Efek dan Mekanisme Baicalin pada Apoptosis pada Sel Kanker Serviks Sel HeLa In-vitro

Abstrak

Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh apoptosis dan mekanisme Baicalin pada sel
kanker serviks manusia HeLa. Efek penghambatan baicalin pada pertumbuhan sel HeLa diukur dengan
uji MTT, dan proliferasi sel dan migrasi dianalisis dengan uji awal sel. Perubahan morfologis sel apoptosis
dipandang oleh cahaya mikroskop dan mikroskop elektron, dan penangkapan pertumbuhan sel
dikonfirmasi dengan flow cytometry. Selain itu, Western blot digunakan untuk menyelidiki ekspresi
protein terkait apoptosis; spektrofotometri digunakan untuk memeriksa aktivasi Caspase-3. Hasil
penelitian kami menunjukkan bahwa baicalin dapat menghambat proliferasi Sel HeLa melalui induksi
apoptosis dalam waktu dan dosis- tergantung (P <0,01). Sinyal apoptosis yang disebabkan oleh baicalin
ditandai oleh pengekspresian Bax, Fas, FasL dan Caspase-8 protein yang diatur ke atas, dan pengaturan
bawah Bcl-2 ekspresi protein Hasil ini menunjukkan bahwa baimbin-induced apoptosis melibatkan
aktivasi Caspase-3 di sel HeLa melalui jalur mitokondria intraselular dan permukaan maut jalur reseptor.

Pengantar

Baicalin, flavonoid yang diekstrak dari ramuan tradisional Cina Scutellaria baicalensis Georgi dan
memiliki banyak signifikan Aktivitas biologis, seperti anti oksidan, anti-inflamasi, anti bakteri, imun-
merangsang, dan efek anti-virus (1-2). Sejauh ini, baicalin telah terbukti memiliki lebar Berbagai kegiatan
anti-tumor in-vitro dan in-vivo, sementara memiliki efek yang tidak signifikan pada manusia normal sel
hematopoietik dan sel jaringan (3). Berbasis pada laporan dari penyelidik sebelumnya, itu menunjukkan
bahwa baicalin dapat menyebabkan apoptosis kanker usus manusia (4), kanker payudara (5), karsinoma
paru (6) dan limfoma Burkitt (7). Baru-baru ini, dilaporkan bahwa baicalin tampaknya menjadi sangat
menarik sebagai obat antikanker baru dan agen kemoterapi potensial melawan manusia karsinoma
mucoepidermoid bermutu tinggi (8). Namun, efek dan mekanisme pastinya Baicalin pada kanker serviks
masih belum diketahui. Kanker serviks adalah salah satu yang paling umum keganasan ginekologis, dan
kejadiannya menempati urutan kedua dalam tumor ginekologis. Di Beberapa tahun terakhir, kejadian
karsinoma serviks Pada wanita muda di bawah 35 tahun adalah menjaga meningkat dengan
meningkatnya infeksi HPV (9). Saat ini, operasi, radioterapi, kemoterapi dan terapi kombinasi digunakan
untuk mengobati serviks Kanker, bagaimanapun, perawatan ini bisa dengan mudah menyebabkan reaksi
merugikan atau komplikasi serius. Studi sebelumnya menyarankan agar baicalin bisa menghambat
pertumbuhan berbagai sel kanker, Tapi hanya sedikit efek samping pada sel normal, begitulah bisa
menjadi selektifitas yang lebih baik untuk pengobatan kanker manusia Karena itu, jelajahi efeknya dan
mekanisme baicalin pada apoptosis Kanker serviks Sel HeLa memiliki teori yang hebat dan signifikansi
praktis, yang akan membantu memberikan pencegahan dan pengobatan baru yang efektif metode
untuk pengobatan kanker serviks.

Bahan kimia dan reagen

Baicalin disediakan oleh Nanjing ZeLang Medical Technology Co, Ltd di Cina, dan kemurnian yang
ditentukan adalah 98,12%, dengan Lot nomor ZL101005 DMEM / HIGH GLUCOSE diperoleh dari Thermo
Fisher Scientific Inc serum serum janin domestik unggul dan kit pendeteksian apoptosis Annexin V-FITC
dibeli dari Nanjing KeyGen Biotech. Co, Ltd di Cina. Proliferasi sel MTT dan Kit uji sitotoksisitas, aktivitas
Caspase-3 assay Kit, kit protein assay BCA, Dimethyl sulfoksida (DMSO), larutan Trypsin-EDTA, Penanda
berat molekul protein, lisis Cell penyangga untuk Western dan IP, HRP berlabel kambing anti-kelinci IgG
(H + L) dan membran PVDF dibeli dari Beyotime Institute of Bioteknologi di China, sementara kelinci
anti-Bcl-2, anti-Bax, anti-Fas, anti-FasL, anti-Caspase-8 dan β-aktin diperoleh dari biosintesis Beijing
bioteknologi Co, Ltd di Cina. Semua lainnya bahan kimia dan reagen yang digunakan bersifat analitis
kelas.

