PENGARUH PEMBERIAN VITAMIN C DAN E TERHADAP JUMLAH

SEL SPERMATOGONIA YANG DIPAPAR RADIASI SINAR X

Studi Eksperimental pada Mencit (Mus muculus) galur Balb/C

Skripsi

Untuk memenuhi sebagian persyaratan

mencapai gelar Sarjana Kedokteran
HALAMAN JUDUL

Oleh :

Septi Dwi Sulistyowati

30101507559

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS ISLAM SULTAN AGUNG

SEMARANG

2019
 SKRIPSI
PENGARUH PEMBERIAN VITAMIN C DAN E TERHADAP JUMLAH
SEL SPERMATOGONIA YANG DIPAPAR RADIASI SINAR X

Studi Eksperimental pada Mencit (Mus muculus) galur Balb/C

Yang dipersiapkan dan disusun oleh :

Septi Dwi Sulistyowati
30101507559
HALAMAN PENGESAHAN
Telah dipertahankan di depan Dewan Penguji
Pada tanggal 7 Februari 2019
dan dinyatakan telah memenuhi syarat

Susunan Tim Penguji

Pembimbing I Anggota Tim Penguji

Drs. Purwito Soegeng P., M.Kes dr. Bekti Safarini, Sp.Rad

Pembimbing II

dr. Mochammad Soffan, MH.Kes dr. Vito Mahendra E., M.Si.Med Sp.B

Semarang, 7 Februari 2019

Fakultas Kedokteran
Universitas Islam Sultan Agung
Dekan,

Dr. dr. H. Setyo Trisnadi, SH., Sp.KF

ii
 SURAT PERNYATAAN

Yang bertanda tangan dibawah ini:

Nama : Septi Dwi Sulistyowati

NIM : 30101507559

Dengan ini menyatakan Skripsi yang berjudul :

“PENGARUH PEMBERIAN VITAMIN C DAN E TERHADAP JUMLAH

SEL SPERMATOGONIA YANG DIPAPAR RADIASI SINAR X
Studi Eksperimental Pada Mencit (Mus musculus) galur Balb/C”

Adalah hasil karya saya dan penuh kesadaran bahwa saya tidak melakukan
tindakan plagiat atau mengambil alih seluruh atau sebagian besar skripsi orang
lain tanpa menyebutkan sumbernya. Jika saya terbukti melakukan tindakan
plagiasi, saya bersedia menerima sesuai dengan aturan yang berlaku.

Semarang, 7 Februari 2019

Septi Dwi Sulistyowati

iii
 PRAKATA

Assalamu’alaikum Wr. Wb.

Alhamdulillah puji syukur kehadirat Allah SWT yang telah memberikan

rahmat, karunia, serta hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi

dengan judul “PENGARUH PEMBERIAN VITAMIN C DAN E TERHADAP

JUMLAH SEL SPERMATOGONIA YANG DIPAPAR RADIASI SINAR X”

dalam rangka memenuhi sebagian persyaratan untuk menyelesaikan Program

Studi Strata 1 (S1) di Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung.

Sholawat serta salam semoga tetap tercurahkan kepada Nabi Muhammad SAW

yang telah membawa umat Islam berada dijalan yang Allah SWT ridhoi.

Dengan selesainya Skripsi ini, terbuka kesempatan penulis untk

mengucapkan terima kasih kepada:

1. Dr. Dr. H. Setyo Trisnadi Sp.KF. SH, selaku Dekan Fakultas Kedokteran

Universitas Islam Sultan Agung Semarang.

2. Drs. Purwito Soegeng P., M.Kes, selaku dosen Pembimbing I yang telah

meluangkan waktunya untuk memberikan bimbingan dengan penuh

kesabaran dan memberikan arahan kepada penulis untuk menyelesaikan

skripsi.

3. dr. Mochammad Soffan, MH.Kes, selaku dosen Pembimbing II yang telah

meluangkan waktu untuk memberikan bimbingan dan arahan kepada

penulis.

iv
 4. dr. Bekti Safarini, Sp.Rad, selaku dosen Penguji I yang telah memberikan

motivasi, saran dan masukan kepada penulis sehingga dapat

menyelesaikan skripsi.

5. dr. Vito Mahendra E., M.Si.Med Sp.B, selaku dosen Penguji II yang telah

memberikan arahan, saran dan masukan kepada penulis.

6. Kepada keluarga saya Ayahanda tercinta Dasmono, Ibunda tercinta Ratini,

kakak tercinta Eka Pipit Wijayanti yang senantiasa telah memberikan

kasih sayang, motivasi dan doa yang tiada henti sehingga penulis tetap

bersemangat dalam menyelesaikan skripsi.

7. Teman-teman sejawat Endorphin 2015 dan semua pihak yang telah

membantu menyelesaikan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan

satu persatu.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari sempurna, karena itu

penulis berterima kasih atas kritik dan sarannya. Sebagai akhir kata dari penulis,

berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi kita semua.

Wassalamu’alaikum Wr. Wb.

Semarang, 7 Februari 2019

Penulis

v
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL.................................................................................................i
SURAT PERNYATAAN.......................................................................................iii
PRAKATA..............................................................................................................iv
DAFTAR ISI...........................................................................................................vi
DAFTAR TABEL...................................................................................................ix
DAFTAR GAMBAR...............................................................................................x
DAFTAR SINGKATAN........................................................................................xi
DAFTAR LAMPIRAN..........................................................................................xii
INTISARI.............................................................................................................xiii
BAB I PENDAHULUAN...................................................................................1
1.1. Latar Belakang..................................................................................1
1.2. Rumusan Masalah.............................................................................3
1.3. Tujuan Penelitian..............................................................................3
1.3.1. Tujuan Umum.......................................................................3
1.3.2. Tujuan Khusus......................................................................3
1.4. Manfaat Penelitian............................................................................3
1.4.1. Manfaat Teoritis....................................................................3
1.4.2. Manfaat Praktis.....................................................................4
BAB II TINJAUAN PUSTAKA..........................................................................5
2.1. Spermatogonia..................................................................................5
2.1.1. Definisi.................................................................................5
2.1.2. Jenis-jenis spermatogonium..................................................5
2.1.3. Spermatogenesis...................................................................7
2.1.4. Faktor-faktor yang mempengaruhi spermatogenesis..........10
2.2. Radiasi............................................................................................11
2.2.1. Definisi...............................................................................11
2.2.2. Sumber Radiasi...................................................................11

vi
 2.2.3. Sinar X................................................................................12
2.2.4. Prinsip Kerja Sinar X..........................................................12
2.2.5. Sifat Sinar X.......................................................................13
2.2.6. Dosis Sinar X......................................................................14
2.2.7. Alat pengukur Radiasi........................................................15
2.2.8. Proteksi Radiasi..................................................................15
2.2.9. Pengaruh Radiasi terhadap Tubuh......................................16
2.2.10. Pengaruh Radiasi terhadap Sel...........................................17
2.3. Vitamin C dan E.............................................................................20
2.3.1. Vitamin C............................................................................20
2.3.2. Vitamin E............................................................................21
2.3.3. Kombinasi vitamin C dan E................................................22
2.4. Mencit Jantan..................................................................................23
2.4.1. Definisi...............................................................................23
2.4.2. Taksonomi Mencit..............................................................24
2.5. Hubungan pemberian vitamin C dan E terhadap jumlah
spermatogonia pada mencit yang dipapar sinar X..........................25
2.6. Kerangka Teori...............................................................................28
2.7. Kerangka Konsep...........................................................................29
2.8. Hipotesis.........................................................................................29
BAB III METODE PENELITIAN......................................................................30
3.1. Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian.....................................30
3.2. Variabel dan Definisi Operasional.................................................30
3.2.1. Variabel Penelitian..............................................................30
3.2.2. Definisi Operasional...........................................................30
3.3. Populasi dan Sampel.......................................................................33
3.3.1. Populasi Penelitian..............................................................33
3.3.2. Sampel Penelitian...............................................................33
3.3.2.1. Jumlah Sampel................................................................33
3.3.2.2. Cara Pengambilan Sampel..............................................34
3.4. Alat dan Bahan Penelitian..............................................................34

vii
 3.4.1. Alat Penelitian....................................................................34
3.4.2. Bahan Penelitian.................................................................35
3.5. Cara Penelitian................................................................................36
3.5.1. Persiapan Penelitian............................................................36
3.5.2. Perlakuan............................................................................36
3.5.3. Pemberian Radiasi Sinar X.................................................37
3.5.4. Pelaksanaan Penelitian........................................................38
3.5.5. Cara Pengambilan Sampel Testis.......................................39
3.5.6. Cara Pembuatan Preparat....................................................39
3.5.7. Cara Pemeriksaan Jumlah Sel Spermatogonia...................40
3.5.8. Alur Kerja Penelitian..........................................................41
3.6. Tempat dan Waktu..........................................................................42
3.6.1. Tempat Penelitian...............................................................42
3.6.2. Waktu Penelitian.................................................................42
3.7. Analisis Hasil..................................................................................42
BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN.....................................43
4.1. Hasil Penelitian...............................................................................43
4.2. Pembahasan....................................................................................46
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan.....................................................................................51
5.2. Saran...............................................................................................51
DAFTAR PUSTAKA............................................................................................52
LAMPIRAN...........................................................................................................54

viii
 DAFTAR TABEL

Tabel 2. 1. Dosis serap kira-kira untuk jaringan per Roentgen pemaparan...........15

Tabel 2. 2. Data biologi mencit putih.....................................................................24
Tabel 4. 1. Hasil analisis normalitas sebaran data dan homogenitas varian..........45
Tabel 4. 2. Hail uji one way anova rerata jumlah sel spermatogonia....................45
Tabel 4. 3. Perbedaan rerata jumlah sel spermatogonia antar kelompok...............46
Y

ix
 DAFTAR GAMBAR

YGambar 2. 1. Skema spermatogonia

Gambar 2. 2. Skema spermatogenesis...................................................................10
Gambar 2. 4. Pembentukan, pembuangan, dan peran ROS pada jejas sel.............20
Gambar 2. 5. Mencit Putih 25

Y
Gambar 4. 1. Grafik bar rerata jumlah sel spermatogonia.....................................44

x
 DAFTAR SINGKATAN

ATP : Adenosin Trifosfat

BNF : Buffered Neutral Formalin

DNA : Deoxyribose Nucleid Acid

FSH : Follicle Stimulating Hormon

GPX : Glutathione Peroxidase

GnRH : Gonadotropin Realeasing Hormon

LH : Lutenizing Hormon

NaCl : Natrium Klorida

ROS : Reactive Oxygen Species

SOD : Superoxide Dismutase

WHO : World Health Organization

xi
 DAFTAR LAMPIRAN

YLampiran 1. ................................................Hasil Data Jumlah Sel Spermatogonia

