Halaman 1/10

Panduan Pengguna Kit Analisis HPLC

Darah Utuh Hemoglobin A1c

ZV-4001-0500-25

500

RT

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14
 Halaman 2/10

Daftar isi
1. PENGGUNAAN YANG DIMAKSUDKAN ................................................ .................................................. ....... 3

2. RINGKASAN DAN PENJELASAN ............................................... ............................. 3

3. SIMBOL IVD ................................................ .................................................. .......... 3

4. PRINSIP UJI ................................................ .................................................. .... 3

5. PERINGATAN DAN PENCEGAHAN ............................................... ............................. 4

6. PENYIMPANAN DAN STABILITAS ............................................... ...................................... 4

7. BAHAN YANG DISEDIAKAN ................................................ ........................................... 4

8. BAHAN YANG DIPERLUKAN NAMUN TIDAK TERSEDIA ............................................. ...... 5

9. CATATAN PROSEDUR ................................................ ............................................... 5

10. PETUNJUK PRA-SET UP ............................................. ................................... 6

11. BATASAN PROSEDUR .............................................. ..................... 6

12. CONTOH PRETREATMENT ................................................ ..................................... 6

13. KONTROL KUALITAS ................................................ ................................................. 7

14. PERHITUNGAN HASIL ............................................... .................................. 7

15. INTERPRETASI HASIL ............................................... ........................... 8

16. NILAI YANG DIHARAPKAN ................................................ ................................................. 8

17. PARAMETER HPLC-UV .............................................. ........................................... 8

18. KINERJA ANALITIS ................................................ .............................. 9

19. CONTOH KROMATOGRAM ................................................ .................................. 9

20. REFERENSI................................................. .................................................. ....... 10

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14
 Halaman 3/10

1. PENGGUNAAN YANG DIMAKSUDKAN

Kit analisis HPLC kuantitatif untuk HbA1c dalam sampel darah utuh manusia.

2. RINGKASAN DAN PENJELASAN

Jumlah HbA1c dalam darah utuh adalah salah satu parameter terpenting untuk skrining dan pemantauan diabetes.
HbA1c dibentuk oleh kombinasi protein hemoglobin dan gula dalam darah. Produksi HbA1c meningkat ketika laju gula
darah meningkat. Oleh karena itu, jumlah HbA1c berhubungan langsung dengan glukosa darah tinggi. Jenis molekul
HbA1c yang berbeda dapat terjadi seperti A1a, A1b, s-A1c, L-A1c, sesuai dengan jenis gula yang digabungkan dengan
hemoglobin. Bagian terpenting dari analisis HbA1c adalah pemisahan terbaik dari spesies ini.

Kit Analisis HPLC Zivak Hemoglobin A1c dikembangkan untuk skrining dan pemantauan diabetes mellitus dalam sampel
darah manusia. Waktu analisis 1,5 menit. Dan juga pencucian kolom 0,5 menit dilakukan pada akhir analisis. Metode dan
prosedur utama yang telah dipilih didasarkan pada EN ISO 13485 dan 98/79 / EC.

3. SIMBOL IVD

Orang Eropa yang taat Pabrikan

Diagnosis in vitro Jumlah order

Cukup untuk <N>

Nomor lot
Tes

Batas suhu

4. PRINSIP UJI

Spesimen darah lengkap diencerkan dengan larutan hemolisis. Kemudian sampel hemolisis disuntikkan ke kolom
pertukaran kation. HbA1c dipisahkan dari spesies lain dengan menggunakan gradien pH dan interaksi ionik antara
kelompok pertukaran kation pada bahan kolom dan komponen hemoglobin.

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14
 Halaman 4/10

5. PERINGATAN DAN PENCEGAHAN

• Hanya untuk penggunaan diagnostik in-vitro. Hanya

• untuk penggunaan profesional.

• Bacalah instruksi dengan seksama, sebelum Anda mulai.

• Jika terjadi kerusakan pada paket kit, harap hubungi Zivak atau pemasok Anda. Jangan gunakan kit dan
• komponen yang kedaluwarsa.
• Harap periksa nomor batch dan tanggal kedaluwarsa sebelum memulai. Sarung

• tangan dan kacamata pelindung harus dipakai.

• Harap lakukan tindakan pencegahan yang diperlukan untuk mencegah infeksi patogen yang dibawa melalui darah saat
bekerja dengan cairan biologis. Tindakan pencegahan keamanan hayati yang tepat dan pembuangan limbah berbahaya
hayati harus diikuti.
• Silakan periksa label pada botol reagen. Reagen kit ini mengandung bahan berbahaya yang dapat
menyebabkan iritasi mata dan kulit.

6. PENYIMPANAN DAN STABILITAS

• Kit analisis ini dapat dikirim pada suhu kamar.

• Setelah tiba, fase gerak dan reagen 1 harus disimpan pada suhu kamar. Kontrol darah utuh dan
• kolom harus disimpan pada 2-8 ° C sampai pemulihan.
• Semua komponen dijamin hingga tanggal kedaluwarsa jika disimpan pada suhu yang direkomendasikan dan digunakan
seperti yang dijelaskan dalam petunjuk ini.

