HASIL PENELITIAN

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL

DAUN PALA (Myristica fragrans Houtt) DENGAN
METODE KLT-BIOAUTOGRAFI

OLEH:

MAGHFIRAH SEPRILIA ZELIN

F201601045

Hasil penelitian ini di ajukan sebagai salah satu syarat

untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi

PROGRAM STUDI S1-FARMASI

UNIVERSITAS MANDALA WALUYA
KENDARI
2021
 LEMBAR PERSETUJUAN HASIL

Hasil Penelitian ini telah di setujui dan diperbaiki dihadapan tim Pembimbing untuk

melaksanakan Seminar Hasil Penelitian Program Studi Farmasi Universitas Mandala

Waluya Kendari dan selanjutnya melaksanakan Skripsi.

Kendari, September 2021

Tim Pembimbing

Pembimbing I Pembimbing II

Apt. Fatma Sari Siharis., S. Farm., M.Si Apt.Bai Athur Ridwan.,S.Farm.,M.Pharm.Sci

NIDN: 03-1204-8703 NIDN: 09-1705-9301

Mengetahui,
Ketua Program Studi Farmasi

Apt. Wa Ode Yuliastri, S. Farm., M. Si.

NIDN: 09 2007 820

i
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Maha Esa yang telah memberikan

rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan hasil penelitian yang

berjudul Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Etanol Daun Pala (Myristica Fragrans

Houtt) Dengan Metode Klt-Bioautografi guna memenuhi salah satu persyaratan untuk

menyelesaikan pendidikan pada program studi Farmasi di Universitas Mandala Waluya.

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penyusunan hasil penelitian ini masih jauh

dari kesempurnaan oleh karena itu saran-saran dari semua pihak yang sifatnya

membangun untuk meningkatkan mutu dari penulisan proposal penelitian ini sangat

penulis harapankan.

Pada kesempatan ini penulis tidak lupa menghaturkan rasa terima kasih yang

sebesar-besarnya kepada Kedua Orang tua Tercinta Bapak Zaenal S.Ag dan ibu Guslina

yang telah memberikan dukungan, kasih sayang serta motivasi, Kepada ibu Apt.

Fatmasari Siharis., S. Farm., M.Si., selaku pembimbing I dan kepada Bapak Apt. Bai

Athur Ridwan., S. Farm., M.Pharm. Sci., selaku pembimbing II atas semua waktu,

tenaga dan pikiran yang telah diberikan dalam membimbing dan mengarahkan penulis

dalam menyusun proposal pennelitian ini. Tak lupa pula Penulis haturkan rasa terima

kasih sebesar-besarnya kepada:

1. Ketua Yayasan Universitas Mandala Waluya

2. Ketua Universitas Mandala Waluya

3. Para Wakil Ketua (Akademik, Non akademik, Kemahasiswaan) Universitas

Mandala Waluya

4. Para Ketua Lembaga (LPPM, LPJM) Universitas Mandala Waluya

5. Ketua Program Studi Farmasi Universitas Mandala Waluya dan stafnya

ii
 6. Seluruh Dosen dan Staf/karyawan Universitas Mandala Waluya yang telah

banyak membantu Penulis semasa pendidikan

7. Seluruh Teman-teman khususnya Program Studi farmasi yang telah memberikan

bantuan dan motivasi kepada Penulis hingga selesainya proposal penelitian ini.

Demikian semoga hasil penelitian ini dapat bermanfaat bagi semua pihak dan

terutama kepada Penulis dalam menyelesaikan pendidikan di Universitas Mandala

Waluya, Amin.

Kendari, September 2021

Penulis

iii
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL..................................................................................................

HALAMAN PENGESAHAN...................................................................................i

KATA PENGANTAR.............................................................................................ii

DAFTAR ISI...........................................................................................................iv

ABSTRAK..............................................................................................................vi

ABSTRACT...........................................................................................................vii

BAB I PENDAHULUAN..........................................................................................

A. Latar Belakang...........................................................................................1

B. Rumusan Masalah......................................................................................3

C. Tujuan Penelitian.......................................................................................4

D. Manfaat Penelitian.....................................................................................4

E. Kebaruan penelitian...................................................................................5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA...............................................................................

A. Tinjauan teoritis variabel bebas.................................................................7

B. Tinjauan teoritis variabel terikat..............................................................10

C. Kajian empiris..........................................................................................19

BAB III KERANGKA KONSEP PENELITIAN.....................................................

A. Dasar pikir penelitian...............................................................................21

B. Bagan kerangka konsep penelitian...........................................................22

C. Variable penelitian...................................................................................22

D. Definisi operasional dan kriteria obyektif................................................22

E. Hipotesis penelitian..................................................................................24

BAB IV METODE PENELITIAN...........................................................................

iv
 A. Jenis dan desain penelitian.......................................................................25

B. Lokasi dan waktu penelitian....................................................................25

C. Alat dan bahan penelitian.........................................................................26

D. Populasi dan sampel.................................................................................26

E. Prosedur kerja penelitian .........................................................................27

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN.....................................................................

A. Hasil Penelitian........................................................................................31

B. Pembahasan..............................................................................................33

BAB V PENUTUP....................................................................................................

A. Kesimpulan..............................................................................................38

B. Saran ...................................................................................................38

DAFTAR PUSTAKA................................................................................................

LAMPIRAN...............................................................................................................

DAFTAR RIWAYAT HIDUP...................................................................................

v
 DAFTAR TABEL

Tabel 1. Penelitian lain yang terkait dari judul aktifitas Daun pala

Tabel 2. Hasil uji Skrining aktivitas antibakteri ekstrak etanol 96% daun pala (Myristica

fragrans Houtt. ) pada konsentrasi 1 mg/ml

Tabel 3. Hasil pemisahan dan pengujian senyawa secara KLT menggunakan campuran

eluen n-heksan: etil (7:3)

Tabel 4. Hasil uji Identifikasi Komponen Kimia Aktif dari Kromatogram ekstrak etanol

Daun Pala (Myristica fragrans Houtt.)

vi
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Daun Pala

Gambar 2. Foto tumbuhan pala (Myristica fragrans Houtt.)

Gambar 3. Escherichia coli

Gambar 4. Staphylococcus aureus

Gambar 5. Skema kerja uji aktivitas antimikroba ekstrak etanol daun pala (Myristica

fragrans Houtt)

Gambar 6. Skema kerja uji skrining aktivitas antibakteri

Gambar 7. Skema kerja pengujian secara KLT-Bioautografi

Gambar 8. Skema kerja Identifikasi Komponen Kimia

Gambar 9. hasil pengujian skrining ekstrak etanol daun pala (Myristica fragrans Houtt.)

pada bakteri uji

Gambar 10. Foto profil kromatogram ekstrak etanol daun pala (Myristica

fragrans Houtt.)

Gambar 11. Foto hasil pengujian KLT-Bioutografi ekstrak etanol daun Pala (Myristica

fragrans Houtt.) terhadap bakteri Eschercia coli

Gambar 12. Foto hasil pengujian KLT-Bioutografi ekstrak etanol daun Pala (Myristica

fragrans Houtt.) terhadap bakteri Staphylococcus aureus

Gambar 13. Foto hasil identifikasi komponen kimia dari kromatogram ekstrak etanol daun

pala (Myristica fragrans Houtt.) menggunakan penampak bercak H2SO4 10%

vii
 DAFTAR ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN

PABA : Asam paraaminobenzoat

DP : Daun pala
O
C : Derajat Celcius

DMSO : Dimetil Sulfoksida

EDP : Ekstrak Daun Pala

Kg : Kilogram

KLTB : Kromatografi lapis Tipis Bioautografi

KLT : Kromatografi lapis Tipis

MNA : Media Nutrient Agar

Mg : Miligram

Ml : Mililiter

PKLT : Pelat Kromatografi Lapis Tipis

PAB : Pengujian Antibakteri

PDH : Pengujian Daya Hambat

Rf : Retention factor

SBU : Suspensi bakteri uji

ZH : Zona Hambat

viii
 BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Infeksi ditimbulkan oleh banyak mikroorganisme, misalnya bakteri, virus, fungi &

protozoa (Mulyati, 2009). Berbagai obat anti infeksi telah dipilih, seperti antibiotik.

Munculnya resistensi obat telah menyebabkan beberapa jenis antibiotik tidak lagi digunakan

untuk pengobatan. Di sisi lain, tingginya harga antibiotik membuat masyarakat yang lemah

secara ekonomi tidak dapat membelinya. Oleh karena itu, masyarakat Indonesia yang

menggunakan berbagai tanaman di daerah tersebut dapat memilih untuk mengobati penyakit

menular. (Wibowo et al., 2008).

