METODE ANALISIS KROMATOGRAFI

TIK metode analisis kromatografi

Setelah mengikuti kuliah krmoatografi mahasiswa dapat:
• Menjelaskan jenis dan asas pemisahan pada analisis kromatografi
• Menjelaskan penyebab terjadinya pelebaran zona
• Menjelaskan parameter efisieni pemisahan dan kinerja sistem kromatografi
• Memahami kegunaan SST
• Melaksanakan validasi pada metoda analisis kromatografi
• Memilih sistem kromatografi
• Memanfaatkan kromatografi utk uji kualitatif dan kuantitatif

TOPIK SUB BAHASAN

Pengantar kromatografi
1. Jenis kromatografi
2. Analit, fase diam dan fase gerak
3. Azas/prinsip dasar pemisahan pada kromatografi
4. Kromatogram dan kegunaannya
5. Parameter pengukur efisiensi pemisahan dan kinerja “kolom”
kromatograf
a) Waktu tambat (rt atau rf )
b) Factor kapasitas (k’)
c) Selektivitas ()
d) Bilangan lempeng teoritis (N)
e) Tebal lempeng teoritis (HETP)
f) Resolusi puncak (Rs)
g) Faktor asimetri (AF)
6. Uji kelayakan system (SST)

SELF TEST

1. Hitunglah waktu yang diperlukan oleh analit

untuk muncul pada kromatogram, jika diketahui:

V
V Harga K’ Volume void Laju alir eluen ml/min
r
0
10 1 1

6 1 2

2. SOP menyatakan bahwa kolom harus mempunyai efisiensi > 30.000 lempeng teoritis/m. Mana
diantara 3 kolom dengan panjang 15 cm di bawah ini, yang memenuhi spesifikasi di atas?
 Waktu tambat (mnt) W1/2 mnt
6,4 0,2
5,6 0,2
10,5 0,6

3. Pilih parameter mana yang dapat menurunkan, dan mana yang meningkatkan efisiensi kolom
dalam kromatografi cair

• Laju alir sangat rendah

• Ukuran partikel fase diam kecil
• Salut fase diam tipis
• Bentuk partikel fase diam tidak teratur
• Suhu tinggi
• Penyalutan fase diam yang teratur
• Ukuran artikel fase diam yang seragam
• Koefsien difusi dalam fase gerak rendah
• Koefsien difusi dalam fase diam tinggi

4. FI IV menyaratkan bahwa betametason 17-valerate haru terpisah dari betametason 21-valerate

dengan nilai Rs > 1,0. Kolom ODS manakah yang memenuhi persyaratan ini?

Column Waktu tambat Waktu tambat Lebar dasar puncak Lebar dasar puncak
ODS betamethasone 21- betamethasone 17- -metason 21- -metason 17-
valerate (min) valerate (min) valerate (min) valerate (min)

1 9.5 8.5 0,4 0,5

2 9.3 8.6 0,4 0,4

5. kalau waktu tambat A, B dan C berurutan adalah 26.3 mnt; 27.2 mnt , dan 27.7 mnt, lebar
ketiganya 0.56 mnt, maka berapa nilai Rs A vs B dan B vs C

6. Jika Void time pada soal no 5 adalah 0.5 mnt, berapakah selektivitas antara puncak B dan C?