PROPOSAL PENELITIAN

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n-HEKSAN, ETIL ASETAT

DAN AIR DARI DAUN SIRIH CINA (Peperomia pellucida L.)
TERHADAP BAKTERI Propionibacterium acnes
DAN Staphylococcus aureus

KALSUM YARHAM B.
NIM : F201801024

PROGRAM STUDI S-1 FARMASI

FAKULTAS SAINS DAN TEKOLOGI
UNIVERSITAS MANDALA WALUYA
2022
 LEMBAR PERSETUJUAN PROPOSAL

Proposal ini telah kami setujui untuk diajukan pada Seminar Proposal Penelitian Program

Studi Farmasi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Manda Waluya, dalam rangka

penyempurnaan penulisan.

Kendari, April 2022

Tim Pembimbing

Pembimbing I Pembimbing II

apt. Jastria Pusmarani, S.Farm,.M.Sc Sugireng, S.Si.,M.Si

NIDN : 09 2007 9001 NIDN : 09 2408 9202

Mengetahui,

Ketua Program Studi Farmasi

apt. Wa Ode Yuliastri., S.Farm., M.Si

NIDN : 09 2007 8202
 KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah

memberikan Rahmat dan Karunia-Nya sehingga Penulis dapat menyelesaikan proposal

yang berjudul “Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi n-Heksan, Etil Asetat dan Air dari

Daun Sirih Cina (Peperomia Pellucida L.) Terhadap Bakteri Propionibacterium acnes

Dan Staphylococcus aureus,” guna memenuhi salah satu persyaratan untuk menyelesaikan

pendidikan pada Program Studi Farmasi di Universitas Mandala Waluya.

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa penyusunan proposal ini masih jauh dari kata

sempurnah oleh karna itu saran dan kritik dari semua pihak yang sifatnya membangun

untuk meningkatkan mutu dari penulisan proposal ini sangat diharapkan oleh penulis.

Pada kesempatan ini penulis tak lupa menghaturkan rasa terimakasih yang sebesar

besarnya kepada Ibu apt. Jastria Pusmarani, S.Farm,.M.Sc selaku Pembimbing I dan

kepada Ibu Sugireng, S.Si.,M.Si selaku pembimbing II atas semua waktu, tenaga

dan pikiran yang telah diberikannya dalam membimbing, mengarahkan, memberi saran

maupun kritik sehingga proposal ini menjadi lebih baik.

Tak lupa pula penulis haturkan rasa terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :

1. Ketua Yayasan Mandala Waluya Kendari, bapak Tasman., S.KM., M.Kes.

2. Rektor Universitas Mandala Waluya Kendari, ibu Dr. PH. Hj. Tasnim., M.P.H.

3. Para Ketua Lembaga (LPPM, LPJM) Universitas Mandala Waluya Kendari, bapak La

Djabo B., S.KM., M.Kes

4. Ketua Prodi Farmasi Universitas Mandala Waluya Kendari, Ibu apt. Wa Ode Yuliastri.,

S.Farm., M.Si.
5. Para Tim Penguji masing-masing : Ibu Nur Hatidjah Awaliyah H, S.Farm.,M.Farm

selaku penguji I, Ibu apt. Nur Helina Natsir, S.Farm.,M.PharmSci selaku penguji II,

dan Ibu Apt. Dian Rahmaniar, S.Farm.,M.KM selaku penguji III.

6. Seluruh dosen dan staf/karyawan Universitas Mandala Waluya Kendari yang telah

banyak membantu penulis semasa pendidikan.

7. Kedua orang tua tercinta dan terkasih yang telah memberikan dukungan, kasih sayang

serta motivasi dan doa yang tak henti-hentinya.

8. Kepada kakak dan adikku Aryanti Yarham B. dan Ismal Yarham B. yang telah

memberikan dukungan, kasih sayang serta motivasi.

9. Kepada seluruh kelurga yang telah memberikan dukungan, kasih sayang serta motivasi.

10. Sahabat seperjuangan saya “GG Squad” Sitti Nursalimah Bachmid, Annisa Nurul

Insani, Nur Iim Harfiah Mudmainnah, Eka Safria, Cantika Putri Hatriyani, Nindi

Novrianti Kadarul dan Nilu Firdayanti. Terimakasih telah menjadi sahabat terbaik

selama menempuh perkuliahan dan mengajarkan banyak hal. Pengalaman yang luar

biasa bersama kalian akan jadi moment yang tidak akan terlupakan dan sangat

dirindukan. Semoga persahabatan kita akan terus berlanjut hingga ke Jannah.

11. Seluruh teman–teman khususnya Program Studi Farmasi yang telah memberikan

bantuan dan motivasi kepada Penulis hingga selesainya proposal ini.

Demikian proposal ini semoga dapat bermanfaat bagi semua pihak dan terutama

untuk Penulis dalam menyelesaikan pendidikan di Universitas Mandala Waluya Kendari

Kendari, April 2022

Penulis
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL........................................................................................................................I
LEMBAR PERSETUJUAN PROPOSAL.....................................................................................ii
KATA PENGANTAR....................................................................................................................iii
DAFTAR ISI....................................................................................................................................v
DAFTAR TABEL..........................................................................................................................vii
DAFTAR GAMBAR.....................................................................................................................viii
DAFTAR ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN.......................................................................ix
BAB I PENDAHULUAN................................................................................................................1
A. Latar Belakang......................................................................................................................1
B. Rumusan Masalah.................................................................................................................3
C. Tujuan...................................................................................................................................3
D. Manfaat.................................................................................................................................4
E. Kebaruan Penelitian...............................................................................................................5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA.....................................................................................................7
A. Tinjauan Umum Variabel Terikat..........................................................................................7
B. Tinjauan Umum Variabel Bebas..........................................................................................17
C. Kajian Empiris.....................................................................................................................21
BAB III KERANGKA KONSEP PENELITIAN........................................................................23
A. Dasar Pikir Penelitian..........................................................................................................23
B. Bagan Kerangka Konsep Penelitian.....................................................................................24
C. Variabel Penelitian..............................................................................................................24
D. Definisi Operasional dan Kriteria Obyektif.........................................................................25
E. Hipotesis penelitian.............................................................................................................26
BAB IV METODE PENELITIAN...............................................................................................27
A. Jenis Penelitian dan Desain Penelitian.................................................................................27
B. Lokasi dan Waktu Penelitian...............................................................................................28
C. Populasi dan Sampel............................................................................................................28
D. Alat dan Bahan....................................................................................................................28
E. Prosedur Kerja.....................................................................................................................28
F. Pengolahan dan Analisi Data...............................................................................................32
 G. Etika Penelitian....................................................................................................................32
H. Waktu Pelaksanaan..............................................................................................................33
DAFTAR PUSTAKA....................................................................................................................35
 DAFTAR TABEL

Tabel 1. Kebaruan Penelitian..............................................................................................5

Tabel 2. Kriteria Kekuatan Daya Hambat Antibakteri.......................................................13

Tabel 3. Waktu Pelaksanaan...............................................................................................33

 DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Propionibacterium acnes.................................................................................8

Gambar 2. Staphylococcus aureus.....................................................................................10

Gambar 3. Tanaman Daun Sirih Cina (Peperomia Pellucida L.)......................................18

Gambar 4. Bagan Kerangka Konsep Penelitian.................................................................24

Gambar 5. Desain Penelitian..............................................................................................27

 DAFTAR ARTI LAMBANG DAN SINGKATAN

No. Singkatan Arti

1. ANOVA Analysis of Variance
2. DMSO Dimethyl Sulfoxide
3. Cm Centimeter
4. G Gram
6. KBM Kadar Bunuh Minimum
7. KHM Kadar Hambat Minimum
8. LSD Least Signifficance Differences
9. MBC Minimum Bactericidal Concentration
10. Mg Miligram
11. Ml Mililiter
12. NA Nutrient Agar
13. °C Dejata celcius
14. % Persen
15. < Lebih kecil
16. > Lebih besar
17. ± Kurang lebih
18. µI Microliter
 BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Penyakit kulit merupakan suatu penyakit yang menyerang pada permukaan tubuh,

dan disebabkan oleh berbagai macam penyebab yang paling umum dan menginfeksi

segala macam usia. Sebagian pengobatan penyakit kulit membutuhkan waktu yang

lama untuk menyebabkan efek. Beberapa makhluk hidup dapat menyebabkan penyakit

kulit, seperti bakteri, virus, maupun jamur. Bakteri, virus dan jamur menginfeksi kulit

sangat umum terjadi dan dapat merusak kulit tetapi tidak pernah sampai mematikan.

