Praktikum Mikrobiologi 6

PERHITUNGAN KUANTITAS MIKROORGANISME 1
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Jumlah mikroorganisme yang berada dalam suatu sampel
atau bahan sangat bervariasi, tergantung dari jenis bahan itu
sendiri dan kondisi lingkungannya. Jumlah mikroorganisme dalam
suatu sampel dapat di hitung dengan menggunakan beberapa
metode yaitu analisa secara langsung yaitu dalam hal ini digunakan
ruang hitung (couting chamber). Perhitungan massa sel secara tidak
langsung sering digunakan dalam mengamati pertumbuhan sel
selama proses fermentasi, dimana komposisi substratnya atau
bahan yang difermentasikan dapat diamati dan diukur teliti.
Adapun yang digunakan dalam percobaan ini yaitu metode MPN dan
ALT.
Dalam perhitungan mikroorganisme secara langsung,
jumlah sel mikroorganisme dapat dihitung jika medium
pertumbuhannya tidak mengganggu pengukuran. Pertumbuhan
massa sel secara tidak langsung sering digunakan dalam mengamati
pertumbuhan sel selama proses fermentasi, dimana komposisi
CICILIA RESA LD. MUHAMMAD FITRAWAN, S.FARM., APT

F1F1 13 159
substratnya atau bahan yang difermentasi dapat diamati dan
diukur dengan teliti.
B. Rumusan Masalah
Adapun rumusan masalah pada praktikum ini yaitu:
1. Bagaimana cara mengetahui tingkat pertumbuhan
mikroorganisme terhadap suatu produk atau sediaan.
2. Bagaimana cara mengetahui cara perhitungan kuantitatif
dari suatu mikroorganisme.
C. Maksud Percobaan
Maksud dilakukannya pratikum ini adalah untuk
mengetahui dan memahami cara-cara perhitungan kuantitas
mikroorganisme suatu produk secara mikrobiologi.
D. Tujuan Percobaan
Tujuan dilakukannya praktikum ini adalah untuk
menentukan kuantitas mikroorganisme pada beberapa produk
farmasi yaitu roti boy, sirup marjan, susu dancow ®, saus somay,
obat kuat, dan pasta gigi.

F1F1 13 159
E. Manfaat Praktikum
Sebagai sumber informasi jumlah mikroorganisme yang
terdapat pada produk farmasi dengan pengujian nilai ALT bakteri,
angka kapang, dan uji MPN sebagai dasar tingkat keamanan produk
tersebut untuk dikonsumsi.

F1F1 13 159
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Teori umum
Kontaminasi bakteri patogen pada makanan dan minuman
dapat menyebabkan berbagai macam penyakit diantaranya typhoid,
diare, keracunan makanan dan lain sebagainya. Penyakit-penyakit ini
akan lebih mudah menjangkiti orang yang mengalami penurunan
daya tahan tubuh karena faktor dari dalam (intrinsik) maupun dari
luar (ekstrinsik). Oleh karena itu, untuk menjamin kesehatan dan
keselamatan konsumen, harus dilakukan pemeriksaan laboratorium
bakteriologik secara berkala (Mansauda dkk., 2014).
Mikroorganisme yang paling umum digunakan sebagai
petunjuk atau indikator adanya pencemaran dalam air adalah E.
Coli, serta bakteri dari kelompok koliform. Bakteri dari jenis
tersebut selalu terdapat didalam kotoran manusia, sedangkan
bakteri patogen tidak selalu ditemukan. Mikroorganisme dari
kelompok koliform secara keseluruhan tidak umum hidup atau
terdapat didalam air, sehingga keberadaannya dalam air dapat