7. BAHAN YANG DISEDIAKAN

Nomor pesanan Volume Simbol Komponen

Reagen 1,
ZV-4001-05R1-25 4x2L R1
Berisi buffer encer
Tahap Seluler A,
ZV-4001-05MA-25 1 x 2,1 L. MA
Mengandung pelarut organik

Tahap Seluler B,
ZV-4001-05MB-25 1 x 0,9 L. MB
Mengandung pelarut organik

ZV-4001-KK-25 1 x 1 buah KK Panduan pengguna

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14
 Halaman 5/10

8. BAHAN DIBUTUHKAN NAMUN TIDAK TERSEDIA

Nomor pesanan Volume Simbol Komponen

Kalibrator Hemolysate
ZV-4001-02S1-25 1 x 3 mL
Tingkat 1 Kalibrator Level 1

Kalibrator Hemolysate
ZV-4001-02S2-25 1 x 3 mL
Level 2 Kalibrator Level 2

Kontrol Hemolysate
ZV-4001-02K1-25 1 x 3mL
Tingkat 1 Kontrol Level 1

Kontrol Hemolysate
ZV-4001-02K2-25 1 x 3 mL
Level 2 Kontrol Level 2

Zivak Hemoglobin A1c Kolom Analisis HPLC Darah Utuh

ZV-4001-02C1-25 1 x 1 buah

9. CATATAN PROSEDUR

Penanganan sampel yang tidak tepat atau modifikasi prosedur pengujian dapat mempengaruhi hasil. Volume pemipetan
yang ditunjukkan, waktu inkubasi, suhu, dan langkah-langkah pra-perawatan harus dilakukan secara ketat sesuai dengan
instruksi. Gunakan pipet dan perangkat yang dikalibrasi saja.

Setelah pengujian dimulai, semua langkah harus diselesaikan tanpa gangguan. Pastikan reagen, bahan, dan perangkat
yang diperlukan disiapkan pada waktu yang tepat.

Sisihkan semua reagen dan spesimen hingga mencapai suhu kamar (18-25 ° C) dan aduk perlahan setiap vial reagen cair dan
sampel sebelum digunakan. Campur reagen tanpa berbusa.

Hindari kontaminasi reagen, pipet dan sumur / tabung. Gunakan ujung pipet plastik sekali pakai baru untuk setiap reagen,
standar, atau spesimen. Jangan mengganti tutup botol. Selalu tutup botol jika tidak digunakan. Jangan menggunakan kembali
sumur / tabung atau reagen.

Waktu inkubasi mempengaruhi hasil. Semua tabung atau sumur harus ditangani dalam urutan dan urutan waktu yang sama.

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14
 Halaman 6/10

10. PETUNJUK PRA-SET UP

Siapkan Instrumen
• Sebelum memulai, cuci kolom dengan aliran 1mL / menit dari% 100 fase gerak B selama 10 menit. Kemudian aktifkan
metode HbA1c dan tunggu selama 5 menit. Setelah langkah pengkondisian, suntikan bisa dimulai. Pada akhir
analisis, bersihkan kolom dengan Wash Buffer sebelum menyimpannya. Petunjuk pencucian di atas akan dilakukan
secara otomatis saat kit ini digunakan dengan Zivak HB-100 Full Automated HbA1c / Variant HPLC Analyzer.

• Jaga kolom pada suhu 4 ° C saat tidak digunakan.

• Pastikan botol fasa gerak tertutup dengan baik, jika tidak, komponen fasa gerak dapat menguap; ini mengubah
waktu retensi.

Persiapan Kalibrator
• Kalibrator siap digunakan. Tidak perlu perlakuan awal sampel.
• Kalibrator harus disimpan pada suhu +4 ° C.

Persiapan Kontrol
• Kontrol siap digunakan. Tidak perlu perlakuan awal sampel.
• Kontrol harus disimpan pada suhu +4 ° C de.

11. BATASAN PROSEDUR

Pengumpulan dan penyimpanan spesimen berpengaruh signifikan terhadap hasil pengujian. Volume spesimen minimal 2 ml.
Sampel Darah Utuh dari hari-hari sebelumnya harus disimpan dalam lemari es sebelum analisis. Sampel EDTA Darah Utuh
dapat disimpan selama 7 hari pada 2-8 ° C dan 24 jam pada suhu kamar.

12. CONTOH PERAWATAN

Pretreatment Sampel (Manual)

Mengambil 5 • L sampel pasien ke dalam botol kaca.

Menambahkan 1 mL dari Reagen 1 dan pusaran untuk 10 detik.

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14
 Halaman 7/10

Menyuntikkan 20 • L ke HPLC-UV sistem.

Sampel yang disiapkan stabil selama 24 jam pada suhu 2-4 ° C.

Pretreatment Sampel (Otomatis)

Tempatkan sampel EDTA darah utuh ke dalam baki sistem.