Jerawat atau Acne vulgaris merupakan salah satu penyakit kulit yang banyak dijumpai

secara global pada remaja dan dewasa muda (Indarto et al., 2019).

Jerawat atau acne yaitu penyakit kulit yang terjadi ketika pori-pori kulit tersumbat

sehingga menyebabkan benjolan yang berisi nanah sampai terjadi inflamasi. Salah satu

penyebab jerawat yaitu karena infeksi bakteri. Propionibacterium acnes adalah salah

satu bakteri penyebab jerawat yang termasuk kelompok Corynebacteria (Rusli et al.,

2016). Jumlah penderita jerawat di Indonesia kian meningkat, mulai dari tahun 2006

sebanyak 60%, tahun 2007 sebanyak 80%, dan tahun 2009 sebanyak 90%. Jumlah

penderita jerawat di Indonesia berkisar 80-85% pada remaja dengan puncak usia

antara 16-19 tahun, 12% pada usia lebih dari 25 tahun dan 3% pada usia antara 35-44

tahun (Afriyanti, 2015). Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes

merupakan bakteri komensal di kulit yang dapat bersifat oportunis. Bakteri-bakteri

tersebut dapat menyebabkan infeksi kulit seperti bisul, nanah dan jerawat (Nakase et

al,, 2014; Chessa et al., 2015).

Propionibacterium acnes merupakan salah satu bakteri gram positif dan microbiota

yang sering dijumpai pada kulit wajah, kulit kepala yang memiliki banyak kelenjar
sebasea (Fitriani et al., 2018). Bakteri utama penyebab Acne vulgaris adalah

Propionibacterium acnes dimana pada masa pubertas terjadi peningkatan aktivitas

androgen memicu pertumbuhan kelenjar minyak sebaseous dan peningkatan produksi

sebum (Armadany & Pratiwi, 2018).

Kini masyarakat telah banyak mengenal pengobatan terhadap jerawat salah satunya

dengan menggunakan antibiotik (Hidayah, 2016). Akibat dari penggunaan antibiotik

dalam jangka waktu yang lama selain menyebabkan resistensi bakteri juga biaya

pengobatan yang cukup mahal, sehingga mendorong pengembangan sumber obat dari

bahan alam yang memiliki efek yang sama dengan obat antibakteri sintetik (Afifi dan

Erlin, 2017).

Salah satu tanaman yang berpotensi sebagai antibakteri terhadap terhadap

pertumbuhan bakteri penyebab jerawat adalah daun sirih cina (Peperomia pellucida

L.) (Mayefis et al., 2020). Ekstrak daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) diketahui

mengandung senyawa kimia golongan glikosida, falavonoid, tanin dan

steroid/triterpenoid (Utami et al., 2013). Senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri

terdiri dari flavonoid dan tanin. Flavonoid memiliki kecenderungan mengikat protein

sehingga dapat mengganggu proses metabolisme bakteri (Zulkarnain et al., 2021).

Pada konsentrasi rendah, tanin berfungsi sebagai bakteriostatik, sedangkan pada

konsentrasi tinggi, tanin berfungsi sebagai antimikroba dengan cara mengkoagulasi

protoplasma bakteri sehingga terbentuk ikatan yang stabil dengan protein bakteri

(Meilina & Hasanah, 2018).

Berdasarkan hasil penelitian terdahulu yang telah dilakukan mengatakan bahwa

diameter zona bening ekstrak etanol daun suruhan (Peperomia pellucida L.) terhadap

bakteri propionobacterium acnes pada konsentrasi 25%, 50%, 75% dan 100% yaitu

sebesar 6,65 mm; 8,2 mm; 13,7 mm dan 17,15 mm (Putrajaya et al., 2019). Dan dari
 hasil penelitian tentang uji efektivitas rebusan daun suruhan (Peperomia pellucida)

terhadap daya hambat pertumbuhan bakteri Sthaphylococcus aureus diketahui, bahwa

rebusan daun suruhan (Peperomia pellucida) mampu menghambat pertumbuhan

bakteri Sthaphylococcus aureus pada konsentrasi 60% – 10% (Fatmalia & Efi, 2018).

Berdasarkan latar belakang diatas dan kajian literatur yang telah dilakukan peneliti

tertarik untuk melakukan penelitian yang berjudul ”Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi n-

Heksan, Etil Asetat dan Air dari Daun Sirih Cina (Peperomia Pellucida L.) terhadap

Bakteri Propionibacterium acnes dan Sthaphylococcus aureus”. Pada penelitian ini

peneliti menggunakan fraksi karena fraksi memiliki kelebihan dibandingkan ekstrak

karena pada fraksi akan terkandung jumlah senyawa yang lebih sedikit sehingga dapat

dioptimalkan senyawa yang diharapkan memberikan efek (Winarsih et al., 2019).

B. Rumusan Masalah

1. Apakah fraksi n-Heksan, etil asetat dan air dari daun sirih cina (Peperomia

pellucida L.) memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Propionibacterium

acnes dan Sthaphylococcus aureus?

2. Pada fraksi yang mana memiliki aktivitas atibakteri paling efektif terhadap

Propionibacterium acnes dan Sthaphylococcus aureus diantara fraksi n-Heksan,

etil asetat dan air dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.)?

C. Tujuan

1. Tujuan Umum

Untuk mengetahui fraksi mana yang memiliki aktivitas atibakteri paling

efektif terhadap Propionibacterium acnes dan Sthaphylococcus aureus diantara

fraksi n-Heksan, etil asetat dan air dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.)

2. Tujuan Khusus
 a) Untuk mengetahui aktivitas antibakteri fraksi n-Heksan, etil asetat, dan air

dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) terhadap bakteri

Propionibacterium acnes dan Sthaphylococcus aureus

b) Untuk mengetahui fraksi mana diantara fraksi n-Heksan, etil asetat dan air

dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) yang memiliki aktivitas

antibakteri paling efektif terhadap bakteri Propionibacterium acnes dan

Sthaphylococcus aureus

D. Manfaat

1. Manfaat Imiah

a. Dapat memberikan data ilmiah mengenai aktivitas antibakteri daun sirih cina

(Peperomia pellucida L.) terhadap bakteri Propionibacterium acnes dan

Sthaphylococcus aurues

b. Dapat dijadikan sumber acuan untuk penelitian selanjutnya dalam

pengembangan ilmu pengetahuan dan teknologi tentang pamanfaatan bahan

alam atau pembuatan formulasi sediaan

3. Manfaat Institusi

a. Penelitian ini dapat digunakan untuk tambahan referensi ilmiah bagi Progrm

Studi Farmasi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Mandala Waluya

b. Dapat digunakan untuk tambahan referensi bagi mahasiswa tingkat akhir

yang hendak melakukan penelitian selanjutnya dengan tema yang sama.

4. Manfaat Praktis

a. Peneliti dapat mengetahui aktivitas antibakteri fraksi n-Heksan, etil asetat,

dan air dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) terhadap bakteri

Propionibacterium acnes dan Sthaphylococcus aureus

 b. Dapat menambah wawasan dan pengetahuan peneliti mengenai aktivitas

antibakteri daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) terhadap bakteri

Propionibacterium acnes dan Sthaphylococcus aureus

E. Kebaruan Penelitian

Berdasarkan kajian literatur penelitian tentang uji aktivitas antibakteri fraksi n-

Heksan, etil asetat, dan air dari ekstrak daun sirih cina (Peperomia pellucida L.)

terhadap bakteri Propionabacterium acnes dan Sthaphylococcus aureus, belum

ditemukan penelitian yang sama sebelumnya. Kebaruan dari penelitian ini dapat

dilihat pada tabel 1.

Tabel 1. Kebaruan Penelitian

No Peneliti Judul Persamaan Perbedaan
.
1. Destik & Isna, 2017 Uji Aktivitas Sampel Metode
Antibakteri pegujian,
Ekstrak Daun bakteri uji,
Suruhan serta peneliti
(Peperomia sebelumnya
pellucida L. menggunakan
Kunth) Terhadap ekstrak etanol
against Klebsiella sedangkan
Pneumoniae peneliti
menggunakan
fraksi
2. Nurbani & Efi, 2018 Uji Efektivitas Samapel dan Metode
Rebusan Daun bakteri uji pengujian,
Suruhan dan peneliti
(Peperomia sebelumnya
pellucida) menggunakan
Terhadap air rebusan
Pertumbuhan sedangkan
Bakteri peneliti
Staphylococcus menggunakan
aureus fraksi
3. Isna & Destik, 2019 Aktivitas Sampel dan Metode
Antibakteri bakteri uji pengujian,
Ekstrak Etanol dan peneliti
Daun Suruhan sebelumnya
(Peperomia menggunakan
pellucida L. ekstrak etanol
 Kunth) Terhadap sedangkan
Bakteri peneliti
Staphylococcus menggunakan
aureus fraksi
4. Yuliani et al., 2022 Efektivitas Ekstrak Sampel, Peneliti
Daun Sirih cina bakteri uji, sebelumnya
(Peperomia dan metode menggunakan
pellucida) pengujian ekstrak etanol
Terhadap sedangkan
Pertumbuhan peneliti
Bakteri menggunakan
Propionabacterium fraksi
acnes dan
Tinjauannya
Menurut
Pandangan Islam
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

A. Tinjauan Umum Variabel Terikat

1. Tinjauan Bakteri Uji

Bakteri adalah mikroorganisme bersel tunggal yang tidak terlihat oleh

mata, tetapi dengan bantuan mikroskop, mikroorganisme tersebut akan nampak.

