Jurnal Kerja Pengaruh PH Dan Temperatur Terhadap Aktivitas Enzim Amilase YURNIIIII

JURNAL PRAKTIKUM BIOKIMIA Nama : Yurni Milham
SEMESTER GANJIL TAHUN 2021

Nim : H031201024
LABORATORIUM BIOKIMIA DEPARTEMEN KIMIA
UNIVERSITAS HASANUDDIN
PENGARUH pH DAN TEMPERATUR TERHADAP

AKTIVITAS ENZIM AMILASE
Jurnal kerja laboratorium ini merupakan laporan sementara dari hasil pengamatan yang
dilakukan di dalam laboratorium. Mahasiswa diharapkan menyelesaikan lembar kerja
ini sesuai dengan pengamatan yang dilakukan dan membahas dengan baik.
Gambar 1. Human Salivary Amylase (PDB: 1SMD)
1. Pengaruh pH
a. Uraikan tahap pembuatan larutan buffer fosfat di bawah ini
Pembuatan buffer pH 4, dilakukan dengan mencampurkan
pH 4
2,7 gram Natrium fosfat dalam 1 L ditambahkan dengan 1 L
larutan Asam fosfat (Supriyatna dkk, 2015).
Pembuatan buffer fosfat pH 5, larutan Asam fosfat 0,1 M
sebanyak 32 mL, ditambahkan dengan larutan Natrium fosfat

pH 5
0,1 M sebanyak 68 mL. kemudian diencerkan sampai
100 mL (Supriyatna dkk, 2015)
pH 6 Larutan buffer posfat 250 mL pH 6 dibuat dengan
mencampurkan larutan Na2HPO4 0,1 M sebesar 12,8 mL dengan
Larutan buffer fosfat pH 6 dibuat dengan mencampur larutan
Na2HPO4 0,1 M dengan larutan NaH2PO4 0,1 M dalam gelas

Nim : H031201024
kimia. Campuran diaduk sambil diukur pH-nya menggunakan
pH meter. Saat pH larutan diatas 6 maka ditambahkan dengan
larutan NaH2PO4 0,1 M hingga pH larutan menjadi 6. Bila pH
dibawah 6 maka ditambahkan larutan Na 2HPO4 0,1 M hingga
pH menjadi 6 (Supriyatna dkk, 2015).
Pembuatan buffer fosfat adalah 4,8 mL Asam fosfat dimasukkan
ke dalam gelas kimia, kemudian ditambahkan akuades sampai
200 mL. kemudian 1,6 gram larutan Natrium fosfat

pH 7
ditimbang dimasukkan ke dalam gelas kimia dan ditambah
akuades hingga 200 mL. Asam fosfat 30 mL dan Natrium
fosfat 70 mL dicampurkan hingga membentuk pH sekitar
7 (Halimah dkk, 2010).
Larutan buffer posfat 250 mL pH 8 dibuat dengan
mencampurkan larutan Na2HPO4 0,1 M sebesar 94,7 mL dengan
larutan NaH2PO4 0,1 M dalam gelas beker 500 mL. Campuran
pH 8 diaduk. Saat pH larutan di atas 8 maka ditambahkan NaH2PO4
0,1 M, tetes demi tetes hingga pH larutan menjadi 8.
Bila pH larutan di bawah 8 maka ditambahkan larutan NaH 2PO4
0,1 M tetes demi tetes hingga pH larutan menjadi
8 (Halimah dkk, 2010)

Nim : H031201024
b. Lengkapilah kolom-kolom berikut ini
10 mL larutan 10 mL larutan 10 mL larutan 10 mL larutan 10 mL larutan

buffer pH 8 buffer pH 7 buffer pH 6 buffer pH 5 buffer pH 4

pati 1% pati 1% pati 1% pati 1% pati 1%
+ + + + +
NaCl 0,1 M NaCl 0,1 M NaCl 0,1 M NaCl 0,1 M NaCl 0,1 M
Fungsi Jawab: sebagai aktivator terhadap enzim.
penambahan
NaCl
Nim : H031201024
+ + + + +
2 mL saliva 2 mL saliva 2 mL saliva 2 mL saliva 2 mL saliva
encer (fp 10x) encer (fp 10x) encer (fp 10x) encer (fp 10x) encer (fp 10x)
Dipanaskan Dipanaskan Dipanaskan Dipanaskan Dipanaskan