Kultur Sel

Sel HeLa diperoleh dari Rumah Sakit Tumor Akademi Ilmu Kedokteran China berada dikultur dalam
DMEM yang mengandung 10% bovine janin serum (FBS), 100 u / mL penisilin dan 100 u/mL streptomisin
dalam inkubator yang lembab pada 37 ° C di bawah CO2 5% suasana. Sel itu berhasil setiap dua sampai
tiga hari.

Persiapan obat

Baicalin dilarutkan dalam DMSO 100% pada a konsentrasi 60 mg / mL sebagai larutan stok dan disimpan
pada suhu 4 ° C, diencerkan dengan DMEM media sebelum setiap percobaan. Akhir konsentrasi DMSO
kurang dari 0,1% pada semua kelompok baicalin.

MTT assay

Efek baicalin terhadap viabilitas sel HeLa ditentukan dengan uji MTT kolorimetrik. Sel HeLa dibiakkan di
DMEM sampai fase eksponensial pertengahan, dan kemudian diunggulkan dalam 96-Piring dengan baik
pada kerapatan 5 × 104 / mL per sumur di 100 μL medium. Setelah inkubasi selama 24 jam, sel-sel
terkena baicalin (25, 50, 75,100, 150, 200 μg / mL) atau 10 μL DMEM (kontrol) selama 24 jam di bawah
atmosfir CO2 5% dan 37 ° C. Setelah diobati, 10 μL MTT 5 mg / mL ditambahkan, dan sel-sel diinkubasi
selama 4 jam pada suhu 37 ° C. Kemudian Formanzan 100 μL ditambahkan untuk membubarkan kristal
formazan selama 4 jam, dan absorbansi spektrofotometri pada 570 nm diukur menggunakan microplate
reader Tingkat penghambatan dihitung sebagai berikut :

Nilai IC50 dihitung dengan

kurva regresi dari IR pada konsentrasi yang berbeda.

Metode gores sel

Sel HeLa diunggulkan ke piring enam sumur, Garis lurus ditarik oleh ujung pipet di Bagian bawah
lempeng budaya saat sel menyebar 80% -90% dari lempeng budaya. Sel dicuci dengan PBS untuk
menghilangkan sel yang terpisah. Lalu sel dibiakkan secara terpisah dalam medium lengkap
mengandung dosis tinggi (100 μg / mL) dan dosis rendah (50 μg / mL) baicalin, sedangkan sel kontrol
kelompok diinkubasi dalam medium lengkap. Dalam multipel yang sama, migrasi sel ke dalam
Permukaan goresan Mark Points diamati dengan mikroskopi pada titik waktu 0, 12, dan 24 jam masing-
masing. Ujung jarak goresan itu diukur dalam foto dan dianalisis dengan komputer perangkat lunak.
Rasio jarak migrasi adalah dihitung sebagai berikut:

Rasio jarak migrasi (%) = (1 - goresan jarak pada titik waktu 24-jam / jarak goresan pada titik waktu 0-
jam) × 100%

Penilaian morfologi sel oleh inverted mikroskopi Sel HeLa dalam fase logaritmik adalah Unggul di piring
6-sumur. Setelah inkubasi selama 24 h, dosis tinggi (100 μg / mL) dan dosis rendah (50 μg /mL) baicalin
ditambahkan ke dalam kelompok perlakuan masing, sedangkan volume DMEM yang sama media
ditambahkan ke dalam kelompok kontrol. Setelah Pengobatan selama 24 jam dan 48 jam, morfologi sel
dilihat oleh mikroskop te8 di bawah CO2 5% suasana. Setelah perawatan baicalin selama 48 jam, sel
dikumpulkan dan diperbaiki pada 2,5% glutaraldehida selama 12 jam pada suhu 4 ° C tetap dalam 1%
osmium tetroxide, didehidrasi dengan konsentrasi aseton dan tertanam di resin epoksi Bagian Ultrathin
dipotong dan diwarnai dengan uranyl acetate selama 30 menit dan kemudian dengan timbal sitrat
selama 20 menit, akhirnya ultrastruktur Sel apoptosis diperiksa oleh TEM (mikroskop elektron
transmisi). Analisis cytometric aliran VITASI VITIT / PI Sel HeLa diobati dengan tinggi dan rendah dosis
baicalin selama 48 jam, kemudian dipanen dan dicuci dua kali dengan PBS. 300 mesh saringan untuk
filtrasi digunakan untuk mendapatkan suspensi sel tunggal. 1 × 106 sel dihitung dan resuspended dalam
500 μL buffer pengikat, kemudian diinkubasi dengan Lampiran 5 μL V-FITC dan 5 μL PI selama 10 menit
dalam gelap. Sel HeLa diuji oleh aliran FACSCalibur cytometer, dan tingkat apoptosis sel diperoleh
dengan software ModFIT.