Ukuran bakteri berkisar anatara panjang 0,5 sampai 10 µ dan lebar 0,5 sampai 2,5

µ tergantung dari jenisnya (µ = 1 mikron = 0,001 mm). Walaupun terdapat beribu

jenis bakteri, tetapi hanya beberapa karakteristik bentuk sel yang dikemukakan

yaitu: Bentuk bulat atau cocci (tunggal = coccus ), bentuk batang atau bacilli

(tunggal = bacillus), bentuk spiral atau spirilli (tunggal = spirillum), bentuk koma

atau vibrios (tunggal = vibrio). Sel-sel ini dapat dijumpai dalam keadaan tunggal,

berpasangan, tetrad, kelompok kecil, gerombolan atau rantai (Buckle et al., 2009).

Bakteri memiliki dinding sel yang berfungsi untuk menentukan bentuk sel.

Asam teikhoik dan lipopolisakarida merupakan komponen dari dinding sel yang

berfungsi untuk melindungi sel dari lisis enzim. Kekakuan dan kekuatan dinding

sel itu terutama disebabkan oleh serat-serat yang kuat yang umumnya tersusun dari

peptidoglikan (Irianto, 2006). Susunan kimiawi dan struktur peptidoglikan khas

untuk setiap bakteri, sehingga perbedaan pada dinding sel inilah yang

dimanfaatkan dalam mengelompokkan bakteri berdasarkan teknik pewarnaan

gram. Berdasarkan teknik tersebut bakteri dibagi dua kelompok, yaitu bakteri gram

positif dan bakteri gram negatif (Pelczar dan Chan, 2008).

2. Uraian Bakteri Propionibacterium acnes

a. Klasifikasi Propionibacterium acnes

Divisi : Protophyta
 Kelas : Schizomycetes

Bangsa : Eubacteriales

Suku : Propionibacteriaceae

Marga : Propionibacterium

Jenis : Propionibacterium acnes (Irianto, 2006).

b. Sifar dan Morfologi Propionibacterium acnes

Propionibacterium acnes adalah termasuk gram-positif berbentuk batang,

tidak berspora. Propionibacterium acnes pada umumnya tumbuh sebagai

anaerob obligat. Beberapa jenis adalah aerotoleran, tetapi tetap menunjukkan

pertumbuhan lebih baik sebagai anaerob. Bakteri ini mempunyai kemampuan

untuk menghasilkan asam propionat, sebagaimana ia mendapatkan namanya

(Hidayah, 2016). Bakteri Propionibacterium acnes menyebabkan acne

dengan menghasilkan lipase yang mengubah asam lemak tak jenuh menjadi

asam lemak jenuh yang menyebabkan sebum menjadi padat. Jika produksi

sebum bertambah, bakteri Propionibacterium acnes juga akan bertambah

banyak yang keluar dari kelenjar sebasea, karena bakteri ini merupakan

pemakan lemak (Hafsari et al., 2015). Gambar bakteri Propionibacterium

acnes dapat dilihat pada gambar 1.

Gambar 1. Propionibacterium acnes (Bruggeman, 2010 )

3. Uraian Bakteri Staphylococcus aureus

a. Klasifikasi Bakteri Staphylococcus aureus

Phylum : Firmicutes

Class : Bacilli

Ordo : Bacillales

Family : Streptococccaceae

Genus : Staphylococcus

Species : Staphylococcus aureus (Soedarto, 2014).

b. Sifat dan Morfologi Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus adalah bakteri berbentuk kokus berukuran garis

tengah sekitar 1 µm yang pada pewarnaan bersifat gram-positif, jika dilihat

dibawah mikroskop berbentuk seperti kelompok anggur. Staphylococcus

aureus tidak aktif bergerak dan tidak membentuk spora. Salah satu spesies

dari Staphylococcus yang menghasilkan pigmen warna kuning emas adalah

aureus. Bakteri Staphylococcus aureus termasuk bakteri patogen yang

menimbulkan kelainan dan infeksi pada kulit (Radji, 2013). Staphylococcus

aureus merupakan flora normal pada tubuh manusia yang terdapat pada kulit,

konjungtiva, hidung, faring, mulut, usus bagian bawah, uretra anterior dan

vagina. Staphylococcus aureus dapat menyebabkan pneumonia, meningitis,

emfisema, infeksi tulang dan sendi maupun endokarditis. Staphylococcus

aureus berperan pada banyak infeksi kulit misalnya acne dan impetigo

(Soedarto, 2014). Gambar bakteri Staphylococcus aureus dapat dilihat pada

gambar 2.
 Gambar 2. Staphylococcus aureus (Gnanamani, 2017)

4. Antibakteri

Antibakteri dapat diartikan sebagai suatu zat yang mampu mengganggu

pertumbuhan maupun mengganggu proses metabolisme bakteri sehingga bakteri yang

merugikan akan perlahan mati. Bahan maupun senyawa yang khusus digunakan untuk

kelompok bakteri dapat didefiniskan sebagai antibakteri. Aktivitas antibakteri terbagi

menjadi 2 yakni aktivitas bakteriostatik dan aktivitas bakterisidal. Aktivitas

bakteriostatik merupakan aktivitas yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri

tetapi tidak membunuh bakteri patogen, sedangkan aktivitas bakterisidal merupakan

aktivitas antibakteri yang mampu membunuh bakteri patogen dengan kisaran yang

luas (Dewi, 2010).

Menurut (Hidayahti, 2010) mekanisme kerjanya antibakteri dibedakan menjadi :

a. Merusak Dinding Sel

Dinding sel merupakan lapisan kaku yang berada diluar. Fungsi dari dinding

sel adalah sebagai penahan sel dan pertahanan dari bentuk sel. Peptidoglikan

merupakan lapisan yang disusun pada dinding sel bakteri, peptidoglikan tersebut

termasuk dalam polimer yang komplek dan dirangkai oleh asam n-asetilmuramat

dan asam n-asetil glukosamin yang disusun bergantian.

Dinding sel bakteri yang kuat dan kaku merupakan sifat dari peptidoglikan

sehingga tekanan osmotik mampu ditahan meskipun dalam keadaan sel kaku.
 Struktur dari dinding sel yang mengalami kerusakan dilakukan seperti

pembentukan yang dihambat maupun perubahan saat sesudah pembentukan.

Pembentukan ikatan glikosida terhambat jika bahan antibakteri berada di

konsentrasi yang rendah sehingga dinding sel yang terbentuk akan terganggu,

sedangkan bahan antibakteri berada di konsentrasi yang tinggi mampu

menyebabkan ikatan glikosida terganggu dan dinding sel yang terbentuk akan

terhenti.

Karakteristik bakteri dapat ditentukan dari dinding sel bakteri yang memiliki

fungsi untuk perlindungan sel bagian dalam. Pada bakteri gram positif memiliki

dinding sel yang disusun oleh peptidoglikan yang berlapis tebal, dengan lapisan

teichoic acid yang mengelilingi serta pada spesies tertentu memiliki lapisan

polisakarida. Sedangkan bakteri gram negatif dinding sel disusun oleh

peptidoglikan yang berlapis tipis, dengan lapisan lipopolisakarida, lipoprotein,

fosfolipid serta protein yang mengelilingi. Jadi sel akan megalami kematian dan sel

menjadi lisis dikarenakan sintesis komponen mengalami gangguan. Sehingga

aktivitas atau sintesis enzim terhambat oleh antibiotik yang telah merusak dinding

sel, dan viabilitas akan hilang serta terjadi pelisisan sel.

b. Mengubah Protein Asam Nukleat

Molekul-molekul protein dan asam nukleat sangat mempengaruhi

kelangsungan hidup sel. Hal ini dapat diartikan kerusakan total pada sel terjadi

pada saat pembentukan atau fungsi dari zat tersebut mengalami gangguan.

