaOH berbahaya ketika terhirup.
2. Pada praktikum ini tidak menggunakan variabel suhu, oleh karena itu di
praktikum selanjutnya diharapkan menggunakan variabel suhu untuk
mengetahui suhu optimum yang baik untuk enzim bekerja.
3. Pembuatan CMC sebaiknya dilakukan dalam kondisi aquades hangat agar
CMC lebih mudah larut.

18
 P3

DAFTAR PUSTAKA

Acharya, P. B, dkk. 2008. Optimization for cellulase production by Aspergillus niger

using saw dust as substrate. African Journal of Biotechnology. 7(22) : 4147-
4152.
Budiman, Arief. 2011. ISOLASI ENZIM α-GLUKOSIDASE DARI GABAH
(Oryza sativa var. Ciherang) [skripsi]. Depok (ID) : Universitas Indonesia.
Dimyathi, F. 2014. ENZIM [makalah]. Lampung (ID) : Universitas Lampung.
Dwismar, Rina. 2013. ISOLASI DAN UJI AKTIVITAS ENZIM SELULASEDARI
BAKTERI SIMBOLON LARVA KUPU-KUPU FAMILY : Cossidae
TERHADAP VARIASI LAMA INKUBASI. AL-Kimia 7(3) : 76-80.
Faizah, Mumtuatul. 2017. PENGARUH SUHU DAN pH TERHADAP AKTIVITAS
ENZIM PROTEASE Bacillus subtilis DARI DAUN KENIKIR (Cosmos
sulphureus) YANG DITUMBUHKAN DALAM MEDIA CAMPURAN
LIMBAH CAIR TAHU DAN DEDAK [skripsi]. Malang (ID) : Universitas
Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Ginting, Artarita. 2015. PEMANFAATAN LIMBAH KULIT JAGUNG UNTUK
PRODUK MODULAR DENGAN TEKNIK PILIN. Dinamika Kerajinan dan
Batik. 32(1) : 51-62.
Idiawati, Nora. 2014. PRODUKSI ENZIM SELULASE OLEH Aspergillus niger
PADA AMPAS SAGU. Jurnal Natur Indonesia 16(1) : 1-9.
Indah, Mutiara. 2004. ENZIM. USU Digital Library. 6(1) : 1-14.
Irawati, Rosyida. 2016. KARAKTERISTIK pH, SUHU, DAN KONSENTRASI
SUBSTRAT PADA ENZIM SELULASE KASAR YANG DIPRODUKSI
OLEH Bacillus circulans [skripsi]. Malang (ID) : Universitas Islam Negeri
Maulana Malik Ibrahim.
Kanti, Atit. 2017.POTENSI KAPANG Aspergillus niger, Rhizopus oryzae DAN
Neurospora sitophila SEBAGAI PENGHASIL ENZIM FITASE DAN
AMILASE PADA SUBSTRAT AMPAS TAHU. Buletin Peternakan. 41(1) :
26-36.
Kombong, Hermin. 2011. Isolasi Enzim Amiloglukosidase Terimmobilisasi dari
Aspergillus niger Ampas Tepung Sagu. J. Prog. Kim. Si. 1(1) : 8-15.
Kumar, Sanjay, dkk. 2011. Effect of Substrate and Fermentation Conditions on
Pectinase and Cellulase Production by Aspergillus niger NCIM 548 in
Submerged (SmF) and Solid State Fermentation (SSF). Food Sci. Biotechnol.
20(5) : 1289-1298.

19
 P3

Lestari, Ryani P, dkk. 2014. METODA EKSTRAKSI DAN METODA ISOLASI.