Lampiran 2. Hasil Mean Jumlah Sel Spermatogonia............................................55
Lampiran 3. Hasil Analisis Normalitas Sebaran Data dan Homogenitas
Varian................................................................................................55
Lampiran 4. Hasil Uji One Way Anova Rerata Jumlah Sel Spermatogonia..........55
Lampiran 5. Hasil Uji Post Hoc LSD Rerata Jumlah Sel Spermatogonia
Antar Kelompok................................................................................55
Lampiran 6. Dokumentasi Penelitian....................................................................56

xii
 INTISARI

Radiasi sinar X merupakan salah satu radiasi pengion yang menyebabkan

terbentuknya radikal bebas sehingga merusak sel spermatogonia. Penggunaan
vitamin C dan E sebagai antioksidan untuk melindungi sel tubuh. Penelitian ini
bertujuan mengetahui pengaruh pemberian vitamin C dan E terhadap jumlah sel
spermatogonia yang dipapar radiasi sinar X.
Metode penelitian eksperimental dengan rancangan post test only control
group design dilakukan pada 35 ekor mencit (Mus musculus) dibagi menjadi 5
kelompok secara acak yaitu KP tidak diberi paparan radiasi dan pemberian
vitamin, KN dengan paparan radiasi sinar X 25 mGy/hari tanpa pemberian
vitamin, KP 1 diberikan vitamin C 0,26 mg/hari, KP 2 diberikan vitamin E 0,208
mg/hari, KP 3 diberikan kombinasi vitamin C 0,26 mg/hari dan vitamin E 0,208
mg/hari setiap sebelum pemaparan radiasi sinar X 25 mGy/hari selama 4 hari
dengan waktu penelitian 21 hari. Pada hari ke 22 sampel diterminasi kemudian
diamati melalui mikroskop. Jumlah sel spermatogonia dianalisis One Way Anova
kemudian uji post Hoc LSD.
Hasil rerata jumlah spermatogonia pada KP, KN, KP1, KP2 dan KP3 yaitu
24,24; 13,28; 19,36; 19,60 dan 23,32. Hasil uji One Way Anova diperoleh nilai p
sebesar 0,000 (p<0,05) artinya terdapat perbedaan rerata jumlah sel
spermatogonia yang bermakna diantara kelima kelompok. Hasil uji post Hoc LSD
menunjukkan perbedaan rerata sel spermatogonia antar dua kelompok ditunjukkan
oleh hampir semua pasangan kelompok (p<0,05); kecuali untuk perbandingan
rerata sel spermatogonia antara KP1 dan KP2 (p>0,05).
Dapat disimpulkan terdapat pengaruh pemberian vitamin C dan E terhadap
jumlah sel spermatogonia mencit yang dipapar radiasi sinar X.

Kata kunci: radiasi sinar X, antioksidan, vitamin C, vitamin E, sel spermatogonia

xiii
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Pemanfaatan radiasi sinar X saat ini banyak digunakan dalam dunia

medis sebagai alat bantu diagnostik ataupun terapi pada penyakit tertentu

(Sudatri et al., 2015). Radiasi sinar X dalam bidang kesehatan khususnya

kedokteran digunakan sebagai radiografi untuk mendiagnosis suatu penyakit

dengan menggambarkan struktur anatomi tubuh manusia (Hasmawati, 2016).

Radiasi merupakan suatu pelepasan energi yang dapat menembus ruang atau

substansi dalam bentuk partikel atau gelombang yang berasal dari sumber

radiasi (Susanti et al., 2016). Apabila sinar radiasi mengenai dan menembus

tubuh yang dilalui dapat mengalami proses ionisasi sehingga radikal bebas

akan merusak DNA (Supriyono et al., 2017). Selain mempunyai manfaat

yang cukup besar, radiasi juga mempunyai efek biologis yang perlu

dipertimbangkan kembali seperti merusak sel-sel normal, kemandulan, mutasi

gen atau sel, dan penurunan jumlah spermatozoa sampai azoospermia

(Sudatri et al., 2015). Menurut Fauziyah and Dwijananti (2013), Sinar X

merupakan radiasi pengion yang dapat menyebabkan masalah berupa

kemandulan (infertilitas). Hasil survei badan kependudukan pada tahun 2011,

kasus infertilitas pasangan suami istri di Indonesia diperkirakan sekitar 12 -

15% kasus (JPNN, 2011).

Tahap perkembangan spermatogonia menjadi spermatid merupakan

tahapan yang radiosensitif. Berdasarkan penelitian sebelumnya oleh Windy

1
 2

(2013), mencit yang diberi paparan radiasi sinar X dengan dosis 5,3 mSv

selama 8 minggu mengalami degenerasi pada sel spermatogonia. Mencit

jantan yang diinduksi dengan radiasi sinar X dengan dosis akumulasi

sebanyak 200 rad menyebabkan terganggunya sel-sel kelamin sehinga jumlah

dan diameter tubulus seminiferus menjadi tidak normal (Sudatri et al., 2015).

Menurut penelitian yang dilakukan oleh Kalsum (2013) menyatakan

bahwa pemberian kombinasi vitamin C dan E pada mencit yang diberi

paparan monosodium glutamat memberikan efek pemulihan yang penuh

terhadap jumlah sel spermatogenik karena kerja vitamin C dan E yang

sinergis. Vitamin E bekerja di membran sel dan vitamin C bekerja di sitosol

secara ekstrasel. Peneliti lain menyatakan bahwa pemberian kombinasi

vitamin C dan E efektif menghambat aktivitas radikal bebas. Pada awal

reaksi, radikal bebas akan di tangkap dan dinetralisir oleh vitamin E

kemudian berubah menjadi vitamin E radikal. Semantara itu, vitamin C akan

mengikat vitamin E radikal dan berubah menjadi vitamin E bebas sehingga

dapat berfungsi kembali menjadi antioksidan (Pramesti et al., 2016).

Berdasarkan hal tersebut, maka peneliti tertarik untuk meneliti mengenai

pengaruh pemberian dosis tunggal serta kombinasi vitamin C dan E terhadap

jumlah spermatogonia pada mencit yang dipapar sinar X.

 3

1.2. Rumusan Masalah

Dari latar belakang tersebut diatas diperoleh rumusan masalah sebagai

berikut:

Apakah terdapat pengaruh pemberian dosis tunggal serta kombinasi

vitamin C dan E terhadap jumlah sel spermatogonia mencit jantan (Mus

musculus) yang dipapar radiasi sinar X ?

1.3. Tujuan Penelitian

1.3.1. Tujuan Umum

Mengetahui pengaruh pemberian dosis tunggal serta kombinasi

vitamin C dan E terhadap jumlah sel spermatogonia pada mencit

jantan (Mus musculus) yang dipapar radiasi sinar X.

1.3.2. Tujuan Khusus

1. Mengetahui jumlah sel spermatogonia pada mencit jantan (Mus

musculus) dengan berbagai perlakuan vitamin C dan E yang

dipapar radiasi sinar-X.

2. Menganalis perbedaan jumlah sel spermatogonia pada mencit

jantan (Mus musculus) dengan berbagai perlakuan vitamin C dan

E yang dipapar radiasi sinar X.

1.4. Manfaat Penelitian

1.4.1. Manfaat Teoritis

1.4.1.1. Hasil penelitian pengaruh pemberian vitamin C dan E

terhadap jumlah sel spermatogonia pada mencit yang

 4

dipapar radiasi sinar X dapat menambah informasi dan ilmu

pengetahuan dalam bidang ilmu Kedokteran.

1.4.1.2. Hasil penelitian pengaruh pemberian vitamin C dan E

terhadap jumlah sel spermatogonia pada mencit yang

dipapar radiasi sinar X dapat menjadi landasan penelitian

selanjutnya.

1.4.2. Manfaat Praktis

Dengan hasil penelitian ini dapat memberikan informasi kepada

pekerja radiasi mengenai manfaat mengkonsumsi vitamin C dan E

untuk mencegah penurunan jumlah sel spermatogonia (abnormalitas

sel) akibat paparan radiasi sinar X.

 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Spermatogonia

2.1.1. Definisi

Spermatogonium adalah sel germinal yang akan membelah dan

menghasilkan spermatozoa (Destri, 2013). Bentuk jamak dari

spermatogonium adalah spermatogonia (Dorlan, 2011).

2.1.2. Jenis-jenis spermatogonium

Spermartogonium berasal dari sel germinal kemudian

mengalami fase proliferatif menjadi spermatogonia fetal berubah

menjadi spermatogonia transisi dan menjadi spermatogonia tipe Ad

(dark). Pada fase proliferatif memilki nukleus yang berbeda sehingga

dapat diamati dengan pewarnaan hematoksilin dan eosin.

Spermatogonia dibagi menjadi 3 jenis, yaitu:

1. Spermatogonia tipe Ad (dark)

Spermatogonia tipe Ad (dark) merupakan spermatogonia

yang memiliki kromatin warna gelap dan tebal dengan bagian

tengah yang terang, sitoplasma menempel pada basal lamina

tubulus seminiferus dan nukleus mengandung granular kromatin

halus. Spermatogonia tipe Ad (dark) kemudian mengalami

mitosis untuk mengisi spermatogonia yang terpakai dan

membelah menjadi spermatogonia tipe Ap (pale).

5
 6

2. Spermatogonia tipe Ap (Pale)

Spermatogonia yang memiliki pewarnaan pucat dan

kromatin granular halus di inti ovoid.

3. Spermatogonia tipe B

Spermatogonia yang ditandai dengan kromatin yang besar

di bawah membran inti ovoid. Type B spermatogonia membagi

secara mitotik untuk menghasilkan spermatosit primer (Sharma et

al., 2011).

Gambar 2. 1. Skema spermatogonia (Sharma et al., 2011)

 7

2.1.3. Spermatogenesis

Spermatogenesis merupakan suatu perkembangan

spermatogonium menjadi spermatozoa. Pembentukan spermatozoa

terjadi di testis tepatnya di tubulus seminiferus dan akan disalurkan ke

retetestis kemudian disimpan dalam epididimis. Saat ejakulasi,

spermatozoa akan dikeluarkan melalui uretra (Susilawati, 2011).

Sebagian besar testis disusun oleh tubulus seminiferus dan

10% oleh jaringan ikat (Susilawati, 2011). Sekitar 370 lobulus atau

fibrom septa yang menyusun dari tubulus seminiferus dan jaringan

intertubular. Tubulus seminiferus merupakan serangkaian tubulus

yang berkelok-kelok didalam testis dan sebagai tempat terjadinya

spermatogenesis. Setiap tubulus seminiferus mempunyai diameter 180

Pm, tinggi epitel germinal 80 Pm dan ketebalan jaringan peritubular 8

Pm. Ruang tubulus dibagi menjadi membran basal (basal luminal) dan

lumen (adluminal) oleh kompleks junctional interseluler (Sharma et

al., 2011). Terdapat 3 lapisan dinding tubulus seminiferus dari luar ke

dalam yaitu tunika propria, lamina basalis dan lapisan epitelium. Pada

lapisan epitelium tubulus seminiferus memiliki sel spermatogonium

dan sel sertoli. Sel spermatogonium akan mengalami pembelahan sel

sehingga menghasilkan spermatozoa dan terletak diantara ruang

membrana basalis dengan lumen tubulus karena mempunyai 4-8.