F1F1 13 159
dianggap sebagai petunjuk terjadinya pencemaran kotoran dalam
arti luas (Purnawijiyanti, 2001).
Sekitar separuh dari sampel air minum juga mengandung
E.coli tetapi jumlah koloninya diperkirakan 10 kali lebih rendah dari
pada dalam sampel makanan. Hasil penelitian yang penting adalah
kolerasi antara proporsi sampel makanan anak yang terkontaminasi
E.coli dan jumlah kejadian penyakit diare setiap tahunnya berkaitan
dengan E.coli (Darmawan, 2000).
Menurut ketentuan WHO (World Health Organization)
dan APHA (American Public Health Association), kualitas air
ditentukan oleh kehadiran dan jumlah bakteri didalamnya. terdapat
beberapa jenis bakteri yang hidup di dalam air yaitu bakteri
Coliform dan E-Coli. Coliform merupakan bakteri fecal yang berasal
dari sisa hewan atau tumbuhan yang sudah mati termasuk juga
manusia, E-Coli adalah bakteri komensial pada usus manusia dan
umumnya bukan patogen penyebab penyakit, namun apabila di dalam
air tersebut terkontaminasi oleh bakteri E-Coli yang bersifat fecal
jika dikonsumsi terus-menerus dalam jangka panjang akan

F1F1 13 159
berdampak pada timbulnya penyakit seperti radang usus, diare,
infeksi pada saluran kemih dan empedu (Utami, 2012).
Nomor yang paling mungkin metode (MPN) adalah
berguna,untuk menghitung jumlah mikroba. Tes ini adalah metode
untuk memperkirakan konsentrasi mikroorganisme di sample
menggunakan larutan broth dalam pengenceran sepuluh kali lipat
dengan sampel yang mengandung partikulat material yang
mengganggu metode pencacahan plate count. Konsep dasar metode
MPN mirip dengan penentuan fraksi metode negatif OFD-nilai.
Kaldu nutrisi akan mendukung pertumbuhan organisme dan berubah
keruh. Pola dasar pertumbuhan tidak ada pertumbuhan dapat
memberikan informasi karena merupakan refleksi ofsampling
kesalahan (Sutton, 2010).
Jumlah kemungkinan adalah teknik tidak langsung yang
memperkirakan jumlah bakteri dengan budidaya sampel dan tumbuh
mikroorganisme pada media kaya atau selektif ini. Teknik ini
didasarkan pada metode statistik dengan menggunakan
pengenceran serial sampel . Perkiraan populasi yang berasal dari
pola terjadinya atribut di pengenceran serial dari Tabel MPN yang

F1F1 13 159
didasarkan pada pendekatan matematika. Teknik MPN telah
biasanya digambarkan pada media padat menggunakan cawan Petri
atau pada media cair menggunakan tabung pengenceran atau piring
mikro (Ullate dkk., 2008).
Hasil perhitungan diatas dinyatakan dalam ALT (Angka
Lempeng Total) Hasil yang didapat sebagai angka lempeng total
harus mengikuti aturan-aturan sebagai berikut : (1)Angka yang
ditulis hanya dua angka, yaitu angka pertama di depan koma dan
angka kedua di belakang koma. Jika angka ketiga ≥ 5, maka
dibulatkan menjadi satu angka lebih tinggi dari angka kedua. (2)
Apabila setelah pembulatan tersebut menyebabkan perubahan pada
angka pertama maka angka tingkat pengenceran dinaikkan menjadi
satu angka lebih tinggi daripada angka sebelumnya. Misalnya
1,95x103 diubah menjadi 2,0x 104 (3)Jika semua tingkat
pengenceran menghasilkan angka kurang dari 30 koloni pada semua
cawan petri, maka hanya jumlah koloni bakteri pada tingkat
pengenceran terendah yang dihitung. Hasilnya dilaporkan sebagai
kurang dari 3,0 dikalikan tibgkat pengenceran tetapi jumlah yang
sebenarnya harus dicantumkan dalam tanda kurung. (4) Jika semua

F1F1 13 159
tingkat pengenceran menghasilkan jumlah lebih dari 300 koloni
pada semua cawan petri, maka hanya jumlah koloni bakteri pada
tingkat pengenceran tertinggi yang dihitung, misalnya dengan cara
menghitung jumlah koloni pada seperempat bagian cawan petri,
kemudian hasilnya dikalikan 4. Hasil perhitungan dilaporkan sebagai
lebih dari 300 dikalikan dengan tingkat pengenceran tetapi jumlah
sebenarnya harus dicantumkan dalam tanda kurung. (5) Jika
terdapat 2 tingkat pengenceran yang menghasilkan jumlah antara
30 dan 300 koloni dan perbandingan antara hasil tertinggi dan
terendah dari kedua tingkat pengenceran terendah ≤ 2, maka harus
ditentukan rerata dari kedua nilai tersebut dengan
memeperhitungkan tingkat pengencerannya. Jika perbadingan
anatara hasil tertinggi dan terendah > 2, maka yang dilaporkan
hanya hasil terkecil (Djide,2005).