Bakteri bersifat komensal yang hidup di kulit manusia, seperti bakteri Staphylococcus

aureus bisa menjadi patogen pada keadaan tertentu yang dapat menginfeksi luka terbuka

terutama yang tidak dirawat dengan baik (Brooks GF, dkk., 2012). Bakteri

Staphylococcus dapat menyebabkan infeksi kulit impetigo, folukulitis, erisipelas, dan

selulitis (Soedarto, 2015).

Sejak lama, pengobatan tradisional telah dikenal luas di dunia, termasuk

Indonesia, yang memiliki banyak jenis tumbuhan. Masyarakat Indonesia sudah lama

menggunakan obat berupa tumbuh-tumbuhan dan bahan-bahan alami. Obat tradisional

memiliki beberapa keunggulan dibandingkan obat sintetik dan sangat diminati dalam

menjaga kesehatan dan mencegah penyakit (Hidayat S, 2005). Pengobatan tradisional

menggunakan banyak ramuan dari tumbuhan, kemudian diracik secara tradisional,

kemudian diperoleh kegunaan dan kegunaannya berdasarkan pengalaman.

Indonesia dihuni oleh berbagai suku dengan pengetahuan pengobatan tradisional

yang berbeda-beda (Muktiningsih SR, dkk., 2010). Orang-orang yang diwariskan secara

turun-temurun di Indonesia menggunakan obat tradisional sebagai warisan leluhur. Pala

1
(Myristica fragrans Houtt.) digunakan oleh masyarakat Sulawesi Utara untuk mengobati

luka. Biji pala mengandung senyawa fenol, terpenoid, flavonoid, yang berpotensi

sebagai antibakteri (Rachmi W, dkk., 2014).

Masyarakat memanfaatkan tumbuhan sebagai obat tradisional untuk mengatasi

berbagai penyakit. Pala (Myristica fragrans) merupakan salah satu tanaman tradisional

Indonesia yang memiliki khasiat obat yang potensial. Buah pala memiliki beberapa bagian

yaitu biji, bunga pala dan daging buah. Setiap bagian buah pala memiliki zat aktif sebagai

agen antibakteri (Nurhasanah, 2014). Tanaman pala adalah tanaman asli Indonesia.

Tanaman pala (Myristica fragrans) digunakan dalam industri farmasi dan memiliki

berbagai khasiat yang bermanfaat bagi kesehatan. Pada dosis rendah, buah pala dapat

digunakan untuk mengurangi perut kembung, meningkatkan daya cerna, menambah nafsu

makan, muntah, mual dan dapat mengobati diare (Agoez,2010). Prospek pala bagus karena

pala selalu dibutuhkan dalam industri makanan, minuman, obat-obatan dan lainnya.

Persyaratan yang lebih spesifik adalah pala dapat dibuat menjadi agen antibakteri

(Putra WS, 2015). Minyak atsiri dan saponin merupakan agen antibakteri yang terkandung

dalam buah pala (Nurd JN et al., 2007). Hasil fitokimia menunjukkan bahwa tanaman pala

memiliki senyawa alkaloid sebagai antibakteri (Palawi JF, 2014). Pala (Myristica fragrans)

memiliki zat antimikroba yang dapat melarutkan dinding sel, sehingga mempengaruhi

viabilitas sel bakteri (Susilawati, 1987).

Pala dikenal sebagai tanaman rempah yang ekonomis dan serbaguna karena setiap

bagian tanaman dapat digunakan di berbagai industri. Sebagian besar masyarakat hanya

memanfaatkan buah pala untuk bahan pangan atau obat, dan pemanfaatan daun pala

sendiri masih kurang (Rastuti, 2013).

2
 Berdasarkan latar belakang diatas, peneliti tertarik untuk melakukan Uji Aktivitas

Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Pala (Myristica Fragrans Houtt.) dengan Metode

KLT-Bioautografi.

B. Rumusan Masalah

Rumusan masalah pada penelitian ini adalah:

1. Apakah ekstrak etanol daun pala (Myristica fragrans Houtt) mempunyai aktivitas

antimikroba dengan metode KLT-Bioautografi?

2. Senyawa dan komponen kimia apa sajakah yang terdapat pada ekstrak etanol

daun pala (Myristica fragrans Houtt) secara KLT-Bioautografi

3. Berapakah nilai Rf ekstrak etanol daun pala secara KLT-Bioautografi yang optimal

sebagai antimikroba?

C. Tujuan Penelitian

Tujuan penelitian ini adalah untuk:

1. Untuk mengetahui aktivitas antimikroba ekstrak etanol daun pala (Myristica

fragrans Houtt) dengan metode KLT-Bioautografi.

2. Untuk mengetahui senyawa dan komponen kimia apa sajakah yang terdapat pada

ekstrak etanol daun pala (myristica fragrans Houtt) secara KLT-Bioautografi

3. Untuk mengetahui nilai Rf ekstrak etanol daun pala yang optimal sebagai antimikroba

secara KLT-Bioautografi.

3
D. Manfaat Penelitian

1. Bagi Instansi Terkait

a. Menemukan sumber obat baru yang dapat dimanfaatkan sebagai obat antimikroba.

b. Meningkatkan kredibilitas institusi prodi Farmasi Universitas Mandala Waluya

sebagai pemanfaatan Obat Bahan Alam Lokal.

2. Bagi peneliti

Penelitian ini diharapkan dapat meningkatkan kemampuan peneliti dalam

keilmuan terkhusus dalam antimikroba dan memberikan wawasan serta menambah

pengalaman dalam menerapkan ilmu yang didapat selama kuliah ke dalam praktik

nyata.

E. Kebaruan Penelitian

Sepengetahuan peneliti, penelitian tentang Efek Aktivitas Antimikroba Ekstrak

Etanol Daun Pala (Myristica Fragrans Houtt) dengan Metode KLT- Bioautografi belum

pernah diteliti sebelumnya. Penelitian yang terkait dengan ini terdapat pada tabel 1.

berikut:

Tabel 1. Penelitian lain yang terkait dari judul aktifitas Daun pala

No Penelitian Judul Persamaan Perbedaan

1. Lubis dkk., Uji Aktivitas sampel yang Metode pengujiannya
.
2017 Antibakteri sama dengan menggunakan metode
Ekstrak menggunakan difusi agar menggunakan
Etanol Daun Ekstrak Etanol pencadang kertas
Pala (Myristica Daun Pala
fragrans (Myristica
Houtt.) Terhadap fragrans
Vancomycin- Houtt.)
resistant
enterococci

4
2. Fawwaz dkk., Potensi daun pala Sampel dan Metode
2014 (Myristica potensi pengujiannya
Fragrans senyawa yang menggunakan analisis
Houtt) sebagai ada dalam kualitatif untuk
sumber fenolik daun pala mencari senyawa
golongan fenolik

3 Arrizqiyani Optimalisasi Sampel dan Penelitian

dkk., 2017 Potensi potensi yang dilakukan dengan
Tanaman Pala senyawa yang menguji
Sebagai
ada dalam potensi semua bagian
Antibakteri
daun pala dari tanaman pala
Escherichia
dengan metode
Coli Menggunakan
ekstraksi
Metode Ekstraksi

4. Mega Uji Aktivitas Uji aktivitas Sampel yang

2012 Antimikroba antimikroba digunakan Ekstrak
Ekstrak Daun dan metode daun salam
Salam (Syzygium
penelitian yang (Syzygium Polyanthum
Polyanthum (Wight) Walp.)
digunakan
(Wight Walp.)
yaitu KLT-
Terhadap
bioautigrafi
Beberapa
Mikroba Patogen
Secara
Klt-Bioautografi

5
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Tinjauan Teoritis Variabel Terikat

1. Uraian Bakteri Uji

a. Escherichia coli

Domain : Bacteria

Divisi : Proteobacteria

Kelas : Gammproteobacteria

Ordo : Enterobacteriales

Familia : Enterobacteriaceae

Genus : Eschericia

Spesies : Eschericia coli (Pelczar, 1988; Garrity, 2004)

Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif berbentuk batang lurus

berukuran 1.1-1.5µm x 2.0-6.0µm, flagellar, motile atau non-motile. Berkembang

secara efektif di sebagian besar jalur dengan pembuatan korosif dan gas.

Gambar 3. Escherichia coli (Pelczar, 1988; Garrity, 2004)

6
b. Staphylococcus aureus

Domain : Bacteria

Divisi : Fimicutes

kelas : Fimibacteria

Ordo : Eubacteriales

Famili : Microcococaceae

Genus : Staphylococcus

Spesies : Staphylococcus aureus (Pelczar, 1988; Garrity, 2004)

Staphylococcus aureus adalah bakteri koksidia gram positif, biasanya

berdiameter 0,5-1,5 µm, tersusun dalam rantai tidak beraturan seperti jumbai buah

anggur. Bakteri ini termasuk bakteri termofilik yang tumbuh pada kisaran suhu 37-

48°C, dengan suhu optimum 35-40°C. pH optimal 6-7, pH minimum 4, pH

maksimum 9,8-10. Bakteri ini menghasilkan racun usus dan kurang tahan terhadap

efek garam dan air. Habitat dan pola pernapasan bakteri ini pada kulit biasanya

ditemukan pada 20-50% orang sehat.