Sementara itu, sel sertoli lebih melekat pada membrana basalis sesuai

dengan fungsinya merawat sel spermatozoa yang baru dibentuk,

 8

menghasilkan hormon inhibin, Androgen Binding Protein dan cairan

testis (Destri, 2013).

Hipotalamus berfungsi sebagai kontrol hormonal dalam

spermatogenesis. Hormon gonadotropin (GnRH) disekresi oleh

hipotalamus kemudian akan memicu dari pelepasan hormon

luteinizing (LH) dan hormon perangsang folikel (FSH) dari

adenohypophysis atau lobus anterior hipofisis. LH membantu

steroidogenesis dengan merangsang sel Leydig dari intersisium

sehingga menghasilkan testosteron sedangkan FSH menstimulasi sel

sertoli untuk menjaga tahapan proliferasi dan perkembangan

spermatogenesis (Sharma et al, 2011).

Menurut Trinil (2011), proses pembelahan sel gamet dibagi

menjadi 2 fase yaitu fase spermatositogenesis dan spermiogenesis.

Pada spermatositogenesis terjadi fase pembelahan secara mitosis dan

meiosis sedangkan pada spermiogenesis terjadi perubahan dari

spermatid menjadi spermatozoa.

Spermatogenesis terbagi menjadi 3 fase antara lain proliferasi

mitotik, meiosis dan pengemasan (Sherwood, 2014). Dapat diuraikan

sebagai berikut:

a. Proliferasi mitotik

Fase mitotik merupakan fase dimana spermatogonium

dapat mengalami pembelahan secara terus-menerus dan

menghasilkan 46 kromosom identik dengan sel induknya (dari 2n

 9

menjadi 2n). Fase ini terjadi pembelahan dari spermatogonium

menjadi spermatosit primer. Pada spermatogonium akan

mengalami fase mitotik sebanyak 2 kali menghasilkan 4

spermatid primer dan 46 kromosom ganda. Sel anak yang

dihasilkan akan masuk ke dalam lumen tubulus seminiferus dan

menjadi sperma. Namun, pada sel anak yang tidak berdiferensiasi

tetap mempertahankan sel germinativum dan berada diluar

tubulus.

b. Meiosis

Pada fase meiosis terdapat 2 fase antara lain fase

pembelahan meiosis I dan meiosis II. Fase meiosis I merupakan

proses pembelahan spermatosit primer yang mempunyai 46

kromosom ganda akan berubah menjadi 2 spermatosit sekunder

yang memiliki 23 kromosom ganda (dari 2n menjadi n). Pada fase

meiosis II terjadi proses pembelahan dari n menjadi n yaitu

spermatosit sekunder akan berdiferensiasi menjadi spermatid

yang memiliki 23 kromosom ganda. Kemudian spermatid akan

dirubah menjadi spermatozoa.

c. Pengemasan (Remodelling Spermatid)

Pada tahap akhir ini, sperma akan dirubah bentuknya

menjadi sperma matur yang motil dan bersifat spesifik.

Perubahannya meliputi kepala, midpiece (badan spermatozoa)

dan ekor. Pada bagian kepala sperma yang mempunyai nukleus

 10

sebagai informasi genetik, akrosom sperma memiliki enzim yang

berfungsi untuk masuk ke dalam ovum, mitokondria sperma

sebagai penghasil energi untuk pergerakan sperma.

Gambar 2. 2. Skema spermatogenesis (Sharma et al., 2011)

2.1.4. Faktor-faktor yang mempengaruhi spermatogenesis

2.1.4.1 Bahan Beracun

Pengaruh radiasi panas maupun kondisi panas dapat

menyebabkan kelainan perkembangan spermatid dan

pembelahan spermatogonia karena pada sel germinal

epitelium bersifat sangat sensitif.

2.1.4.2 Pengaruh Nutrisi

Defisiensi nutrisi yang spesifik berpengaruh terhadap

reproduksi laki-laki saat terjadi fertilisasi. Penurunan sekresi

 11

gonadotropin dipengaruhi oleh kekurangan energi makanan.

Kekurangann vitamin A yang mempengaruhi epitel germinal

sehingga berdampak pada rendahnya kualitas spermatozoa,

atrofi testis, pengecilan kelenjar asesorius. Kekurangan

vitamin E berepengaruh besar terhadap metabolisme sel

terutama sebelum pubertas dan menyebabkan kerusakan

testis namun tidak menyebabkan infertilitas (Susilawati,

2011).

2.2. Radiasi

2.2.1. Definisi

Radiasi merupakan suatu energi yang dipancarkan dalam

bentuk partikel atau gelombang elektromagnetik dari sumber radiasi

(Fauziyah, 2013). Salah satu faktor yang dapat mempengaruhi proses

fisiologis tubuh manusia adalah radiasi. Radiasi dapat merusak sel-sel

jaringan tubuh yang terkena atau dilaluinya apabila tubuh manusia

sering terpapar radiasi dalam jangka waktu yang lama dan dosis

radiasi yang melebihi ambang batas normal (Hasmawati, 2016). Pada

tindakan medis menggunakan radiasi sinar X sebagai penunjang

diagnostik dengan dosis yang relatif aman untuk mendeteksi kelainan

organ (Fauziyah, 2013).

2.2.2. Sumber Radiasi

Sumber radiasi dibagi menjadi 2 yaitu sumber radiasi alami

dan sumber radiasi buatan. Sumber radiasi alami ditemukan pada

 12

kehidupan sehari-hari seperti radiasi dari matahari, radiasi yang

berasal dari mineral-mineral radioaktif yang ada di bumi kemudian

terlarut dalam air dan udara, radiasi yang ditimbulkan dari peralatan-

peralatan modern misalnya televisi, handphone, monitor komputer.

Sumber radiasi buatan merupakan sumber radiasi yang dibuat oleh

manusia dan biasanya melebihi ambang batas normal yang dapat

diterima oleh tubuh. Salah satu contoh dari sumber radiasi buatan

yaitu CT scan dan reaktor nuklir (Supriyono et al., 2017).

2.2.3. Sinar X

Sinar X pertama kali ditemukan pada tahun 1895 oleh Wilhelm

Conrad Rontgen seorang kebangsaan Jerman (Hasmawati, 2016).

Sinar X merupakan salah satu radiasi pengion yang termasuk radiasi

elektromagnetik dengan panjang gelombang pendek (Sudatri et al.,

2015). Sinar radiasi pengion apabila mengenai dan menembus bahan

yang dilalui dapat menyebabkan proses ionisasi (Supriyono et al.,

2017).

2.2.4. Prinsip Kerja Sinar X

Tabung hampa udara atau tabung vakum merupakan

pembangkit sinar X yang mangandung filamen dan berfungsi sebagai

penyimpanan aliran energi sebelum dipancarkan. Pada tabung hampa

udara terdapat 2 elektroda yaitu komponen anoda dan komponen

katoda. Komponen anoda dan katoda dihubungkan dengan sumber

listrik. Sumber listrik dapat memberikan suplai panas atau tegangan

 13

tinggi sehingga tabung filamen panas dan akan terjadi emisi thermis

dimana katoda akan membebaskan elektron dan membentuk awam

elektron. Katoda dapat membebaskan elektron lebih banyak jika diberi

suplai panas atau gelombang pendek elektromagnetik. Elektron-

elektron menuju ke anoda dan dipusatkan ke alat pemusat (focusing

cup) sehingga terjadi tumbukan antara elektron dengan anoda karena

arus yag berlawanan. Apabila tumbukan tepat di inti atom (atom

anoda) disebut dengan “Radiasi Bremstrahlung”. Terjadi radiasi

karena mengalami perlambatan pada tumbukan dan proses

bremstrahlung dapat dialami elektron berulang kali sehingga spektrum

radiasi sinar X bersifat terus-menerus (Karmila, 2014).

2.2.5. Sifat Sinar X

Berdasarkan Karmila Bandu (2014) dan Edi Daenuri Anwar

(2011), sinar X memiliki sifat-sifat utama yaitu:

1. Tidak dapat dilihat dengan mata.

2. Dapat merambat seperti laju cahaya.

3. Tidak dapat didefleksikan dengan lensa atau prisma, dapat

didefleksikan dengan kristal.

4. Dapat menembus semua materi atau bahan.

5. Dapat diserap oleh zat sesuai dengan berat atom atau kepadatan

bahan.

6. Dapat mengionisasi zat yang dilewatinya sehingga mengalami

perubahan struktur pada zat.

 14

7. Termasuk dalam radiasi pengion yang dapat membebaskan

elektron.

8. Dapat merubah jaringan tubuh.

2.2.6. Dosis Sinar X

Sinar X dalam bidang kedokteran digunakan sebagai

pemeriksaan radiodiagnostik untuk mengetahui kelainan pada organ

dalam tubuh. Sehingga hasil dari pencitraan film radiografi harus

memberikan informasi yang sesuai dengan yang dibutuhkan dokter

untuk diagnosis penyakit. Untuk hasil pecitraan film radiografi jelas

perlu diperhatikan permberian dosis radiasi terhadap pasien, biasanya

diberikan dosis yang relatif kecil dan aman. Satuan-satuan dosis

radiasi:

1. Rontgen (r)

Satuan rontgen merupakan satuan pemaparan radiasi yang

menghasilkan muatan 2,58 x 10-4 coulomb per kg udara.

2. Rad

Satuan rad merupakan satuan dosis serap yang dibutuhkan untuk

melepaskan tenaga 100erg dalam 1 gram bahan yang disinari (1 rad

= 100 erg/gram ).

3. Gray (Gy)

Jika dikonversi ke rad maka 1 gray = 100 rad.

 15

Tabel 2. 1. Dosis serap kira-kira untuk jaringan per Roentgen

pemaparan

Jaringan Rad per Roentgen

pemaparan
50 KVp 1 MeV
Jaringan lunak 0,95 0,95
Tulang 5 0,9
4. Rem

Rem merupakan satan dosis ekuivalen atau rad dikalikan dengan

faktor kualitas.

1 Roentgen = Red = 1 Rem

5. Sievent (Sv)

Sievent merupakan satuan dosis radiasi sinar tembus yang dapat

diserap oleh tubuh.

1 Sv = 100 rem

1 Sv = 100 rad

2.2.7. Alat pengukur Radiasi

Survey meter merupakan alat ukur yang digunakan untuk

mengukur radiasi sinar X, yang berfungsi untuk mengukur laju

paparan radiasi dari benda yang mengandung radioaktif (Arizal et al.,

2016).

2.2.8. Proteksi Radiasi

Berdasarkan Radiologi Diagnostik Fakultas Kedokteran

Universitas Indonesia, proteksi terhadap dokter sebagai pemeriksa dan

petugas radiologi perlu diperhatikan sebagai berikut :

1. Hindari penyinaran pada bagian tubuh yang tidak terlindungi.

 16

2. Dosis radiasi yang digunakan harus minimum mungkin dan tidak

boleh melebihi dosis maksimum yang diperkenankan.

3. Pemakaian sarung tangan, apron, gaun pelindung yang berlapis

timbal dengan tebal maksimum 0,5 mm Pb.