F1F1 13 159
B. Uraian Bahan
1. Pepton (Ditjen POM Edisi IV, 1995 : Hal. 1191)
Nama resmi :pepton
Nama lain :pepton
Pemerian :serbuk, kuning kemerahan sampai coklat, bau
khas tidak busuk
Kelarutan :larut dalam air, memberikan larutan berwarna
coklat kekuningan yang bereaksi asam
Penyimpanan :Dalam wadah tertutup baik.
Kegunaan :Sebagai sumber nitrogen
2. Natrium klorida (Ditjen POM Edisi IV, 1995 : Hal. 584)
Nama Resmi :natrii chloridum
Nama Lain :natrium klorida
RM/BM :NaCl / 58,44
Pemerian :hablur putih, berbentuk kubus atau berbentuk
prisma, tidak berbau, rasa asin, mantap diudara
Kelarutan :sangat mudah larut dalam air

F1F1 13 159
Penyimpanan :dalam wadah tertutup rapat
Kegunaan :sebagai sampel
3. Aquadest (Ditjen POM Edisi IV, 1995 : Hal. 1125)
Nama resmi :aqua destillata
Nama lain :air suling
RM / BM :H2O / 18,02
Pemerian :cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau,
tidak berasa
Kegunaan :sebagai sumber nutrien mikroba dan pelarut
medium
Penyimpanan : dalam wadah tertutup baik
4. Dekstrosa (Ditjen POM Edisi IV, 1995 : Hal. 300)
Nama resmi :Dextrosum
Sinonim :glukosa, dekstrosa
RM / BM :C6H12O6/180,16
Pemerian :hablur tidak berwarna, serbuk halus atau butiran
putih, tidak berbau, rasa manis.

F1F1 13 159
Kelarutan :mudah larut dalam air, sangat mudah larut dalam
air mendidih, agak sukar larut dalam etanol
(95%)
Kegunaan :sebagai sumber nutrient yang spesifik untuk
mikroba jamur
Penyimpanan :dalam wadah tertutup baik.
5. Etanol (Ditjen POM edisi III, 1979: Hal. 65)
Nama resmi : Aethanolum
Sinonim : Alkohol
RM / BM : C2H6O/46,07
Pemerian : Cairan tak berwarna, jernih, mudah menguap
dan mudah bergerak; bau khas; rasa panas.
Mudah terbakar dengan memberikan nyala biru
yang tidak berasap.
Kelarutan : Sangat mudah larut dalam air, dalam kloroform
P dan dalam eter P.
Kegunaan : Sebagai antiseptik
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, terlindung dari
cahaya; di tempat sejuk, jauh dari nyala api.

F1F1 13 159
6. BTB (Brom Timol Blue)
Nama Resmi : BROM TIMOL BLUE
Nama Lain : Biru Bromtimol
Pemerian : Serbuk kemerahan atau coklat
Kelarutan : Praktis tidak larut dalam air, larut dalam
etanol (95%) p. Dalam larutan alkali encer.
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup baik
Kegunaan : Sebagai Indikator
7. Tween 80
Nama Resmi : Polysorbatum 80
Nama Lain : Polisorbat 80, tween
Pemerian :Cairan kental, transparan, tidak berwarna
hampir tidak mempunyai rasa.
Kelarutan : Mudah larut dalam air, dalam etanol
(95%)P dalam etil asetat P dan dalam
methanol P, sukar larut dalam parafin cair P
dan dalam biji kapas P.