Gambar 4. Staphylococcus aureus (Pelczar, 1988; Garrity, 2004)

7
2. Mekanisme Kerja Antimikroba

Antibiotik merupakan obat yang membunuh mikroorganisme, terutama

mikroorganisme yang berbahaya bagi tubuh manusia. Menurut sifat toksisitas selektif,

ada agen antibakteri yang menghambat pertumbuhan mikroorganisme, yaitu aktivitas

antibakteri dan beberapa perlu membunuh mikroorganisme, yang disebut aktivitas

bakterisidal. Tingkat minimum yang diperlukan untuk menghambat pertumbuhan

mikroorganisme atau membunuh mikroorganisme masing-masing disebut tingkat

penghambatan minimum dan tingkat pembunuhan minimum. Beberapa aktivitas

antibakteri dapat meningkat dari bakteriostatik menjadi bakterisidal (Ganiswara, 1995)

Ada beberapa sifat antimikroba yang ideal, termasuk toksisitas tinggi terhadap

mikroorganisme tetapi tidak beracun bagi inang, jangkauan yang luas, tidak ada

resistensi yang akan dihasilkan dengan cepat, dengan adanya cairan tubuh, protein

plasma dan enzim jaringan, tidak boleh dikurangi. Sifat adsorpsi, distribusi,

metabolisme dan ekskresi (ADME) mengharuskan konsentrasi darah dapat dicapai

dengan cepat dan ekskresi ginjal dapat dipertahankan untuk waktu yang lama tanpa

membahayakan ginjal pasien (Ganiswara, 1995; Mycek, 2001).

Mekanisme kerja utama antimikroba (Katzung, 2004; Ganiswara, 1995):

a. Penghambatan metabolisme sel mikroba

Mikroorganisme membutuhkan asam folat untuk bertahan hidup. Patogen harus

mensintesis asam folat sendiri dari asam paraaminobenzoat (PABA). Ketika agen

antibakteri bertabrakan dengan asam paraaminobenzoat (PABA) untuk membentuk

asam folat, analog asam folat nonfungsional terbentuk.

b. Penghambatan sintesis dinding sel

Dinding sel mikroorganisme adalah peptidoglikan kimia, yang merupakan jenis

bahan komposit polimer mukopeptida, dan setelah dinding sel terbentuk, dapat

8
 menghambat reaksi pembentukan atau memodifikasi dinding sel, sehingga merusak

struktur dinding seluler. Agen antibakteri ini dapat menghambat sintesis dan

menghambat aktivitas enzim (transpepeptase, dll), merusak dinding sel dan

menyebabkan lisis sel. Contoh: bacitoracin, sefalosporin, siklosporin, penisilin,

vankomisin.

c. Penghambatan fungsi membran sel

Membran sitoplasma mempertahankan zat tertentu di dalam sel dan mengatur

aliran masuk dan keluar zat tertentu. Membran sel menjaga keutuhan komponen sel,

dan kerusakan pada membran akan mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel

atau kematian sel, akibatnya mikroorganisme akan mati. Jika integritas dan fungsi

membran plasma sel terganggu, makromolekul dan ion meninggalkan sel, maka sel

akan hancur. Dalam hal ini, agen antimikroba dapat berinteraksi dengan sterol

sitoplasma dalam jamur dan menghancurkan membran sel bakteri Gram negatif.

Membran sel bakteri dan jamur dapat dihancurkan oleh zat tertentu tanpa merusak

sel inang. Obat yang termasuk dalam kelompok ini adalah golongan polimixin,

amfoterisin, colistin, imidazol dan polien, serta berbagai antimikroba kemoterapi.

d. Penghambatan sintesis protein

Umur sel tergantung pada mempertahankan keadaan asli molekul. Salah satu

kondisi atau zat yang mengubah kondisi ini adalah mengubah sifat protein dengan

membuat kerusakan sel yang tidak dapat diperbaiki. Beberapa antibiotik, seperti

aminoglikosida, linkomisin, kloramfenikol, tetrasiklin, dan eritromisin, menghambat

sintesis protein bakteri. Sepanjang hidup, sel mikroba harus mensintesis banyak jenis

protein. Sintesis protein dilakukan di ribosom menggunakan mRNA dan tRNA.

Ribosom bakteri terdiri dari dua subunit yang ditunjuk masing-masing sebagai

ribosom 30S dan 50S, tergantung pada konstanta presipitasi.

9
 e. Penghambatan sintesis asam nukleat

DNA dan RNA berperan penting dalam proses kehidupan normal sel. Ini

berarti bahwa kerusakan apa pun pada pembentukan atau fungsi zat ini dapat

menyebabkan kerusakan total pada sel. Dalam hal ini akan mempengaruhi

metabolisme asam nukleat, seperti pengikatan enzim yang bergantung pada DNA,

pengikatan RNA polimerase bakteri, dan pemblokiran heliks DNA

3. Metode Ekstraksi

a. Definisi ekstraksi

Ekstraksi adalah proses pemisahan zat yang diinginkan dari obat

menggunakan pelarut pilihan, melarutkan zat yang diperlukan dalam pelarut.

Secara umum, metode ekstraksi dipilih tergantung pada berbagai faktor seperti sifat

obat dan kemampuan beradaptasi untuk setiap metode ekstraksi, pentingnya

memperoleh ekstrak. Obat lengkap atau hampir lengkap. Sifat-sifat obat merupakan

faktor utama yang perlu dipertimbangkan ketika memilih metode ekstraksi (Ansel,

1989).

b. Mekanisme ekstraksi

Umumnya zat aktif yang terkandung dalam tumbuhan dan hewan lebih

larut dalam pelarut organik. Proses ekstraksi zat aktif dari tumbuhan adalah pelarut

organik menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel tumbuhan atau

hewan yang mengandung zat aktif tersebut. Zat aktif akan terlarut, sehingga

konsentrasi larutan zat aktif di dalam sel dan pelarut organik di luar sel akan

berbeda, kemudian larutan pekat akan berdifusi keluar, dan proses ini berlanjut ke

larutan zat aktif di dalam maupun di luar sel (Ditjen POM,1986; Tobo, 2001).

10
 c. Jenis ekstraksi

1) Ekstraksi secara dingin

Metode ekstraksi secara dingin adalah ekstraksi yang di dalam proses

kerjanya tidak memerlukan pemanasan. Metode ini cocok untuk kristal tunggal

yang mengandung komponen kimia yang tidak tahan panas dan kristal tunggal

lunak atau tipis. Metode dingin meliputi pencelupan, perkolasi, dan Soxhlet

(Ditjen POM,1986; Tobo, 2001).

2) Ekstraksi secara panas

Ekstraksi panas adalah metode ekstraksi yang menggunakan panas dalam

suatu proses. Serbuk sari cair dapat dengan mudah memasuki kompartemen sel

eksperimental dan melarutkan zat aktif ke dalam sel tunggal, mempercepat

ekstraksi saat dipanaskan. Cara ini cocok tidak hanya untuk bahan sederhana

dengan bahan aktif tahan panas, tetapi juga untuk bahan sederhana dengan

tekstur keras, seperti kulit, serat kayu, dan kayu. Ekstraksi panas mengacu pada

refluks dan distilasi uap.

4. Identifikasi Dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis adalah metode pemisahan fisik dan kimia. Lapisan

pemisah yang tersusun dari bahan partikulat (fase diam) ditempatkan pada pembawa

berupa kaca, pelat logam atau lapisan yang sesuai. Campuran yang akan dipisahkan

dalam bentuk larutan bercak-bercak atau pita. Setelah menempatkan pelat atau lapisan

dalam wadah tertutup dengan larutan pembengkakan yang sesuai (fase gerak),

pemisahan terjadi selama proses difusi kapiler (pembengkakan). Selain itu, senyawa

tidak berwarna harus diekspos (terdeteksi) (Stahl, 1985).

Kromatografi lapis tipis digunakan untuk memisahkan senyawa hidrofobik seperti

lipid dan hidrokarbon. Sebagai fase diam, digunakan senyawa yang tidak bereaksi

11
seperti silika gel atau alumina. Silica gel biasa dilengkapi dengan perekat untuk

memberikan kekuatan pada lapisan dan meningkatkan daya rekat pada kaca pendukung.

Pengikat yang umum digunakan adalah kalsium sulfat (Sastrohamidjojo, 1991).