4. Hindari pemeriksaan sinar tembus pada tulang kepala.

5. Akomodasi mata sebelum melakukan pemeriksaan sinar tembus

paling sedikit 20 menit.

2.2.9. Pengaruh Radiasi terhadap Tubuh

Pengaruh radiasi dalam tubuh tergantung dari dosis radiasi,

waktu yang diberikan dan kerentanan jaringan (jaringan yang tumbuh

dengan cepat). Pada jaringan yang tumbuh cepat mempunyai efek 3

kali lipat selama fase pertumbuhan.

Berdasarkan Panduan Radiologi Diagnostik Fakultas

Kedokteran Universitas Indonesia tahun 2015 menjelaskan bahwa

pengaruh penyinaran sinar X adalah :

1. Luka permukaan yang dangkal :

- Kerusakan kulit (skin damage)

- Epilasi

- Kuku rapuh

2. Kerusakan hemopoetik :

- Limfopeni

- Leukopeni

- Anemia
 17

- Leukemia

- Kehilangan respons terhadap daya imunitas spesifik

3. Induksi keganasan :

- Leukemia

- Karsinoma kulit

- Sarkoma

4. Berkurangnya kemungkinan hidup

5. Abrasi genetik berupa mutasi gen maupun mutasi kromosom

6. Efek lain seperti katarak, obesitas, dan sterilitas yang dapat

bersifat sementara maupun permanen.

2.2.10. Pengaruh Radiasi terhadap Sel

Radiasi yang ditimbulkan oleh sinar X mempunyai beberapa

manfaat namun juga mempunyai kerugian bagi manusia tergantung

dari dosis yang diberikan dan lama waktunya. Gangguan kesehatan

pada tubuh akibat dari paparan radiasi sinar X merupakan interaksi

antara pengion dengan sel atau jaringan tubuh berlangsung secara

bertahap. Diawali dari tahap fisik sampai akhirnya ke tahap biologi.

Ada 4 tahapan antara lain :

1. Tahap fisik

Pada tahap ini terjadi penyerapan energy dari radiasi

pengion sehingga menimbulkan eksitasi dan ionisasi pada

molekul berlangsung dalam waktu singkat sekitar 10-16 detik.

 18

2. Tahap fisik-kimia

Setelah terjadi reaksi eksitasi dan ionisasi kemudian

mengalam reaksi-reaksi pembentukan radikal bebas yang tidak

stabil yang berlangsung 10-6 detik.

3. Tahap kimia-biologi

Tahap ini berlangsung beberapa detik setelah tahap

sebelumnya yaitu terjadi reaksi antara radikal bebas dan

peroksidase dengan molekul organik sel atau inti sel sehingga

mengakibatkan kerusakan-kerusakan pada molekul sel. Jenis

molekul sel yang bereaksi berpengaruh terhadap jenis

kerusakan-kerusakan yang ditimbulkan. Sebagai contoh pada

molekul protein yang mempunyai ikatan rantai panjang apabila

terjadi reaksi molekul protein maka molekul akan putus dan

protein menjadi rusak. Molekul protein yang putus akan

terbuka dan melakukan reaksi lainnya.

4. Tahap biologi

Pada tahap akhir ini terjadi respon biologi yang bervariasi

bergantung pada reaksi antara radikal bebas dan peroksidase

dengan molekul sel yang menyebabkan kerusakan sel. Proses

ini berlangsung mulai dari beberapa puluh menit sampai

beberapa puluh tahun. Pada proses ini dapat menyebabkan

kerusakan pada seluler atau meluas sampai ke jaringan, organ

bahkan menyebabkan kematian. Akibat dari kerusakan sel

 19

seperti kerusakan sel secara langsung, pembelahan sel tertunda

atau permanen (Karmila, 2014).

Menurut V. Kumar dkk (2015) absorbsi energi radiasi sinar X

dapat menyebabkan kerusakan sel melalui beberapa mekanisme yaitu :

1. merusak mitokondria yang memiliki kemampuan untuk

menghasilkan ATP dan ROS saat keadaan patologis.

2. mengganggu homeostasis kalsium.

3. merusak membran sel (plasma dan lisosom).

4. merusak DNA dan salah pelipatan protein.

Mitokondria sangat rentan terhadap jejas pada saat keadaan

hipoksia, toksin dan radiasi. Apabila mitokondria mengalami

kerusakan maka proses fosforilasi menjadi abnormal, sehingga

menyebabkan produksi ATP menjadi turun dan produksi ROS

meningkat. ROS adalah spesies kimia yang memiliki sebuah elektron

tanpa pasangan pada orbit luar. Radikal bebas tersebut bersifat tidak

stabil dan sangat reaktif. Salah satu cara menstabilkan molekulnya

dengan merebut elektron dari molekul lain. Akibatnya molekul lain

mengalami destruktif dan menimbulkan reaksi berantai. ROS yang

timbul dalam sel akan menyerang pembentuk sel seperti asam nukleat,

protein sel dan lipid. Rangkaian kerusakan akan terjadi karena ROS

juga akan mengakibatkan molekul yang bereaksi dengannya akan

berubah menjadi radikal bebas. Kerusakan yang terjadi pada sel

tersebut dapat memicu terjadinya nekrosis ataupun apoptosis pada sel.

 20

Radiasi pengion dapat mentransfer energi pada biomolekul target

dengan merubah karakteristiknya sehingga dapat merusak sel

(Nurhayati, 2011).

Gambar 2. 3. Pembentukan, pembuangan, dan peran ROS pada jejas

sel (Kumar et al., 2015)
2.3. Vitamin C dan E

2.3.1. Vitamin C

Vitamin C merupakan antioksidan non enzimatik dan bekerja

di ekstraseluler karena mempunyai banyak gugus hidroksil sehingga

mudah larut dalam air. Berfungsi sebagai pengambil ROS yang

bertujuan untuk melawan efek radikal bebas dari kerusakan DNA

yang diinduksi atau ROS yang berlebihan (Putri, 2015). Vitamin C

dapat mereduksi superoksida, hidrogen peroksida radikal hidroksida

dan oksigen reaktif lainnya yang muncul di ekstraseluler maupun

intraseluler (Pakaya, 2014).

Asupan harian vitamin C harus seimbang dengan jumlah

yang dirusak oleh oksidasi atau jumlah yang diekskresikan. Pada

manusia dewasa sehat rata-rata kehilangan 3-4 % cadangan asam

askorbat dalam tubuhnya per hari. Sehingga untuk mempertahankan

 21

cadangan asam askorbat dalam tubuh sebesar 1500 mg atau lebih,

tubuh perlu mengabsorbsi sekitar 60 mg per hari. Pada perokok untuk

mencapai konsentrasi normal dalam plasma diperlukan vitamin C

sebesar 100 mg/hari. Konsentrasi askorbat dalam plasma dapat

berkurang dalam kondisi tertentu, seperti penggunaan obat-obat

kontrasepsi oral, pada penyakit tertentu, khususnya infeksi dan juga

setelah operasi. Batas asupan maksimum vitamin C untuk pria usia

19-70 tahun adalah 2000 mg/hari (Hardman and Limbird, 2012).

2.3.2. Vitamin E

Vitamin E merupakan vitamin larut lemak, campuran dari

tokoferol dan tokotrienol. Berfungsi sebagai antioksidan yang

melindungi kerusakan membran sel dari radikal bebas dengan cara

menekan peroksidasi lipid (Yulianto, 2013). Vitamin E berfungsi

sebagai antioksidan yang memadamkan rantai radikal bebas di

membrane sel dan lipoprotein plasma dengan bereaksi dengan radikal

peoksida lipid yang dibentuk oleh peroksidasi asam lemak tak jenuh

ganda. Produk radikal tokoferoksil relative tidak reaktif, sehingga

menjadi senyawa yang bersifat non radikal (Murray et al., 2014).

Asupan harian vitamin E untuk mencapai konsentrasi normal

dalam plasma adalah 10-30 mg per hari. Kebutuhan asupan tersebut

akan turun jika mengkonsumsi makanan yang mengandung

antioksidan lain. Pada bayi ASI mengandung cukup banyak α-

tokoferol sehingga kebutuhan dapat terpenuhi. Batas asupan

 22

maksimum untuk pria dewasa usia 19-70 tahun adalah 1000 mg/hari.

(Hardman and Limbird, 2012).

2.3.3. Kombinasi vitamin C dan E

Setiap organisme memempunyai mekanisme pertahanan untuk

melindungi dirinya dari ROS. Pembentukan ROS menyebabkan

kerusakan oksidatif dan stress oksidatif yang dapat berkontribusi pada

jaringan luka di hati, otak, ginjal, paru-paru, dan diorgan lain. Stress

oksidatif terjadi apabila radikal bebas berlebihan dipertahanan

antioksidan dari sistem reproduksi laki-laki (Putri, 2015).

Antioksidan merupakan suatu substansi yang dapat

menghentikan atau menghambat kerusakan oksidatif pada suatu

molekul dengan cara bereaksi dengan radikal bebas reaktif

membentuk yang relatif stabil, sehingga kerusakan sel dapat

dihentikan dengan memberikan elektron pada radikal bebas (Pakaya,

2014). Antioksidan berfungsi untuk menetralisir radikal bebas dengan

cara melengkapi kekurangan elektron pada radikal bebas sehingga

tidak mempunyai kemampuan lagi untuk mengambil elektron dari sel

atau DNA dan menghambat terjadinya reaksi berantai yang dihasilkan

dalam proses pembentukan radikal bebas. Antioksidan berperan

penting sebagai protektor dari ROS dengan cara melindungi

organisme dari kerusakan oksidatif dan stress oksidatif menggunakan

2 mekanisme yaitu strategi enzimatik dan non enzimatik. Contoh

antioksidan enzimatik antara lain Superoxide dismutase (SOD),

 23

katalase, dan Glutathione peroxidase (GPX) sedangkan yang termasuk

antioksidan nonenzimatik seperti vitamin C, vitamin E, piruvat,

glutation, dan carnitin. Karotenoid, vitamin E, dan vitamin C dapat

melindungi sel dari radikal bebas dan peroksidasi lipid.

Pemberian kombinasi vitamin C dan E efektif menghambat

aktivitas radikal bebas. Pada awal reaksi, radikal bebas akan di

tangkap dan di netralisir oleh vitamin E kemudian berubah menjadi

vitamin E radikal. Semantara itu, vitamin C akan mengikat vitamin E

radikal dan berubah menjadi vitamin E bebas sehingga dapat

berfungsi kembali menjadi antioksidan (Pramesti et al., 2016).

Penggunaan vitamin C pada manusia adalah 100 mg/hari dan untuk

vitamin E adalah 80 mg/hari atau 120 IU.

Kombinasi vitamin E dan vitamin C yang memiliki sifat

sinergis. Vitamin E bekerja di membran sel dan vitamin C bekerja

disitosol secara ekstrasel sehingga dapat memberikan efek yang

optimal dalam melawan radikal bebas (Kalsumet al., 2013).