F1F1 13 159
Kegunaan : Sebagai emulgator fase air
Penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat
C. Uraian Sampel
1. Susu Dancow Enriched
Produksi : PT. Nestle Indonesia
Komposisi : padatan susu (susu sapi, susu bubuk skim, lemak
susu), laktosa, 3 mineral, pengemulsi, lesitin
kedelai, premiks vitamin.
2. Pepsodent (pasta gigi)
Produksi : PT. Unilever Indonesia Tbk.
Komposisi : kalsium karbonat, air, sorbitol, silika hidrasi, sulfat
lauril sodium, sodium monofluorofosfat, Gum
selulosa, potassium sitrat, sodium silika, sodium
saccharin, DMDM hidansoin, Cl 77891. Fluorida.
3. Sirup Marjan
Produksi : PT. Lasellefood Indonesia
Komposisi : Gula Pasir, Air, Ektrak Kelapa, Ekstrak Pandan,
Perisa Cocopandan, Pengatur Keasaman Asam

F1F1 13 159
Sitrat, Pewarna (Ponceau 4 R Cl 16255) dan
Tarttrazin (Cl 19140).
4. Roti Boy
Komposisi : tepung, gula, telur, mentega, margarin, dan perasa
kopi.
5. Obat Kuat (Spartax)
Spartax Epimedium folium extrac 150 mg, Panax Gingseng
50, mg, Butea Superba root extract powder 50 mg, L-Arginine
200 mg, ZnS047H20 21,99 mg, Zn 5 mg dan Dicalcium phoshate
28,01 mg.

F1F1 13 159
BAB III
METODE KERJA
A. Alat
Alat-alat yang digunakan pada praktikum ini yaitu :
a. Batang pengaduk g. Pipet tetes
b. Botol gelap h. Sendok tanduk
c. Cawan petri i. spoit
d. Enkas j. Spritus
e. Erlenmeyer 250 ml k. Tabung reaksi
f. Inkubator l. Timbangan analitik

F1F1 13 159
B. Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah :
a. Alkohol 70% h. Obat kuat spartax®
b. Aquadest i. Pasta gigi pepsodent®
c. BTB j. Potato dekstrose agar
d. Susu dancow® k. Roti boy
e. Kapas l. Saus somay
f. Nutrient agar m. Sirup Marjan®
g. Nutrient broth n. Tween80

F1F1 13 159
C. Cara Kerja
1. Penyiapan Sampel
 Disiapkan sampel.
 Di larutkan 1 ml di larutkan dalam 9 mL akuades.
 Diambil 1 mL larutan sampel.
 Dimasukkan 1 mL dalam botol pengenceran 10-2.
 Diambil 1 mL dari botol pengenceran 10 -2, masukkan dalam
botol pengenceran 10-3.
 Untuk botol pengenceran 10-3, di buang sebanyak 1 ml
larutannya.
2. Pengujian ALT Bakteri
Cara kerja dari praktikum ini adalah sebagai berikut.
 Disiapkan alat dan bahan yang digunakan.
 Dimasukkan medium sebanyak 15 ml ke dalam cawan petri
berdasarkan pengenceran masing – masing.
 Diambil sampel sebanyak 1 ml dan dimasukkan ke dalam cawan
petri masing – masing yang telah diberi etiket berdasarkan
pengenceran tersebut kemudian dihomogenkan dengan
membentuk angka delapan.

F1F1 13 159
 Diinkubasi pada suhu 37oC selama 1 x 24 jam.
 Diamati perubahan yang terjadi.
3. Pengujian ALT kapang
Cara kerja dari praktikum ini adalah sebagai berikut:
 Diambil 3 cawan petri yang steril dan diberi etiket masing-
masing label 10-1, 10-2, dan 10-3.
 Dari botol pengenceran 10-1, 10-2 dan 10-3, masing-masing
cawan petri diisi 1 ml sampel berdasarkan label
pengencerannya.
 Ditambahkan 10 ml medium NA dalam cawan petri kemudian
dihomogenkan, dibiarkan memadat kemudian diinkubasi selama
3 x 24 jam.
 Diamati jumlah koloni yang tumbuh dan dihitung nilai ALT-nya.
4. Pengujian MPN
Cara kerja dari praktikum ini adalah sebagai berikut:
 Dibuat 3 seri yaitu seri A, B, C. Tiap seri di buat 3 tabung
reaksi yang berisi 10 ml medium LB (Laktosa Broth) dengan

F1F1 13 159
tabung durham terbalik. Seri A pengenceran 10 -1, seri B
pengenceran 10-2, dan seri C pengenceran 10-3.
 Diambil 1 ml larutan sampel dengan pengenceran 10 -1 untuk seri
A kemudian dimasukkan pada masing-masing tabung reaksi
kemudian dihomogenkan
 Dilakukan hal yang sama untuk seri B dan seri C.
 Diinkubasi pada suhu 370C selama 1 x 24 jam.
 Diamati perubahan warna medium yang terjadi dari hijau
menjadi kuning dan timbulnya gelembung gas dalam tabung
durham .
 Dihitung nilai MPN nya.

