Aktivitas Antioksidan Tumbuhan Terpilih Dari Ramuan Empiris Untuk Penyakit Liver: Kajian

Fisika-Kimia dan Biologi Molekular

HARTO WIDODO, Prof. Dr. apt. Abdul Rohman, M.Si.; Prof. Dr. apt. Sismindari, S.U.; Prof. Dr. drh. Widya Asmara, S
Universitas Gadjah Mada, 2021 | Diunduh dari http://etd.repository.ugm.ac.id/

AKTIVITAS ANTIOKSIDAN TUMBUHAN TERPILIH DARI RAMUAN

EMPIRIS UNTUK PENYAKIT LIVER: KAJIAN FISIKA-KIMIA DAN
BIOLOGI MOLEKULAR

Abstrak

Penyakit kronis dan penyakit degeneratif terkait lainnya telah menjadi

permasalahan kesehatan secara global dan prevalensinya terus meningkat.
Patofisiologi berbagai penyakit degeneratif berkaitan erat dengan stres oksidatif
(SO). Penyebab SO adalah meningkatnya jumlah oksidan khususnya reactive
antioxidant species (ROS) yang dipicu oleh faktor internal maupun faktor eksternal
dan berkurangnya jumlah dan aktivitas antioksidan (AAO) endogen seperti
superoxide dismutases (SOD), catalase (CAT), Glutathione-S-transferase (GSt)
serta tidak tercukupinya asupan antioksidan (AO) dari luar tubuh. Liver merupakan
organ target utama SO yang berakibat prevalensi penyakit liver semakin tinggi.
Tumbuhan yang mengandung berbagai fitokimia merupakan sumber AO yang
sangat penting. Indonesia selain memiliki biodiversitas tumbuhan yang tinggi juga
memiliki keberagaman suku (etnisitas) dan budaya. Pengobat tradisional (battra)
dari berbagai etnis memanfaatkan beragam tumbuhan untuk mengobati berbagai
penyakit merupakan aspek yang menarik untuk dipelajari. Riset Tumbuhan Obat
dan Jamu (dikenal sebagai RISTOJA) tahun 2012, 2015, dan 2017 telah
menginventarisir 380 tumbuhan yang digunakan oleh battra untuk pengobatan
penyakit liver, 14 diantaranya terpilih untuk dikaji utamanya karena belum banyak
publikasi ilmiah terkait AAO tumbuhan tersebut. Tujuan penelitian ini adalah
menguji AAO tumbuhan terpilih secara in vitro kimiawi, biologis maupun secara
in vivo sehingga untuk mendaptkan fraksi dengan AAO paling tinggi. Sampel
tumbuhan dikeringkan, diserbuk, disaring (60 mesh) dan dimaserasi untuk
memperoleh ekstrak metanol kasar (EMK). EMK dianalisis kandungan flavonoid
total (KFT) dan fenol total (KFnT) serta diuji AAO secara in vitro kimia
menggunakan metode DPPH Radical Scavenging Activity, ABTS Radical Cation
Decolorization Assay, dan Ferric Reducing-Antioxidant Power (FRAP) Assay.
EMK Macaranga subpeltata dan Baccaurea racemosa menunjukkan AAO lebih
tinggi selanjutnya difraksinasi mengunakan n-hexan, diklorometan, kloroform, etil
asetat, etanol, dan air sehingga dihasilkan berturut-turut fraksi heksan (FH), fraksi
diklorometan (FD), fraksi kloroform (FK), fraksi etilasetat (FEA), fraksi etanol
(FEt), fraksi air (FA), dan residu (FR). Pengujian AAO terhadap seluruh fraksi
menunjukkan bahwa FEA M. subpeltata lebih baik daripada fraksi lainya serta
menunjukkan daya penangkapan radikal bebas lebih baik dari pada standard
pembanding baik L(+)-ascorbic acid (vitamin C) maupun silymarin. Pengujian
AAO secara in vitro dilakukan pada sel line Vero dan HepG2, sedangkan secara in
vivo pada tikus Sprague Dawley (SD) jantan yang dinduksi kerusakan hati
menggunakan CCl4. Perlakuan 1 mM H2O2 meningkatkan produksi ROS sel Vero
hingga 1,6 kali dari kontrol, sedangkan pemberian FEA M. subpeltata dan
silymarin masing-masing dengan dosis 150 g/mL berturut-turut menurunkan
produksi ROS sebesar 50% dan 44%. FEA 50 g/mL meningkatkan sel Vero hidup
hingga 9,53% sedangkan silymarin 50 g/mL sebesar 8,09%. Pada dosis 150