2.4. Mencit Jantan

2.4.1. Definisi

Mencit (Mus muculus) merupakan kelompok binatang mamalia

yang mempunyai kemampuan berkembang biak, mudah dipelihara

dan respon yang cepat apabila diuji cobakan. Oleh karena itu, hewan

mencit sering digunakan sebagai sarana penelitian karena hewan

mencit (Mus muculus) mempunyai kelengkapan organ, kebutuhan

 24

nutrisi, metabolisme dan karakteristik reproduksi hampir sama dengan

manusia. Pada hewan mencit juga memiliki genetik mencit,

karakteristik biologi dan perilakunya sama dengan manusia sehingga

banyak kondisi manusia yang dapat direplikasikan ke hewan mencit

(Fauziyah, 2013).

Tabel 2. 2. Data biologi mencit putih (Fauziyah, 2013)

Kriteria Keterangan
Berat Badan
- Jantan 20-40 gram
- Betina 18-35 gram
Lama hidup 1-3 tahun
Temperatur tubuh 36,5˚C
Kebutuhan air Ad libitum
Kebutuhan makanan 4-5 gram/hari
Pubertas 28-49 hari
Lama kebuntingan 17-21 hari

2.4.2. Taksonomi Mencit

Taksonomi mencit (Mus muculus) menurut Ani Fauziyah

(2013) sebagai berikut:

Kingdom : Animalia
Filum : Chordata
Kelas : Mammalia
Ordo : Rodentia
Family : Muridae
Super famili : Murinae
Genus : Mus
Subgenus : Mus
Species : Mus muculus
 25

Gambar 2. 4. Mencit Putih (Fauziyah, 2013)

Mencit (Mus musculus) memerlukan waktu

spermatogenesis selama 35,5 hari setelah mengalami 4 kali daur epitel

seminiferus. Setiap satu kali daur epitel seminiferus pada mencit

adalah 207 ± 6 jam (Sherwood, 2014)

2.5. Hubungan pemberian vitamin C dan E terhadap jumlah spermatogonia

pada mencit yang dipapar sinar X

Berdasarkan penelitian sebelumnya oleh Windy (2013), mencit yang

diberi paparan radiasi sinar X dengan dosis 5,3 mSv selama 8 minggu

mengalami degenerasi pada sel spermatogonia. Akibat terganggunya proses

pembentukan sel – sel kelamin didalam testis terutama pada spermatogonia

karena epitel germinal bersifat sangat sensitif terhadap radiasi (Susilawati,

2011). Pemberian radiasi sinar-x pada mencit menyebabkan munculnya reaksi

ROS (Reactive Oxygen Species) atau radikal bebas terutama melalui air dapat

mentransfer energi pada biomolekul target sehingga terjadi ionisasi yang

menyebabkan kerusakan lebih lanjut pada komponen molekul sel (Nurhayati,

2011). ROS merupakan suatu molekul derivat yang tidak berpasangan

 26

sehingga sangat reaktif dan tidak stabil. Salah satu cara menstabilkan

molekulnya dengan merebut elektron dari molekul lain. Akibatnya molekul

lain mengalami destruktif dan menimbulkan reaksi berantai. ROS dapat

merusak pembentuk sel seperti lipid, protein, polisakarida dan DNA (Khaira,

2010).

ROS akan mengakibatkan molekul yang bereaksi dengannya akan

berubah menjadi radikal bebas. Kerusakan yang terjadi pada sel tersebut

dapat memicu terjadinya nekrosis ataupun apoptosis pada sel. Oleh karena

itu, sel membutuhkan antioksidan yang berperan penting sebagai protektor

dari ROS dengan cara melindungi organisme dari kerusakan oksidatif dan

stress oksidatif menggunakan 2 mekanisme yaitu strategi enzimatik dan non

enzimatik. Vitamin C dan E termasuk antioksidan non enzimatik. Vitamin C

Berfungsi sebagai pengambil ROS yang bertujuan untuk melawan efek

radikal bebas dari kerusakan DNA yang diinduksi atau ROS yang berlebihan

dengan cara masuk dalam mitokondria melalui transporter glukosa

difasilitasi (glut-1) dan melindungi dari cedera oksidatif (Putri, 2015).

Vitamin E berfungsi sebagai antioksidan yang melindungi kerusakan

membran sel dari radikal bebas dengan cara menekan peroksidasi lipid

(Yulianto, 2013).

Pemapaparan sinar X mampu menghasilkan reaksi ROS (Reactive

Oxygen Species) atau radikal bebas yang dapat merusak sel-sel gonad normal

di testis. Pemberian kombinasi vitamin C dan vitamin E dapat memberikan

efek yang optimal dalam melawan radikal bebas (Kalsumet al., 2013).
 27

Pemberian kombinasi vitamin C dan E efektif menghambat aktivitas radikal

bebas. Pada awal reaksi, radikal bebas akan di tangkap dan di netralisir oleh

vitamin E kemudian berubah menjadi vitamin E radikal. Semantara itu,

vitamin C akan mengikat vitamin E radikal dan berubah menjadi vitamin E

bebas sehingga dapat berfungsi kembali menjadi antioksidan (Pramesti et al.,

2016).
 28

2.6. Kerangka Teori

Radiasi sinar-X Antioksidan

- Mencit jantan galur
Balb/C
- Umur 3 bulan Mencit Vitamin C dan E
- Berat badan ± 20-30 g
- Sehat
Pembentukan ROS

Stress oksidatif

Akumulasi ROS
Kadar ROS ↓

Kerusakan membrane dan

kerusakan DNA

Kerusakan sel
spermatogonia (degenerasi,
nekrosis, apoptosis)

Jumlah sel spermatogonia

Spermatogenesis
 29

2.7. Kerangka Konsep

Paparan Radiasi Sinar X

Vitamin C dan Vitamin E Jumlah Spermatogonia

2.8. Hipotesis

Terdapat pengaruh pemberian vitamin C dan vitamin E terhadap

jumlah spermatogonia yang dipapar radiasi sinar X.

 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian

Pada penelitian ini dilakukan menggunakan jenis penelitian

eksperimental dengan rancangan penelitian Post Test Only Randomized

Control Group Design.

3.2. Variabel dan Definisi Operasional

3.2.1. Variabel Penelitian

3.2.1.1. Variabel Bebas

Pemberian vitamin C, vitamin E dan kombinasi vitamin C

dan E

3.2.1.2. Variabel Tergantung

Jumlah sel spermatogonia

3.2.1.3. Variabel Prakondisi

Paparan radiasi sinar X

3.2.2. Definisi Operasional

3.2.2.1. Vitamin C

Perlakukan yang diberikan pada mencit berupa

vitamin C dengan berpedoman pada dosis yang dikonsumsi

manusia yaitu 100 mg/hari (Hardman and Limbird, 2012),

kemudian dikonversi untuk mendapatkan dosis yang

diberikan pada mencit. Dosis pada manusia dengan berat

30
 31

badan 70 kg dikonversikan menjadi dosis pada mencit

dengan berat badan 20-30 g didapatkan 0,0026 kemudian

dengan mengkalikan faktor konversi dengan dosis vitamin C

untuk manusia yaitu 0,0026 × 100 mg/hari, sehingga

didapatkan dosis untuk mencit adalah 0,26 mg/hari. Vitamin

C diberikan 30 menit sebelum paparan sinar X.

Skala : nominal

3.2.2.2. Vitamin E

Perlakukan yang diberikan pada mencit berupa

vitamin E dengan berpedoman pada dosis yang dikonsumsi

manusia yaitu 80 mg/hari (Hardman and Limbird, 2012),

kemudian dikonversi untuk mendapatkan dosis yang

diberikan pada mencit. Dosis pada manusia dengan berat

badan 70 kg dikonversikan menjadi dosis pada mencit

dengan berat badan 20-30 g didapatkan 0,0026 kemudian

dengan mengkalikan faktor konversi dengan dosis vitamin C

untuk manusia yaitu 0,0026 × 80 mg/hari, sehingga

didapatkan dosis untuk mencit adalah 0,208 mg/hari. Vitamin

C diberikan 30 menit sebelum paparan sinar X.

Skala : nominal

3.2.2.3. Kombinasi Vitamin C dan E

Vitamin C dan E adalah kombinasi vitamin C dan E

yang akan diberikan kepada mencit yang terpapar radiasi

 32

sinar-X dengan dosis dari vitamin C yaitu 0,26 mg/hari dan

30 menit diberikan vitamin E yaitu 0,208 mg/hari yang

digunakan menggunakan sonde oral.

Skala : nominal

3.2.2.4. Dosis Radiasi Sinar X

Dosis radiasi sinar X adalah dosis 25 mGy yang

diberikan kepada mencit ketika dipapar radiasi sinar X

selama 4 hari dengan tegangan 220 V dan arus 63 mA

selama 5 detik.

Skala : nominal

Terdapat 4 kelompok mencit yang diberi paparan

radiasi sinar-X yaitu :

i Kelompok kontrol negatif yaitu mencit yang diberikan

paparan radiasi sinar X 25 mGy/hari selama 4 hari

tanpa pemberian vitamin

ii Kelompok perlakuan 1 yaitu mencit yang diberikan

vitamin C 0,26 mg/hari 30 menit setiap sebelum

dipapar radiasi sinar X 25 mGy/hari selama 4 hari.

iii Kelompok perlakuan 2 yaitu mencit yang diberikan

vitamin E 0,208 mg/hari 30 menit setiap sebelum

dipapar radiasi sinar X 25 mGy/hari selama 4 hari.

iv Kelompok perlakuan 3 yaitu mencit yang diberikan

kombinasi vitamin C 0,26 mg/hari kemudian 30 menit

 33

kemudian diberikan vitamin E 0,208 mg/hari setiap

sebelum pemaparan radiasi sinar X 25 mGy/hari selama

4 hari.

3.2.2.5. Jumlah Sel Spermatogonia

Jumlah sel spermatogonia adalah jumlah dari hasil

penghitungan sel spermatogonia yang tidak mengalami

kerusakan sel yang dilakukan dengan pengecatan

hematoksilin eosin dan pengamatan menggunakan mikroskop

dengan perbesaran 400x pada 5 lapang pandang. Sel

spermatogonia normal adalah sel spermatogonia yang tidak

mengalami kerusakan akibat dari paparan sinar X karena

adanya vitamin C dan E sebagai antioksidan.

Skala : rasio

3.3. Populasi dan Sampel

3.3.1. Populasi Penelitian

Populasi pada penelitian adalah mencit galur Balb/C jenis

kelamin jantan dengan usia 3 bulan yang dipelihara di Laboratorium

Biologi Universitas Negeri Semarang (UNNES).

3.3.2. Sampel Penelitian

3.3.2.1. Jumlah Sampel

Jumlah sampel berdasarkan ketentuan WHO (World

Health Organization) pada penelitian eksperimental dengan

hewan coba adalah 5 ekor mencit jantan (Mus Musculus)

 34

tiap kelompok dan ditambah 2 ekor sebagai cadangan,

sehingga total jumlah sampel yang digunakan pada

penelitian ini adalah 35 ekor mencit yang akan dibagi

menjadi 5 kelompok dengan 3 kelompok perlakuan, 1

kelompok kontrol positif dan 1 kelompok kontrol negatif.