Sehingga bahan-bahan antibakteri dapat menyebabkan protein mengalami

denaturasi dan kerusakan sel pada asam nukleat yang tidak dapat lebih lanjut

diperbaiki.

c. Mengubah Permeabilitas Sel

 Membran sel disusun oleh protein dan fosfolipid yang mempunyai

permeabilitas selektif dikarenakan sitoplasma dibatasi oleh selaput. Fungsi dari

membran sitoplasma sendiri untuk pengaturan masuk atau keluarnya bahan tertentu

didalam sel. Protein pembawa atau disebut juga protein carrier dalam membran sel

kemungkinan terdapat saat proses pengangkutan diperlukannya zat-zat kedalam

atau keluar sel, sedangkan enzim protein dalam membran sitoplasma memiliki

fungsi untuk sintesis petidoglikan membran komponen luar. Adanya bahan

antibakteri yang mengganggu fungsi dari membran sel, maka akan menyebabkan

terjadi perubahan pada permeabilitas dari sel bakteri, sehingga sel akan mati

maupun sel-sel yang sedang tumbuh akan terhambat.

d. Menghambat Kerja Enzim

Kelangsungan proses metabolisme didalam sel dapat dibantu dengan adanya

enzim protein, banyaknya zat kimia diketahui mampu menyebabkan gangguan pada

reaksi biokimia misal pada air raksa, golongan tembaga, logam berat serta

senyawa-senyawa logam berat yang lain, pada konsentrasi rendah efektif digunakan

sebagai bahan antibakteri. Sehingga proses metabolisme dan aktifitas sel bakteri

akan terganggu dikarenakan terhambatnya kerja enzim. Hal inilah yang

menyebabkan sel bakteri hancur dan mati.

e. Menghambat Sintesis DNA, RNA, dan Protein

DNA, RNA, dan protein memegang peran penting dalam proses kehidupan

normal sel bakteri. Jika terjadi gangguan pada DNA, RNA, dan protein maka dapat

menyebabkan gangguan pada pembentukan atau fungsi pada zat tersebut sehingga

sel mengalami kerusak dan kehidupan sel bakteri akan terganggu.

5. Metode Penentuan Aktivitas Antibakteri

 Metode untuk melakukan uji aktivitas antibakteri dibagi menjadi dua yakni

metode pengenceran dan metode difusi. Uji difusi disk atau disebut juga disc

diffusion dilakukan dengan pengukuran pada diameter clear zone atau zona

hambat yang terbentuk. Zona hambat yang terbentuk menunjukkan jika terdapat

respon hambatan pada pertumbuhan bakteri oleh senyawa antibakteri yang

terkandung didalam ekstrak (Utami, 2017).

Zona hambat atau area jernih yang berada disekitar paper disk menunjukkan

bahwa tidak ada pertumbuhan bakteri dan menandakan jika bakteri tersebut

sensitif terhadap antibakteri, namun bakteri akan tetap terlihat jika bakteri tersebut

telah resisten terhadap antibakteri (Hidayahti, 2010). Adapun kriteria kekuatan

daya hambat antibakteri dapat dilihat pada tabel 2.

Tabel 2. Kriteria Kekuatan Daya Hambat Antibakteri (Utami, 2017).

Luas Zona Hambat Kekuatan

Zona hambat > 20 mm Daya hambat sangat kuat
Zona hambat 10-20 mm Daya hambat kuat
Zona hambat 5-10 mm Daya hambat sedang
Zona hambat 0-5 mm Daya hambat lemah
a. Metode difusi

1) Metode disc diffusion (tes Kirby & Bauer)

Metode ini untuk menentukan aktivitas agen antimikroba. Piringan yang

berisi agen antimikroba diletakkan pada media Agar yang telah ditanami

mikroorganisme yang akan berdifusi pada media Agar tersebut. Area

jernih mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan mikrorganisme

oleh agen antimikroba pada permukaan media agar (Rahayu, 2019).

2) E-test

Metode ini untuk mengestimasi KHM (kadar hambat minimum)

yaitu konsentrasi minimal suatu agen antimikroba untuk dapat

 menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Metode ini menggunakan

strip plastik yang mengandung agen antimikroba dari kadar terendah

hingga tertinggi dan diletakkan pada permukaan media Agar yang telah

ditanami mikroorganisme. Pengamatan dilakukan pada area jernih yang

ditimbulkannya yang menunjukkan kadar agen antimikroba yang

menghambat pertumbuhan mikroorganisme pada media Agar (Rahayu,

2019).

3) Ditch-plate technique

Sampel uji berupa agen antimikroba yang diletakkan pada parit yang

dibuat dengan cara memotong media agar dalam cawan petri pada bagian

tengah secara membujur dan mikroba uji (maksimum 6 macam)

digoreskan ke arah parit yang berisi agen antimikroba (Rahayu, 2019).

4) Cup-plate technique

Metode ini serupa dengan disc diffusion, dimana dibuat sumur pada

media agar yang telah ditanami dengan mikroorganisme dan pada sumur

tersebut diberi agen antimikroba yang akan diuji (Rahayu, 2019).

5) Gradient-plate technique

Konsentrasi agen antimikroba pada media Agar secara teoritis

bervariasi dari 0 hingga maksimal. Media Agar dicairkan dan larutan uji

ditambahkan. Campuran kemudian dituang kedalam cawan petri dan

diletakkan dalam posisi miring. Nutrisi kedua selanjutnya dituang

diatasnya. Plate diinkubasi selama 24 jam untuk memungkinkan agen

antimikroba berdifusi dan permukaan media mengering. Mikroba uji

(maksimal 6 macam) digoreskan pada arah mulai dari konsentrasi tinggi

ke rendah. Hasil diperhitungkan sebagai panjang total pertumbuhan

 mikroorganisme maksimum yang mungkin dibandingkan dengan

pembanding pertumbuhan hasil goresan (Rahayu, 2019).

b. Metode dilusi

1) Metode dilusi cair/broth dilution test (serial dilution)

Metode ini mengukur MIC (minimum inhibitory concentration) atau

KHM (kadar hambat minimum) dan MBC (minimum bactericidal

concentration) atau KBM (kadar bunuh minimum). Cara yang dilakukan

adalah dengan membuat seri pengenceran agen antimiroba pada medium

cair yang ditambahkan dengan mikroba uji. Larutan uji agen antimikroba

pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan

mikroba uji ditetapkan sebagai KHM. Larutan yang ditetapkan sebagai

KHM tersebut selanjutnya di kultur ulang pada media cair tanpa

penambahan mikroba uji ataupun agen antimikroba dan diinkubasi

selama 18-24 jam. Media cair yang ditetapkan terlihat jernih setelah

diinkubasi ditetapkan sebagai KBM (Rahayu, 2019).

2) Metode dilusi padat/solid dilution test

Metode ini serupa dengan metode dilusi cair namun menggunakan

media padat (solit). Keuntungan metode ini adalah satu konsentrasi agen

antimikroba yang diuji dapat digunakan untuk menguji beberapa mikroba

uji (Rahayu, 2019).

6. Media Pertumbuhan Bakteri

Media merupakan sarana pertumbuhan yang mengandung nutrisi yang

dibutuhkan oleh mikroorganisme sebagai makanannya. Mikroorganisme dalam

pertumbuhannya membutuhkan unsur logam seperti natrium, kalium, kalsium,

 magnesium, mangan, besi, seng, tembaga, fosfor, cobalt, hidrogen, oksigen dan

sulfur (Maria et al., 2019)

Terdapat enam komponen pertama yang digunakan dalam sintesis adalah

karbohidrat, lipid, protein dan asam nukleat dan dua sisanya ada di dalam sel

sebagai kation dan memainkan berbagai peran. Pada organisme heterotrof,

kebutuhan akan faktor tumbuh sudah dapat terpenuhi oleh ekstrak daging

(Purwaning, 2017). Salah satu media yang menggunakan ekstrak daging dan

protein sebagai sumber glukosa dan asam amino serta paling umum digunakan

untuk menumbuhkan sebagian besar bakteri adalah media NA (nutrient agar)

(Maria et al., 2019).

Media NA (nutrient agar) merupakan media yang berbentuk serbuk berwarna

putih kekuningan dan apabila setelah digunakan akan berbentuk padat karena

terdapat kandungan agar sebagai pemadatnya. Komposisi yang terpenting dalam

media ini adalah karbohidrat dan protein yang terdapat pada ekstrak daging dan

pepton sesuai dengan kebutuhan sebagian besar bakteri (Maria et al., 2019).

