Kromatografi Gas
Kromatografi gas/gas chromatograpy (GC) adalah alat analisis yang digunakan untuk
menganalisis berbagai komponen dalam sampel. Dalam kromatografi gas, komponen sampel
dilarutkan dalam pelarut dan diuapkan untuk memisahkan analit dengan mendistribusikan
sampel antara dua fase: fase gerak dan fase diam. Fase gerak adalah gas inert secara kimia
(tidak mudah bereaksi dengan sampel/zat lain) seperti helium, nitrogen, dll yang berfungsi
untuk membawa molekul analit melalui kolom yang dipanaskan. Sifat-sifat yang diinginkan
untuk fase gerak ialah (1) bersifat inert; (2) memiliki kemurnian yang tinggi, agar pada saat
menganalisis pure yang akan dipisahkan hanyalah senyawa yang ada di dalam sampel yang
akan dianalisis, tidak ada gangguan dari fase geraknya; (3) memiliki viskositas rendah; (4)
tahan pada listrik tinggi agar gas tersebut tidak rusak/terdekomposisi pada suhu tinggi.
Kromatografi gas adalah satu-satunya bentuk kromatografi yang tidak menggunakan fase
gerak untuk berinteraksi dengan analit.
Fase diam dapat berupa adsorban padat, yang disebut kromatografi gas-padat (GSC),
atau cairan pada penyangga inert, yang disebut kromatografi gas-cair (GLC). Sifat-sifat yang
diinginkan untuk fase diam dalam kolom kromatografi gas-cair meliputi (1) volatilitas rendah
(idealnya, titik didih cairan setidaknya 100 °C lebih tinggi dari suhu operasi maksimum untuk
kolom); (2) stabilitas termal; (3) memiliki kelarutan yang cukup.
Tabel 1. Beberapa Fase Diam Cair Umum untuk Kromatografi Gas-Cair.
Suhu
Fase Diam Nama dagang Pengaplikasian yang umum
Maksimum, °C
Polidimetil siloksan OV-1, SE-30 350 Fasa nonpolar serba guna,
hidrokarbon, aromatik
polinuklir, steroid, PCB
5% Fenil-polidimetil OV-3, SE-52 350 Metil ester asam lemak, alkaloid,
siloksan obat-obatan, senyawa
terhalogenasi
50% Fenil-polidimetil OV-17 250 Obat-obatan, steroid, pestisida,
siloksan glikol
50% Trifluoropropil- OV-210 200 Aromatik terklorinasi,
polidimetil siloksan nitroaromatik, benzena
tersubstitusi alkil
Polietilen glikol Carbowax 250 Asam bebas, alkohol, eter,
20M minyak esensial, glikol
50% Sianopropil- OV-275 240 Asam lemak tak jenuh ganda,
polidimetil siloksan asam rosin, asam bebas, alkohol
A. Prinsip Dasar
Daripada pemisahan fisik (seperti distilasi dan teknik serupa), GC menciptakan
pemisahan waktu. Ini dilakukan dengan melewatkan campuran yang diuapkan (atau
gas) melalui tabung yang berisi bahan yang memperlambat beberapa komponen lebih
dari yang lain. Ini memisahkan komponen dalam waktu. Setelah deteksi, hasilnya adalah
kromatogram, di mana setiap puncak mewakili komponen yang berbeda dari campuran
aslinya. Secara umum, prinsip dasar kromatografi gas adalah sebagai berikut:
1. Ketika komponen yang diuapkan disajikan dengan fase gas dan fase pelapisan,
komponen tersebut terbagi antara dua fase menurut daya tarik relatifnya terhadap
dua fase.
2. “Daya tarik” dapat berupa kelarutan, volatilitas, polaritas, interaksi kimia tertentu,
atau sifat lain yang berbeda dari satu komponen ke komponen lainnya.
3. Jika satu fase diam (pelapisan) dan fase lainnya bergerak (gas pembawa), komponen
akan bergerak dengan kecepatan kurang dari fase bergerak. Berapa banyak
tergantung pada kekuatan daya tarik.
4. Jika komponen yang berbeda memiliki “daya tarik” yang berbeda, mereka akan
terpisah pada waktunya.
Dalam kromatografi gas-padat (GSC), adsorben padat digunakan sebagai fase diam
& pemisahan terjadi melalui proses adsorpsi. sedangkan dalam kromatografi gas-cair
(GLC), fase diam terdiri dari lapisan tipis cairan tidak mudah menguap yang terikat pada
penopang padat & pemisahan terjadi melalui proses partisi. Kromatografi gas-cair adalah
teknik yang paling umum digunakan. Sampel yang akan dipisahkan terlebih dahulu
diubah menjadi uap & dengan demikian dicampur dengan fase gerak gas. Komponen
sampel yang lebih larut dalam fase diam bergerak lebih lambat & komponen yang
kurang larut dalam fase diam bergerak lebih cepat. Oleh karena itu, komponen-
komponen dipisahkan menurut koefisien partisinya. GLC digunakan di semua bidang
ilmu; namanya biasanya disingkat menjadi kromatografi gas (GC). Penerapan GSC
terbatas karena retensi semipermanen molekul aktif atau polar dan tailing puncak elusi
yang parah. Tailing merupakan hasil dari proses adsorpsi yang tidak linier. Akibatnya,
GSC hanya berguna untuk pemisahan spesies yang tidak tertahan oleh kolom gas-cair,
seperti komponen udara, hidrogen sulfida, karbon disulfida, nitrogen oksida, karbon
monoksida, karbon dioksida, dan gas-gas langka.