3.3.2.2. Cara Pengambilan Sampel

Sampel penelitian diambil secara simpel random

sampling dari populasi mencit (Mus musculus) dengan

kriteria sebagai berikut :

Kriteria inklusi :

- Mencit jantan galur Balb/C

- Berumur 3 bulan

- Berat badan mencit ± 20-30 g

- Sehat : aktif begerak, makan dan minum normal

Kriteria eksklusi :

- Kelainan genetik
Kriteria drop out adalah mencit yang sakit dan mati selama

proses penelitian berlangsung.

3.4. Alat dan Bahan Penelitian

3.4.1. Alat Penelitian

Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah :

1. Kandang mencit beserta tempat pakan dan minumnya

2. Kandang perlakuan

3. Perangkat alat bedah untuk mengambil testis

 35

4. Kaca objek

5. Deck glass

6. Pipet

7. Cawan petri

8. Mikroskop cahaya dengan lensa okuler perbesaran 10x dan lensa

objektif perbesaran 400x

9. Sonde oral

10. Timbangan untuk menimbang berat badan mencit

11. Sinar-X rontgen Mobile Diagnosis type SF100BY yang terdiri

dari : tabung pesawat, control panel dan remote control

12. Apron sebagai proteksi radiasi

3.4.2. Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah :

1. Alkohol 70%

2. Alkohol 80%

3. Xylol 1

4. Xylol 2

5. Xylol 3

6. Aquadest

7. Hematoksilin

8. Vitamin C

9. Vitamin E

10. Eosin
 36

11. Blue buffer

12. Mounting media

13. Buffered Neutral Formalin (BNF) 10%

3.5. Cara Penelitian

3.5.1. Persiapan Penelitian

1. Persiapan hewan coba mencit (Mus musculus) sebanyak 35 ekor

yang sesuai dengan kriteria inklusi.

2. Mencit diambil secara random dari populasi mencit (Mus

musculus).

3. Persiapan kandang tikus dengan pakan dan minumnya.

4. Memasukan mencit ke kandang dan diberi nomor untuk mengundi

pembagian kelompoknya. Nomor 1 (kelompok kontrol positif),

nomor 2 (kelompok kontrol negatif ), nomor 3 (kelompok

perlakuan pemberian vitamin C), nomor 4 (kelompok perlakuan

dengan pemberian vitamin E), nomor 5 (kelompok perlakuan

pemberian kombinasi vitamin C dan E).

5. Persiapan alat dan bahan penelitian.

3.5.2. Perlakuan

1. Vitamin C 0,26 mg/hari dilarutkan dalam 0,2 ml aquades dan

diberikan pada kelompok mencit 3 dengan menggunakan sonde

oral setiap sebelum dipapar radiasi sinar X 25 mGy/hari selama 4

hari. Pemberian vitamin C dilakukan pada 30 menit sebelum

paparan radiasi sinar X.

 37

2. Vitamin E 0,208 mg/hari dilarutkan dalam 0,2 ml aquades

diberikan pada kelompok mencit 4 dengan mengunakan sonde oral

setiap sebelum dipapar radiasi sinar X 25 mGy/hari selama 4 hari.

Pemberian vitamin E diberikan pada 30 menit sebelum paparan

radiasi sinar X.

3. Kombinasi vitamin C dan E diberikan pada kelompok mencit 5

setiap sebelum dipapar radiasi sinar X selama 4 hari. Pemberian

pertama menggunakan sonde oral adalah vitamin C 0,26 mg/hari

yang dilarutkan dalam aquades 0,2 ml dan 30 menit diberikan

vitamin E 0,208 mg/hari yang dilarutkan 0,2 ml aquades.

3.5.3. Pemberian Radiasi Sinar X

Pemberian radiasi pada mencit Pesawat Sinar X tipe SF100BY

diuraikan sebagai berikut :

1. Pemaparan radiasi sinar X roentgen diberikan kepada semua

kelompok.

2. Menekan tombol ON pada kontrol panel.

3. Mengatur line voltage sampai jarum menunjukkan pada posisi garis

merah (220 V).

4. Mengatur arus sebesar 63 mA.

5. Mengatur lama pemaparan dengan memutar slektor sec sebesar 5

second.

6. Mengatur tegangan kV sampai jarum menunjukkan angka 70.

7. Mengatur jarak mencit dari tabung sinar X sejauh 40 cm.

 38

8. Mengatur lampu kolimator sehingga dapat mengenai seluruh tubuh

mencit.

9. Kemudian melakukan pemaparan dengan mengaktifkan tombol ON

pada remote kontrol sampai indicator pada pesawat sinar X

menyala.

10.Setelah pemberian dosis radiasi sinar X pada mencit selama 4 hari,

maka mesin dapat dimatikan dengan menekan tombol off.

11.Langkah-langkah 1-9 dilakukan sampai hari ke-4 dengan dosis

radiasi 25 mGy/hari.

3.5.4. Pelaksanaan Penelitian

1. Membagi mencit secara acak menjadi 5 kelompok, setiap

kelompok terdiri dari 7 ekor mencit.

2. Menempatkan mencit dalam kandang sesuai kelompok.

3. Membagi kelompok mencit sesuai dengan rancangan penelitian.

- Kelompok kontrol positif (KP) yaitu mencit yang

tidak diberikan paparan radiasi sinar X dan

pemberian vitamin.

- Kelompok kontrol negatif (KN) yaitu mencit yang

diberikan paparan radiasi sinar X 25 mGy/hari

selama 4 hari tanpa pemberian vitamin.

- Kelompok perlakuan (KP 1) yaitu mencit yang

diberikan vitamin C 0,26 mg/hari setiap sebelum

dipapar radiasi sinar X 25 mGy/hari selama 4 hari.

 39

- Kelompok perlakuan (KP 2) yaitu mencit yang

diberikan vitamin E 0,208 mg/hari setiap sebelum

dipapar radiasi sinar X 25 mGy/hari selama 4 hari.

- Kelompok perlakuan (KP 3) yaitu mencit yang

diberikan kombinasi vitamin C 0,26 mg/hari dan

vitamin E 0,208 mg/hari setiap sebelum pemaparan

radiasi sinar-X 25 mGy/hari selama 4 hari.

4. Selanjutnya sampai hari ke-21 mencit dirawat dan diberi pakan

standar. Pada hari ke-22 mencit diterminasi dengan

menggunakan metode dislocation cervicalis.

3.5.5. Cara Pengambilan Sampel Testis

1. Mencit di terminasi dengan cara dislocation cervicali.

2. Dilakukan dengan sayatan pada kulit abdomen dan fascia,

kemudian rongga abdomen dibuka sampai batas bawah diafragma.

3. Organ testis di ambil kemudian di fiksasi dalam larutan Buffered

Neutral Formalin (BNF) 10% dan disimpan dalam pot plastik.

3.5.6. Cara Pembuatan Preparat

1. Letakkan jaringan testis ke objek glass.

2. Objek glass yang tertempel pita jaringan kering ke dalam xylol 1,

xylol 2 dan xylol 3 masing-masing selama 3 menit.

3. Keringkan preparat.

4. Kemudian masukkan ke dalam alkohol absolute, alkohol 80% dan

alkohol 70% masing-masing selama 3 menit.

 40

5. Bersihkan preparat dengan air mengalir selama 5 menit.

6. Rendam di larutan hematoksilin selama 2-3 menit.

7. Bersihkan dengan air mengalir selama 30 detik.

8. Kemudian masukkan ke Define Concentrate selama 30 detik.

9. Bersihkan sisa Define Concentrate dengan air mengalir selama 30

detik.

10. Masukkan ke dalam larutan Eosin selama 1 menit.

11. Masukkan ke dalam alkohol 70%, alkohol 80% dan alkohol

absolute masing-masing selama 2 menit.

12. Bersihkan noda preparat dengan tisu kemudian di keringkan

13. Masukkan ke dalam xylol 1, xylol 2 dan xylol 3 masing-masing

selama 2 menit.

14. Keringkan preparat, lalu tetesi mounting media 1 tetes.

15. Tutup preparat dengan dec glass

16. Preparat siap di amati.

3.5.7. Cara Pemeriksaan Jumlah Sel Spermatogonia

1. Siapkan mikroskop dalam keadaan ON.

2. Pasang preparat di mikroskop.

3. Atur lensa obyektif dengan perbesaran 400 kali

4. Amati perubahan sel yang mengalami degenerasi, apoptosis dan

nekrosis

5. Hitung jumlah sel spermatogonia yang tidak mengalami kerusakan

sebanyak 5 lapang pandang.

 41

3.5.8. Alur Kerja Penelitian

35 ekor mencit (Mus musculus) galur Balb C

Randomisasi

Kelompok 1 Kelompok 2 Kelompok 3 Kelompok 4 Kelompok 5

7 ekor 7 ekor 7 ekor 7 ekor 7 ekor

Pemberian Pemberian Pemberian

Pemaparan
Tidak vitamin C vitamin E kombinasi
radiasi sinar X
diberikan 0,26 mg/hari 0,208 mg/hari vitamin C
25 mGy/hari
paparan setiap sebelum setiap 0,26 mg/hari
selama 4 hari
radiasi sinar pemaparan sebelum dan vitamin E
tanpa
X dan radiasi sinar X pemaparan 0,208 mg/hari
pemberian
pemberian 25 mGy/hari radiasi sinar X setiap sebelum
vitamin
vitamin selama 4 hari 25 mGy/hari pemaparan

selama 4 hari radiasi sinar X

25 mGy/hari

Selanjutnya sampai hari ke 21 mencit dirawat dan diberi pakan

standart
Pada hari ke 22 mencit diterminasi

Pengambilan organ testis

Pemeriksaan jumlah sel spermatogonia

 42

3.6. Tempat dan Waktu

3.6.1. Tempat Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biologi Universitas

Negeri Semarang (UNNES), Laboratorium Histologi dan Patologi

Anatomi Universitas Islam Sultan Agung (UNISSULA).

3.6.2. Waktu Penelitian

Pemeliharaan hewan percobaan, penelitian, dan pemeriksaan

jumlah sel spermatogonia dilakukan pada tahun 2018.

3.7. Analisis Hasil

Setelah didapatkan data, yang perlu dilakukan selanjutnya adalah

menganalisis dan melihat data tersebut normal atau tidak dengan

menggunakan uji normalitas Shapiro wilk. Kemudian melakukan uji

homogenitas dengan menggunakan Levene test. Dilanjutkan dengan uji One

Way Anova dengan nilai signifikansi (p < 0,05). Jika data tidak normal dan

tidak homogen maka uji parametrik tidak dapat digunakan sehingga kita

harus mengujinya dengan uji non parametrik yaitu uji Kruskal Wallis. Setelah

dilakukan uji One Way Anova atau Kruskal Wallis dilanjutkan uji Post Hoc.

Uji statistic dilakukan dengan menggunakan komputer.

