Mekanisme derajat kedelai (Glycine max L.

Merrill) terkait dengan tahap kematangan dan suhu

pengeringan pascapanen

1. Perkenalan

Kesulitan dalam mengekstraksi dan mengidentifikasi turunan katabolik klorofil dapat menjelaskan
bahwa mekanisme penguraian masih belum sepenuhnya dipahami. Khususnya pada kedelai,
fenomena ini memiliki makna yang luar biasa karena hilangnya warna hijau mempengaruhi kualitas
biji-bijian di pasar. Kehadiran klorofil atau pigmen kehijauan lainnya dalam kanola dan kedelai tidak
hanya memberikan warna gelap dan meningkatkan oksidasi dengan adanya cahaya.

Pemecahan klorofil saat ini digambarkan sebagai mekanisme multi-langkah. Kelompok reaksi
pertama menghasilkan turunan kehijauan. Perubahan utama yang terjadi pada reaksi kelompok
pertama berhubungan dengan pelepasan Mg melalui perpindahan dengan dua H dalam kondisi
asam dan/atau oleh aksi Mg dekelatase dan pemutusan rantai fitol oleh enzim klorofilase, yang
menghasilkan zat antara kehijauan, seperti seperti feofitin, klorofilida dan feoforbida, semuanya
menunjukkan cincin tetrapirol utuh. Meskipun mekanisme umum degradasi telah ditetapkan, tidak
ada informasi tentang pengaruh lingkungan eksternal pada mekanisme yang terlibat dalam
degradasi klorofil dalam kedelai selama pematangan dan penyimpanan pascapanen.

2. Bahan dan metode

2.1. Desain eksperimental dan bahan tanaman

Menggunakan rancangan percobaan faktorial 2x6x3 (2 kultivar x 6 tahap pematangan x 3
kondisi pengeringan.

2.2. Kondisi pengeringan

Benih yang terbungkus, dalam polong utuhnya pada setiap tahap pematangan, dibagi menjadi
empat kelompok dan tiga benih kadar air telah menurun menjadi 13%. Setelah itu, biji diirik,
disimpan pada 2 C sampai analisis kelembaban dan pigmen.

2.3. Penentuan kelembaban

Kadar air benih baru dipanen ditentukan dengan pengeringan oven 10 g sampel pada 105 °C sampai
mencapai berat konstan. Kelembaban sisa dalam benih cepat atau lambat kering ditentukan dengan
mengeringkan 2 g biji kedelai bubuk pada 105°C sampai mencapai berat konstan

2.4. Ekstraksi pigmen

Lima gram biji kering digiling , dicampur dengan 80% aseton dingin, disaring melalui corong pelat
sinter di bawah vakum. Pelet yang diendapkan diekstraksi dua kali sampai residu tidak berwarna.
Filtrat gabungan dipindahkan ke dalam corong pisah dalam 60 mL petroleum eter dan 20 mL air
deionisasi dingin. Lapisan air adalah dibuang setelah gemetar kuat dan berdiri. pencucian diulangi 3-
4 kali untuk menghilangkan aseton dan fase eter yang mengandung pigmen didehidrasi dengan
natrium sulfat anhidrida. Ini larutan disaring, dipindahkan ke gelas kimia dan dikeringkan dalam
rotavapor. Residu dilarutkan dalam 4-5 mL aseton dan disaring pada filter membran 0,45 m sebelum
analisis HPLC.
2.5. Analisis pigmen HPLC

Tiga pompa dengan gradien ternary (LC10ADVP), sistem yang dikendalikan digunakan untuk analisis
HPLC. Pemisahan menggunakan Nukleosil ODS 100 kolom dan laju alir 1 mL/menit.

2.6. Persiapan standar pigmen

Klorofil dibeli dari Sigma Chemical Co. Karena turunan klorofil tidak tersedia di pasaran, warna
kehijauan katabolit klorofil dibuat dari bayam.