7. Klindamisin

Klindamisin bekerja dengan menghambat sintesis protein subunit 50s pada

ribosom bakteri, sehingga mengganggu proses pembentukan rantai peptidoglikan

bakteri. Klindamisin dapat menghambat protein bakteri, racun, enzim dan

sitokinin didalam jaringan (Ramadhan, 2015).

Klindamisin memiliki aktivitas yang tinggi terhadap berbagai bakteri

fakultatif anaerob. Organisme gram positif yang rentan terhadap klindamisin

adalah Actinomyces, Eubacterium, Lactobacillus, Peptostreptococcus,

propionibacterium dan spesies Staphylococcus, termasuk strain yang resisten

 terhadap penisilin. Obat ini memiliki aktivitas yang lemah terhadap organisme

gram negatif (Ramadhan, 2015).

B. Tinjauan Umum Variabel Bebas

1. Tinjauan Umum Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)

a. Klasifikasi Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)

Klasifikasi tanaman herba suruhan adalah sebagai berikut (Majumder et al,

2011):

Kingdom : Plantae

Subkingdom : Tracheobionta

Super divisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Subkelas : Magnoliidae

Ordo : Piperales

Famili : Piperaceae

Genus : Peperomia Ruiz & Pavon

Spesies : Peperomia pellucida L. Kunth

Sinonim : Peperomia exigua Miq.

b. Morfologi Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)

Tumbuhan herba daun sirih cina (Peperomia pellucida L. Kunth)

merupakan tanaman yang berasal dari Amerika Tropis. Tumbuh secara liar di

tempat-tempat lembab seperti pekarangan rumah. Terna semusim tumbuh

tegak dengan tinggi 20-40 cm, dan jika terlalu tinggi akan menggantung

dengan batang bulat yang mempunyai penampang 3-5 mm, bercabang, batang

dan daun banyak mengandung cairan, berwarna hijau pucat. Daun tunggal
 bertangkai dengan helaian lebar berbentuk seperti jantung, ujung runcing,

pangkal melekuk, pertulangan melengkung, tepi rata dan terletak berselang-

seling. Panjang daun 1-3 cm. Permukaan atas daun hijau pucat mengkilap,

bagian bawah berwarna lebih muda. Bunga keluar dari ujung tangkai atau

ketiak daun berbentuk majemuk tersusun dalam rangkaian berbentuk bulir

kecil-kecil dengan diameter 1 mm, berwarna hijau dengan panjang 1-6 cm

ujung runcing tersusun seperti buah lada, berwarna kecoklatan. Akar serabut,

tidak dalam (Kinho et al., 2011). Gambar dari tanaman sirih cina (Peperomia

pellucida L.) dapat dilihat pada gambar 3.

Gambar 3. Tanaman Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)

Sumber: (Mufidah, 2022)

c. Nama Daerah

Jawa : Saladaan (Sunda), ketumpang ayer (melayu), Rangu-rangu (jawa),

Gofugoroho (Temate). Nama asing : Cao hu jiao (C)

Sulawesi : Daun kaca-kaca (Makassar) (Angga, 2014).

d. Manfaat Tanaman

Secara tradisional daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) digunakan

sebagai obat abses, bisul, acne vulgaris, penyakit kulit, sakit kepala,

mengurangi nyeri pada rematik dan rematik gout (Angelina et al., 2015).
 Beberapa hasil penelitian yang telah dilakukan menunjukkan bahwa tanaman

daun sirih cina mempunyai potensi sebagai antiinflamasi, memiliki efek

antipiretik, antimikroba dan anti kanker (Tarigan et al., 2012).

e. Kandungan Senyawa

Tanaman sirih cina (Peperomia pellucida L.) memiliki kandungan senyawa

flavonoid, tanin, saponin, steroid atau triterpenoid (Lestari, 2010; Angelina et

al., 2015). Selain itu tanaman suruhan mengandung poliferol, minyak atsiri,

kalsium oksalat dan lemak (Dalimartha, 2006), serat, karbohidrat, dan protein,

mineral yang terkandung yaitu kalium, kalsium, mangan, magnesium, natrium

dan zat besi (Egwuche et al., 2011).

2. Ekstraksi

Ekstraksi merupakan metode pemisahan senyawa kimia dari jaringan

tumbuhan maupun hewan dengan menggunakan zat penyari tertentu dengan cara

memisahkan satu atau lebih komponen dari sumber komponen. Ekstraksi

bertujuan untuk menarik semua komponen yang bersifat aktif yang terdapat dalam

simplisia (Hambali et al., 2014).

3. Ekstrak

Ekstrak adalah sediaan yang dapat berupa kering, kental, dan cair, dibuat

dengan menyari simplisia nabati atau hewani menurut metode yang sesuai, yaitu

maserasi, perkolasi atau penyeduhan dengan air mendidih (Lenny, 2006).

4. Fraksi

Fraksinasi merupakan proses pemisahan antara zat cair dengan zat cair.

Fraksinasi dilakukan secara bertingkat berdasakan tingkat kepolarannya yaitu dari

non polar, semi polar dan polar. Senyawa yang memiliki sifat non polar akan larut

dalam pelarut non polar, yang semi polar akan larut dalam pelarut semi polar dan
 yang bersifat polar akan larut dalam pelarut polar (Harbone, 1987). Fraksinasi ini

umunya dilakukan dengan menggunakan metode corong pisah atau kromatografi

kolom. Corong pisah merupakan peralatan laboratorium yang di gunakan untuk

memisahkan komponen-komponen dalam campuran antara dua fase pelarut yang

memiliki masa jenis berbeda yang tidak bercampur (Haznawati, 2012).

Ekstrak yang telah dilarutkan ke dalam pelarut yang sesuai nantinya akan di

masukan ke dalam corong pisah dan dicampur dengan pelarut berdasarkan tingkat

kepolaranya setelah itu corong pisah dikocok. Setelah dikocok akan terbentuk dua

lapisan seperti pada pelarut yang memiliki massa jenis lebih tinggi akan berada di

lapisan bawah, dan yang memiliki massa jenis lebih kecil akan berada di lapisan

atas. Senyawa yang terkandung dalam ekstrak nantinya akan terpisah sesuai

dengan tingkat kepolarannya pelarut yang di gunakan. Senyawa akan tertarik oleh

pelarut yang tingkat kepolarannya sama dengan senyawa

tersebut (Haznawati, 2012).

5. Aquadest

Aquadest adalah air hasil destilasi atau penyulingan yang biasanya disebut

juga dengan air murni. Air merupakan pelarut yang bersifat universal dan mudah

menyerap atau melarutkan berbagai partikel dengan mudah dan rentan

kontaminasi. Aquadest berbentuk cairan jernih, tidak berbau, dan tidak berasa

(Santosa et al., 2008).

6. Etil Asetat

Etil asetat memiliki rumus kimia C4H8O2. Etil asetat adalah pelarut semi

polar yang mudah terbakar dan mudah menguap. Etil asetat larut dalam 15 bagian

air, dapat bercampur dengan eter, etanol, dan kloroform. Penggunaan pelarut etil
 asetat digunakan dalam ekstraksi flavonoid, alkaloid, dan polifenol (Harborne

2006).

7. n-Heksans

n-Heksan adalah pelarut non polar yang diperoleh dari hasil penyulingan

minyak tanah dari suatu campuran hidrokarbon. n-Heksan bersifat mudah

menguap, tidak berwarna, mudah terbakar, larut dalam alkohol, benzen, kloroform,

dan eter. Senyawa non polar seperti terpeneoid, triterpenoid, sterol, alkaloid, dan

fenil propanoid larut oleh pelarut n-Heksan (Robinson, 1995).