Dalam kromatografi lapis tipis, fase diam adalah lapisan tipis bahan padat yang

ditumpangkan pada permukaan penyangga datar. Lapisan ini dipasang ke permukaan

dengan menggunakan perekat. Dua sifat penting dari fase diam adalah ukuran partikel

dan keseragaman, karena kekuatan adhesi pada penyangga sangat bergantung pada

kedua sifat ini. Pelet pitch kasar tidak memberikan hasil yang memuaskan. Salah satu

cara untuk meningkatkan efisiensi pemisahan adalah dengan menggunakan fase diam

granular. Absorben yang banyak digunakan dalam kromatografi lapis tipis adalah silika

gel, alumina, tanah diatom, selulosa dan poliamida (Sastrohamidjojo, 1991; Stahl,

1985).

Fase gerak adalah media transmisi yang tersusun dari satu atau beberapa pelarut.

Karena gaya kapiler, ia bergerak dalam fase diam (lapisan berpori). Pemilihan sistem

pelarut yang akan digunakan didasarkan pada prinsip disolusi yang sama. Artinya,

sistem pelarut non-polar digunakan untuk memisahkan sampel non-polar, dan sistem

pelarut polar digunakan untuk memisahkan sampel polar (Stahl, 1985).

Jarak batch suatu senyawa pada kromatogram dinyatakan sebagai nilai numerik

Rf (Stahl, 1985).

Rf = Jarak perambatan bercak dari titik penotolan

Jarak perambatan pelarut dari titik penotolan

Faktor-faktor yang mempengaruhi nilai Rf adalah struktur kimia senyawa yang akan

dipisahkan, sifat adsorben, ketebalan dan keseragaman lapisan absorber, jenis pelarut dan

kemurnian pelarut, serta jumlah pelarut, sampel dan temperature (Sastrohamidjojo,

1991).

12
5. Metode Pengujian Antimikroba

a. Metode dilusi

Prinsip penggunaan metode ini untuk menguji potensi antibiotik adalah

membandingkan resistensi dosis antibiotik yang diuji terhadap pertumbuhan

mikroorganisme yang diuji dengan resistensi yang sama melalui dosis antibiotik

standar standar dalam media cair.

Metode ini menggunakan koefisien difusi antibiotik yang tidak lagi

menghambat pertumbuhan organisme uji. Faktor yang mempengaruhi potensi

keberhasilan pengujian metode ini adalah masa inkubasi dan suhu yang seragam

sepanjang masa inkubasi (Djide, 2008).

b. Metode difusi

Metode ini menggunakan media padat untuk menginokulasi permukaan tubuh

secara seragam untuk pengujian kerentanan antibiotik. Pengujian senyawa antibiotik

dilakukan dengan cara meletakkan perisai atau wadah pada permukaan media dan

menempatkannya dalam wadah dengan volume tertentu. Mereka kemudian

diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu. Selama masa inkubasi, antibiotik berdifusi

ke dalam gel agar, membentuk zona resistensi. Area yang diperoleh digunakan

sebagai kriteria kuantitatif untuk mengukur kemampuan fleksi antibiotik standar

(Djide, 2008).

c. KLT-Bioautografi

KLT-Bioautografi merupakan metode deteksi yang dapat menentukan

senyawa antibakteri tak teridentifikasi dengan menentukan efek biologis

(antibakteri, protozoa, antitumor) dan aktivitas antibakteri dari zat yang diteliti

(Sastroamidjojo, 1985).

13
 Pengujian biokromatografi adalah metode khusus untuk mendeteksi bintik-

bintik dalam kromatografi KLT (Kromatografi Lapis Tipis). Kromatografi lapis

tipis ini memiliki aktivitas antibakteri, antijamur dan antivirus, sehingga metode

pemisahannya lebih mendekati deteksi biologis (Pratiwi, 2008 tahun).

Program KLT-Bioautografi menggunakan teknologi difusi agar. Teknik ini

memisahkan senyawa antibakteri pada lapisan KLT dan pada agar yang dikulturkan

secara homogen. Setelah inkubasi pada suhu dan waktu tertentu, terlihat adanya

zona hambat yang ditunjukkan oleh aktivitas senyawa aktif reagen terhadap

pertumbuhan mikroorganisme yang akan diuji (Djide, 2005).

KLT-Bioautografi dibagi dalam tiga kelompok yaitu (Djide, 2008):

1) KLT-Bioautografi langsung

Dimana mikroorganisme tumbuh di atas lempeng kromatografi lapis tipis.

2) KLT-Bioautografi kontak

Ketika senyawa antimikroba yang diberikan berada dalam kontak

langsung dengan agar benih dari pelat KLT.

3) KLT-Bioautografi pencelup

Setelah merakit agar, suspensi bakteri dituangkan ke dalam plat

kromatografi elusi yang ditempatkan dalam cawan petri dan permukaan yang

dilapisi agar digunakan sebagai substrat. Setelah pemadatan, media mikroba

untuk peran butiran dikompresi dan diinkubasi pada suhu dan waktu yang

sesuai. Keuntungan dari metode ini adalah efektif dalam mendeteksi keberadaan

senyawa antimikroba dan menentukan tempat pewarnaan dengan campuran

kompleks, sehingga memungkinkan isolasi senyawa aktif (Pratiwi, 2008).

14
B. Tinjauan Teoritis Variabel Bebas

1. Tanaman Pala (Myristica fragrans Houtt.)

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophya

Sub-Divisi : Coniferophytina

Class : Magnoliopsida

Sub Kelas : Magnolianae

Ordo : Magnoliales

Famili : Myristicaceae

Genus : Myristica

Spesies : Myristica fragrans Hout (Heyne, 1987)

Pala (Myristica fragrans) merupakan tanaman yang tumbuh dengan baik di

daerah tropis. Tanaman ini termasuk dalam famili Myristaceae dan terdapat sekitar

200 spesies. Ketika pohon tumbuh subur dan tumbuh di lingkungan terbuka, daun

menghalangi matahari dan tingginya bisa mencapai 15-18 kaki. Daun meruncing ke

atas dan bagian atas daun kusam (Sunanto, 1993).

Daun pala berbentuk lonjong, dengan akar meruncing dan ujung runcing. Warna

di bawahnya adalah biru langit. Bagian atas berwarna hijau gelap. Masa tanam buah

hingga pemetikan tidak boleh lebih dari 9 bulan. Buahnya bulat, lebar dan runcing.

Kulit halus, kuning, tebal dan terhidrasi. Bijinya satu, dibelah menjadi dua bagian dan

dilindungi oleh cangkang yang tidak cukup tebal tetapi cukup keras. Bentuk biji

menjadi lonjong, lonjong dan coklat tua seiring bertambahnya usia (Rismunandar,

1992).

15
 Gambar 1. Daun Pala (Rismunandar, 1992).

Sifat-sifat biji pala antara lain:

a. Biji pala yg masih belum relatif tua apabila dikeringkan akan membuat daging biji yg

relatif rapuh, & mudah sebagai target serangga gudang.

b. Biji pala yang sudah tua akan menghasilkan biji yang sangat keras setelah

dikeringkan, yang akan menghasilkan bubuk giling jika digiling

c. Kulit biji ditutupi dengan kulit merah. Partikel ini disebut massa. Semua bagian

pala (termasuk daging, fuli, dan biji) memiliki banyak manfaat (Rismunandar,

1992).

2. Nama lain tanaman pala (Myristica fragrans Houtt.)

Pala memiliki nama yang berbeda di setiap daerah, seperti palo (Nusa Tenggara),

kala pelang (Sumatera Barat), kuhipun (Maluku), atau gosora (Ternate) (Kurniawati,

2010).

Gambar 2. Foto tumbuhan pala (Myristica fragrans Houtt.) (Kurniawati, 2010).

16
3. Kandungan Kimia

Informasi tentang komposisi kimia jaringan atau organ tanaman Myristica tidak

banyak dibahas. Pala mengandung 9% air, 27% karbohidrat, 6,5% protein, 33% minyak

campuran dan 4,5% minyak atsiri. Kulit biji mengandung 22,5% minyak atsiri dan lebih

dari 10% minyak atsiri, 73% aspergillin dan 13% minyak atsiri diisolasi. Biji dan buah

juga mengandung saponin, sedangkan daunnya mengandung flavonoid (Arrijani, 2005).

Daun pala juga mengandung minyak atsiri, namun kandungannya tidak tinggi (Drazat,

2007).

4. Khasiat

Menurut Kurniawati (2010), pala dapat digunakan sebagai pengobatan yang efektif

untuk sakit gigi. Daun pala juga mengandung minyak atsiri dan senyawa fenolik lainnya

yang dapat disuling untuk mendapatkan minyak atsiri. Minyak atsiri ini digunakan

sebagai bahan obat tradisional dan dapat diekspor untuk membuat kosmetik, sabun,

parfum dan produk lainnya (Arrijani, 2005).

C. Kajian Empiris

Tanaman pala merupakan tanaman asli Indonesia, terutama di Banda dan

sekitarnya serta Irian Jaya. Pala dikenal sebagai tanaman rempah-rempah yang bernilai

ekonomis dan multi fungsi, karena setiap bagian tanaman dapat dimanfaatkan di

berbagai industri seperti makanan dan minuman, obat-obatan, parfum dan kosmetik.