B. Instrumen
Berikut diagram skema untuk instrumen kromatografi gas secara umum.
C. Proses pemisahan
Gas pembawa seperti helium (He), nitrogen (N2) atau hidrogen (H2) lebih disukai
untuk disuplai pada laju aliran konstan ke sampel ke lubang injeksi. Sebuah tabung
pemisah yang disebut kolom dihubungkan antara port injeksi sampel dan detektor, ketiga
bagian dipertahankan pada suhu yang sesuai. Sampel yang disuntikkan ke dalam port
injeksi sampel secara instan menguap dan mengalir ke dalam kolom.
Bagaimana Kolom Memisahkan Komponen
Pemisahan campuran menjadi komponen individu terjadi di kolom. Banyak kolom
tersedia untuk memisahkan campuran. Pilihannya tergantung pada sifat campuran dan
jenis informasi yang diinginkan. Namun, semua kolom berfungsi menggunakan
mekanisme dasar yang sama. Ini adalah penampang kolom yang berisi sampel injeksi
dua komponen (titik berwarna). Tidak ada pengepakan atau pelapisan; kolom hanyalah
sebuah tabung kosong.
D. Interpretasi kromatogram
Pengukuran Puncak
1. Waktu retensi/retention time
Waktu kemunculan, diukur dari injeksi hingga deteksi, adalah jumlah dari dua
bagian:
a. Waktu pemipaan—berapa lama waktu yang dibutuhkan gas pembawa untuk
melewati kolom. Ini diukur dengan menyuntikkan udara atau zat lain yang tidak
berinteraksi.
b. Waktu retensi—waktu tambahan yang disebabkan oleh interaksi komponen
dengan fase diam dalam kolom.
Waktu ini diukur berdasarkan waktu dari saat sampel diinjeksikan pada titik
dimana tampilan menunjukkan tinggi puncak maksimum untuk senyawa itu.
Setiap senyawa memiliki waktu retensi yang berbeda. Untuk senyawa tertentu,
waktu retensi sangat bervariasi dan bergantung pada:
1) Titik didih senyawa. Senyawa yang mendidih pada temperatur yang lebih
tinggi daripada temperatur kolom, akan menghabiskan hampir seluruh
waktunya untuk berkondensasi sebagai cairan pada awal kolom. Dengan
demikian, titik didih yang tinggi akan memiliki waktu retensi yang lama.
2) Kelarutan dalam fase cair. Senyawa yang lebih mudah larut dalam fase cair,
akan mempunyai waktu lebih singkat untuk dibawa oleh gas pembawa.
Kelarutan yang tinggi dalam fase cair berarti memiiki waktu retensi yang
lama.
3) Temperatur kolom. Temperatur tinggi menyebakan pergerakan molekul-
molekul dalam fase gas; baik karena molekul-molekul lebih mudah
menguap, atau karena energi atraksi yang tinggi cairan dan oleh karena itu
tidak lama tertambatkan. Temperatur kolom yang tinggi mempersingkat
waktu retensi untuk segala sesuatunya di dalam kolom.
Untuk sebagian besar tujuan, waktu pemipaan diabaikan dan waktu retensi diambil
sebagai waktu kemunculan.
2. Ukuran puncak/peak size
Ukuran dapat diukur baik sebagai area puncak atau tinggi puncak, keduanya diukur
relatif terhadap garis dasar yang dibangun. Garis dasar di bawah puncak tidak dapat
diukur secara langsung. Itu harus dibangun dari garis dasar di kedua sisi puncak. Ini
sederhana dengan puncak yang terpisah dengan baik. Jauh lebih sulit ketika puncak
digabungkan, di tepi trailing puncak pelarut, atau kurang dari ideal. Untuk alasan ini,
waktu yang dihabiskan untuk meningkatkan pemisahan puncak adalah waktu yang
dihabiskan dengan baik.
Efisiensi pada Kolom
Kolom efisiensi tinggi menghasilkan puncak yang sempit, bisa dilihat pada gambar
berikut
GC dengan deteksi MS (GC-MS) adalah alat rutin dan ampuh untuk analisis kuantitatif
senyawa organik dalam sampel lingkungan dan biologis.
LATIHAN SOAL