xvii
 Aktivitas Antioksidan Tumbuhan Terpilih Dari Ramuan Empiris Untuk Penyakit Liver: Kajian
Fisika-Kimia dan Biologi Molekular
HARTO WIDODO, Prof. Dr. apt. Abdul Rohman, M.Si.; Prof. Dr. apt. Sismindari, S.U.; Prof. Dr. drh. Widya Asmara, S
Universitas Gadjah Mada, 2021 | Diunduh dari http://etd.repository.ugm.ac.id/

g/mL FEA meningkat sel Vero hidup hingga 10,24% sedangkan silymarin
sebesar 12,54%. CCl4 dosis 2 mL/kg BB diberikan pada hari ke-4 dan ke-8
mengakibatkan tekanan pertambahan berat badan (BB) tikus SD jantan,
menimbulkan kerusakan hepatosit seperti degenarasi hidrofik, steatosis, dan
akumulasi glikogen, serta ditandai dengan meningkatnya serum alanin
transaminase (ALT), aspartat transaminase (AST), dan conjugated bilirubin (CB).
Pemberian senyawa AO (FEA M. subpeltata dosis 50, 100, 150 mg/kg BB; 100
mg/kg BB silymarin; dan butil hidroksi anisol/BHA dosis 10 mg/kg BB) selama 10
hari mampu mencegah tekanan pertambahan BB dan kerusakan liver akibat
pemberian CCl4. FEA dan silymarin dosis 100 mg/kg BB memiliki kemampuan
yang setara dalam mencegah penurunan BB sedangkan BHA 10 mg/kg BB
memiliki kemampuan yang paling rendah. Senyawa AO mampu mencegah dan
memperbaiki kerusakan hepatosit dari SO yang diakibatkan oleh metabolisme
CCl4. FEA M. subpeltata mampu mencegah lipid peroksidasi yang ditandai dengan
kadar malondialdehid (MDA) yang normal, meningkatkan protein total liver, dan
meningkatnya AO endogen liver (terutama SOD dan GSt) yang sebanding dengan
silymarin maupun BHA. AAO FEA M. subpeltata dalam mencegah SO baik in
vitro maupun in vivo melalui mekanisme: penangkapan radikal bebas, agen
pereduksi, pengkelat logam, pencegah peroksidasi lipid, dan aktivasi antioksidan
endogen. Tumbuhan obat yang digunakan oleh pengobat tradisonal merupakan data
base yang sangat penting untuk mengekplorasi senyawa antioksidan baru. Faksi etil
asetat dari M. subpeltata menunjukkan potensi yang baik untuk dimanfaatkan lebih
lanjut.

Kata kunci: antioxidant, ramuan penyakit hati, in vitro, in vivo

xviii
 Aktivitas Antioksidan Tumbuhan Terpilih Dari Ramuan Empiris Untuk Penyakit Liver: Kajian
Fisika-Kimia dan Biologi Molekular
HARTO WIDODO, Prof. Dr. apt. Abdul Rohman, M.Si.; Prof. Dr. apt. Sismindari, S.U.; Prof. Dr. drh. Widya Asmara, S
Universitas Gadjah Mada, 2021 | Diunduh dari http://etd.repository.ugm.ac.id/