C. Kajian Empiris

Secara empiris, herba sirih cina (Peperomia pellucida L.) dapat mengobati sakit

kepala, nyeri perut, dan membantu mengatasi timbulnya jerawat. Sirih cina

(Peperomia pellucida L.) umumnya dikonsumsi dengan cara diseduh, tetapi ada juga

yang mengkonsumsinya sebagai lalapan segar (Putrajaya et al., 2019). Selain itu daun

sirih cina (Peperomia pellucida L.) dapat digunakan sebagai antibakteri hal tersebut

telah sesuai dengan penelitian sebelumnya yang mengatakan bahwa ekstrak etanol

daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) memiliki aktivitas antibakteri terhadap

Staphylococcus aureus (Isna & Destik, 2019). Penelitian lain juga mengatakan bahwa

ekstrak daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) mempunyai aktivitas antibakteri

terhadap Klebsiella pneumonia (Destik & Isna, 2017). Serta ada juga penelitian lain

yang mengatakan bahwa ekstrak daun sirih cina (Peperomia pellucida l..) memliki

aktivitas antibakteri terhadap Propionibacterium acnes (Yuliani et al., 2022). Manfaat

lain tanaman sirih cina (Peperomia pellucida l..) yaitu sebagai obat demam, obat sakit

kepala, dan sakit perut (Karomah, 2019). Tanaman sirih cina (Peperomia pellucida l..)

dapat juga mengatasi penyakit asam urat, nyeri pada rematik, luka terpukul dan luka

bakar ringan (Dandirwalu & Theopilus, 2015)

 BAB III

KERANGKA KONSEP PENELITIAN

A. Dasar Pikir Penelitian

Antibakteri adalah suatu zat yang mampu mengganggu pertumbuhan maupun

mengganggu proses metabolisme bakteri sehingga bakteri yang merugikan akan

perlahan mati (Dewi, 2010). Contoh bakteri yang merugikan yaitu Staphylococcus

aureus dan Propionibacterium acnes merupakan bakteri komensal di kulit yang dapat

bersifat oportunis. Bakteri-bakteri tersebut dapat menyebabkan infeksi kulit seperti

bisul, nanah dan jerawat (Nakase et al., 2014; Chessa et al., 2015). Dan untuk

mecegah penyakit infeksi yaitu salah satunya dengan menggunakan antibiotik

(Hidayah, 2016). Tetapi Akibat dari penggunaan antibiotik dalam jangka waktu yang

lama selain menyebabkan resistensi bakteri juga biaya pengobatan yang cukup mahal,

sehingga mendorong pengembangan sumber obat dari bahan alam yang memiliki efek

yang sama dengan obat antibakteri sintetik (Afifi dan Erlin, 2017). Salah satu tanaman

yang berpotensi sebagai antibakteri adalah daun sirih cina (Peperomia pellucida L.)

(Mayefis et al., 2020).

Ekstrak daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) diketahui mengandung senyawa

kimia golongan glikosida, falavonoid, tanin dan steroid/triterpenoid (Utami et al.,

2013). Senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri terdiri dari flavonoid dan tanin .

Flavonoid memiliki kecenderungan mengikat protein sehingga dapat mengganggu

proses metabolisme bakteri (Zulkarnain et al., 2021). Pada konsentrasi rendah, tanin

berfungsi sebagai bakteriostatik, sedangkan pada konsentrasi tinggi, tanin berfungsi

sebagai antimikroba dengan cara mengkoagulasi protoplasma bakteri sehingga

terbentuk ikatan yang stabil dengan protein bakteri (Meilina & Hasanah, 2018).
B. Bagan Kerangka Konsep Penelitian

Adapun kerangka konsep penlitian ini dapat dilihat pada gambar 4.

Fraksi n-Heksan dari Daun

Siri Cina (Peperomia
pellucida L.)

Fraksi Etil Asetat dari Daun

Sirih Cina (Peperomia
Aktivitas Antibakteri
pellucida L.)

Fraksi Air dari Daun Sirih

Cina (Peperomia pellucida
L.)

Keterangan:

: Variabel Dependen

: Variabel Independen

: Menyatakan pengaruh antara variabel independen dan

variabel dependen

Gambar 4. Bagan Kerangka Konsep Penelitian

C. Variabel Penelitian

1. Variabel terikat : Variabel terikat dalam penelitian ini yaitu aktivitas ntibakteri

terhadap bakteri

2. Variabel bebas : Variabel bebas dalam penelitian ini yaitu :

a. Fraksi n-Heksan dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.)

b. Fraksi etil asetat dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.)
 c. Fraksi air dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.)

D. Definisi Operasional dan Kriteria Obyektif

1. Definisi Operasional Variabel Dependen

a. Aktivitas Antibakteri

Aktivitas antibakteri ditandai dengan zona hambat (zona bening) yang

terbentuk disekitar cakram yang menunjukkan hambatan pertumbuhan mikroba

Kriteria objektif (Utamai, 2017) :

Zona hambat > 20 mm : Daya hambat sangat kuat

Zona hambat 10-20 mm : Daya hambat kuat

Zona hambat 5-10 mm : Daya hambat sedang

Zona hambat 0-5mm : Daya hambat lemah

2. Definisi Operasional Variabel Independen

a. Fraksi n-Heksan dari Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)

Fraksi n-Heksan dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) yaitu hasil

yang didapatkan dari fraksinasi menggunakan metode partisis cair-cair.

Kriteria Objektif : Dalam satuan gram

b. Fraksi Etil Asetat dari Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)

Fraksi etil asetat dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) yaitu hasil

yang didapatkan dari fraksinasi menggunakan metode partisis cair-cair.

Kriteria Objektif : Dalam satuan gram

c. Fraksi Air dari Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)

`Fraksi air dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) yaitu hasil yang

didapatkan dari fraksinasi menggunakan metode partisis cair-cair.

Kriteria Objektif : Dalam satuan gram

E. Hipotesis penelitian

Hipotesis penelitian ini yaitu :

1. Ha > 0,05 Ditolak

2. H0 < 0,05 Diterima

Keterangan :

Ha = Fraksi n-Heksan, etil asetat, dan air dari daun sirih cina (Peperomia pellucida

L.) tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Propionibacterium acnes

dan Staphylococcus aureus.

H0 = Fraksi n-Heksan, etil asetat, dan air dari daun sirih cina (Peperomia pellucida

L.) memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Propionibacterium acnes dan

Staphylococcus aureus.
 BAB IV

METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian dan Desain Penelitian

Jenis penelitian ini merupakan penelitian analitik dimana dalam penelitian ini

dilakukan uji statistik dengan tujuan untuk menentukan aktivitas antibakteri farksi n-

Heksan, etil asetat dan air dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) dalam

menghambat bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus aureus. Desain

penelitian ini dapat dilihat pada gambar 5.

A1

A2
DSC EEDSC FEDSC
A A3 ZH DRZH

K+

K-

Gambar 5. Desain Penelitian

Keterangan:
DSC : Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)
EEDSC : Ekstrak Etanol Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)
FEDSC : Fraksinasi Ekstrak Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)
A1 : Konsentrasi Fraksi n-Heksan Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)
75%
A 2
: Konsentrasi Fraksi Eteil Asetat Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)
75%
A3
: Konsentrasi fraksi air daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) 75%
K+
: Kontrol positif (+) Klindamisin 150 mg
K-
: Kontrol negatif (-) DMSO 10%
ZH : Zona Hambat
DRZH : Diameter Rata-rata Zona Hambat
B. Lokasi dan Waktu Penelitian

Lokasi penelitian bertempat di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia dan

Laboratorium Kimia Farmasi-Instrumentasi Farmasi Universitas Mandala Waluya

Kendari. Penelitian ini akan dilaksanakan pada bulan Mei-Juli 2022

C. Populasi dan Sampel

Populasi dalam penelitian ini adalah tanaman sirih cina (Peperomia pellucida L.)

yang diperoleh di Provinsi Sulawesi Tenggara Kabupaten Kemaraya Kecamatan

Kendari Barat. Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah daun sirih cina

(Peperomia pellucida L.).

D. Alat dan Bahan

1. Alat yang digunakan

Gelas kimia, gelas ukur, cawan petri, corong pisah, tabung reaksi, batang

pengaduk, hotplate, Rotary evaporator, labu ukur, jarum ose, inkubator, jangka

sorong, lampu spiritus, kapas, mikropipet, Laminar Air Flow (LAF), pinset, rak

tabung, timbangan analitik (Fitriyanti et al., 2020).

2. Bahan yang digunakan

Aquadest, etanol 96%, larutan NaCl 0,9%, media NA (Nutrient Agar), n-

Heksan, etil asetat, DMSO, biakan propionibacterium acnes dan biakan

Staphylococcus aureus (Fitriyanti et al., 2020).

E. Prosedur Kerja

1. Pengambilan sampel daun sirih cina

Sampel daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) diperoleh di Kabupaten

Kemaraya, Sulawesi Selatan. Pengambilan sampel dilakukan pada pagi hari

(08.00-10.00), daun sirih yang digunakan adalah seluruh bagian daun yang sehat

dan segar.
2. Pengolahan sampel daun sirih cina

Daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) yang telah diambil, dicuci hingga

bersih dengan air mengalir, kemudian dijemur sampai kering. Setelah daun

(Peperomia pellucida L.) menjadi kering, dihaluskan daun sirih cina (Peperomia

pellucida L.) hingga menjadi serbuk simplisia dengan menggunakan blender.