F1F1 13 159
BAB IV
HASIL PEMBAHASAN
A. HASIL PENGAMATAN
1. Gambar Pengamatan
10-1 10-2
a. Uji ALT
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS HALU OLEO
10-3
MEDIUM : Nutrient Agar (NA)
SAMPEL :pepsodent

F1F1 13 159
10-1 10-2

FAKULTAS
10-3FARMASI
SAMPEL : Obat Kuat

FAKULTAS FARMASI

F1F1 13 159
10-1 10-2
10-3
SAMPEL : sirup

FAKULTAS FARMASI
UNIVERS ITAS HALU OLEO

F1F1 13 159
10-4 10-5
10-6
MEDIA : Nutrient Agar (NA)
SAMPEL : roti
a. Gambar pengamatan Uji MPN

F1F1 13 159
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI Keterangan:

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS HALO OLEO 1. Kapas
2. Tabung
reaksi
3. Gas yang
terbentuk
4. Medium LB
5. Tabung
durham
Medium : Lactosa Broth
Sampel : Sirup
B. TABEL HASIL PENGAMATAN
1) Tabel hasil pengamatan uji MPN

F1F1 13 159
a. Dancow
Replikasi Pengenceran Total MPN
10-1 10-2 10-3
1 + - -
2 - - -
3 - - -
Jumlah 1 0 0 4
b. Roti boy
10-1 10-2 10-3
1 + + +
2 + + -
3 - - -
jumlah 2 2 1 28
c. Siomay
10-1 10-2 10-3

F1F1 13 159
1 + + +
2 + + -
3 - - -
jumlah 2 2 1 28
d. Obat kuat
10-1 10-2 10-3
1 + + +
2 + - -
3 - - -
Jumlah 2 1 1 20
2) Tabel hasil uji ALT
a. Tabel sampel sirup
Pengenceran 10-1 10-2 10-3
Jumlah koloni 20 48 28
b. Tabel sampel Obat Kuat

F1F1 13 159
c. Tabel uji sampel Pepsoden
d. Tabel uji sampel Roti
C. Pembahasan
Perhitungan mikroorganisme dilakukan untuk mengetahui
jumlah koloni mikroorganisme tersebut dapat berkembang dalam
jangka waktu tertentu dan dengan perlakuan tertentu, serta
mengetahui kecepatan perkembang biakannya. Perhitungan
kuantitas mikroorganisme dapat dilakukan secara langsung dan

F1F1 13 159
tidak langsung. Perhitungan ini dilakukan untuk mengetahui jumlah
sel dalam bakteri massa sel dan kapang.
Perhitungan mikroorganisme dapat dilakukan dengan dua
cara yaiu metode MPN dan metode SPC di mana metode SPC ini
meliputi ALT bakteri. Pada percobaan perhitungan kuantitas
mikroorganisme dilakukan sebuah pengenceran. Pengenceran
dilakukan untuk memberikan perbedaan kosentrasi awal
mikroorganisme pada tiap medium untuk memberikan variasi
pertumbuhan nantinya, dimana terdapat variasi dari kosentrasi
yang tinggi hingga kosentrasi yang rendah.
Metode MPN merupakan metode untuk menguji ada
tidaknya bakteri koliform dalam sampel tersebut. Bakteri coliform
adalah golongan bakteri intestinal, yaitu hidup dalam saluran
pencernaan manusia. Bakteri coliform adalah bakteri indikator
keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih tepatnya, sebenarnya,
bakteri coliform fecal adalah bakteri indikator adanya pencemaran
bakteri patogen. Penentuan coliform fecal menjadi indikator
pencemaran dikarenakan jumlah koloninya pasti berkorelasi positif
dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi

F1F1 13 159
coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada
mendeteksi bakteri patogenik lain. Hasil positif maka akan terjadi
perubahan warna dari hijau menjadi kuning dan di dalam tabung
durham terdapat gas ditandai dengan naiknya tabung durham yang
disertai dengan adanya gelembung udara. Bakteri bersifat
merombak karbohidrat melalui proses fermentasi yang
menghasilkan karbondioksida dan senyawa akohol yang bersifat
asam sehingga warna medium berubah menjadi kuning.
Syarat untuk menghitung koloni pada cawan adalah cawan
yang dipilih dapat dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni
antara 30 – 300 untuk bakteri dan 10-150 untuk jamur beberapa
koloni yang bergabung menjadi satu merupakan suatu kumpulan
koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan dapat dihitung
sebagai satu koloni, suatu deretan (rantai) koloni yang terlihat
sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai satu koloni.
Pada pengujian ALT, sampel dimasukkan kedalam cawan
petri yang sudah terdapat medium PDA, Potato Dextrose agar
merupakan medium padat karena mengandung agar yang
memadatkan medium serta kegunaannya merupakan medium untuk

F1F1 13 159
pertumbuhan jamur. Setelah itu diinkubasi selama 3-5 hari, tujuan
diinkubasi selama 3-5 hari karena waktu tersebut adalah waktu
dimana jamur tumbuh.
Berbeda dengan metode agar cawan yang menggunakan
medium agar, dalam metode MPN digunakan metode cair di dalam
tabung reaksi, dimana perhitungan yang dilakukan merupakan tahap
pendekatan secara statistik. Pada umumnya untuk setiap
pengenceran digunakan 3 atau 5 seri tabung. Semakin banyak
tabung reaksi yang digunakan akan menunjukkan ketelitian yang
semakin tinggi. Pengenceran harus dilakukan sedemikian rupa
sehingga beberapa tabung yang berisi medium cair yang
diinokulasikan dengan larutan hasil pengenceran tersebut
mengandung satu sel mikroba, sedangkan tabung lainnya tidak
mengandung sel. Setelah diinkubasi, diharapkan pada beberapa
tanbung terjadi pertumbuhan (positif), sedangkan tabung lainnya
tidak terjadi pertumbuhan (negatif).
Media yang digunakan adalah LB (Lactose Broth), baik itu
LBDS dan LBSS yang diberi indikator perubahan pH yaitu
NR (Neutral Red) dan dimasukkan tabung durham. penambahan LB

F1F1 13 159
bertujuan karena LB banyak mengandung gula yang berguna untuk
pertumbuhan mikroba, kemudian diinkubasi.
Tabung durham yang dipakai diletakkan pada posisis
terbalik, sebagai indikator untuk jasad renik pembentuk gas. Perlu
diperhatikan ketika menyuntikkan media pada tabung durham tidak
boleh terbentuk gas karena akan mengganggu hasil pengamatan.
Pengamatan tabung yang positif dapat dilihat dengan
mengamati timbulnya kekeruhan, perubahan warna, atau
terbentuknya gas di dalam tabung durham. Namun, bila dalam suatu
tabung hanya terjadi kekeruhan atau perubahan warna tanpa
adanya gelembung gas, tabung tersebut dinyatakan negatif.
Gelembung udara yang dihasilkan pada tabung durham disebabkan
oleh adanya aktivitas respirasi mikroorganisme.Kekeruhan dan
perubahan warna yang terdapat pada tabung reaksi juga
disebabkan karena adanya aktivitas dari suatu mikroorganisme.
Kekeruhan yang terjadi pada setiaptabung reaksi tersebut
berbeda-beda, ada yang mengalami kekeruhan pada bagian
permukaannya saja dan ada juga yang mengalami
kekeruhan secara merata. Tetapi untuk pengamatan yang lebih