Analisis western blot

Ekspresi gen terkait apoptosis diselidiki oleh analisis Western blot. HeLa sel (1 × 106/ mL) diunggulkan di
piring kemudian dibudidayakan selama 24 jam. Setelah perawatan dengan baicalin untuk 48 jam, sel
HeLa dikumpulkan dan dicuci dua kali dengan PBS yang dingin. Sel kemudian dilisiskan dalam
lisispenyangga untuk Western dan IP. Konsentrasi protein diukur menggunakan deteksi protein BCA alat
uji Singkatnya, jumlah protein yang sama dipisahkan oleh SDSPAGE dan ditransfer ke membran PVDF.
Setelah memblokir dengan 5% Susu skim tanpa lemak, membran diinkubasi semalam dengan antibodi
primer, dan kemudian dengan antibodi sekunder. Anti kelinci Bcl-2, Bax, Fas, FasL, Caspase-8 dan β-actin
Antibodi digunakan sebagai antibodi primer dengan lobak peroksidase (HRP) - dikepreskan IgG anti
kelinci kambing sebagai antibodi sekunder. Setelah dicuci, protein terdeteksi Uji chemiluminescence blot
Barat, dan gambar diperoleh dengan gel jenis TMW.

sistem pencitraan

Uji aktivitas Caspase-3 Aktivasi caspase-3 dideteksi oleh metode spektrofotometri. 5 × 106 sel itu
dikumpulkan dari sel HeLa yang diobati dengan tinggi dan dosis rendah baicalin selama 12 jam. Lalu
dingin buffer lisis ditambahkan ke dalam sel, dan sel-selnya Dilisis es, terombang ambing dalam osilator
vortex dan disentrifugasi pada 10.000 rpm selama 1 menit. Setelah itu supernatan itu ditarik ke
sentrifugal lain tabung, konsentrasi protein ditentukan dengan metode asam bicinchoninic (BCA). 50 μL
2x buffer reaksi dan 5 μL Caspase-3 substrat ditambahkan ke dalam supernatan lisis 50 μL lisis
mengandung 200 μg protein, sedangkan 50 μL lisis buffer dan 50 μL 2x buffer reaksi ditambahkan ke
dalam kelompok kontrol Setelah kultur di 37° C selama 4 jam dalam gelap, absorbansi pada 450
nmdiukur menggunakan microplate reader, dan Aktivitas caspase-3 diwakili oleh nilainya dari ODtreated
/ ODcontrol.

Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan Perangkat lunak statistik SPSS13.0. Data itu dianalisis
dengan analisis varian satu arah; perbedaan antar kelompok diuji oleh Test Student yang tidak
berpasangan dan dinyatakan sebagai mean ± SD. Perbedaan pada: p <0,05 adalah dianggap signifikan
secara statistik

Hasil

Pengaruh baicalin pada pertumbuhan sel HeLa Efek baicalin terhadap viabilitas sel HeLa ditentukan
dengan MTT assay. Setelah perawatan dengan konsentrasi yang berbeda baicalin selama 24 jam,
hasilnya menunjukkan bahwa Pertumbuhan sel HeLa secara signifikan terhambat, dan jumlah sel yang
layak menurun dalam a tergantung dosis (P <0,05, P <0,01). Itu Tingkat penghambatan sel HeLa
ditunjukkan pada Tabel1, dan IC50 dari baicalin (24 jam) dihitung dengan kurva regresi adalah 94,44 μg /
mL (Gambar 1). Pengaruh baicalin pada proliferasi dan kemampuan migrasi sel HeLa Kemampuan
proliferasi sel HeLa dan migrasi diamati dengan metode sel awal. Setelah menggaruk, sel di setiap
kelompok pindah ke daerah goresan, namun kecepatan proliferasi sel dan migrasi adalah yang tercepat
dalam kelompok kontrol, area awal hampir lenyap pada 24 jam titik waktu Jarak migrasi sel masuk
kelompok baicalin (50 μg / mL dan 100 μg / mL) berkurang secara signifikan, dan jumlah Sel-sel di
daerah awal juga mengalami penurunan, terutama kelompok dosis tinggi (100 μg / mL), area goresan
masih terlihat jelas pada waktu 24 jam titik (Gambar 2). Dibandingkan dengan kontrol kelompok, jarak
migrasi kelompok baicalin menurun secara signifikan (P <0,05), terutama Rasio migrasi sel kelompok
dosis tinggi itu lebih rendah dari kelompok dosis rendah (Tabel 2) Hasil penelitian menunjukkan bahwa
baicalin dapat menghambat proliferasi dan migrasi sel HeLa tergantung dosis. Morfologi sel apoptosis
HeLa diinduksi oleh baicalin diamati di bawah mikroskop cahaya Perubahan yang mencolok dalam
morfologi sel baicalin diperlakukan diamati di bawah mikroskop terbalik Sel HeLa tumbuh dengan baik
kelompok kontrol, yang bentuknya poligonal, Warna pun rata, dan kromatin kendur. Setelah