Analisis secara otomatis akan dimulai setelah mengklik Mulailah tombol pada perangkat lunak.

Injeksi, kalkulasi dan pelaporan dilakukan secara otomatis dengan instrumen.

Sampel yang disiapkan stabil selama 24 jam pada suhu 2-4 ° C.

13. KONTROL KUALITAS

Hasil tes hanya valid jika tes telah dilakukan dengan mengikuti instruksi. Selain itu pengguna harus benar-benar mematuhi
aturan GLP (Good Laboratory Practice) atau standar / hukum lain yang berlaku. Semua standar dan kontrol kit harus
ditemukan dalam kisaran yang dapat diterima seperti yang dinyatakan pada Sertifikat QC (Kontrol Kualitas). Jika kriteria tidak
terpenuhi, proses tersebut tidak valid dan harus diulang.

Setiap laboratorium harus menggunakan sampel yang diketahui sebagai kontrol lebih lanjut. Jika terjadi penyimpangan, masalah teknis
berikut harus dibuktikan:

Tanggal kedaluwarsa reagen (yang disiapkan), kondisi penyimpanan, pipet, perangkat, kondisi inkubasi, dan metode pencucian.
Direkomendasikan untuk berpartisipasi pada uji coba penilaian kualitas yang sesuai.

14. PERHITUNGAN HASIL

Persentase luas analit yang diperoleh digunakan untuk perhitungan hasil HbA1c. Kurva kalibrasi linier akan dibuat dengan
area persentase yang dihitung ini. Rumus perhitungan diberikan di bawah ini.

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14
 Halaman 8/10

•1• •••• • 100

% •••• =
(•1• •••• + •0 ••••)

Sinyal sampel di atas level kontrol tertinggi harus dikonfirmasi dengan metode referensi.

15. INTERPRETASI HASIL

Berbagai masyarakat merekomendasikan nilai Cut-Off yang berbeda untuk pengulangan pengukuran dan penerapan uji
konfirmasi. Bergantung pada penerapan sampel pasien dari populasi yang berbeda, sangat disarankan agar setiap
laboratorium menetapkan kisaran nilai normalnya sendiri dan bahwa distribusi nilai ini dikoordinasikan dengan
rekomendasi dari masyarakat yang bertanggung jawab di wilayah geografis ini.

Hasil itu sendiri seharusnya bukan satu-satunya alasan untuk konsekuensi terapeutik apa pun. Mereka harus
dikorelasikan dengan observasi klinis dan tes diagnostik lainnya.

16. NILAI YANG DIHARAPKAN

% 4,0 -% 5,6 Normal

% 5.7 -% 6.4 Pra-diabetes
>% 6.5 Diabetes

Direkomendasikan agar setiap laboratorium menetapkan kisaran nilai normalnya sendiri.

17. PARAMETER HPLC-UV

Instrumen Zivak HB-100 HbA1c Otomatis Penuh / Varian HPLC Analyzer Zivak
Kolom Hemoglobin A1c Kolom HPLC
Detektor UV / VIS

Panjang gelombang 415 nm

Injeksi
20 µL
Volume
Oven Kolom
35 ° C
Suhu

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14
 Halaman 9/10

Waktu Laju Aliran

%SEBUAH %B
(mnt) (µL / menit)

1 00.00 1500 98 2
2 00.31 1500 98 2
3 00.32 1500 2 98
4 00.49 1500 2 98
5 00.50 1500 98 2
6 01.30 1500 98 2

18. KINERJA ANALITIS

Intra-assay Uji antar

Ketepatan Linearitas
Tidak Analit Presisi Presisi
(%) (R 2)
(%CV) (%CV)
1 HbA1c 98.32 0.479 1.19 0,9985

Kekhususan Analitik (Reaktivitas Silang): Tidak ada reaktivitas silang yang ditemukan dengan zat khas yang diuji.

19. CONTOH KROMATOGRAM

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14
 Halaman 10/10

20. REFERENSI

1. https://www.medicinenet.com/what_is_hemoglobin_a1c_hba1c/views.htm
2. https://www.diabetes.co.uk/what-is-hba1c.html
3. https://www.webmd.com/diabetes/guide/glycated-hemoglobin-test-hba1c
4. Florkowski C., "HbA1c sebagai Tes Diagnostik untuk Diabetes Mellitus-Meninjau Bukti", Clin Biochem Rev, 34 (2):
75-83, 2013.
5. Sandler CN, McDonnell ME, "Peran Hemoglobin A1c dalam Penilaian Diabetes dan Risiko Kardiovaskular", Jurnal
Kedokteran Klinik Cleveland, 83 Suppl 1 (5): 54-510, 2016. James TM, Davis JE, McDonald JM, Santiago JV,
6. Ladenson JH, “Perbandingan Hemoglobin A1c dan Hemoglobin A1 pada Pasien Diabetes”, Biokimia Klinis, Volume
14, Edisi 1, 25-27, 1981.

D.No: ZV-4001-KK-25_Rev14