Agar Coklat

Definisi Agar Coklat

Agar coklat pada dasarnya sama dengan agar darah kecuali selama pembuatan, sel darah
merah dilisis ketika di tambahkan pada bahan dasar agar cair. Akibatnya, lisis sel
mengeluarkan nutrisi intraseluler seperti hemoglobin, hemin (faktor “X”), dan koenzim
nikotinamida adenin dinukleotida (faktor NAD atau “V”) ke dalam agar yang dimanfaatkan
oleh bakteri fastidious. Sel darah merah yang telah lsisi memberikan warna kecoklatan
pada medium agar, itulah mengapa dinamakan agar coklat. Bakteri patogen yang paling
umum membutuhkan media yang diperkaya untuk pertumbuhannya adalah Neisseria
gonorrhoeae dan Haemophilus spesies.

Komposisi Agar Coklat

Bahan Gms / Liter
Kasein / Pencernaan Jaringan Hewan 15.0g

Tepung jagung 1.0g

Natrium Klorida 5.0g

Dipotassium Phosphate 4.0g

Monopotassium Phosphate 1.0g

Larutan hemoglobin 2%

Pengayakan koenzim 10.0ml

Agar 10.0g
 PH akhir 7,2 ± 0,2 ( Pada 25º C )
Persiapan Agar Coklat
Persiapan larutan haemoglobin
Tambahkan hemoglobin ke air suling sampai mencapai volumenya 500 ml. Aduk rata dan
autoklaf selama 15 menit pada tekanan 15 lbs pada 21º C. Dinginkan pada suhu 45º C -50 °
C.
Persiapan media
Tambahkan komponen kecuali larutan hemoglobin ke air suling sampai volumenya
menjadi
500 ml. Aduk rata. Panaskan perlahan sampai mendidih. Autoklaf selama 15 menit pada
tekanan 15 lbs pada 21° C. Dinginkan pada suhu 45° C -50° C. Tambahkan 500ml larutan
hemoglobin steril dan aduk rata. Tuang ke dalam cawan petri steril atau distribusikan ke
dalam tabung steril.

Prinsip Agar Coklat

Basis Agar coklat, dengan tambahan suplemen, memberikan pertumbuhan yang sangat baik
dari organisme yang rewel tanpa tumbuh berlebihan oleh organisme yang mencemari.
Kasein dan jaringan hewan mencerna yang memberi organisme nutrisi nitrogen, asam
amino, dan elemen lain yang penting untuk pertumbuhan organisme. Karena Neisseria
spesies sangat sensitif terhadap zat beracun seperti asam lemak, oleh karena itu
penambahan tepung jagung membantu menetralkan kemungkinan metabolit beracun,
sementara kalium fosfat membantu menjaga pH yang seragam selama pertumbuhan.
Nartrium klorida menjaga keseimbangan osmotik sehingga menjaga integritas sel.
Chocolate agar juga dianggap sebagai varian dari plat agar darah, yang mengandung sel
darah merah yang telah dilisis dengan pemanasan perlahan hingga 80° C. Panas
menonaktifkan enzim yang dapat menurunkan NAD. Suplemen tambahan menyediakan
faktor X yang diperlukan (dari Hemoglobin) dan faktor V (dari Suplemen Pertumbuhan)
yang dibutuhkan oleh organisme yang rewel. Beberapa modifikasi juga dapat dilakukan
untuk pertumbuhan organisme tertentu. Thayer-Martin Media adalah agar coklat yang
dilengkapi dengan vankomisin, nistatin, dan colistin untuk menghambat flora normal,
termasuk Neisseria nonpatogenik untuk isolasi selektif N.gonorrhoeae dan N.
meningitides. Agar Coklat yang dilengkapi dengan bacitracin adalah media selektif yang
digunakan untuk meningkatkan isolasi primer H. influenza dari spesimen yang
mengandung flora campuran bakteri dan / atau jamur. Agar coklat yang dilengkapi dengan
basis GC dan suplemen pertumbuhan adalah modifikasi lain yang mendukung persyaratan
pertumbuhan khusus (hemin dan NAD) yang diperlukan untuk isolasi organisme yang
rewel, seperti H.influenzae ketika diinkubasi pada suhu 35-37° C dalam atmosfer 5% CO 2.
Interpretasi Hasil dari Agar Coklat
 Neisseria gonorrhoeae menghasilkan koloni keci berwarna abu-abu hingga putih,
berlendir, konsistensi halus, dan tepi yang tegas.
 Neisseria meningitidis menghasilkan koloni abu-abu kebiruan yang lebih besar,
mukoid, bulat, cembung, halus, lembab, berkilau dengan tepi yang jelas.
 Haemophilis influenzae menghasilkan koloni kecil, tidak berwarna, lembab dengan
bau mani yang khas.
Kegunaan Agar Coklat
 Digunakan dalam isolasi dan budidaya mikroorganisme yang rewel, terutama
spesies Haemophilus dan Neisseria.
 Ini digunakan untuk isolasi Neisseria gonorrhaeae dari kasus kronis dan akut
infeksi gonokokus.
Batasan Agar Coklat
 Direkomendasika bahwa uji biokimia dan / atau serologis tambahan harus
dilakukan pada koloni yang diisolasi dari kultur murni untuk melengkapi
identifikasi.
 Agar coklat adalah media yang diperkaya, sehingga organisme non-patogen dapat
menumbuhkan bakteri patogen secara berlebihan. Jika isolasi N.gonorrhoeae
diinginkan, media selektif seperti Thayer Martin Agar, Modifikasi harus digunakan
secara parallel dengan rumus non-selektif ini.
 Hemoglobin yang diendapkan dapat muncul sebagai bintik hitam pada atau didalam
media dan tidak mempengaruhi kinerja media.
 Ada atau tidak adanya N.gonorrhoeae dalam suatu spesimen tidak
mengesampingkan kemungkinan adanya organisme patogen lain.
Referensi
1. Dalynn Biologicals
2. Layanan Laboratorium Timur Laut
3. Himedia
4. Diagnostik Hardy
5. Ronal M.Atlas dan James W.Snyder. Buku pegangan media mikrobiologi klinis dan
kesehatan masyarakat. CRC Press. 2014 oleh Taylor & Franciis Group, LLC.