perawatan dengan baicalin selama 24 jam dan 48 jam, untuk Tingkat tertentu, pertumbuhan sel yang
melekat itu terhambat Beberapa sel menjadi menyusut dan bundar, Kemudian sel-sel terlepas dari
sajian budaya dan melayang. Apalagi bagian sel menjadi lebih gelap warnanya, membran sel menonjol,
dan apoptosis tubuh akhirnya muncul Perubahan morfologi ini Sel apoptotik menunjukkan bahwa
baicalin memiliki kemampuan untuk menginduksi apoptosis sel HeLa. (Gambar 3) Morfologi sel
apoptosis HeLa diinduksi oleh baicalin diamati oleh TEM Di bawah mikroskop elektron transmisi, kami
mengamati bahwa ada microvilli yang kaya permukaan sel dalam kelompok kontrol. Beberapa
organel, seperti mitokondria dan kasar Retikulum endoplasma, dapat diamati dengan mudah. Selain itu,
sel-sel yang memiliki inti bulat, kromatin longgar dan nukleolus menonjol besar. Sel HeLa diinduksi
dengan dosis tinggi baicalin selama 48 jam, permukaan mikrovili secara signifikan berkurang, dan
sementara itu, kondensasi kromatin dan tubuh berbentuk bulan sabit bisa diamati. Perubahan ini adalah
karakteristik apoptosis kematian sel (Gambar 4).

Deteksi persentase apoptosis

sel dengan metode pewarnaan ganda dengan Annexin V-FITC / PI Sel HeLa yang terkumpul di semua
kelompok ternoda melalui AnnexinV-FITC dan PI, dan kemudian sel Tingkat apoptosis terdeteksi oleh
flow cytometry (Gambar 5). Sel HeLa didistribusikan ke dalam empat kuadran: sel yang layak (Annexin- /
PI-), sel apoptosis awal (Annexin + / PI-), terlambat sel apoptosis (Annexin + / PI +), dan nekrotik
sel (Annexin- / PI +). Tingkat apoptosis sel di Indonesia kelompok kontrol (AnnexinV - FITC positif, B2 +
B4) adalah 4,61 ± 0,34%. Dibandingkan dengan kelompok kontrol, tingkat apoptosis sel hati diobati
dengan peningkatan baicalin (P <0,05). Tingkat apoptosis kelompok dosis lebih tinggi lebih banyak dari
10%, lebih tinggi dari kelompok dosis rendah, yang menunjukkan bahwa baicalin bisa menjadi signifikan
menginduksi apoptosis sel HeLa dalam dosis- tergantung jalannya Ekspresi gen protein berhubungan
dengan apoptosis diperiksa oleh Western blot Pengaruh baicalin pada protein Bcl-2 dan Bax ekspresi
Ekspresi protein yang terkait dengan apoptosis gen yang disebabkan oleh baicalin diperiksa oleh
Western blotting. Pada sel HeLa yang tidak diobati, Strip protein Bcl-2 dapat digambarkan sebagai:
Warnanya lebih gelap, luasnya lebih besar, Lebih banyak ekspresi protein. Terutama di Sel HeLa diobati
dengan baicalin selama 48 jam, warnanya Protein Bcl-2 menjadi lebih ringan, yang menunjukkan
Gambar 5. Deteksi persentase sel apoptosis dengan flow cytometry. (A) kelompok kontrol, (B) kelompok
dosis tinggi, (C) kelompok dosis renda (D) efek baicalin pada apoptosis sel HeLa. *P <0,05 dibandingkan
dengan kelompok kontrolyang berurutan turun dari ekspresi Protein Bcl-2 Bax protein ekspresi
meningkat dengan meningkatnya dosis baicalin, menunjukkan bahwa baicalin dapat mengatur Bax
Ekspresi protein Tingkat ekspresi Protein β-aktin secara substansial bebas dari baicalin, jadi protein β-
aktin dianggap sebagai referensi internal Hasil ini menunjukkan bahwa ekspresi protein anti-apoptosis
Bcl- 2 dihambat oleh baicalin dalam dosis-dependent cara, sementara Bax dilant (Gambar 6). Efek
baicalin pada Fas, FasL dan Caspase-8 ekspresi protein Sel HeLa diobati dengan tinggi di Baicalin dosis
rendah selama 48 jam. Dibandingkan dengan kelompok kontrol, ekspresi Fas, FasL dan protein Caspase-
8 meningkat, sebagai tambahan Ekspresi protein pada kelompok dosis tinggi lebih tinggi dibandingkan
kelompok dosis rendah. β-aktin itu terus dianggap sebagai referensi internal (Gambar 7). sel (Annexin- /
PI +). Tingkat apoptosis sel di Indonesia kelompok kontrol (AnnexinV - FITC positif, B2 + B4) adalah 4,61 ±
0,34%. Dibandingkan dengan kelompok kontrol, tingkat apoptosis sel hati diobati dengan peningkatan
baicalin (P <0,05). Tingkat apoptosis kelompok dosis lebih tinggi lebih banyak dari 10%, lebih tinggi dari
kelompok dosis rendah, yang menunjukkan bahwa baicalin bisa menjadi signifikan menginduksi
apoptosis sel HeLa dalam dosis- tergantung jalannya Ekspresi gen protein berhubungan dengan
apoptosis diperiksa oleh Western blot Pengaruh baicalin pada protein Bcl-2 dan Bax.