Selain itu, buah pala juga menghasilkan minyak yang digunakan sebagai obat untuk

merangsang sistem jantung, diare, reumatik, nyeri otot, sakit gigi, menghilangkan racun

di hati dan berbagai khasiat lainnya. Daun pala merupakan bagian tanaman yang belum

banyak dimanfaatkan. Rastuti dkk. (2013) menjelaskan bahwa senyawa yang

terkandung dalam daun pala antara lain alkaloid, triterpen, tanin dan 2 flavonoid

(Rastuti et al., 2013).

17
 Hal ini sesuai dengan banyak penelitian terhadap daun pala yang terbuka. Yaitu,

Muammar Fawwaz, Siti Nurdiansyah A, Muzakkir Umpan (2014) melakukan

penelitian yang menunjukkan bahwa kandungan flavonoid buah pala memberikan

adanya senyawa fenolik, khususnya ekstrak etano daun pala (Myristica aromans Houtt)

yang mengandung senyawa fenolik total. Kandungan total fenol ekstrak daun pala

adalah 183,56 mgGAE/g ekstrak. Juga dalam penelitian yang dilakukan oleh Lubis,

Winda Aldrani (Winda Aldrani 2017) membahas toleransi ekstrak etanol pada daun

pala (Myristica aromans Houtt.) dengan menggunakan metode difusi, agar dan

pembawa kertas. Tes aktivitas antibakteri vankomisin enterococcus menunjukkan

bahwa aktivitas antibakteri buah pala dapat melawan enterococci resisten vankomisin

dengan memperhatikan diameter hambat pertumbuhan bakteri dari konsentrasi hambat

minimum dan konsentrasi efektifnya.

Penelitian ini juga sejalan dengan penelitian yang dilakukan Wibowo Agus, dkk

(2019), tentang uji aktivitas antibakteri minyak atsiri daun pala segar dengan metode

difusi sumuran yang dilakukan terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus

aureus ditemukan bahwa daun pala memiliki aktivitas antibakteri terhadap kedua

bakteri tersebut dan juga pada penelitian Undri Rastuti, dkk (2013) tentang aktivitas

antibakteri daun pala ditemukan bahwa daun pala mempunyai komponen kimia turunan

fenol atau flavonoid.

18
 BAB III

KERANGKA KONSEP PENELITIAN

A. Dasar Pikir Penelitian

Dalam penelitian ini bahan alami digunakan untuk menghambat pertumbuhan

Escherichia coli pada penyakit diare. Bahan alami yang digunakan adalah daun pala

(Myristica fragrans). Penggunaan bagian tanaman ini bertujuan untuk mengoptimalkan

potensi antibakteri yang dimiliki oleh tanaman pala pada setiap bagiannya. Nilai ekonomis

tanaman pala terletak pada bunga pala dan bijinya, sedangkan bagian daun dan daging

buahnya masih belum termanfaatkan dengan optimal sehingga masih banyak terbuang

begitu saja. Meskipun masih terdapat komponen kimiawi pada daun dan daging buah pala

berupa minyak atsiri, namun komponen kimia tersebut tergolong sebagai agen antibakteri

yang potensial.

Berdasarkan hal tersebut, maka diperlukan penelitian tentang pengembangan

potensi antibakteri dari bagian daun pala. Daun pala berpotensi sebagai antibakteri

yaitu pada kandungan flavonoid dan terpenoid. Flavonoid merupakan salah satu golongan

fenol alam terbesar yang mempunyai kecenderungan untuk mengikat protein sehingga

mengganggu proses metabolisme. Mekanisme flavonoid dalam menghambat pertumbuhan

bakteri yaitu merusak permeabilitas dinding sel bakteri.

19
B. Bagan Kerangka Konsep Penelitian

Ekstrak etanol daun pala Antibakteri, Kandungan

(Myristica fragrans Hout) kimia dan nilai Rf

Keterangan:

: Variabel bebas

: Variabel terikat

: Menyatakan pengaruh antara variabel bebas dan

Terikat

C. Variabel Penelitian

1. Variabel terikat : Variabel terikat pada penelitian ini adalah antibakteri,

kandungan kimia dan nilai Rf.

2. Variabel bebas : Variabel bebas pada penelitian ini adalah ekstrak etanol

daun pala (Myristica fragrans Houtt).

D. Definisi Operasional dan Kriteria Obyektif

1. Definisi Operasional Variabel Terikat

a. Antibakteri

Agen antibakteri adalah obat yang menghancurkan mikroorganisme, terutama

yang berbahaya bagi tubuh manusia. Ada zat antibakteri yang menekan pertumbuhan

mikroorganisme yang disebut aktivitas bakteriostatik tergantung pada karakteristik

toksisitas opsional. Ada sesuatu yang Anda butuhkan untuk membunuh bakteri.

Aktivitas antibakteri tertentu dapat bersifat bakteriostatik dan bakterisida meningkat

ketika kadar antibakteri meningkat di atas KHM (Ganiswara, 1995). Kriteria target:

satuan mg / dl

20
 b. Nilai Rf.

Nilai Rf (koefisien retensi) didefinisikan sebagai rasio jarak perjalanan senyawa

ke permukaan fase diam dibagi dengan jarak perjalanan pelarut ke fase gerak. Dapat

digunakan untuk mengkonfirmasi keberadaan berbagai senyawa dalam sampel.

Rf = Jarak perambatan bercak dari titik penotolan

Jarak perambatan pelarut dari titik penotolan

2. Definisi Operasional Variabel Bebas

a. Ekstrak Etanol Pala (Myristica fragrans Houtt.)

Ekstrak etanol daun pala (Myristica fragrans Houtt) adalah proses pemisahan

pelarut yang menggunakan evaporator untuk mengambil beberapa filtrat dan

menguapkannya.

E. Hipotesis Penelitian

1. H0 = Ekstrak etanol daun pala (Myristica fragrans Houtt) tidak mempunyai

aktivitas antibakteri.

Ha = Ekstrak etanol daun pala (Myristica fragrans Houtt) memiliki efek

sebagai antibakteri.

2. H0 = Tidak terdapat senyawa atau komponen kimia yang memiliki aktivitas

antibakteri pada daun pala (Myristica fragrans Houtt)

Ha = Tidak terdapat senyawa atau komponen kimia yang memiliki aktivitas

antibakteri pada daun pala (Myristica fragrans Houtt)

3. H0 = Ekstrak etanol daun pala (Myristica fragrans Houtt) tidak mempunyai nilai

Rf yang optimal sebagai antimikroba.

Ha = Ekstrak etanol daun pala (Myristica fragrans Houtt) mempunyai nilai Rf

yang optimal sebagai antimikroba.

21
 BAB IV

METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Desain Penelitian

1. Jenis Penelitian

Jenis penelitian ini adalah penelitian eksperimental dengan tujuan untuk

mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol 96% daun pala (Myristica fragrans

Houtt.) menggunakan metode KLT-Bioautografi terhadap bakteri Staphylococcus

aureus dan Escherichia coli.

2. Desain Penelitian

Desain penelitian yang dilakukan dapat dilihat pada gambar berikut:

DP EDP KLTB PAB ZH

Keterangan :

DP : Daun pala

EDP : Ekstraksi Daun Pala

KLTB : Kromatografi lapis Tipis Bioautografi

PAB : Pengujian Antibakteri

ZH : Zona Hambat

B. Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Universitas

Mandala Waluya pada bulan Desember tahun 2020 sampai bulan Januari tahun 2021.

C. Alat dan Bahan Penelitian

1. Alat yang digunakan

Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah autoklaf, api bunsen,

bejana maserasi, cawan Petri, chamber (kamag), gelas ukur, inkubator, labu erlenmeyer,

pengering rambut, jarum ose, Laminar Air Flow (LAF), lampu UV 254 nm dan 366 nm,

22
 oven, spektrometer UV (Genesis), jarum suntik, tabung reaksi, timbangan analitik,

timbangan kasar, pipa kapiler dan vial.

2. Bahan yang digunakan

Bahan baku yang digunakan dalam penelitian ini adalah aquades steril, ekstrak

etanol daun pala (Myristica fragrans Houtt.), dimetil sulfoksida (DMSO), etanol 96%,

lempeng KLT, medium Nutrien Agar (NA) dan Potato Dextrose Agar (PDA), mikroba

biakan uji (Escherichia coli, Staphylococcus aureus), n-heksan: etil asetat (7:3),

Pereaksi Aluminium klorida, Pereaksi Feri klorida, Pereaksi toluena: etil asetat,

Pereaksi Asam sulfat dan Natrium klorida 0,9%.