ANTIOXIDANT ACTIVITY OF SELECTED PLANTS FROM EMPIRICAL

CONCOCTION FOR LIVER DISEASES: A STUDY OF PHYSIC-
CHEMICAL AND MOLECULAR BIOLOGY

Abstract

A chronic and other degenerative-related diseases have become a global

health problem and the prevalence continues to increase. The pathophysiology of
those various degenerative diseases is closely related to oxidative stress (OS), an
imbalance state of the oxidant-antioxidant system. It may occur due to an increase
of oxidants level especially reactive antioxidant species (ROS), a reduction of the
number and activity of endogenous antioxidants such as superoxide dismutases
(SOD), catalase (CAT), Glutathione-S-transferase (GSt), and insufficient of dietary
intake of antioxidants (AO). The liver is the main target organ of OS, consequences
to a high prevalence of liver disease. Plants containing various phytochemicals are
very important sources of AO. Apart from having immense plant biodiversity,
Indonesia also has ethnic and cultural diversities. Traditional healers (battra) of
various ethnicities utilizing plants for treating many diseases is an enticing aspect
to be studied. The research on medicinal plants and Jamu (known as RISTOJA) in
2012, 2015, and 2017 has inventoried 380 plants utilized by battra for liver disease
treatment, 14 of those were selected to study mainly based on the scarce
information of their OA activity (AOA). The purpose of this study was to
investigate the AAO of selected plants both in vitro and in vivo to obtain the
fraction with the highest AAO. The plant samples were dried, powdered, filtered
(60 mesh), and macerated to obtain crude methanol extract (CME). The CMEs
were analyzed for total flavonoid content (TFC) and total phenolic content (TPC)
and examined for in vitro AOA using the DPPH Radical Scavenging Activity
method, ABTS Radical Cation Decolorization Assay, and Ferric Reducing-
Antioxidant Power (FRAP) Assay. Principal Component Analyses upon the result
of those series tests showed that CME of Macaranga subpeltata and Baccaurea
racemosa exhibited higher AOA. These two CMEs then fractionated using n-
hexane, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, ethanol, and water to obtain
HF, DF, CF, EAF, EtF, WF, and also a residue (R) respectively prior to evaluate
their AOA. The TFC, TPC, AOA evaluations showed that the EAF of M.
subpeltata was superior to other fractions and exhibited a higher free radical
scavenging activity than those standards both L(+)-ascorbic acid (vitamin C) and
silymarin. In vitro AOA evaluation was carried out on Vero and HepG2 cell lines,
while in vivo AOA assessment was done on male Sprague Dawley (SD) rats treated
with CCl4 to induced liver damage. Vero cell ROS production increased 1,6 fold by
treatment of 1 mM H2O2, whereas the giving of EAF M. subpeltata and silymarin

xix
 Aktivitas Antioksidan Tumbuhan Terpilih Dari Ramuan Empiris Untuk Penyakit Liver: Kajian
Fisika-Kimia dan Biologi Molekular
HARTO WIDODO, Prof. Dr. apt. Abdul Rohman, M.Si.; Prof. Dr. apt. Sismindari, S.U.; Prof. Dr. drh. Widya Asmara, S
Universitas Gadjah Mada, 2021 | Diunduh dari http://etd.repository.ugm.ac.id/

at the same dose of 150 g.mL-1 were able to reduce the ROS production of 50%
and 44% respectivally. The giving of FEA 50 g.mL-1 increased Vero cells alive
by 9.53% while silymarin 50 g.mL-1 was 8.09%. Compared to untreated cells,
EAF at a dose of 150 g.mL-1 increased the alive of Vero cells by 10.24% while
silymarin was 12.54%. CCl4 at doses of 2 mL.kg-1 BW by gavage administration
on the 4th and 8th days indicated an oppression on male SD rats' weight gain. Rats
receiving the CCl4 displayed hepatocyte damage such as hydropic degeneration,
steatosis, and accumulation of glycogen. It also markedly elevated serum alanine
transaminase (ALT), aspartate transaminase (AST), and conjugated bilirubin (CB).
A consecutive 10 day-administration of AOs (EAF M. subpeltata at doses of 50,
100, 150 mg.kg-1 BW; silymarin at a dose of 100 mg.kg-1 BW; and butyl hydroxy
anisol/BHA at a dose of 10 mg.kg-1 BW) were capable of discharging weight gain
oppression and alleviating of liver damage due to CCl4 treatment. EAF and
silymarin at a dose of 100 mg.kg-1 BW exhibited the same capacity to prevent
weight loss, while BHA 10 mg/kg BW resulted the lowest demonstration. AO
compounds can prevent and repair OS hepatocyte due to CCl4 intoxication. The
EAF of M. subpeltata decreased malondialdehyde (MDA) to a normal level an
indication of lipid peroxidation prevention, increase of total liver protein, and
enhance liver endogenous AO (especially SOD and GST) of SD rats compared to
those CCl4-treated rats which were equal to the effect of silymarin and BHA
administration. The AOA mechanisms in which FEA of M. subpeltata preventing
OS both in vitro and in vivo were through: free radical scavenging, reducing
agents, metal chelating, preventing lipid peroxidation, and activating of
endogenous antioxidants. Medicinal plants used by traditional healers are a very
important database for exploring new antioxidant compounds. The ethyl acetate
fraction of M. subpeltata showed potential AAO properties for further utilization.

Keywords: antioxidant, liver diseases concoction, in vitro, in vivo

xx