Ekspresi

Ekspresi protein yang terkait dengan apoptosis gen yang disebabkan oleh baicalin diperiksa oleh
Western blotting. Pada sel HeLa yang tidak diobati, Strip protein Bcl-2 dapat digambarkan sebagai:
Warnanya lebih gelap, luasnya lebih besar, Lebih banyak ekspresi protein. Terutama di Sel HeLa diobati
dengan baicalin selama 48 jam, warnanya Protein Bcl-2 menjadi lebih ringan, yang menunjukkan .
Gambar 5. Deteksi persentase sel apoptosis dengan flow cytometry. (A) kelompok kontrol, (B) kelompok
dosis tinggi, (C) kelompok dosis rendah, (D) efek baicalin pada apoptosis sel HeLa. * P <0,05
dibandingkan dengan kelompok kontrol yang berurutan turun dari ekspresi Protein Bcl-2 Bax protein
ekspresi meningkat dengan meningkatnya dosis baicalin, menunjukkan bahwa baicalin dapat mengatur
Bax Ekspresi protein Tingkat ekspresi Protein β-aktin secara substansial bebas dari baicalin, jadi protein
β-aktin dianggap sebagai referensi internal Hasil ini menunjukkan bahwa ekspresi protein anti-apoptosis
Bcl- 2 dihambat oleh baicalin dalam dosis-dependent cara, sementara Bax dilantik (Gambar 6). Efek
baicalin pada Fas, FasL dan Caspase-8ekspresi protein Sel HeLa diobati dengan tinggi dan Baicalin dosis
rendah selama 48 jam. Dibandingkan dengan kelompok kontrol, ekspresi Fas, FasL dan protein Caspase-
8 meningkat, sebagai tambahan Ekspresi protein pada kelompok dosis tinggi lebih tinggi dibandingkan
kelompok dosis rendah. β-aktin itu terus dianggap sebagai referensi internal (Gambar 7).

Aktivasi caspase- 3 diselidiki

oleh metode
spektrofotometri Setelah diobati dengan baicalin selama 12 jam, 24h, 36 jam dan 48 jam, aktivasi
Caspase-3 dideteksi dengan metode spektrofotometri. Seperti ditunjukkan pada Tabel 3, pada sel yang
diperlakukan dengan baicalin, Caspase-3 secara bertahap diaktifkan dengan perpanjangan waktu,
sedangkan aktivasi Caspase-3 di kelompok kontrol tetap hampir tidak berubah Dibandingkan dengan
kelompok kontrol, Aktivasi Caspase-3 pada kelompok baicalin tersebut meningkat secara tidak jelas
setelah 12 jam. Tapi caspase-3 aktivasi secara signifikan ditingkatkan dengan Perpanjangan waktu
pengobatan setelah 24 jam. Caspase-3 proses aktivasi pada baicalin dosis tinggi kelompok lebih cepat
dari dosis rendah baicalin kelompok, yang mengungkapkan bahwa baicalin diinduksi aktivasi caspase-3
dalam waktu dan waktu tergantung pada dosis.