D. Populasi dan Sampel

Populasi sampel adalah tanaman pala (Myristica fragrans Houtt.) yang diperoleh

langsung dari Laonti Kab. Konawe Selatan, sedangkan sampel yang digunakan adalah

Daun Pala (Myristica fragrans Houtt).

E. Prosedur Kerja Penelitian

1. Penyiapan sampel

a. Pengolahan sampel

Ambil sampel daun pala (Myristica fragrans Houtt.), Bilas dengan air mengalir

dan tiriskan. Kemudian keringkan daun pala di bawah sinar matahari. Daun kering

dihancurkan menjadi bubuk dengan blender.

2. Pembuatan ekstrak etanol daun pala

Pembuatan ekstrak etanol dengan menggunakan metode maserasi. Serbuk daun

pala sebanyak 1 kg, sampel dimasukkan ke dalam wadah tertutup dan direndam dengan

menggunakan pelarut etanol 96% sampai seluruh bagian simplisia terendam.

Prosesnya berlangsung 3x24 jam. Dimana setiap 1 x 24 jam akan dilakukan

23
 penggantian pelarut. Filtrat dikumpulkan dan dipekatkan dengan vacuum rotary

evaporator pada suhu ≤40ºC hingga diperoleh ekstrak etanol daun pala (Ansel,1989).

3. Sterilisasi alat dan bahan

Semua alat yang digunakan harus dicuci dan dikeringkan. Labu erlenmeyer

dibungkus dengan kain katun, ditutup dengan plastik tahan panas dan disterilkan dalam

autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit. Bungkus vial dan tabung reaksi dalam foil

dan sterilkan dalam oven pada 180°C selama 2 jam. Sterilkan forsep dan jarum suntik

dengan api Bunsen. Semua media benih (Nutrien agar dan Potato dextrose agar)

diautoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit (Pertiwi, 2010).

4. Penyiapan bakteri uji

a. Peremajaan bakteri uji

Bakteri yang diuji diremajakan dengan menggosok permukaan media agar dengan

jarum melingkar dan memiringkan media nutrient agar, dan diinkubasi selama 1x24

jam pada suhu 37°C (Nurcahyanti, Dewi & Timotius, 2011).

b. Pembuatan suspensi bakteri uji

Pada uji peremajaan, masing-masing bakteri disuspensikan dalam larutan NaCl

fisiologis 0,9% steril dan ditempatkan dalam kuvet. Transmisi suspensi kultur

diukur dengan spektrofotometer pada 580 nm untuk memberikan transmisi bakteri

25%. T. Saline 0,9% steril digunakan sebagai blanko (Kuete et al, 2011).

5. Uji skrining antibakteri

Ekstrak daun pala (Myristica fragrans Houtt.) Timbang 10 mg dan larutkan

dalam 0,2 ml DMSO. 9,8 mL media ditambahkan ke ekstrak pada konsentrasi 1 mg/mL.

Campuran dituang ke dalam cawan petri kemudian dihomogenkan dan dibiarkan

memadat. Suspensi bakteri dikeluarkan dari media padat menggunakan jarum ose

24
 kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 1 x 24 jam. Aktivitas antimikroba

diamati, ditunjukkan dengan ada atau tidak adanya pertumbuhan bakteri.

6. Pemisahan senyawa dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Ekstrak etanol 96% daun pala (Myristica fragrans Houtt.) dilarutkan dalam

larutan elusi yang sesuai. Letakkan di atas plat KLT berukuran 7 x 1 cm menggunakan

pipa kapiler. Pelat KLT harus dipanaskan dalam oven untuk diaktifkan sebelum

digunakan. Oleskan ekstrak dan bandingkan sekitar 1 cm dari tepi bawah piring dan

tunggu sampai kering. Tempatkan pelat dalam labu kromatografi yang berisi eluat jenuh

(n-heksana: etil asetat (4: 1)). Pelat dibiarkan terelusi dari tepi atas pelat hingga batas 0,5

cm. Cawan dikeluarkan dari wadah dan diangin-anginkan sampai eluat menguap.

Kromatogram yang dihasilkan diamati dengan pewarnaan di bawah sinar UV pada

panjang gelombang 254 nm dan 366 nm. Fluoresensi terakumulasi pada disk (Djide,

2008).

7. Pengujian secara KLT-Bioautografi

Inokulasi satu dosis bakteri pada 10 ml Nutrien agar (NA) steril yang didinginkan,

tuangkan ke dalam cawan Petri steril, dan lakukan asepsis. Tempatkan pelat KLT yang

dielusi pada permukaan agar akhir. Piring dibiarkan selama 30 menit dan dipisahkan dari

media. Medium diinkubasi pada suhu 37°C selama 1x24 jam. Zona penghambatan terlihat

pada agar dan dibandingkan dengan kromatogram KLT (Djide, 2008).

8. Identifikasi komponen kimia

Kromatogram disemprot dengan menggunakan pereaksi untuk masing-

masing komponen kimia berikut (Ditjen POM, 1987):

a) Pereaksi flavonoid

Aluminium klorida setelah disemprot tampak bercak berpendar dalam sinar UV

366 nm

25
 BAB V

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Penelitian

1. Hasil Ekstraksi Daun Pala (Myristica fragrans Houtt.)

Hasil pembuatan simplisia dari daun pala sebanyak 1 kg diperoleh simplisia yang

telah dikeringkan sebanyak 400,273 gram kemudian dimaserasi serbuk simplisia daun pala

dengan pelarut etanol 96%, dipekatkan dengan menggunakan alat rotavapor sehingga

diperoleh ekstrak kental sebanyak 41,673 gram. % rendamen ekstrak hasil perbandingan

berat ekstrak dengan berat simplisia awal sebesar 10,017%.

2. Uji Skrining Antibakteri

Berdasarkan pengujian skrining antibakteri pada ekstrak etanol daun pala

(Myristica frgarans Houtt.) terhadap beberapa bakteri uji maka diperoleh hasil bahwa

ekstrak etanol 96% daun pala memberikan aktivitas yang baik terhadap bakteri uji

Staphylococcus aureus, dan juga memberikan aktivitas yang baik terhadap bakteri uji

Escherichia coli. Hasil pengujian selengkapnya dapat dilihat pada tabel 2 berikut :

Tabel 2. Hasil uji Skrining aktivitas antibakteri ekstrak etanol 96% daun pala (Myristica
fragrans Houtt. ) pada konsentrasi 1 mg/ml

Bakteri Uji
No. Sampel
SA EC
Ekstrak etanol daun pala (Myristica
1. + +
fragrans Houtt.)
Keterangan :
SA : Staphylococcus aureua
EC : Escherchia coli

26
3. Hasil Uji Antibakteri

a. Hasil pemisahan dan pengujian senyawa KLT

Pemisahan dan pengujian senyawa secara KLT menggunakan campuran n-

heksan : etil (7:3) dengan penampak bercak lampu UV 254 nm diperoleh 3 bercak

yaitu pada Rf 0,92, Rf 0,78, Rf 0,64. Pada penampak bercak lampu UV 366 nm

diperoleh 3 bercak yaitu pada Rf 0,92, Rf 0,78, Rf 0,64 dan pada penampak bercak

H2SO4 diperoleh 1 bercak dengan nilai Rf 0,64.

Hasil pemisahan dan pengujian senyawa secara KLT dapat dilihat pada tabel

berikut:

Tabel 3. Hasil pemisahan dan pengujian senyawa secara KLT menggunakan campuran eluen
n-heksan: etil (7:3)

Penampak noda Bakteri uji yang

Noda Rf
UV 254 UV 366 dihambat
1 0,92 Coklat tua Coklat tua SA

2 0,78 Kuning kecoklatan Coklat tua -

3 0,64 Kuning kecoklatan - -

Keterangan : SA = staphylococcus aureus

Bakteri staphylococcus aureus menghambat.

Bakteri Escherichia coli tidak menghambat

b. Identifikasi komponen kimia

Pada uji identifikasi komponen kimia aktif ekstrak etanol daun pala (Myristica

fragrans Houtt.) dengan penampak noda H2SO410% didapatkan hasil uji yang dapat

dilihat pada tabel berikut:

Tabel 4. Hasil uji Identifikasi Komponen Kimia Aktif dari Kromatogram ekstrak etanol
Daun Pala (Myristica fragrans Houtt.)