Serbuk yang telah dihasilkan kemudian diayak menggunakan ayakan hingga

diperoleh serbuk yang halus dan seragam (Shelly et al., 2017; Putrajaya et al.,

2019).

3. Ekstraksi sampel

Ekstraksi sampel dengan menggunakan metode maserasi. Serbuk simplisia

ditimbang sebanyak ± 300 gram, kemudian dilakukan maserasi menggunakan

etanol 96% dengan perbandingan 1:10. Dilakukan selama 3 x 24 jam. Kemudian,

disaring. Filtrat yang didapat kemudian di evaporasi dalam suhu 60ºC sampai

didapatkan ekstrak kental dari daun sirih cina (Peperomia pellucida L.) (Putrajaya

et al., 2019).

4. Fraksinasi Ekstrak Daun Sirih Cina (Peperomia pellucida L.)

Fraksinasi n-Heksan, etil asetat, dan air dilakukan pembuatan dengan cara

ditimbang ekstrak etanol batang langir 50 gram ekstrak disuspensikan dengan n-

Heksan:aquades (1:1) sebanyak 250 ml, kemudian dikocok selama 10-15 menit

setelah itu didiamkan sehingga terbentuk 2 lapisan yaitu lapisan n-Heksan dan

lapisan air. Dikeluarkan lapisan air dan n-Heksan masing-masing di tampung di

dalam Erlenmeyer. Lapisan air dimasukan kembali ke dalam corong pisah

kemudian ditambahkan dengan pelarut etil asetat lalu dikocok selama 10-15 menit

setelah itu didiamkan sehingga terbentuk 2 lapisan. Dikeluarkan lapisan air dan etil

asetat masing-masing di tampung di dalam erlenmeyer. Sehingga di peroleh 3

 fraksi yaitu fraksi n-Heksan, etil asetat dan air. Hasil fraksi ini kemudian

dipekatkan dengan Rotary Evaporator ( Sarker et al., 2006).

5. Prosedur Pengujian aktivitas antibakteri

a. Sterilisasi alat

Alat-alat disterilisasi dalam autoklaf dibungkus dengan kertas dan

dimasukkan ke dalam autoklaf pada suhu 121ºC dengan tekanan 15 atm selama

15 menit. Alat-alat yang tidak dapat disterilisasi dengan menggunakan autoklaf

disterilkan dengan alkohol 70% (Saputra et al., 2021).

b. Pembuatan media Nutrient Agar (NA)

Sebanyak 5 gram media Nutrient Agar (NA) dilarutkan dalam 250 mL

aquadest steril. Kemudian media dipanaskan dengan hot plate stirer untuk

memastikan media tersuspensi sempurna. Setelah media tersuspensi sempurna,

kemudian dimasukkan dalam autoklaf pada suhu 121ºC selama 15 menit.

c. Peremajaan bakteri

Medium NA (Nutrient Agar) yang telah dibuat, dimasukkan kedalam dua

tabung reaksi lalu dimiringkan, setelah NA (Nutrient Agar) memadat diambil

masing masing 1 koloni biakan bakteri Propionibacterium acnes dan

Staphylococcus aureus dengan menggunakan ose lurus, kemudian digoreskan

pada permukaan medium NA (Nutrient Agar) lalu diinkubasi pada suhu 37°C

selama 1 × 24 jam.

d. Pembuatan suspensi bakteri uji

Setelah biakan murni diperoleh, diambil masing-masing 1 ose bakteri

Propionibacterium acnes dan Staphylococcus aureus digoreskan kedalam 5 ml

media NA (Nutrient Agar) yang telah memadat didalam tabung reaksi,

diinkubasi pada suhu 35-37°C selama 18-24 jam. Kemudian diambil 1 ose
 inokulum, di masukkan kedalam tabung reaksi yang telah berisi 10 ml NaCl

0,9% dan dihomogenkan.

e. Pengenceran fraksi dari daun sirih cina ((Peperomia pellucida L.)

Konsentrasi fraksi yang digunakan 75% untuk mendapat konsentrasi

tersebut maka larutan stok diencerkan dimana tiap konsentrasi dibuat dalam

volume 10 ml. Cara pengencerannya yaitu ditimbang ekstrak daun sirih cina

sebanyak 7,5 g kemudian dimasukan ke dalam gelas kimia dan ditambahkan

DMSO (Dimthyl Sulfoxide) 10% hingga 10 ml lalu diaduk sampai homogen,

kemudian dimasukkan ke dalam botol dan diberi label (Stefanovic, 2012).

f. Pembuatan suspensi klindamisin

Kontrol positif yang digunakan untuk pengujian daya hambat terhadap

bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus aureus menggunakan

antibiotik Klindamisin 150 mg. Pembuatan suspensi klindamisin yaitu

ditimbang sebanyak 150 mg klindamisin kemudian dicukupkan dalam 10 ml

aquadest steril (Athaillah & Sugesti, 2020).

g. Pengujian luas zona hambatan fraksi n-Heksan, etil asetat dan air dari daun

sirih cina (Peperomia pellucida L.) terhadap bakteri Propionibacterium acnes

dan Sthaphylococcus aureus

Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan metode sumur agar

dengan langkah-langkah sebagai berikut : Disiapkan medium NA steril cair

sebanyak 20 ml, dimasukkan kedalam dua botol coklat, diambil suspensi

bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus aureus masing-masing

sebanyak 10 µl dimasukkan kedalam botol coklat, dihomogenkan, kemudian

dituang kedalam cawan petri dibiarkan memadat. Kemudian dibuat 5 lubang

berukuran 6 mm dengan menggunakan tips micro pipet. Pada masing-masing

 lubang sumuran dimasukkan kontrol positif, kontrol negatif, dan fraksi n-

Heksan, etil asetat dan air yang diujikan. Inkubasikan pada suhu 37ºC selama

24 jam. Uji dilakukan dengan tiga kali pengulangan (Putrajaya et al., 2019).

h. Pengamatan dan pengukuran zona hambat

Pengamatan dan pengukuran diameter hambatan dilakukan setelah masa

inkubasi 24 jam. Zona hambatan yang terbentuk diukur dengan menggunakan

jangka sorong (Ayu, 2013).

F. Pengolahan dan Analisi Data

a. Pengolahan Data

Data diolah menggunakan Analisis One-Way ANOVA dan uji LSD

menggunakan perangkat program SPSS versi 16.0 dengan membandingkan hasil

dari pengujian daya hambat sediaan terhadap bakteri Propionibacterium acnes dan

Staphylococcus aureus. Data dianggap signifikan jika nilai p < 0,05.

b. Analisis Data

Data yang akan dianalisa disajikan dalam bentuk tabel dan grafik kemudian

dijabarkan dalam bentuk narasi.

G. Etika Penelitian

Dalam penelitian ini harus memenuhi prinsip etika dalam melakukan suatu

penelitian yaitu pertama peneliti membuat surat persetujuan penelitian yang ditanda

tangani oleh pembimbing I, pembimbing II dan mengajukan surat izin melakukan

penelitian kepada Kepala Laboratorium Farmasi Universitas Mandala Waluya setelah

disetujui selanjutnya peneliti menentukan alat dan bahan yang akan digunakan dalam

penelitian dan terakhir penelitian dengan tetap memperhatikan aturan di dalam

Laboratorium Farmasi Universitas Mandala Waluya.

H. Waktu Pelaksanaan

Waktu pelaksanaan penelitian ini direncanakan berlangsung selama 3 bulan. Secara

rincih waktu pelaksanaan penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 3.

Tabel 3. Waktu Pelaksanaan

No. Kegiatan Bulan

Mei Juni Juli

Minggu Ke- Minggu Ke- Minggu Ke-

I II III IV I II III IV I II III IV

1. Persiapan

penelitian

2. Pengambilan

sampel

3. Ekstraksi

sampel

4. Fraksinasi

ekstrak

5. Pengujian

aktivita

antibakteri
6. Analisis data
 DAFTAR PUSTAKA

Angelina, M., Amelia, P., Irsyad, M., Meilawati, L., dan Hanafi, M. 2015. Karakterisasi
Ekstrak Etanol Herba Ketumpang Air (Peperomia pellucida L. Kunth).
Biopropal Industri. 6(2):53-61.

Armadany, F. I., & Pratiwi, A. (2018). Uji aktivitas antibakteri sediaan krim anti jerawat
ekstrak etanol terpurifikasi daun sirih ( Piper betle L.) dengan Basis
Vanishing Cream terhadap Propionibacterium acne. Journal Pharmauho, 4
(September), 30.