F1F1 13 159
akurat, tabung reaksi dinyatakan positif bila terdapat gelembung
udara pada tabung durhamnya saja karena kekeruhan atau
perubahan warna yang terjadi bisa saja disebabkan oleh efek
sampel yang digunakan, ketidaksterilan pelaksanaan praktikum
sehingga sampel terkontaminasi ataupun karena proses pemanasan
dalam autoklaf.
Metode MPN ini umumnya digunakan untuk menghitung
jumlah bakteri pada air khususnya untuk mendeteksi adanya
bakteri koliform yang merupakan kontaminan utama sumber air
minum. Ciri-ciri utamanya yaitu bakteri gram negatif, batang
pendek, tidak membentuk spora, memfermentasi laktosa menjadi
asam dan gas yang dideteksi dalam waktu 24 jam inkubasi pada
37ºC
DAFTAR PUSTAKA
Ditjen POM, 1979, Farmakope Indonesia edisi III, Departemen

Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Ditjen POM, 1995, Farmakope Indonesia edisi IV, Departemen

Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Darmawan, 2000, Penyakit Bawaan Makanan, Penerbit Buku

Kedokteran:Jakarta.

F1F1 13 159
Mansauda, K.L., Fatimawali, Kojong, Novel, 2014, analisis cemaran

bakteri coliform pada saus tomat Jajanan bakso tusuk yang
beredar di manado, Jurnal Ilmiah Farmasi – UNSRAT Vol. 3
No. 2.
Purnawidjayanti, H.A, 2001, Sanitasi Higine dan Keselamatan Kerja

dalam Pengolahan Makan, Karnisus:Jakarta.
Sutton, Schot, 2010, The Most Probable Number Method and Its Uses
in Enumeration, Qualification, and Validation, Microbiology
Topics, Vol. 16, N0. 3.
Ullate, E.G., bayon, J.R., Castro, 2008, Efficiency of MPN method to

indicate hydrocarbon biodegradation processes within
permeable pavements, International Conference on Urban
Drainage, Edinburgh, Scotland, UK.
Utami, N.S., Muryani, Chatarina, Endarto, Danang, 2012, kaitan

pencemaran bakteri coliform dan e-coli Pada air sumur penduduk
dengan kepadatan Permukiman di kecamatan jebres kota
Surakarta, Vol. 1, No. 1.
LAMPIRAN
A. Skema Kerja
akuades 9 ml 10-0l 10-1 10-2 10-3

sampel 1 ml

F1F1 13 159
ALT
Bakteri
Media NA
ALT
Kapang
Media PDA
10-1 10-2 10-3
Uji MPN

F1F1 13 159
B. Komposisi Media
a) Medium LB (Lactosa Broth)
Potato dari gelatin 5,0
Ekstrak Daging 3,0
Lactosa 5,0
Air 1000 mL
b) Medium NA (Natrium Agar)
Peptone 5,0
Ekstrak beef 3,0
Agar 15
Aquadest 1000 mL
c) Medium PDA (Potato Dextrose Agar)
EKstrak Kentang 4,0 dari 200 g kentang
D-Glukosa 20
Agar 15
Pembuatan: Larutkan 39 g/L, autoklaf.

F1F1 13 159
3) Perhitungan
1. Uji ALT
1
ALT = V. N.
FP
a. Tabel sampel sirup
Karena data yang diperoleh hanya satu yang memenuhi
syarat maka yang dilaporkan pada pengenceran 10-2 yaitu:
1
ALT = 15 ml . 48 .
10−2
= 7,2 x 104
b. Tabel sampel Obat Kuat
1
ALT = 15 ml . 32 .
10−2
= 4,8 x 104

F1F1 13 159
c. Tabel uji sampel Pepsodent
1
ALT = 15 ml . 41 .
10−3
= 6,1 x 105
d. Tabel uji sampel Roti
1
ALT = 15 ml . 141 .
10−3
= 2,1 x 106
2. Uji MPN

F1F1 13 159
1
MPN = Nilai MPN x
fp tengah
a. Sampel dancow
1
MPN = 4 x
10−2
= 4,0 x 102
b. Sampel Roti Boy
1
MPN = 28 x
10−2
= 2,8 x 103
c. Sampel siomay
1
MPN = 28 x
10−2
= 2,8 x 103
d. Sampel obat kuat
1
MPN = 20 x
10−2
= 2,0 x 103

F1F1 13 159
F1F1 13 159

Praktikum Mikrobiologi 6

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Praktikum Mikrobiologi 6

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PERHITUNGAN KUANTITAS MIKROORGANISME 1

Jumlah mikroorganisme yang berada dalam suatu sampel

atau bahan sangat bervariasi, tergantung dari jenis bahan itu

sendiri dan kondisi lingkungannya. Jumlah mikroorganisme dalam

suatu sampel dapat di hitung dengan menggunakan beberapa

ruang hitung (couting chamber). Perhitungan massa sel secara tidak

langsung sering digunakan dalam mengamati pertumbuhan sel

selama proses fermentasi, dimana komposisi substratnya atau

bahan yang difermentasikan dapat diamati dan diukur teliti.