[skripsi]. Bandung (ID) : Politeknik Negeri Bandung.
Meryandini, Anja, dkk. 2009. ISOLASI BAKTERI SELULOLITIK DAN
KARAKTERISASI ENZIMNYA. MAKARA SAINS. 13(1) : 33-38.
Prasetyawati, Dwi Putri. 2015. PEMANFAATAN KULIT JAGUNG DAN
TONGKOL JAGUNG (Zea mays) SEBAGAI BAHAN DASAR
PEMBUATAN KERTAS SENI DENGAN PENAMBAHAN NATRIUM
HIDROKSIDA (NaOH) DAN PEWARNA ALAMI [naskah publikasi].
Surakarta (ID) : Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Purkan, dkk. 2015. Produksi Enzim Selulase dari Aspergillus niger Menggunakan
Sekam Padi dan Ampas Tebu sebagai Induser. Jurnal ILMU DASAR. 16(2) :
95-102.
Respati, Ningtyas, dkk. 2017. OPTIMASI SUHU DAN pH MEDIA
PERTUMBUHAN BAKTERI PELARUT FOSFAT DARI ISOLAT BAKTERI
TERMOFILIK. Jurnal Prodi Biologi. 6(7) : 424-430.
Risma, Destrimita. 2012. ISOLASI DAN KARAKTERISASI ENZIM α-
GLUKOSIDASE DARI BERAS LAPUK (Oryza sativa) [skripsi]. Depok (ID) :
Universitas Indonesia.
Safari, Saiful, dkk. 2017. PEMANFAATAN KULIT JAGUNG (Zea mays) UNTUK
PRODUKSI GLUKOSA MENGGUNAKAN KAPANG Trichoderma sp.
KOVALEN : 3(1) : 17-23.
Sari, Maya Retna. 2017. STUDI PENGARUH PENAMBAHAN POLIETILEN
GLIKOL 6000 TERHADAP KESTABILAN ENZIM PROTEASE DARI
Rhizopus oligosporus [skripsi]. Bandar Lampung (ID) : Universitas Lampung.
Simbolon, Megawati. 2017. ISOLASI DAN PEMURNIAN ENZIM KITIN
DEASETILASE DARI ASPERGILLUS ACULEATUS ISOLAT TANAH
HUMUS. Jurnal Pertanian. 42(5) : 1-54.
Sutrisno. 2016. ISOLASI DAN KARAKTERISASI EKSTRAK KASAR ENZIM
XILANASE DARI Aspergillus niger. BSS. 265(1) : 1-6.
Wahyuni. 2015. KONVERSI ENZIMATIK PENGUJIAN AKTIVITAS ENZIM α-
AMILASE [makalah]. Bandung (ID) : Institut Teknologi Bandung.
Wuryanti. 2004. ISOLASI DAN PENENTUAN AKTIVIAS SPESIFIK ENZIM
BROMELIN DARI BUAH NANAS (Ananas comosus L.). J. Kim. Sains &
Apl. 7(3) : 78-82.

20
 P3

LEMBAR PERHITUNGAN REAGEN

1. Kebutuhan gr NaOH
 NaOH 0,6 M untuk semua variabel
Bahan baku (gr) : larutan NaOH (ml) = 1 : 12,5
Bahan baku = 40 gr larutan NaOH : 40 x 12,5 = 500 ml
m( gr) 1000 m 1000
M= x 0,6= x
BM v (ml) 40 500
m=12 gr
2. Kebutuhan Nutrient untuk Starter
Basis = 150 ml = 0,15 L
a. Glukosa : 10 gr/L x 0,15 L = 1,5 gram
b. NaCl : 1 gr/L x 0,15 L = 0,15 gram
c. CaCl2 : 0,2 gr/L x 0,15 L = 0,03 gram
d. MgSO4 : 1,7 gr/L x 0,15 L = 0,255 gram
e. KH2PO4 : 2 gr/L x 0,15 L = 0,3 gram
f. CMC = 1% w/v CMC dalam 100 ml H2O
Massa CMC = 0,01 gr/ml x 100 ml = 1 gram
3. Kebutuhan Sampel Dicampur ke Aquades (basis 100 ml)
10% w/v = 0,1 gr/ml x 100 ml = 10 gram (semua variabel)
4. Volume Starter yang ditambahkan
10% v 0,1 x 100 ml = 10 ml (semua variabel)
 P3

LEMBAR PERHITUNGAN DATA

 Konsentrasi Glukosa Sebelum Inkubasi

Vtotal Vpengenceran
( F−M )× × ×2,5
Vtitrasi Vdiambil
C=
Vtotal

Perhitungan Konsentrasi Variabel :

20 25
( 52−43 ) × ×
5 5
C 1= ×2,5=22,5 mg/ml
20
20 25
( 52−49,5 ) × ×
5 5
C 2= ×2,5=6,25 mg/ ml
20
20 25
(52−50,7 ) × ×
5 5
C 3= ×2,5=3,25 mg/ml
20
20 25
( 52−50,5 ) × ×
5 5
C 4= ×2,5=3,75mg /ml
20

 Konsentrasi Glukosa Setelah Inkubasi

T = 7 menit
20 25
( 46,8−44,9 ) × ×
5 5
C 1= ×2,5=4,75 mg/ml
20
20 25
( 46,8−44,8 ) × ×
5 5
C 2= ×2,5=5 mg/ml
20
20 25
( 46,8−44 ) × ×
5 5
C 3= × 2,5=7 mg /ml
20
20 25
( 46,8−43,8 ) × ×
5 5
C 4= ×2,5=7,5 mg/ml
20