 BAB IV

HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Penelitian

Penelitian dilakukan untuk mengetahui pengaruh pemberian vitamin C

dan E terhadap jumlah sel spermatogonia pada mencit balb/c yang dipapar

sinar X. Penelitian dilakukan di Laboratorium Biologi Universitas Negeri

Semarang (UNNES) dan telah mendapat persetujuan dari Dewan Komisi

Bioetika FK Unissula Semarang. Subjek penelitian 35 ekor mencit jantan

Balb/c dengan berat badan 20-30 gr. Mencit diadaptasi selama 1 minggu

kemudian dibagi 5 (lima) kelompok secara acak, terdiri dari kelompok

kontrol positif (K(+)), kontrol negatif (K(-)), kelompok pemberian vitamin C

(P1), kelompok pemberian vitamin E (P2) dan kelompok pemberian

kombinasi vitamin C dan E (P3).

Kelompok K(+) tidak diberi perlakuan, sedangkan keempat kelompok

lainnya dipapar sinar X 25 mGy/hari selama 4 hari. Sebelum pemaparan sinar

X, pada kelompok P1 diberi vitamin C 0,26 mg/hari, pada kelompok P2

diberi vitamin E 0,208 mg/hari, dan pada kelompok P3 diberi kombinasi

vitamin C 0,26 mg/hari dan vitamin E 0,208 mg/hari. Mencit dirawat

sebagaimana biasa hingga hari ke-21, dan pada hari ke-22 dilakukan

terminasi untuk pengambilan organ testis dan pemeriksaan jumlah sel

spermatogonia.

43
 44

Selama pelaksanaan penelitian, terdapat 4 (empat) ekor mencit yang

yang drop out (masing-masing 2 ekor di kelompok P1 dan P3), total

diperoleh 31 preparat organ testis dengan pewarnaan HE untuk perhitungan

jumlah sel spermatogonia, namun jumlah preparat yang digunakan sebanyak

25 agar diperoleh jumlah data yang seragam untuk tiap kelompoknya. Hasil

penghitungan rerata jumlah sel spermatogonia ditunjukkan pada Gambar 4.1.

30
Rerata jumlah sel spermatogonia

25 24.24 23.32

19.36 19.60
20

15 13.28

10

0
K(+) K(-) P1 P2 P3
Kelompok

Gambar 4. 1. Grafik bar rerata jumlah sel spermatogonia

Gambar 4.1 memperlihatkan rerata jumlah sel spermatogonia tertinggi

di kelompok K(+), diikuti oleh rerata jumlah sel spermatogonia di kelompok

P3, P2, dan P1; sedangkan yang rerata jumlah sel spermatogonia terendah

ditunjukkan kelompok K(-).

Hasil analisis normalitas sebaran data dengan uji shapiro wilk

diperoleh jumlah sel spermatogonia yang terdistribusi normal di kelima

 45

kelompok (p>0,05). Hasil analisis Levene test diperoleh varian jumlah sel

spermatogonia yang homogen (p>0,05) (Tabel 4.1).

Tabel 4. 1. Hasil analisis normalitas sebaran data dan homogenias varian

Kelompok p-value
Shapiro Wilk Levene test
K(+) 0,490* 0,697**
K(-) 0,492*
P1 0,853*
P2 1,000*
P3 0,758*

Keterangan: * = p > 0,05 (distribusi data normal)

** = p > 0,05 (varian data homogen)

Jumlah sel spermatogonia selanjutnya dianalisis secara parametrik

dengan uji one way anova dan diperoleh nilai p sebesar 0,000 (p<0,05)

artinya terdapat perbedaan rerata jumlah sel spermatogonia yang bermakna

diantara kelima kelompok (Tabel 4.2).

Tabel 4. 2. Hasil uji one way anova rerata jumlah sel spermatogonia

Kelompok Mean ± SD p-value

K(+) 24,24 ± 0,33 0,000*
K(-) 13,28 ± 0,30
P1 19,36 ± 0,60
P2 19,60 ± 0,45
P3 23,32 ± 0,39

Keterangan: * = p < 0,05 (beda bermakna)

Rerata jumlah sel spermatogonia dianalisis lebih lanjut dengan uji

post hoc LSD untuk mengetahui kelompok mana saja yang menunjukkan

kebermaknaan perbedaan tersebut (Tabel 4.3). Perbedaan rerata sel

spermatogonia antar dua kelompok ditunjukkan oleh hampir semua pasangan

 46

kelompok (p<0,05); kecuali untuk perbandingan rerata sel spermatogonia

antara kelompok P1 dan P2 (p>0,05).

Berdasarkan hasil uji post hoc ini dapat diketahui bahwa pemberian

vitamin C dan E baik secara tunggal maupun kombinasi berpengaruh

terhadap peningkatan jumlah sel spermatogonia pada mencit balb/c yang

dipapar sinar X. Vitamin C memiliki efektifitas yang serupa dengan vitamin

E dalam meningkatkan jumlah sel spermatogonia pada mencit balb/c yang

dipapar sinar X. Pemberian kombinasi vitamin C dan E menunjukkan

efektifitas yang lebih baik daripada pemberian vitamin C atau vitamin E

secara tunggal. Namun pemberian kombinasi vitamin C dan E pada mencit

balb/c yang dipapar sinar X belum dapat menghasilkan jumlah sel

spermatogonia yang setara dengan jumlah sel spermatogonia mencit normal.

Tabel 4. 3. Perbedaan rerata jumlah sel spermatogonia antar kelompok.

Kelompok (I) Kelompok (J) Mean difference (I-J) p-value

K(+) K(-) 10,96 0,000*

P1 4,88 0,000*

P2 4,64 0,000*

P3 0,92 0,003*

K(-) P1 -6,08 0,000*

P2 -6,32 0,000*
 47

P3 -10,04 0,000*

P1 P2 -0,24 0,382

P3 -3,96 0,000*

P2 P3 -3,72 0,000*

Keterangan: * = perbedaan bermakna (p<0,05)

4.2. Pembahasan

Hipotesis pada penelitian ini diterima sehingga menunjukkan bahwa

terdapat pengaruh pemberian vitamin C dan E baik secara tunggal maupun

kombinasi terhadap peningkatan jumlah sel spermatogonia pada mencit

balb/c yang dipapar sinar X. Dari hasil penelitian didapatkan nilai p < 0,05

hampir pada semua kelompok, kecuali untuk perbandingan rerata sel

spermatogonia antara kelompok P1 dan P2 (p>0,05).

Rerata jumlah sel spermatogonia tertinggi pada kelompok K(+) yaitu

24,24 kemudian diikuti oleh rerata jumlah sel spermatogia pada kelompok P3,

P2 dan P1; sedangkan rerata jumlah spermatogonia terendah ditunjukkan

pada kelompok K(-). Hasil penelitian menunjukan bahwa rerata jumlah sel

spermatogonia terdapat perbedaan bermakna antara kelompok perlakuan

dengan kelompok kontrol. Hal ini disebabkan mitokondria pada sel

spermatogonia sangat rentan apabila terpapar radiasi sehingga menyebabkan

produksi ATP menjadi turun dan produksi ROS meningkat. ROS adalah

spesies kimia yang memiliki sebuah elektron tanpa pasangan pada orbit luar.
 48

Radikal bebas tersebut bersifat tidak stabil dan sangat reaktif. Salah satu cara

menstabilkan molekulnya dengan merebut elektron dari molekul lain.

Akibatnya molekul lain mengalami destruktif dan menimbulkan reaksi

berantai. ROS yang timbul dalam sel akan menyerang pembentuk sel seperti

asam nukleat, protein sel dan lipid (Nurhayati, 2011). Peningkatan kerusakan

seluler seperti ROS dapat menimbulkan kondisi yang dinamakan stress

oksidatif. Keadaan ini dapat diinduksi oleh berbagai faktor yaitu kurangnya

antioksidan dan kelebihan produksi radikal bebas. Pembentukan ROS

merupakan proses fisiologis tubuh, namun apabila terjadi peningkatan yang

berlebihan akan berpengaruh negatif pada tubuh. ROS akan mengakibatkan

molekul yang bereaksi dengannya akan berubah menjadi radikal bebas.

Kerusakan yang terjadi pada sel tersebut dapat memicu terjadinya nekrosis

ataupun apoptosis pada sel (Sudatri et al., 2015). Oleh karena itu, sel

membutuhkan antioksidan yang berperan penting sebagai protektor dari ROS

dengan cara melindungi organisme dari kerusakan oksidatif dan stress

oksidatif.

Antioksidan merupakan suatu substansi yang dapat menghentikan atau

menghambat kerusakan oksidatif pada suatu molekul dengan cara bereaksi

dengan radikal bebas reaktif membentuk yang relatif stabil, sehingga

kerusakan sel dapat dihentikan dengan memberikan elektron pada radikal

bebas (Pakaya, 2014). Antioksidan berfungsi untuk menetralisir radikal

bebas dengan cara melengkapi kekurangan elektron pada radikal bebas

sehingga tidak mempunyai kemampuan lagi untuk mengambil elektron dari

 49

sel atau DNA dan menghambat terjadinya reaksi berantai yang dihasilkan

dalam proses pembentukan radikal bebas. Antioksidan berperan penting

sebagai protektor dari ROS dengan cara melindungi organisme dari kerusakan

oksidatif dan stress oksidatif menggunakan 2 mekanisme yaitu strategi

enzimatik dan non enzimatik. Contoh antioksidan enzimatik antara lain

Superoxide dismutase (SOD), katalase, dan Glutathione peroxidase (GPX)

sedangkan yang termasuk antioksidan nonenzimatik seperti vitamin C,

vitamin E, piruvat, glutation, dan carnitin. Karotenoid, vitamin E, dan vitamin

C dapat melindungi sel dari radikal bebas dan peroksidasi lipid.

Vitamin C memiliki efektifitas yang serupa dengan vitamin E dalam

meningkatkan jumlah sel spermatogonia pada mencit balb/c yang dipapar

sinar X. Rerata jumlah sel spermatogonia yang diberikan perlakuan vitamin C

dan E (kelompok P1 dan P2) yaitu 19,36 dan 19,60. Vitamin C merupakan

antioksidan bekerja di ekstraseluler dan bersifat mudah larut dalam air.

Berfungsi sebagai pengambil ROS yang bertujuan untuk melawan efek

radikal bebas dari kerusakan DNA yang diinduksi atau ROS yang berlebihan

dengan cara masuk dalam mitokondria melalui transporter glukosa

difasilitasi (glut-1) dan melindungi dari cedera oksidatif (Putri, 2015).

Vitamin E merupakan antioksidan non enzimatik dan vitamin memiliki larut

lemak, campuran dari tokoferol dan tokotrienol. Berfungsi sebagai

antioksidan yang melindungi kerusakan membran sel dari radikal bebas

dengan cara menekan peroksidasi lipid. Peroksidase lipid dapat dihentikan

oleh vitamin E dengan cara menyumbangkan satu atom hidrogennya dari

 50

gugus OH kepada lipid peroksidasi yang bersifat radikal sehingga menjadi

vitamin E yang kurang reaktif dan tidak merusak (Yulianto, 2013).