27
 Warna hasil Golongan
Pereaksi Rf Warna bercak
penyemprotan senyawa
Kuning
H2SO410% 0,78 kecoklatan Coklat tua + flavonoid

B. Pembahasan

Sampel daun pala (Myristica fragrans H.) dikumpulkan dari desa Laonti, daerah

Kabupaten Konawe Selatan. Sampel yang diperoleh dikeringkan sampai seluruh bagian

daun benar-benar kering. Tujuan dari proses pengeringan itu sendiri adalah untuk

mengurangi kadar air sampel dan mencegah pertumbuhan mikroba. Simplisia kemudian

dirajang hal ini dilakukan untuk meningkatkan luas permukaan sampel sehingga kontak

antara filter cair dan sampel semakin besar dan memudahkan ekstraksi komponen kimia

yang terkandung di dalamnya. Proses ekstraksi dilakukan dengan cara merendam sampel

dengan pelarut etanol selama 3 x 24 jam kemudian diuapkan. metode eskraksi maserasi

tidak dipanaskan sehingga zat aktif yang bersifat termolabil tidak rusak. Alasan lain juga

didasarkan pada konsistensi daun pala yang lunak dan memiliki dinding sel yang tipis

sehingga memungkinkan cairan dengan mudah menembus dan mengekstrak bahan kimia

yang dikandungnya. Metode maserasi dipilih karena keuntungan utama metode ekstraksi

maserasi yaitu, prosedur dan peralatan yang digunakan sederhana.

Pelarut yang digunakan adalah pelarut etanol, hal ini didasarkan sifat etanol yang

hampir polar yang dapat digunakan untuk mengekstrak semua komponen kimia dalam

tumbuhan. Hasil dari proses maserasi dipekatkan dengan rotary evaporator untuk

mendapatkan ekstrak etanol kental, yang kemudian diuapkan sehingga diproleh berat

konstan. Ekstrak etanol yang diperoleh adalah 41.673 gram. % rendamen ekstrak dari hasil

perbandingan berat ekstrak dengan berat simplisia awal, diperoleh sebesar 10, 017%

Skrining aktivitas antibakteri dilakukan dengan cara menmpelkan lempeng KLT

28
yang telah dielusi dengan n-heksan: etil asetat (7:3) pada media NA yang berisi masing-

masing bakteri Eschericia coli dan staphylococcus aureus. Adanya aktivitas antibakteri

ditandai dengan terbentuknya bercak aktif berupa zona hambat pada media padat yang

telah diinokulasikan masing masing bakteri. Bercak aktif ini muncul karena adanya proses

penghambatan pertumbuhan bakteri disekitar noda pada lempeng yang ditempelkan pada

media yang berisi bakteri Eschercia coli maupun staphylococcus aureus sehingga senyawa

aktif yang terdapat pada noda bereaksi dengan menghambat pertumbuhan bakteri disekitar

dan terbentuklah zona hambatan.

Uji KLT-Bioutografi dilakukan pada ekstrak etanol daun pala secara kromatografi

lapis tipis menggunakan campuran elusi n-heksan: etil asetat (7:3). Campuran elusi ini

digunakan karena dapat dengan baik memisahkan senyawa yang berpotensi sebagai

senyawa antibakteri yang terdapat pada ekstrak. KLT-Bioautografi merupakan uji lanjutan

untuk memastikan bahwa komposisi kimia daun pala memberikan aktivitas antibakteri.

Metode yang digunakan untuk KLT-Bioautografi terdiri dari menempatkan pelat KLT

pada agar (NA) dengan cara mengkontakkan dan menempatkan organisme yang diuji pada

permukaan nutrien yang diinokulasi. Senyawa antibakteri didifusikan ke dalam media agar

pada pelat kromatografi, setelah inkubasi pada suhu dan waktu yang tepat akan mencegah

pertumbuhan bakteri dan membentuk transparan sampai permukaan media menjadi jernih.

Hasil kromatografi lapis tipis ditunjukkan pada UV 254 nm, UV 366 nm dan H 2SO4 10%.

Lampu UV 254 nm dan UV 366 nm digunakan untuk melihat noda pada lempeng KLT

sehingga dapat diidentifikasi senyawa yang ada. Hasil KLT-bioautografi yang diperoleh

yaitu terdapat 3 noda pada UV 254 nm, 3 noda pada UV 366 dan 1 tnoda pada lempeng

KLT setelah disemprotkan larutan H2SO4 10%.

Pada uji KLT yang telah dilakukan, dapat dilihat nilai Rf pelat untuk

29
mengidentifikasi senyawa penghambat bakteri yang diuji. Hasil KLT menunjukkan adanya

noda pada lampu UV 254 nm, UV 366 nm dan pada lempeng KLT setelah disemprotkan

larutan H2SO4 10% dibandingkan dengan daerah semu yang terbentuk pada cawan Petri

yang diberi perlakuan KLT-Bioautografi dan diinkubasi selama 1 x 24 jam pada suhu 37°C

kemudian dibandingkan nilai Rf yang diperoleh melalui perbandingan dengan pelat

identifikasi senyawasehingga diketahui senyawa mana yang menghambat mikroorganisme

pada nilai Rf.

Hasil KLT-Bioutografi menunjukkan bahwa bercak dengan nilai Rf 0,92 aktif

terhadap Staphylococcus aureus. Ini ditandai dengan adanya bercak aktif berupa zona

bening yang muncul pada noda yang bernilai Rf 0,92 yang membuktikan bahwa noda

tersebut menghambat pertumbuhan dari bakteri Staphylococcus aureus. Tidak semua bintik

muncul ketika UV 254 nm, UV 366 nm dan larutan H 2SO4 10% memberikan zona hambat

bagi bakteri. Hal ini dikarenakan tidak semua senyawa dalam ekstrak etanol daun pala

(Myristica fragrans Houtt.) memiliki sifat antibakteri.

Hasil uji identifikasi komponen kimia menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun

pala mengandung senyawa flavonoid. Adanya flavonoid ditandai pada saat penyemprotan

larutan H2SO4 10% menunjukkan bercak kuning atau coklat tua pada nilai Rf 0,78.

Penelitian ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan Wibowo Agus, dkk (2019),

tentang uji aktivitas antibakteri minyak atsiri daun pala segar dengan metode difusi

sumuran yang dilakukan terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus

ditemukan bahwa daun pala memiliki aktivitas antibakteri terhadap kedua bakteri tersebut

dan juga pada penelitian Undri Rastuti, dkk (2013) tentang aktivitas antibakteri daun pala

ditemukan bahwa daun pala mempunyai komponen kimia turunan fenol atau flavonoid.

Pada tumbuhan, flavonoid dapat membentuk kompleks dengan protein ekstraseluler dan

dinding sel sebagai agen antibakteri. Selain itu, flavonoid lipofilik dapat merusak membran

30
mikroba. Terpen atau terpenoid bersifat antibakteri. Meskipun mekanismenya belum

sepenuhnya dijelaskan, senyawa ini diperkirakan bekerja pada kerusakan membran yang

diinduksi senyawa lipofilik (Cowan, 1999).

Salah satu mekanisme kerja antibakteri adalah dengan mengubah sifat protein.

Suhu dan konsentrasi bahan kimia mengubah sifat protein yang berperan penting dalam

mempertahankan umur sel. Senyawa yang menghambat sintesis protein juga dapat

menyebabkan kesalahan pembacaan mRNA, yang menyebabkan kegagalan protein dan

kematian sel (Pertiwi.N, 2010). Ada juga agen antibakteri yang bekerja langsung pada

membran sel, mempengaruhi permeabilitas dan memungkinkan mikroorganisme

dilepaskan ke dalam sel. Membran sel adalah lapisan selektif permeabel di bawah

dinding sel yang mengontrol masuk dan masuknya zat ke dalam sel dan mempertahankan

permeabilitas internal dan sekresi (Nurhasanah, 2014).

Ikatan hidrogen terbentuk antara fenol dan protein yang merusak struktur protein.

Ini terdiri dari semua protein dan dengan demikian mempengaruhi permeabilitas dinding

sel dan membran sel. Permeabilitas dinding sel dan membran terhambat oleh senyawa

flavonoid dan terpen tanaman yang dapat menyebabkan ketidakseimbangan makromolekul

dan ion intraseluler, yang menyebabkan lisis.

31
 BAB VI

PENUTUP

A. Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa:

1. Ekstrak etanol 96% daun pala (Myristica fragrans H.) memberikan aktivitas antibakteri

terhadap bakteri Staphylococcus aureus, dan bakteri Eschercia coli.

2. Komponen golongan kimia aktif yang memberikan aktivitas antibakteri secara KLT -

Bioautografi pada ekstrak etanol daun pala (Myristica fragrans H.) adalah golongan

flavonoid.

3. Nilai Rf ekstrak etanol daun pala secara KLT-Bioautografi yang optimal sebagai

antibakteri adalah nilai Rf 0,92

B. Saran

Sebaiknya dilakukan penelitian lebih lanjut dan mendalam untuk mengisolasi senyawa

antibakteri pada sampel daun pala (Myristica fragrans Houtt.) sehingga dapat diperoleh

senyawa tunggal yang berefek antibakteri.

32
 DAFTAR PUSTAKA

Agoez Azwar. 2010. Tanaman Obat Indonesia. Jakarta: Salemba Medika

Ansel, H.C., 1989, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, Edisi 4, diterjemahkan dari
Bahasa Inggris oleh Farida Ibrahim, Universitas Indonesia Press, Jakarta.