Afifi, R., dan Erlin, E. 2017. “Uji Anti Bakteri Ekstrak Daun Jambu Biji (Psidium Guajava
L) Terhadap Zona Hambat Bakteri Jerawat Propionibacterium Acnes
Secara In Vitro.” Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada 17 (2): 321–30.

Ayu, D. 2013, ‘Uji Efektivitas Sabun Cair dari Ekstrak Daun Pepaya (Carica Papaya L.)
Terhadap Staphylococcus aureus’. [Skripsi], Makasar : Fakultas Farmasi
Universitas Indonesia Timur Makasar.

Buckle KA, Edwards RA, Fleet GH, Wootton M. Ilmu Pangan. Jakarta: Universitas
Indonesia (UI-Press); 2009.

Chessa, D., Ganau, G., & Mazzarello, V. (2015). An overview of Staphylococcus

epidermidis and Staphylococcus aureus with a focus on developing
countries. Journal of Infection in Developing Countries, 9(6), 547–550. doi:
10.3855/jidc.6923.

Dewi, Fajar Kusuma. 2010. “Aktifitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Mengkudu
(Morinda citrifolia L.) terhadap Bakteri Pembusuk Daging Segar”.
SKRIPSI Jurusan Biologi FMIPA Universitas Sebelas Maret; Surakarta.

Daimartha, S. 2006. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Edisi IV. Puspa Swara, Jakarta.

Dandirwalu, E., dan Theopilus, W.W. 2015. Uji Daya Hambat Ekstrak Etanol Suruhan
(Peperomia pellucida L.H.B Kunth) Terhadap Pertumbuhan Bakteri
Staphylococcus aureus Secara In Vitro. Jurnal Biologi Pendidikan dan
Terapan. 2 (1):08-14.

Egwuche, R.U., Odetola, A.A., and Erukainure, O.L. 2011. Preliminary Investigation Into
The Chemical Properties of Peperomia pellucida L. Journal Of
Phytochemistry. 5(1):48-53

Fitriani, U., Budiastuti, A., & Widodo, A. (2018). Pengaruh Pemakaian masker madu
terhadap derajat keparahan akne vulgaris. Jurnal Kedokteran Diponegoro,
7(2), 885–891.
Hidayah, N. 2016. “Uji Aktivitas Ekstrak Metanol Klika Anak Dara (Oblongus Burm F.)
Terhadap Bakteri Penyebab Jerawat.” Skripsi. Program Sarjana Universitas
Islam Negeri Alauddin.

Hafsari AR, Cahyanto T, Lestari RI. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Beluntas
(Pluchea indica (L.) LESS.) terhadap Propionibacterium acnes Penyebab
Jerawat. ISSN. 2015;IX(1):141–61.

Hidayah ND. Uji Aktivitas Ekstrak Metanol Klika Anak Dara (Crotonoblangus burn F.)
terhadap Bakteri Penyebab Jerawat. Universitas Islam Negeri Alaudin;
2016.

Hidayahti, N., 2010. “Isolasi Dan Identifikasi Jamur Endofit Pada Umbi Bawang Putih
(Allium sativum) Sebagai Penghasil Senyawa Antibakteri Terhadap Bakteri
Streptococcus mutans Dan Escherichia coli” (Skripsi). Universitas Islam
Negeri Malang Maulana Malik Ibrahim, Malang.

Hambali, M., Febrilia, M., dan Fitriadi, N. 2014. Ekstraksi Antosianin Dari Ubi Jalar
Dengan Variasi Konsentrasi Solven dan Lama Waktu Ekstraksi. Teknik
Kimia. 2(20):25-35.

Harbone, J.B.2006. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan.

Edisi Kedua. Bandung: Penerbit ITB. Pp4-147.

Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan.
Penerbit ITB : BandungHermans, M.H.E. 2005. A General Overview Of
Burn Care. Int Wound J 2005; 2: 3, 206–220

Irianto, K. 2006. Mikrobiologi. Bandung: Yrama Widya.

Karomah, S. 2019. Uji Ekstrak Tumbuhan Sirih Cina (Peperomia pellucida L.) Sebagai
Antibakteri Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Staphylococcus
epidermidis. Skripsi. Fakultas Biologi Universitas Medan Area, Medan.

Kinho, Julianus., Arini, Diah I. D., Tabba, Supratman., Kama, Harwiyaddin, Kafiar,
Yermias., Shabri, S.., Karundeng, Mood C. (2011). Tumbuhan Obat
Tradisional di Sulawesi Utara Jilid 1. Manado: Balai Penelitian Kehutanan
Manado. ISBN : 978-602-98144-1-5.

Lestari, P. 2010. Karakterisasi Simplisia dan Isolasi Senyawa Triterpenoida/Steroida Dari

Herba Suruhan (Peperomia pellucidae Herba). Skripsi. Fakultas Farmasi
Universitas Sumatera Utara, Medan.

Lenny, S. 2006. Isolasi dan Uji Bioaktifitas Kandungan Kimia Puding Merah Dengan
Metode Brand Shrimp. Medan: Universitas Sumatra Utara.
Majumder, pulak., Abraham, Priya., V, Satya. (2011). Ethno-medicinal Phytochemical and
Pharmacological review of an amazing medicinal herb Peperomia pellucida
(L.) HBK.. Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical
Sciences, ISSN: 0975-8585, volume 2 halaman 358.

Meilina, Noer Erin, & Hasanah, Aliya Nur. (2018). Review Artikel: Aktivitas antibakteri
ekstrak kulit buah manggis (Garnicia mangostana L.) terhadap bakteri
penyebab jerawat. Farmaka, 16(2).

Nakase, K., Nakaminami, H., Takenaka, Y., Hayashi, N., Kawashima, M., & Noguchi, N.
(2014). Relationship between the severity of acne vulgaris and
antimicrobial resistance of bacteria isolated from acne lesions in a hospital
in Japan. Journal of Medical Microbiology, 63(5), 721–728.
https://doi.org/10.1099/jmm.0.067611-0

Putrajaya, F., Nur, H., dan Anis, K. 2019. Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Suruhan
(Peperomia pellucida L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Penyebab
jerawat (Propionobacterium acnes) Dengan Metode Sumur Agar. EDU
MASDA Journal. 3(2):123-140

Purwaning. (2017). ‘Mikrobiologi Berbasis Inkuiry-Google Buku’. [Berasal dari

https://books.google.co.id/]

Pelczar, M. J. dan Chan, E. C. S. 2008. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta. UI Press

Rusli, D., Ade, A.R., dan Putra, A.N. 2016. “Formulasi Krim Clindamycin Sebagai Anti
Jerawat Dan Uji Efektivitas Terhadap Bakteri Propionibacterium Acnes.”
Jurnal Ilmiah Bakti Farmasi 1(2): 5–14.

Radji, M. (2013) Buku Ajar Mikrobiologi : Panduan Mahasiswa Farmasi & Kedokteran.
EGC press. Jakarta.

Ramadhan A. Uji Aktivitas Antibakteri Senyawa-senyawa Hasil Modifikasi Struktur Etil P-

Metoksisinamat melalui Reaksi Esterifikasi terhadap Bakteri Gram Negatif
dan Gram Positif. UIN Syarif Hidayatullah; 2015.

Sarker SD, Latif Z, & Gray AI. 2006. Natural products isolation. In: Sarker SD, Latif Z, &
Gray AI, editors. Natural Products Isolation. 2nd ed. Totowa (New Jersey).
Humana Press Inc. hal. 6-10, 18.

Soedarto. Mikrobiologi Kedokteran. Surabaya: Sagung Seto; 2014.

Tarigan br, Irma Mariani, Bahri, Saiful, & Saragih, Awaluddin. (2012). Aktivitas
Antihiperurisemia Ekstrak Etanol Herba Suruhan (Peperomia pellucida (L.)
Kunth) Pada Mencit Jantan Antihyperuricemic Activity of Ethanol Extract
of Suruhan Herb (Peperomia pellucida (L.) Kunth) in Male Mice. Journal of
Pharmaceutics and Pharmacology, 1(1), 37–43.
Utami, Prapti, Puspaningtyas, Desty Ervira, & Gz, S. (2013). The miracle of herbs.
AgroMedia

Utami, N.A., 2017. “(Lycopersicon esculentum Mill) Terhadap Pertumbuhan Bakteri

Staphylococcus aureus”. (Skripsi). Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Zulkarnain, Zulkarnain, Muthiadin, Cut, & Nur, Fatmawati. (2021). Potensi Kandungan
Senyawa Ekstraksi Daun Patikan Kebo (Euphorbia hirta L.) sebagai
Kandidat Antibiotik Alami. TEKNOSAINS: Media Informasi Sains Dan
Teknologi, 15(2), 190–196.