KAPITA SELEKTA SAINS FARMASETIKA

PENETAPAN KADAR CLOPIDOGREL

KELOMPOK 1

PRITA DAHANA (202FF05101)

PINDI NATANIA T. (202FF05102)
BISMA NUGRAHA (202FF05103)
YUNITA LESTARI (202FF05104)
SONYA LORENSA T. (202FF05105)
MEGA AMELIA W. (202FF05106)
LAXMI LISTIANTI (202FF05107)
MUHAMMAD AKBAR A. (202FF05115)
PUPY DIANTINIA (202FF05116)
ISMATURRAHMI (202FF05117)
AGUS RAHMAT W. (202FF05118)
DESI PRATAMA SARI (202FF05108)
MIRA CHRISTINA (202FF05109)
DEVI DWI AMALIA (202FF05110)
NABILAH GUMAYAH P. (202FF05111)
OBEITRI MARDANI (202FF05112)
MELLA ROZZA (202FF05113)
FITRI APRILIA S. (202FF05114)
Latar Belakang
Clopidogrel merupakan antiplatelet golongan thieonopiridin, berkhasiat
dalam pencegahan dan pengobatan stroke, penyakit jantung koroner dan
angina pektoris. Obat ini bekerja dengan menghambat reseptor adenosin
diposfat (ADP) di membran trombosit sehingga mencegah terjadinya
agregasi trombosit yang merupakan penyebab dari penyumbatan
pembuluh darah arteri di otak dan jantung (Adiwijaya, 2011).

Pemeriksaan kadar zat aktif merupakan persyaratan yang wajib

dilaksanakan untuk menjamin kualitas obat, sehingga dapat
tercapainya efek terapeutik yang diharapkan (Wike, 2013). Penetuan
kadar dilakukan untuk melihat apakah kadar clopidogrel yang akan
dipakai apakah memenuhi persyaratan atau tidak .

Dalam United State Pharmacopeia (USP) edisi ke-34 tahun

2011, penetapan kadar clopidogrel dalam sediaan tablet dapat
dilakukan dengan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dan
spektrofotometri ultraviolet.
 Tujuan
 Menentukan atau mengukur atau menganalisa kadar
bahan aktif pada klopidogrel menggunakan metode
KCKT
Prinsip Kerja
Pemisahan berdasarkan fase diam berupa padatan dan fase
gerak berupa cairan. (FI Edisi 6 hal. 2034) berdasarkan
fase diam dan fase gerak yang digunakan pengujian tablet
klopidogrel termasuk kromatografi jenis partisi fase
terbalik.
Prinsip kerja HPLC adalah pemisahan komponen
analit berdasarkan kepolarannya, setiap campuran yang
keluar akan terdeteksi dengan detektor dan direkam dalam
bentuk kromatogram (kusuma,2016).
 JENIS-JENIS KCKT
Berdasarkan sifat fase diamnya :
1. Kromatografi Adsorpsi 2. Kromatografi Partisi
Adsorbennya berupa silica gel Pemisahan dengan
dan pemisahannya berlangsung mekanisme partisi terjadi
melalui berulangnya langkah apabila fasa diam yang
secara adsorpsi-desorpsi. berupa cairan.

Berdasarkan kepolaran fase diam dan

fase geraknya:

1. Fase Normal
Dimana fase diam yang digunakan
bersifat polar, dan fase geraknya
bersifat non polar/lipofil 2. Fase terbalik
Dimana fase diam non polar dan
fase geraknya bersifat polar/hidrofil
Metode kckt
Alat Dan Bahan

Alat Labu Ukur

Komponen Alat
KCKT Timbangan
Analitik

Pipet KCKT Mortir dan stemper

Bahan

Tablet Klopidogrel
Klopidogrel bisulfat BPFI
Kalium fosfat monobasa P
Metanol P
Dapar fosfat
Asetonitril
Aquadest (FI edisi VI))
UJI KESESUAIAN SISTEM
Tujuan :
• Uji keseuaian sistem harus dilakukan secara rutin karena untuk memastikan keefektifan sistem operasional akhir (Ditjen POM, 1995)
• Suatu sistem dikatakan sesuai jika memenuhi persyaratan persisi, resolusi (daya pisah), faktor ikutan, efisiensi kolom dan faktor kapasitas

Persyaratan Keterangan

Efisiensi Kolom (plate • N > 2000 N dipengaruhi oleh :

number/N) • Ukuran efisien kolom adalah jumlah lempeng (N) yang didasarkan pada • Lebar pita (W). Makin kecil W, N akan makin besar. N menjadi ukuran
konsep lempeng teoritis pada distilasi baik / tidaknya suatu kolom
• Ukuran butir
N = 16 () , • Distribusi ukuran butir
tR = waktu retensi solut, Wb = lebar dasar puncak • Sifat butir (porous penuh / pelikuler)

Resolusi (R) • R > 1.5 3 langkah untuk memperoleh Rs tinggi :