Diskusi

Seperti yang diketahui, apoptosis adalah hal yang mendasar fenomena kehidupan melalui keseluruhan
proses kehidupan. Telah dilaporkan bahwa di banyak manusia sel tumor, proliferasi sel akan tidak
dibatasi jika apoptosis sel parah terhambat (10). Jadi keseimbangan antara sel proliferasi dan apoptosis
memiliki dampak yang kuat pada perkembangan dan perawatan yang normal organ (11). Dalam studi
skala besar lebih lanjut, itu telah menemukan bahwa obat anti kanker terbanyak di Indonesia Aplikasi
klinis bisa menginduksi sel tumor apoptosis Dilaporkan bahwa baicalin diberikan Efek anti tumor pada
sel kanker manusia melalui beberapa jalur apoptosis (12-13) : (i) jalur mitokondria intraselular ('hakiki');
(ii) reseptor kematian permukaan jalur ('ekstrinsik'); (iii) endoplasma.

jalur retikulum. Induksi apoptosis di indonesia Kanker serviks manusia oleh baicalin dilaporkan,
penelitian menunjukkan bahwa baicalin hydrate bisa menginduksi apoptosis melalui induksi mitokondria
disfungsi terganggu seperti yang ditunjukkan pada Potensi membran mitokondria (14), sementara Hasil
kami menunjukkan bahwa baicalin diinduksi Sel heLa apoptosis melalui aktivasi caspase-3 melalui jalur
mitokondria dan jalur reseptor kematian Studi kami mengamati apoptosis HeLa sel yang dirawat oleh
baicalin untuk mendeteksi efek antineoplastik baicalin pada manusia karsinoma serviks Viabilitas sel
diperiksa dalam tes MTT. Ditemukan bahwa baicalin bisa secara signifikan menghambat pertumbuhan
sel HeLa dalam waktu dan dosis tergantung cara. Selanjutnya penelitian, uji awal sel digunakan
untukamati kemampuan proliferasi sel HeLa dan migrasi, hasilnya menunjukkan kecepatan dari migrasi
sel secara signifikan menurun setelah Pengobatan dengan baicalin, berbeda dengan kontrol kelompok,
jarak migrasi sel berkurang sebagai dosis tergantung Apoptosis sel adalah fisiologis aktif proses yang
mengakibatkan penghancuran diri seluler (15). Selain perubahan biokimia, memang ditandai dengan
perubahan morfologis yang berbeda, termasuk penyusutan sel, membran plasma blebbing, kondensasi
kromatin, meningkat kepadatan sel, kariokuin dan pembentukannya dari tubuh apoptotik. Perubahan ini
bisa jadi diamati dengan mikroskop biologis terbalik dan mikroskop elektron transmisi setelah HeLa sel
yang dirawat oleh baiclain. Selanjutnya, flow cytometry dilakukan untuk menentukan apakah baicalin-
induced penurunan viabilitas disebabkan oleh apoptosis Hasil pemeriksaan menunjukkan bahwa Tingkat
apoptosis sel HeLa meningkat dengan meningkatnya konsentrasi baicalin, Selain itu, tingkat apoptosis
kelompok dosis tinggi mencapai setinggi 14,07 ± 0,85%. Hasil ini menunjukkan bahwa baicalin memiliki
kemampuan untuk menginduksi apoptosis pada sel HeLa. Anggota keluarga Bcl-2 mungkin memainkan
peran penting peran dalam menentukan apakah sebuah sel akan hidup atau mati, karena mereka
berada di hulu ireversibel kerusakan seluler dan fokus sebagian besar usaha mereka pada tingkat
mitokondria (16). Karena Efek apoptosis keluarga Bcl-2, bisa jadi dibagi menjadi protein pro-apoptosis
(Bax, Bak, Bik, dkk) dan protein anti apoptosis (Bcl-2, Bcl-xl, Bcl-w, dkk). Terutama, Bax dan Bcl-2 Dua
jenis protein apoptosis khas. Memiliki telah dilaporkan bahwa rasio Bax pro-apoptotik dan anggota anti-
apoptosis Bcl-2 sangat penting penentu kerentanan terhadap apoptosis (17). Penelitian oleh Zheng J
menunjukkan bahwa protein tingkat ekspresi Bcl-2 menurun pada HL-60 / Sel ADR setelah pengobatan
baicalin sementara itu dari gen pro-apoptosis secara bertahap meningkat (18). Hasil penelitian kami