Pemberian kombinasi vitamin C dan E menunjukkan efektifitas yang

lebih baik daripada pemberian vitamin C atau vitamin E secara tunggal.

Kombinasi vitamin E dan vitamin C yang memiliki sifat sinergis. Vitamin E

bekerja di membran sel dan vitamin C bekerja disitosol secara ekstrasel

sehingga dapat memberikan efek yang optimal dalam melawan radikal bebas

(Kalsum et al., 2013). Pemberian kombinasi vitamin C dan E efektif

menghambat aktivitas radikal bebas. Pada awal reaksi, radikal bebas akan di

tangkap dan di netralisir oleh vitamin E kemudian berubah menjadi vitamin E

radikal. Semantara itu, vitamin C akan mengikat vitamin E radikal dan

berubah menjadi vitamin E bebas sehingga dapat berfungsi kembali menjadi

antioksidan (Pramesti et al., 2016). Namun pemberian kombinasi vitamin C

dan E pada mencit balb/c yang dipapar sinar X belum dapat menghasilkan

jumlah sel spermatogonia yang setara dengan jumlah sel spermatogonia

mencit normal. Hal ini disebabkan paparan radiasi sinar X dapat merusak sel

spermatogonia. Oleh karena itu pemberian vitamin C dan E penting untuk

mencegah kerusakan sel spermatogonia yang terpapar radiasi sinar X

meskipun jumlah sel spermatogonia tidak setara dengan sel spermatogonia

normal.

Keterbatasan dari penelitian ini tidak dilakukan pemeriksaan pada

testis setelah paparan radiasi sinar X pada hari ke-4 dan pemberian dosis

vitamin yang tidak bervariasi. Konsekuensi dari penelitian yang tidak

 51

dilakukan belum diketahui histologi testis setelah dipapar radiasi sinar X

selama 4 hari dan dosis vitamin yang efektif.

 BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian terdapat pengaruh pemberian vitamin C,

vitamin E dan kombinasi keduanya terhadap jumlah sel spermatogonia yang

diberi paparan radiasi sinar X, meliputi:

5.1.1. Rerata penghitungan jumlah sel spermatogonia mencit jantan (Mus

musculus) galur balb – c pada kelompok perlakuan yang diberikan

vitamin C 0,26 mg/hari, vitamin E 0,208 mg/hari, kombinasi vitamin

C 0,26 mg/hari dan vitamin E 0,208 mg/hari adalah 19,36 ; 19,60 dan

23,32.

5.1.2. Terdapat perbedaan jumlah sel spermatogonia pada mencit jantan

(Mus musculus) dengan berbagai perlakuan vitamin C dan E yang

dipapar radiasi sinar X.

5.2. Saran
5.2.1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai efek pemberian

vitamin C, vitamin E dan kombinasi keduanya terhadap jumlah sel

spermatogonia yang diberi paparan radiasi sinar X dengan

pemeriksaan testis setelah dipapar radiasi sinar X.

5.2.2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai efek pemberian

vitamin C, vitamin E dan kombinasi keduanya terhadap jumlah sel

spermatogonia yang diberi paparan radiasi sinar X dengan dosis yang

bervariasi.

52
 DAFTAR PUSTAKA

Arizal, M. Z. Et Al. (2016) ‘Analisis Radiasi Hambur Di Luar Ruangan Klinik

Radiologi Medical Check Up ( Mcu )’, 19(1), Pp. 15–20.

Daenuri Anwar, E. (2011) ‘Sistem Prioteksi Radiasi : Analisis Terhadap Bidang

Radiologi Rumah Sakit’, Jurnal Phenomenon, 1(1), Pp. 47–63.

Destri, W. (2013) ‘Studi Histopatologi Respon Organ Testis Mencit (Mus

Musculus) Terhadap Potensi Radioprotektif Tanaman Rosela Dalam
Radiasi Ionisasi Radiodiagnostik’. Skripsi. FKH, Institut Pertanian
Bogor.

Fauziyah, A., And Dwijananti, P. (2013a) ‘Pengaruh Radiasi Sinar X Terhadap

Motilitas Sperma Pada Tikus Mencit ( Mus Muculus )’, Pp. 93–98.

Hardman, J. G. And Limbird, L. E. (Eds) (2012) Goodman & Gilman Dasar

Farmakologi Terapi. 10th Edn. Jakarta: Egc.

Hasmawati (2016) ‘Analisis Dosis Paparan Radiasi Sinar-X Diunit Radiologi Rs.
Bhayangkara Makassar Uin Alauddin Makassar’. Skripsi. FST, Fisika,
UIN Alauddin Makassar.

JPNN. (2011). Infertilitas Masalah Besar Bagi Pasutri Indonesia. Retrieved from
https://www.jpnn.com/news/infertilitas-masalah-besar-bagi-pasutri

Kalsum, U., Ilyas, S. And Hutahaean, D. S. (2013) ‘Pengaruh Pemberian Vitamin

C Dan E Terhadap Gambaran Histologis Testis Mencit (Mus Musculus
L.) Yang Dipajankan Monosodium Glutamat (Msg)’. Saintia Biologi.
Tersedia dari: Indonesian Publication Index.

Karmila, B. (2014) ‘Efek Radiasi Sinar-X Pada Anak-Anak’. Skripsi. FKG,

Universitas Hasanuddin Makassar.

Khaira, K. (2010) ‘Menangkal Radikal Bebas Dengan Anti-Oksidan’, Jurnal

Saintek, Pp. 183–187.

Kumar, V., Abbas, A. K. And Aster, J. C. (2015) Buku Ajar Patologi Robbins. 9th
Edn. Edited By I. M. Nasar And S. Cornain. Singapore: Elsevier
Saunders.

Murray, R. K. Et Al. (2014) Biokimia Harper. 29th Edn. Edited By R.

Soeharsono, F. Sandra, And H. Oktavius. Jakarta: Egc.

Nurhayati, S. (2011) ‘Superoksida Dismutase ( Sod ) : Apa Dan Bagaiamana

Peranannya Dalam Radioterapi’, Pp. 67–74.

53
 54

Pakaya, D. (2014) ‘Medika Tadulako , Jurnal Ilmiah Kedokteran , Vol . 1 No . 2’,

1(2), Pp. 36–44.

Pramesti, Citra Ayu; Arimbi; Srianto, P. (2016) ‘Pengaruh Pemberian Kombinasi

Vitamin E Dan Vitamin C Sebagai Tindakan Preventif Terhadap Jumlah
Sel Leydig Mencit (’, 9(3), Pp. 7–13.

Putri, A. P. (2015) ‘Efek Vitamin C Terhadap Kualitas Spermatozoa Yang Diberi

Paparan Asap Rokok’, J Majority, 4, Pp. 1–4.

Sharma, Rakesh; Agarwal, A. (2011) ‘Sperm Chromatin’, (January). Doi:

10.1007/978-1-4419-6857-9.

Sherwood, L. (2014a) Fisiologi Manusia Dari Sel Ke Sistem. Edisi 8. Jakarta:

EGC.

Sherwood, L. (2014b) Fisiologi Manusia Dari Sel Ke Sistem. Edisi 8. Jakarta:

EGC.

Sudatri, N. W. Et Al. (2015) ‘Kualitas Spermatozoa Mencit Yang Terpapar

Radiasi Sinar-X Secara Berulang’, 16(1), Pp. 56–61.

Supriyono, Puji., Candrawila, Wila S., Rahim, Agus H. Dan Murni, T. W. (2017)
‘Keamanan Peralatan Radiasi Pengion Dikaitkan Dengan Perlindungan
Hukum Bagi Tenaga Kesehatan Di Bidang Radiologi Diagnostik’,
1(363), Pp. 102–116.

Susanti, N. T. Et Al. (2016) ‘Pengaruh Pajanan Radiasi Sinar-X Dari Radiografi

Panoramik Terhadap Ph Saliva’, 4(2), Pp. 352–357.

Susilawati, T. (2011) Spermatologi. Malang : Universitas Brawijaya Press.

Yulianto, A. R. (2013) ‘Pengaruh Vitamin E Terhadap Kualitas Sperma Tikus

Putih Yang Dipapar Timbal’, Skripsi. FIMPA, Biologi, Universitas
Negeri Semarang.
 55

Lampiran 1. Hasil Data Jumlah Sel Spermatogonia

 56

Lampiran 2. Hasil Mean Jumlah Sel Spermatogonia

Report

Mean

Kelompok Spermatogonia

K(+) 24,24

K(-) 13,28

P1 19,36

P2 19,60

P3 23,32

Total 19,9600

Lampiran 3. Hasil Analisis Normalitas Sebaran Data dan Homogenitas Varian

Kelompok p-value
Shapiro Wilk Levene test
K(+) 0,490* 0,697**
K(-) 0,492*
P1 0,853*
P2 1,000*
P3 0,758*

Keterangan: * = p > 0,05 (distribusi data normal)

** = p > 0,05 (varian data homogen)

Lampiran 4. Hasil Uji One Way Anova Rerata Jumlah Sel Spermatogonia
Kelompok Mean ± SD p-value
K(+) 24,24 ± 0,33 0,000*
K(-) 13,28 ± 0,30
P1 19,36 ± 0,60
P2 19,60 ± 0,45
P3 23,32 ± 0,39
 57

Keterangan: * = p < 0,05 (beda bermakna)

Lampiran 5. Hasil Uji Post Hoc LSD Rerata Jumlah Sel Spermatogonia Antar
Kelompok

Kelompok (I) Kelompok (J) Mean difference (I-J) p-value

K(+) K(-) 10,96 0,000*

P1 4,88 0,000*

P2 4,64 0,000*

P3 0,92 0,003*

K(-) P1 -6,08 0,000*

P2 -6,32 0,000*

P3 -10,04 0,000*

P1 P2 -0,24 0,382

P3 -3,96 0,000*

P2 P3 -3,72 0,000*

Keterangan: * = perbedaan bermakna (p<0,05)

 58

Lampiran 6. Dokumentasi Penelitian

Gambar 1. Pengambilan Mencit dari Gambar 2. Dislokasi cervicalis

kandang

Gambar 3. Pembedahan Mencit Gambar 4. Testis Mencit

 59

Gambar 5. Pengawetan Testis Gambar 6. Hasil Preparat Kelompok

Dengan Formalin Kontrol Positif Pewarnaan
Hematoksilin Eosin dengan
Pembesaran 400X

Gambar 7. Hasil Preparat Kelompok Gambar 8. Hasil Preparat Kelompok

Kontrol Negatif Pewarnaan Perlakuan 1 Pewarnaan
Hematoksilin Eosin dengan Hematoksilin Eosin dengan
Pembesaran 400X Pembesaran 400X
 60

Gambar 9. Hasil Preparat Kelompok Gambar 10. Hasil Preparat

Perlakuan 2 Pewarnaan Kelompok Perlakuan 3 Pewarnaan
Hematoksilin Eosin dengan Hematoksilin Eosin dengan
Pembesaran 400X Pembesaran 400X