• Resolusi di definisikan sebagai perbedaan antara waktu retensi dua puncak
yang saling berdekatan
• Nilai Rs harus mendekati atau lebih dari 1,5 karena akan memberikan
pemisahan puncak yang baik (base line resolution)
Rs =
tR = waktu retensi (menit) dan W = lebar puncak
• Harga faktor kapasitas (k’) 1,5 dengan eluen sesuai
• Harga faktor selektifitas (α) dengan eluen lani, tetapi kekuatan elusi sama /
dengan eluen ketiga sebagai aditif (mengubah buffer, menambah garam,
pasangan ion)
• Harga N, dengan cara mengurangi laju alir eluen menggunakan kolom
yang lebih panjang, menggunakan butir kolom yang lebih kecil

Faktor Ikutan (TF) • TF < 2 Penyebab tailing factor :

• Jika puncak yang akan dikuantifikasi asimetri (tidak setangkup), maka
suatu perhitungan asimetris merupakan cara yang berguna untuk
mengontrol atau mengkarakterisasi sistem kromatografi
• Peningkatan puncak yang asimetri akan menyebabkan penurunan resolusi,
batas deteksi dan presisi
• TF = 1 menunjukan kromatogram bersifat simetris (selangkup)
• TF > 2 menunjukan kromatogram mengalami pengekoran (tailing).
Semakin besar harga TF maka kolom yang dipakai semakin kurang efisien
• Guard coloum yang sudah mulai rusak
• Fase gerak yang mulai rusak
• Partikel silica yang dipakai di dalam bahan pendukung bukanlah partikel
silica yang baik
• Adanya komponen lain yang keluar tepat setelah peak  gunakan 2 PG
Rumus : TF =
bc = selisih antara waktu retensi dan waktu yang menunjukan akhir puncak
ac = selisih antara waktu yang menunjukan akhir puncak dan awal puncak
 Persyaratan Keterangan
Analisis Data • Waktu retensi analit dikurangi dengan waktu retensi pelarut pengelusi • Waktu retensi yang dinyatakan dalam satuan (menit) memberikan arti
atau pelarut pengelusi campuran disebut sebagai waktu retensi terkoreksi yang sangat penting dalam analisis kualitatif dengan KCKT
yang dinyatakan sebagai R’
Rumus : tR’ = tR – tM

Faktor Kapasitas / Faktor • Rumus : k’ = • tR – to = waktu retensi

Retensi (k’) • To = waktu retensi gerak

Selektivitas (α) • Merupakan nilai retensi relatif tiap komponen oleh fase diam
• Rumus : α =

Sehingga α =

(Sumber : Nofita, dkk. 2018. Penetapan Kondisi Optimum Pengujian Kadar Parasetamol dan Kafein Dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Jurnal
Farmasi Malahayati Vol 1 No 2
Uji Kesesuaian Sistem

1
Larutan Kesesuaian Sistem
• Timbang saksama 100mg serbuk
klopidogrel bisulfate BPFI larutkan
dalam 500mL methanol P lalu
diencerkan dengan methanol p
dalam labu ukur 1000mL.

• Timbang sakasama 200mg Pipet 5mL ke labu

senyawa sejenis b klopidogrel BPFI,
ukur 200mL.
larutkan dalam 500mL methanol P
lalu diencerkan dengan methanol Encerkan dengan
p dalam labu ukur 1000mL fase gerak sampai
tanda batas
 2
Pipet 5mL ke labu ukur 200mL.
Larutan Baku Encerkan dengan fase gerak
• Timbang saksama 40 mg serbuk klopidogrel sampai tanda batas
bisulfate BPFI larutkan dalam 500mL
methanol P lalu diencerkan dengan methanol 1µg/mL
P dalam labu ukur 1000mL.

• Timbang sakasama 250mg senyawa sejenis A

klopidogrel BPFI, larutkan dalam 500mL Pipet 5mL ke labu ukur 200mL.
methanol P lalu diencerkan dengan methanol Encerkan dengan fase gerak
P dalam labu ukur 1000mL sampai tanda batas
6µg/mL

• Timbang sakasama 300mg senyawa sejenis C

klopidogrel BPFI, larutkan dalam 500mL
methanol P lalu diencerkan dengan methanol
P dalam labu ukur 1000mL
Pipet 5mL ke labu ukur 200mL.
Encerkan dengan fase gerak
sampai tanda batas

7,5µg/mL
12
 Pembuatan Larutan Uji Kesesuaian Sistem

Timbang dan serbukkan

tidak kurang dari 20
tablet

Timbang saksama sejumlah

tablet serbuk setara dengan
lebih kurang 75 mg klopidogrel

Masukan ke dalam labu ukur

200ml, tambahkan 5 mL metanol
P, encerkan dengan fase gerak
hingga tanda batas
Biarkan 10 menit, lalu kocok
porositas 0,45μm atau lebih kecil
Sistem Kromatografi
Gunakan filtrat
Detektor : 220 nm
Kolom : 4,6 mm x 15 cm yang
Saring sebagian larutan melalui berisi bahan pengisi L57
penyaring membrane dengan
Laju alir : kurang dari 1mL/menit