menunjukkan bahwa baicalin bisa down-mengatur ekspresi protein Bcl-2, dan up-mengatur ekspresi
protein Bax, sebagai hasilnya dimana rasio Bax / Bcl-2 meningkat secara signifikan, menginduksi
apoptosis HeLa sel. Dan ini juga konsisten dengan Bhutia's penelitian (19). Apalagi baicalin juga dilantik
ekspresi Fas, FasL dan Caspsase-8 protein dalam dosis tergantung cara. Hasil kami menunjukkan bahwa
baicalin induced apoptosis pada HeLa sel melalui Caspase-8 dan Caspase-3 processing, di cara yang Fas /
FasL-dependent. Reseptor kematian (Fas / FasL / Caspase-8) jalur sinyal adalah sistem transduksi sinyal
penting, yang mana memediasi respons seluler terhadap pertumbuhan, diferensiasi dan apoptosis sel
tutor. Reseptor kematian termasuk nekrosis tumor faktor (TNF) reseptor superfamili. Fas reseptor-
interaksi ligan menggunakan aktivasi caspase-8 ke memicu downstream algojo caspase (20). Aliran
utama apoptosis, caspases, membelah banyak protein vital seluler mempengaruhi kaskade apoptosis
(21). Khususnya, Caspase-3 disebut protease kematian, memainkan a Peran kunci selama proses
apoptosis. Itu Uji spektrofotometri digunakan untuk mendeteksi Aktivitas Caspase-3. Hasilnya
menunjukkan hal tersebut pada sel yang diberi baichin, aktivitas Caspase-3 meningkat, terutama pada
kelompok dosis tinggi, Aktivitas caspase-3 secara signifikan dilantik di ketergantungan dosis dan waktu.
Data kami jelas menunjukkan bahwa tingkat apoptosis sel HeLa dikaitkan dengan aktivitas Caspase-3,
Persentase sel apoptosis meningkat, sementara Aktivitas Caspase-3 meningkat rupanya di saat yang
sama, dan ini konsisten dengan penelitian Pidgeon (22). Sudah mapan bahwa aktivasi adalah caspase
cascade during apoptosis occurs via caspase cascade selama apoptosis terjadi melalui aktivasi
mitokondria intraselular atau jalur reseptor kematian permukaan (23). Oleh karena itu, disimpulkan
bahwa baicalin-induced apoptosis melibatkan aktivasi Caspase-3 di Sel HeLa melalui dua jalur ini. Saat ini
studi menunjukkan bahwa baicalin meningkat rasio Bax / Bcl-2 untuk menginduksi apoptosis sel oleh
mengatur ekspresi protein Bcl-2 dan Bax melalui jalur mitokondria intraselular. Meningkatnya rasio Bax /
Bcl-2 akan berubah permeabilitas membran mitokondria, berakibat pada pelepasan sitokrom C di
mitokondria, Selain itu, cytochrome C dikombinasikan dengan yang lainnya faktor, yang menyebabkan
mengaktifkan Caspase-3 dan sel apoptosis (24). Dalam penelitian ini, juga ditunjukkan bahwa baicalin
mempromosikan tingkat Fas / FasL dan caspase aktif-8, yang kemudian mengaktifkan sinyal hilir
(caspases-3) lebih jauh melalui jalur reseptor kematian sel permukaan. Studi kami menunjukkan bahwa
baicalin bisa menghambat proliferasi sel HeLa melalui mekanisme yang melibatkan induksi apoptosis
melalui jalur mitokondria intraselular dan jalur reseptor kematian permukaan. Jadi kita percaya bahwa
baicalin mungkin sebagai kandidat di pengembangan obat anti kanker.

Ucapan Terima Kasih

Penulis mengakui dukungan dari Departemen Teknik Biologi, Yanshan Universitas di China

Daftar pustaka

Martin J and Dusek J. The Baikal skullcap (Scutellaria baicalensis Georgi) -a potential source of new
drugs. Ceska. Slov. Farm. (2002) 51: 277-283.

Li FQ, Wang T, Pei Z, Liu B and Hong JS. Inhibition of microglial activation by the herbal flavonoid
baicaklin attenurons in-flammation-mediated degeneration of dopaminergic neurons. J. Neuml. Tmnsm.
(2005) 112: 331-347.

Li BQ, Fu T, Dongyan Y, Mikovits JA, Ruscetti FW and Wang JW. Flavonoid baicalin inhibits HIV-1 infection
at the level of viral entey. Biochem. Biophys. Res. Common. (2000) 276: 534-538.