Arrijani, 2005, Biology and Conservation of Genus Myristica in Indonesia, Biodiversitas

6:147-151.

Brooks GF, Carroll KC, Butel JS, Morse SA, Mietzner TA., 2012, Mikrobiologi
Kedokteran Jawetz, Melnick & Adelberg. Edisi ke-25. Jakarta: EGC;
h.194-211.

Ditjen POM., 1986, Sediaan Galenik, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.

Ditjen POM., 1987, Farmakope Indonesia Edisi III, Departemen Kesehatan RI, Jakarta.

Djide, N. dan Sartini, 2008, Analisis Mikrobiologi Farmasi, Universitas Hasanuddin,

Makassar.

Drazat, 2007, Meraup Laba dari Pala, PT Agromedia Pustaka, Bogor, Indonesia.

Garrity, M.G., 2004, Taxonomic Outline of the Prolcargotes Bergeys Marvel of

Systemic Bacteriology, Second Edition, New York, Amerika Serikat.

Hidayat S., 2005, Ramuan Tradisional Ala 12 Etnis Indonesia. Edisi ke-1. Jakarta: PPS; .
h. 12-13.

Muktiningsih SR, Muhammad HS, Harsana IW, Budhi M, Panjaitan P., 2010 Review
Tanaman Obat yang Digunakan Oleh Pengobatan Tradisional di Sumatera
Utara, Sulawesi Selatan, Bali, dan Sumatera Selatan. Media Litbang
Kesehatan; 6:25-36.

Mulyati, Endah Sri., 2009. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat Daun
Ceremai (Phyllanthus acidus (L.) Skeels) Terhadap Staphylococcus aureus
Dan Escherichia coli Dan Bioautografinya. Surakarta: Fakultas farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta

Mycek, M,J., 2001, Farmakologi Ulasan Bergambar, Cetakan 1, terjemahan Azwar

Agoes, Widya Medika, Jakarta.

Nurd JN, Mulyono E, Risfaher., 2007. Teknologi Pengolahan Pala. Badan Penelitian
Pertanianp. 4-12
Nurhasanah., 2014. Antimicrobal Activity Of Nut- meg (Myristica fragrans) Fruit
Methanol Extract Againts Growth Staphylococcus aureus dan Escherichia
coli. Skripsi. FKIP Program Studi Pendidikan Biologi Universitas Khairun

Pelczar, M.J. & Chan, E.C.S., 1988, Dasar-dasar mikrobiologi, edisi ke 1, Universitas
Indonesia Press, Jakarta.

Pertiwi, N., 2010, ‘Uji Aktivitas Antibakteri dan Mekanisme Penghambatan Ekstrak Air
Campuran Daun (Piper betle L.) dan Kaput Sirih (Ca(OH)2 terhadap
beberapa Bakteri uji’, Skripsi, S.farm., Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah, Jakarta.

Poeloengan, M., & Praptiwi, P., 2010. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Buah
Manggis (Garcinia mangostana Linn). Media Peneli- tian dan
Pengembangan Kesehatan, 20(2), 65-69.

Pratiwi, S, T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, Erlangga, Jakarta.

Putra WS. 2015. Kitab Herbal Nusantara. Jakarta: Katahati. P. 295-99

Rachmi W, Zanuri A, Yuharmen., 2014, Perbandingan Isolasi Minyak Atsiri Biji Pala
Cara Hidrodistilasi dan konvensional serta uji akitivitas
antibakteri dan antioksidan. JOM FMIPA.;1:335-342.

Rismunandar, 1992, Budidaya dan Tataniaga Pala, Penerbit Swadaya, Jakarta, Indonesia.

Sastroamidjojo, H., 1985, Kromatografi, Edisi II, Liberti, Yogyakarta.

Sastroamidjojo, H., 1991, Kromatografi, edisi 2, Yogyakarta, Indonesia. Stahl, E.,

1985, Analisis Obat Secara kromatografi dan Mikroskopi, diterjemahkan
dari Bahasa Inggris oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro, ITB
Press, Bandung.

Shan, B., Cai, Y. Z., Brooks, J. D., & Corke, H., 2007. The in vitro antibacterial activity
of dietary spice and medicinal herb extracts. Interna- tional Journal of food
microbiology, 117(1), 112-119.

Soedarto, 2015. Mikrobiologi Kedokteran. Edisi ke-1. Jakarta: Sagung Seto; h.194-221.

Sri, A.H., 2015. Mikrobiologi Kesehatan. Yogyakarta: Penerbit Andi. Halaman 17, 125-
126, 148-150.
Sunanto, H., 1993, Budidaya Pala Komoditas Ekspor, Kanisius, Yogyakarta. Tobo, F.,
Mufidah, T., dan Mahmud, I., 2001. Buku Pegangan Laboratorium
Fitokimia I, Laboratorium Fitokimia Jurusan Farmasi FMIPA,
Universitas Hasanudin, Makassar.

Wibowo, Marlia Singgih, dkk 2008. Uji Aktivitas Infusum Bunga Rosella (Hibiscus
sabdariffa. L). STIKes BTH Tasikmalaya.
Lampiran 1. Skema kerja

Daun pala (Myristica fragrans Houtt.)

Maserasi dengan Etanol 96%

Ekstrak Etanol Residu

diuapkan

Ekstrak Etanol Kental

Uji Skrining
Aktivitas Antibakteri

Kesimpulan

Ekstrak Aktif

Pembahasan

Pemisahan Senyawa
Secara KLT

Pengamatan

Uji KLT-Bioautografi

Identifikasi Komponen

Gambar 1. Skema kerja uji aktivitas antimikroba ekstrak etanol daun pala (Myristica
fragrans Houtt)
 Tuangkan 10mL medium NA 10mg Ekstrak Daun Pala
dalam cawan petri (Myristica fragrans Houtt.)

Tambahkan 1 mL Suspensi Dilarutkan dengan

bakteri 0,2mL DMSO

Dimasukkan Paper Disk

Homogenkan dan biarkan
selama 15 menit
memadat

Medium NA + Suspensi Bakteri +

Disk yang mengandung Ekstrak

Inkubasi 1 x 24 jam

Diamati

Kesimpulan

Gambar 2. Skema kerja uji skrining aktivitas antibakteri

 Ekstrak Etanol Daun Pala
(Myristica fragrans Houtt.)

Ditotolkan pada lempeng KLT

Dielusi

n-heksan : etil asetat (4:1)

Diamati pada lampu UV

254 nm dan 366 nm

secara aseptis ditempelkan lempeng KLT

selama
30 menit diatas medium

Medium NA + Suspensi Bakteri

Diinkubasi 1 x 24 jam

Zona Hambat

Diamati dan diukur

Data

Bandingkan dengan
kromatogram hasil
pengujian KLT

Kesimpulan

Gambar 3. Skema kerja pengujian secara KLT-Bioautografi

 Lempeng KLT

Disemprot

AlCl3 FeCl3 Toluena : Etil Asetat H2SO4

Amati

Pembahasan

Kesimpulan

Keterangan:
AlCl3 : Aluminium Klorida
FeCl3 : Feri Klorida
H2SO4 : Asam Sulfat

Gambar 4. Skema kerja Identifikasi Komponen Kimia

Lampiran 2. Hasil pengujian skrining

Gambar 5. hasil pengujian skrining ekstrak etanol daun pala (Myristica fragrans Houtt.)
pada bakteri uji

Keterangan :

EC : Escherichia coli

SA : Staphylococcus aureus
Lampiran 3. Profil Kromatogram

0,92
0,78
0, 64

A B C

Gambar 6. Foto profil kromatogram ekstrak etanol daun pala (Myristica

fragrans Houtt.)

Keterangan :

A : Bercak yang nampak pada penampak bercak lampu UV 254mm

B : Bercak yang nampak pada penampak bercak lampu UV 366mm

C : Bercak yang nampak pada penampak bercak H2SO4 10%

Lampiran 4. Hasil pengujian KLT-Bioautografi

Gambar 7. Foto hasil pengujian KLT-Bioutografi ekstrak etanol daun Pala (Myristica
fragrans Houtt.) terhadap bakteri Eschercia coli

Bercak aktif

Gambar 8. Foto hasil pengujian KLT-Bioutografi ekstrak etanol daun Pala (Myristica
fragrans Houtt.) terhadap bakteri Staphylococcus aureus
 Lampiran 5. Hasil identifikasi komponen kimia

Gambar 9. Foto hasil identifikasi komponen kimia dari kromatogram ekstrak etanol daun
pala (Myristica fragrans Houtt.) menggunakan penampak bercak H2SO4 10%
Lampiran 6. Foto tumbuhan pala

Gambar 10. Foto tumbuhan pala (Myristica fragrans Houtt.)

Gambar 11. Foto daun pala (Myristica fragrans Houtt.)