1 2
DAPAR FOSFAT
Dilarutkan 1,36 gram kalium
Fosfat monobasa P dalam
500 mL air lalu diencerkan
dengan air hingga volume
1000ml
Fase Diam
Fase diam umumnya silika yang
dimodifikasi atau butiran polimerik
(L57: ovomukoid yang diketahui
sebagai protein kiral yang terikat
secara kimia pada partikel silica,
diameter lebih kurang 5 pm dan
ukuran pori 120A)
PROSEDUR
PREPARASI SAMPEL
3
FASE GERAK LARUTAN BAKU
Dibuat campuran dapar Timbang saksama sejumlah
fosfat-asetonitril P dengan klopidogrel bisulfate BPFI,
perbandingan 75:25 (3:1), masukkan ke dalam labu.
saring dan awaudarakan Larutkan dan encerkan
dengan methanol P hingga
kadar ±1,0 mg/mL
Kolom Kromatografi
Bagian kolom termasuk baja tahan
karat, baja tahan karat berlapis Sistem Kromatografi:
Detektor 220 nm, Kolom 4,6mm x 15cm yang berisi bahan
dan kolom polimer diisi dengan
fase diam pengisi L57. Laju alir ± 1ml/menit
(Farmakope Indonesia VI, hal 900)
 Pembuatan Larutan Uji

Timbang dan serbukkan

tidak kurang dari 20
tablet

Timbang saksama sejumlah

tablet serbuk setara dengan
lebih kurang 75 mg klopidogrel

Masukan ke dalam labu ukur

100ml, tambahkan 50 ml Buang 5 ml filtrate pertama,
metanol P Gunakan filtrat

Sonikasi selama 5 menit dan

aduk selama 30 menit,
encerkan dengan metanol P
sampai tanda
Pipet 5 ml larutan ke dalam
Saring sebagian larutan melalui
labu ukur 50ml, encerkan
penyaring membrane dengan
dengan methanol P ad tanda
porositas 0,45μm atau lebih kecil
batas
 PROSEDUR KERJA KCKT
Setimbangkan kolom dan detector dengan fase gerak
dan laju alir tertentu sampai dicapai kondisi konstan

Disuntikkan secara terpisah melalui injector larutan

baku dan larutan uji (masing-masing 10 µl)
kedalam kromatogram

Direkam kromatogram dan ukur respon puncak

utama Ket:
C = Kadar Klopidogrel Bisulfat BPFI
321,82 = Bobot Molekul Klopidogrel
419,90 = Bobot Molekul Klopidogrel Bisulfat
Dihitung menggunakan rumus ru = Respon Puncak Larutan Uji
rs = Respon Puncak Larutan Baku

FI Edisi VI, 2020

PERHITUNGAN PK Clopidogrel
•Perhitungan
  jumlah mg klopidogrel dalam serbuk tablet, dengan
rumus:
100 C

Keterangan:
321,82 = bobot molekul klopidogrel
419,90 = bobot molekul klopidogrel bisulfat
C = Kadar Klopidogrel bisulfat BPFI (mg/mL) --- Larutan baku
Ru = respon puncak larutan uji
Rs = respon puncak larutan baku FI Ed VI, 2020
 
Contoh perhitungan:
Jumlah Clopidogrel bisulfat (mg) dalam serbuk tabletyang digunakan:
Diketahui
ru = 226513
rs = 226515
 
Penyelesaian:
100 C Penetapan Kadar Clopidogrel bisulfat:
= 109,31%
=100 x 0,1 x10
Memenuhi Syarat
= 10(0,766) (0,999) (10) (Clopidogrel bisulfat tidak kurang dari
= 76,52 mg 90% dan tidak lebih 110%)

FI Ed VI, 2020
 DAFTAR PUSTAKA
DEPKES RI. 2020. Farmakope Indonesia Edisi VI.Jakarta: Departemen Kesehatan
Republik Indonesia
Rubiyanto, D. 2017.”Metode Kromatografi”.Yogyakarta:Dee Publish.
Kusuma, W., S., A. Ismanto H., M. 2016.” Penggunaan Instrumen High-performance Liquid
Chromatography Sebagai Metode Penentuan Kadar Kapsaisin Pada Bumbu
Masak Kemasan “Bumbu Marinade Ayam Special” Merek Sasa. Farmaka. Vol. 14
No. 2. Hal. 41-46
Nofita, dkk. 2018. Penetapan Kondisi Optimum Pengujian Kadar Parasetamol dan Kafein
Dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Jurnal Farmasi Malahayati Vol 1 No 2
Lampiran
THANK
YOU
CONT
ENT