T = 22 menit
20 25
( 46,8−45,5 ) × ×
5 5
C 1= ×2,5=3,25 mg/ml
20
20 25
( 46,8−45,1 ) × ×
5 5
C 2= ×2,5=4,25 mg/ml
20
 P3

20 25
( 46,8−20 ) × ×
5 5
C 3= ×2,5=67 mg/ml
20
20 25
( 46,8−44 ) × ×
5 5
C 4= × 2,5=7 mg/ ml
20

T = 37 menit
20 25
( 46,8−36,5 ) × ×
5 5
C 1= × 2,5=25,75 mg/ml
20
20 25
( 46,8−44 ) × ×
5 5
C 2= × 2,5=7 mg/ml
20
20 25
( 46,8−39,8 ) × ×
5 5
C 3= × 2,5=17,5 mg/ml
20
20 25
( 46,8−22 ) × ×
5 5
C 4= × 2,5=62 mg/ml
20

T = 52 menit
20 25
( 46,8−44 ) × ×
5 5
C 1= ×2,5=7 mg/ml
20
20 25
( 46,8−22,8 ) × ×
5 5
C 2= × 2,5=60 mg/ml
20
20 25
( 46,8−23,5 ) × ×
5 5
C 3= × 2,5=58,25 mg/ml
20
20 25
( 46,8−21 ) × ×
5 5
C 4= × 2,5=64,5 mg/ml
20

T = 67 menit
20 25
( 46,8−33,6 ) × ×
5 5
C 1= × 2,5=33 mg/ml
20
20 25
( 46,8−33 ) × ×
5 5
C 2= × 2,5=34,5 mg/ml
20
 P3

20 25
( 46,8−21 ) × ×
5 5
C 3= × 2,5=64,5 mg/ml
20
20 25
( 46,8−21,5 ) × ×
5 5
C 4= × 2,5=63,25 mg/ ml
20

 Perhitungan Aktivitas Enzim

ΔC 1000 1 unit
Aktivitas Enzim= ×( )×( )
T BM 1 μmol
T = 7 menit
4,75−22,5 1000 1 unit unit
A 1= × × =−14,087
7 180 1 μmol ml menit
5−6,25 1000 1unit unit
A 2= × × =−0,992
7 180 1 μmol ml menit
7−3,25 1000 1 unit unit
A 3= × × =2,976
7 180 1 μmol ml menit
7,5−3,75 1000 1unit unit
A 4= × × =2,976
7 180 1 μmol ml menit

T= 22 menit
3,25−22,5 1000 1unit unit
A 1= × × =−4,861
22 180 1 μmol ml menit
4,25−6,25 1000 1 unit unit
A 2= × × =−0,505
22 180 1 μmol ml menit
67−3,25 1000 1 unit unit
A 3= × × =16,098
22 180 1 μmol ml menit
7−3,75 1000 1unit unit
A 4= × × =0,821
22 180 1 μmol ml menit

T = 37 menit
25,75−22,5 1000 1unit unit
A 1= × × =0,488
37 180 1 μmol ml menit
7−6,25 1000 1unit unit
A 2= × × =0,113
37 180 1 μmol ml menit
17,5−3,25 1000 1unit unit
A 3= × × =2,139
37 180 1 μmol ml menit
62−3,75 1000 1unit unit
A 4= × × =8,746
37 180 1 μmol ml menit
 P3

T = 52 menit
7−22,5 1000 1unit unit
A 1= × × =−1,656
52 180 1 μmol ml menit
60−6,25 1000 1unit unit
A 2= × × =5,743
52 180 1 μmol ml menit
58,25−3,25 1000 1unit unit
A 3= × × =5,876
752 180 1 μmol ml menit
64,5−3,75 1000 1unit unit
A 4= × × =6,490
52 180 1 μmol ml menit

T = 67 menit
33−22,5 1000 1unit unit
A 1= × × =0,871
67 180 1 μmol ml me nit
34,5−6,25 1000 1unit unit
A 2= × × =2,342
67 180 1 μmol ml menit
64,5−3,25 1000 1unit unit
A 3= × × =5,079
67 180 1 μmol ml menit
63,25−3,75 1000 1unit unit
A 4= × × =4,934
67 180 1 μmol ml menit