dalam water dalam water dalam water dalam water dalam water
bath bath bath bath bath
Diasamkan Mengapa kedua tabung tersebut ditambahkan asam asetat?
dengan
penambahan Jawab: untuk mengasamkan larutan dan mempermudah reaksi amilum
asam asetat dengan iodin.
Ditambahkan 3 Ditambahkan Ditambahkan Ditambahkan Ditambahkan

tetes iodin 3 tetes iodin 3 tetes iodin 3 tetes iodin 3 tetes iodin
Fungsi Jawab : mengetahui kadar amilum dalam suatu sampel.
penambahan
iodin
Indikator Jawab: terjadi perubahan warna menjadi biru pekat karena adanya
perubahan
warna bahwa iodin yang membentuk kompleks warna biru akibat adanya ikatan
terdapat
aktivitas amilase semu.
adalah….
Nim : H031201024
CH2OH
CH2OH
H O H H O H
H H + nI2
OH H OH H
O O O
H OH H OH n
Berdasarkan
CH2OH
tahap reaksi di CH2OH
atas dengan H O H H O H amilase
H I H
penambahan OH H OH H
reagen-reagen, O O O
buatlah H OH H OH n
I
mekanisme Biru
reaksi amilase
CH2OH
H O H
H
OH H + I2
OH OH
H OH
bening
Hasil
Pengamatan
Keterangan:
+++++ = Biru tua ++ = Sedikit biru
++++ = Biru muda + = Hampir tidak berwarna
+++ = Agak biru
Nim : H031201024
pH Waktu (menit) 1/t (menit)
4 30 0,0333
5 35 0,0285
Hasil berikut ini 6 30 0,0333

menunjukkan
pengaruh pH 7 30 0,0333
terhadap
aktivitas 8 35 0,0285
amilase. Buatlah
kurva hubungan
pH vs 1/waktu
(t) Hubungan pH dengan 1/t
0.034
0.032
1/t
0.03
0.028
0 50 100 150
pH
Pembahasan Pada percobaan ini digunakan larutan buffer fosfat dengan pH
8,0; 7,0; 6,0; 5,0; dan 4,0. Hal ini bertujuan mengetahui pada pH
berapa enzim α-amilase dapat bekerja secara optimal. Larutan buffer
tersebut masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan
ditambahkan dengan larutan 5 mL larutan amilum 1% yang bertindak
sebagai substrat. Lalu ditambahkan 2 mL larutan NaCl 0,1 M.
Penambahan NaCl bertujuan sebagai aktivator enzim, lalu
ditambahkan 2 mL saliva encer fp 10 kali, dalam hal ini saliva
bertindak sebagai enzim, karena saliva terkandung enzim α-amilase.
Kemudian dilakukan pemanasan dalam water bath pada suhu 38 oC.
Suhu ini menggambarkan suhu tubuh normal manusia. Pada tabung

Nim : H031201024
reaksi I dan II dilakukan pengasaman dengan penambahan asam asetat
dengan tujuan agar menyamakan kondisi pH setiap tabung reaksi,
karena enzim α-amilase tidak bisa bekerja optimal dalam keadaan pH
8 ataupun keadaan yang sangat asam. Setelah itu, ditambahkan iodin
0,1 N. Tujuan penambahan iodin adalah sebagai indikator dengan
melihat perubahan warna dari biru menjadi bening akibat adanya
ikatan semu antara amilum dengan iodin. Selanjutnya ditunggu hingga
larutan pH berapa yang paling cepat mencapai titik optimum selama
35 menit dan diamati perubahan warnanya pada interval 5 menit
secara berulang. Aktivitas enzim amilase dilihat berdasarkan tabung
mana yang mengalami perubahan warna secara drastis yaitu dari biru
menjadi tidak berwarna yang menandakan bahwa enzim amilase
menghidrolisis amilum menjadi glukosa dengan memutuskan ikatan
glioksida.
Berdasarkan grafik hubungan pH terhadap invers waktu, dapat
diketahui bahwa pH optimum aktivitas enzim α-amilase adalah pada
pH 7. Hal ini sesuai dengan teori di mana pH optimum dari aktivitas
enzim α-amilase adalah pada pH 6,2–7.