3. Hasil

3.1. Sintesis standar turunan klorofil

perlu untuk mensintesis feofitin, klorofilida dan feoforbida a dan b karena kurangnya turunan klorofil
yang tersedia secara komersial. Ekstrak daun bayam segar berhasil digunakan dan identitas senyawa
yang disintesis dikonfirmasi oleh karakteristik spektralnya. Seperti yang diharapkan, spektrum
klorofilida a dan b mirip dengan klorofil induknya masing-masing a dan b karena satu-satunya
perbedaan dalam molekul struktur adalah kurangnya rantai fitol di klorofilida. Demikian pula,
spektrum pheophorbides a dan b mungkin dibandingkan dengan pheophytins a dan b, masing-
masing. Klorofil a dan b dan feofitin a dan b memiliki identitas mereka dikonfirmasi oleh
spektrometri massa desorpsi plasma.

3.2. Pemisahan dan identifikasi kedelai pigmen oleh HPLC

Pigmen yang diamati dalam kromatogram sampel diidentifikasi menurut spektrum serapannya dan
waktu retensi dibandingkan dengan standar masing-masing yang diproduksi di laboratorium

Tabel 2 menyajikan waktu retensi dan panjang gelombang serapan maksimum dari semua pigmen
diisolasi sesuai dengan prosedur dan kondisi kromatografi dijelaskan. Hasil nyatakan waktu retensi
rata-rata disertai dengan standar deviasi mereka dari semua sampel yang dianalisis. Tabel 2,
pigmennya adalah: dielusi sesuai dengan penurunan polaritasnya, mulai pada 7,70 menit dengan
klorofilida b dan berakhir pada sekitar 30 menit dengan feofitin a. Semua pigmen baik-baik saja
dipisahkan kecuali untuk epimer klorofil a dan b dan feofitin a dan b yang terelusi segera setelah itu
orang tua mereka yang sesuai.
3.3. Perubahan pigmen selama pematangan kedelai

Semakin dominan pigmen yang ditemukan adalah lutein, klorofil a dan b, feofitin a dan b dan yang
kurang dominan adalah diidentifikasi sebagai klorofilida a dan b, feoforbida a, epimer klorofil b ,
feofitin a dan b , sebagai serta beberapa xantofil yang tidak teridentifikasi. hanya lutein yang dapat
dideteksi dalam jumlah rendah dan beberapa puncak kecil yang tidak teridentifikasi xantofil.

3.4. Hubungan antara pigmen hijau utama dan kadar air dalam benih yang baru dipanen

Pada awal periode pematangan ketika biji mengandung sekitar 70% kelembaban, tingkat klorofil
total hampir 500 mg kg-1. Saat pematangan berlangsung, terjadi penurunan eksponensial klorofil
hingga hampir menghilang sepenuhnya. Hanya sejumlah kecil feofitin yang terdeteksi di setiap
tahap, mewakili kurang dari 10% dari kandungan klorofil asli. Turunan dephytylated (feofitin dan
klorofilida) hanya ditemukan dalam beberapa sampel dalam jumlah sedikit meskipun terjadi
degradasi klorofil dan kadar feofitin yang rendah.

3.5. Pengaruh pengeringan pascapanen terhadap klorofil degradasi

Biji yang dikeringkan pada 25 C memiliki pigmen hijau hampir benar-benar terdegradasi, kecuali saat
dipanen lebih awal tahap pematangan (R6). Kandungan klorofil kering benih pada 25 C yang dipanen
pada R6 adalah sekitar 50 mg kg−1 dan menurun menjadi 3 mg kg-1. feofitin juga hadir dalam tingkat
rendah, mulai dari 6 mg kg-1 dan berakhir pada tingkat yang tidak terdeteksi. klorofilida dan
feoforbida tidak terdeteksi di ini sampel. Benih dikirim ke pengeringan oven pada suhu 40 C dengan
sirkulasi udara menyajikan tingkat klorofil yang tinggi dan akumulasi feofitin juga bisa menjadi
diamati. Kedua pigmen tersebut menurun selama proses pematangan.