Dalam perhitungan mikroorganisme secara langsung,

jumlah sel mikroorganisme dapat dihitung jika medium

pertumbuhannya tidak mengganggu pengukuran. Pertumbuhan

massa sel secara tidak langsung sering digunakan dalam mengamati

pertumbuhan sel selama proses fermentasi, dimana komposisi

CICILIA RESA LD. MUHAMMAD FITRAWAN, S.FARM., APT

substratnya atau bahan yang difermentasi dapat diamati dan

diukur dengan teliti.

Adapun rumusan masalah pada praktikum ini yaitu:

1. Bagaimana cara mengetahui tingkat pertumbuhan

mikroorganisme terhadap suatu produk atau sediaan.

2. Bagaimana cara mengetahui cara perhitungan kuantitatif

dari suatu mikroorganisme.

Maksud dilakukannya pratikum ini adalah untuk

mengetahui dan memahami cara-cara perhitungan kuantitas

mikroorganisme suatu produk secara mikrobiologi.

Tujuan dilakukannya praktikum ini adalah untuk

menentukan kuantitas mikroorganisme pada beberapa produk

obat kuat, dan pasta gigi.

CICILIA RESA LD. MUHAMMAD FITRAWAN, S.FARM., APT

Sebagai sumber informasi jumlah mikroorganisme yang

terdapat pada produk farmasi dengan pengujian nilai ALT bakteri,

tersebut untuk dikonsumsi.

CICILIA RESA LD. MUHAMMAD FITRAWAN, S.FARM., APT

Kontaminasi bakteri patogen pada makanan dan minuman

dapat menyebabkan berbagai macam penyakit diantaranya typhoid,

diare, keracunan makanan dan lain sebagainya. Penyakit-penyakit ini

akan lebih mudah menjangkiti orang yang mengalami penurunan

luar (ekstrinsik). Oleh karena itu, untuk menjamin kesehatan dan

keselamatan konsumen, harus dilakukan pemeriksaan laboratorium

bakteriologik secara berkala (Mansauda dkk., 2014).

Mikroorganisme yang paling umum digunakan sebagai

petunjuk atau indikator adanya pencemaran dalam air adalah E.

Coli, serta bakteri dari kelompok koliform. Bakteri dari jenis

tersebut selalu terdapat didalam kotoran manusia, sedangkan

bakteri patogen tidak selalu ditemukan. Mikroorganisme dari

kelompok koliform secara keseluruhan tidak umum hidup atau

terdapat didalam air, sehingga keberadaannya dalam air dapat

CICILIA RESA LD. MUHAMMAD FITRAWAN, S.FARM., APT

dianggap sebagai petunjuk terjadinya pencemaran kotoran dalam

arti luas (Purnawijiyanti, 2001).

Sekitar separuh dari sampel air minum juga mengandung

E.coli tetapi jumlah koloninya diperkirakan 10 kali lebih rendah dari

pada dalam sampel makanan. Hasil penelitian yang penting adalah

kolerasi antara proporsi sampel makanan anak yang terkontaminasi

E.coli dan jumlah kejadian penyakit diare setiap tahunnya berkaitan

dengan E.coli (Darmawan, 2000).

Menurut ketentuan WHO (World Health Organization)

dan APHA (American Public Health Association), kualitas air

ditentukan oleh kehadiran dan jumlah bakteri didalamnya. terdapat

beberapa jenis bakteri yang hidup di dalam air yaitu bakteri

Coliform dan E-Coli. Coliform merupakan bakteri fecal yang berasal

manusia, E-Coli adalah bakteri komensial pada usus manusia dan

umumnya bukan patogen penyebab penyakit, namun apabila di dalam