Nim : H031201024
Ditambahkan 3 Ditambahkan 3 Ditambahkan 3 Ditambahkan 3

Nim : H031201024
tetes iodin 0,01 M tetes iodin 0,01 M tetes iodin 0,01 M tetes iodin 0,01 M
Hasil Pengamatan
Hasil berikut ini Suhu Waktu (menit) 1/t (menit)

menunjukkan
pengaruh 0 oC 35 0,0333
temperatur
terhadap aktivitas 27 oC 30 0,0285
amilase. Buatlah
kurva hubungan 36 oC 30 0,0333
temperatur vs
1/waktu (t)
100 oC 30 0,0333
Nim : H031201024
Pembahasan Pada percobaan ini ditentukan suhu optimum pada aktivitas
enzim α-amilase. Masing-masing tabung diisi dengan 5 mL larutan
amilum 1%, larutan amilum berfungsi sebagia substrat. Setelah itu,
ditambahkan sebanyak 2 mL saliva encer fp 10 kali yang berfungsi
sebagai enzim, karena pada saliva terkandung suatu enzim, yaitu
enzim α-amilase. Tabung pertama dicelupkan ke dalam air es (0
°C), tabung kedua ditempatkan pada suhu kamar (27 °C), tabung
ketiga dimasukkan ke dalam inkubator (36 °C) dan tabung
keempat dimasukkan dalam penangas air (100 °C). Perlakuan ini
dilakukan pada berbagai suhu yang telah ditentukan masing-
masing agar dapat diketahui pada suhu berapa enzim amilase
bekerja secara optimal. Pengujian ini dilakukan selama 35 menit
dan diteteskan ke plat tetes yang telah diisi 3 tetes iodin 0,01 M
dengan mengulangi perlakuan setiap interval 5 menit, diamati
perubahan warna yang terjadi. Tujuan penambahan iodin adalah
sebagai indikator dengan melihat perubahan warna dari biru
menjadi bening.
Berdasarkan grafik hubungan temperatur terhadap invers
waktu, dapat diketahui bahwa temperatur optimum aktivitas enzim
α-amilase adalah pada temperatur 36 °C. Hal ini tidak sesuai
dengan teori, dimana temperatur optimum aktivitas enzim
α-amilase adalah pada 27 °C. Penentuan yang tidak sesuai dengan
teori ini mungkin saja disebabkan oleh pati yang kurang baik dan
berbagai kondisi lainnya.

Nim : H031201024
Kesimpulan
1. pH optimum untuk aktivitas enzim amilase pada pH 7.
2. Temperatur optimum aktivitas enzim α-amilase adalah pada temperatur 36 °C.
Makassar, 30 September 2021

Dosen/Asisten Mahasiswa
Nama : Yuyun Sukawati Rusma Nama : Yurni Milham

NIM : H031171005 NIM : H031201024
Nim : H031201024
DAFTAR PUSTAKA
Supriyatna, A., Amalia, D., Jauhari, A.A., dan Holydaziah, D., 2015, Aktivitas Enzim
Amilase, Lipase, dan Protease dari Larva, Jurnal Biokimia¸ 9(2):18-32.
Halimah, Syahalam, E., Okfrianti, Y., Siregar, S. S., dan Mailiza, A., 2010, Buku Ajar
Biokimia, Poli Teknik Kesehatan Bengkulu, Bengkulu.

Jurnal Kerja Pengaruh PH Dan Temperatur Terhadap Aktivitas Enzim Amilase YURNIIIII

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Jurnal Kerja Pengaruh PH Dan Temperatur Terhadap Aktivitas Enzim Amilase YURNIIIII

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

JURNAL PRAKTIKUM BIOKIMIA Nama : Yurni Milham

SEMESTER GANJIL TAHUN 2021

PENGARUH pH DAN TEMPERATUR TERHADAP

Gambar 1. Human Salivary Amylase (PDB: 1SMD)

larutan Asam fosfat (Supriyatna dkk, 2015).

Pembuatan buffer fosfat pH 5, larutan Asam fosfat 0,1 M

sebanyak 32 mL, ditambahkan dengan larutan Natrium fosfat

100 mL (Supriyatna dkk, 2015)

pH 6 Larutan buffer posfat 250 mL pH 6 dibuat dengan

mencampurkan larutan Na2HPO4 0,1 M sebesar 12,8 mL dengan

Larutan buffer fosfat pH 6 dibuat dengan mencampur larutan

Na2HPO4 0,1 M dengan larutan NaH2PO4 0,1 M dalam gelas

kimia. Campuran diaduk sambil diukur pH-nya menggunakan

pH meter. Saat pH larutan diatas 6 maka ditambahkan dengan

larutan NaH2PO4 0,1 M hingga pH larutan menjadi 6. Bila pH

dibawah 6 maka ditambahkan larutan Na 2HPO4 0,1 M hingga

pH menjadi 6 (Supriyatna dkk, 2015).

Pembuatan buffer fosfat adalah 4,8 mL Asam fosfat dimasukkan

ke dalam gelas kimia, kemudian ditambahkan akuades sampai

200 mL. kemudian 1,6 gram larutan Natrium fosfat

akuades hingga 200 mL. Asam fosfat 30 mL dan Natrium

fosfat 70 mL dicampurkan hingga membentuk pH sekitar

7 (Halimah dkk, 2010).

Larutan buffer posfat 250 mL pH 8 dibuat dengan

mencampurkan larutan Na2HPO4 0,1 M sebesar 94,7 mL dengan

larutan NaH2PO4 0,1 M dalam gelas beker 500 mL. Campuran

pH 8 diaduk. Saat pH larutan di atas 8 maka ditambahkan NaH2PO4

0,1 M, tetes demi tetes hingga pH larutan menjadi 8.

Bila pH larutan di bawah 8 maka ditambahkan larutan NaH 2PO4

0,1 M tetes demi tetes hingga pH larutan menjadi

8 (Halimah dkk, 2010)

b. Lengkapilah kolom-kolom berikut ini

10 mL larutan 10 mL larutan 10 mL larutan 10 mL larutan 10 mL larutan

5 mL larutan 5 mL larutan 5 mL larutan 5 mL larutan 5 mL larutan

Dipanaskan Dipanaskan Dipanaskan Dipanaskan Dipanaskan

Ditambahkan 3 Ditambahkan Ditambahkan Ditambahkan Ditambahkan

pH Waktu (menit) 1/t (menit)

Hasil berikut ini 6 30 0,0333

Pembahasan Pada percobaan ini digunakan larutan buffer fosfat dengan pH

berapa enzim α-amilase dapat bekerja secara optimal. Larutan buffer

tersebut masing-masing dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan

ditambahkan dengan larutan 5 mL larutan amilum 1% yang bertindak

sebagai substrat. Lalu ditambahkan 2 mL larutan NaCl 0,1 M.

Penambahan NaCl bertujuan sebagai aktivator enzim, lalu

ditambahkan 2 mL saliva encer fp 10 kali, dalam hal ini saliva

bertindak sebagai enzim, karena saliva terkandung enzim α-amilase.

Kemudian dilakukan pemanasan dalam water bath pada suhu 38 oC.

Suhu ini menggambarkan suhu tubuh normal manusia. Pada tabung

reaksi I dan II dilakukan pengasaman dengan penambahan asam asetat

dengan tujuan agar menyamakan kondisi pH setiap tabung reaksi,

karena enzim α-amilase tidak bisa bekerja optimal dalam keadaan pH

8 ataupun keadaan yang sangat asam. Setelah itu, ditambahkan iodin

0,1 N. Tujuan penambahan iodin adalah sebagai indikator dengan

melihat perubahan warna dari biru menjadi bening akibat adanya

ikatan semu antara amilum dengan iodin. Selanjutnya ditunggu hingga

larutan pH berapa yang paling cepat mencapai titik optimum selama

35 menit dan diamati perubahan warnanya pada interval 5 menit

secara berulang. Aktivitas enzim amilase dilihat berdasarkan tabung

menjadi tidak berwarna yang menandakan bahwa enzim amilase

menghidrolisis amilum menjadi glukosa dengan memutuskan ikatan

Berdasarkan grafik hubungan pH terhadap invers waktu, dapat

diketahui bahwa pH optimum aktivitas enzim α-amilase adalah pada