Li HJ, Xie WL and Zhu J. Antitumor effects of bacailin and its effect on telomerase in tumor celIs. Jiangsu
Med. J. (2008) 34: 931-933.

Zhou QM, Wang S, Zhang H, Lu YY, Wang XF, MotooY and Su SB. The combination of baicalin and
baicalein enhances apoptosis via the ERK/p38 MAPK pathway in human breast cancer cells. Acta
Pharmacol. Sin. (2009) 30: 1648-1658.

Du GJ, Han G, Zhang S, Lin H, Wu X, Wang M, Ji L, Lu L, Yu L and Liang W. Baicalin suppresses lung
carcinoma and lung metastasis by SOD mimic and HIF-1α inhibition. Eur. J. Pharmacol. (2010) 630: 121-
130.

Huang Y, Hu JD, Zheng J, Li J, Wei TN, Zheng ZH and Chen YY. Down-regulation of the PI3K/Akt signalling
pathway and induction of apoptosis in CA46 Burkitt lymphoma cells by baicalin. J. Ex. Clin. Cancer Res.
(2009) 31: 48-56.

Xu XF, Cai BL, Guan SM, Li Y, Wu JZ, Wang Y and Liu B. Baicalin induces human mucoepidermoid
carcinoma Mc3 cells apoptosis in-vitro and in-vivo. Invest New Drugs (2011) 29: 637-645.

Xu XM. Human papillomaviruses and cervical cancer vaccines: to decode 2008 nobel prize in physiology
or medicine. Prog. Biochem. Biophys. (2008) 35: 1095-1103.
Martin SJ, Lennon SV, Bonham AM and Cotter TG. Induction of apoptosis (programmed cell death) in
human leukemic HL-60 cells by inhibition of RNA or protein synthesis. J. Immunol. (1990) 145: 1859-
1867.

Kliche KO and Höffken K. The role of apoptosis in hematologic malignancies and modulation of apoptosis
as a new therapeutic approach. J. Cancer Res. Clin. Oncol. (1999) 125: 226-231.

Lu HF, Hsueh SC, Ho YT, Kao MC, Yang JS, Chiu TH, Huamg SY, Lin CC and Chu JG. ROS mediates baicalin-
induced apoptosis in human promyelocytic leukemia HL-60 cells through the expression of the gadd153
and mitochondrial-dependent pathway. Anticancer Res. (2007) 27: 117-126.

Wan QF, Gu LG, Yin SJ, Ge DY and Li GM. Effect of Baicalin on cell apoptosis FAS/FAS-L system of
pneumonia mice lung tissue infected with FM1. Chin. Pharmacol. Bull. (2011) 27: 1555-1559.

Kim BR, Kim IS, Ko KH, Lee JJ, Kim HG and Park RG. The mechanism of intracellular signal pathway that
baicalin hydrate elevate chemotherapeutic response of cervical carcinoma. Korean J. Obstet. Gynecol.
(2003) 46: 1965-1974.

Ali MR, Yong MJ, Gyawali R, Mosaddik A, Ryu YC and Cho SK. Mango (Mangifera indica L.) peel extracts
inhibit proliferation of hela human cervical carcinoma cell via induction of apoptosis. J. Korean Soc. Appl.
Biol. Chem. (2012) 55: 397-405.

Gross A. McDonnell JM and Korsmeyer SJ. BCL-2family members and the mitochondriain apoptosis.
Genes Dev. (2013) 13: 1899-1911.

Wang WD. Bcl-2/Bax ratio and the life of death fate of cells. Chin. J. Cancer Biother. (2007) 4: 393-396.

Zheng J, Hu JD, Chen YY, Chen BY, Huang Y, Zheng ZH and Liu TB. Baicalin induces apoptosis in leukemia
hl-60/adr cells via possible down-regulation of the pi3k/akt signaling pathway. asian pacifc. J. Cancer
Prev. (2012) 13: 1119-1124.

Bhutia SK, Mallick SK, Maiti S, Mishra D and Maiti T. Abrus abrin derived peptides induce apoptosis by
targeting mitochondria in HeLa cells. Cell Biol. Int.(2009) 33: 720-727.

Kang YH , Lee KA, Ryu CJ, Lee HG , Lim JS, Park SN, Paik SG and Yoon DY. Mitomycin C induces apoptosis
via Fas/FasL dependent pathway and suppression of IL-18 in cervical carcinoma cells. Cancer Lett. (2006)
237: 33-44.

Straszewski-Chavez SL, Abrahams VM and Mor G. The role of apoptosis in the regulation of trophoblast
survival and differentiation during pregnancy. Endocr. Rev. (2005) 26: 877-897.

Pidgeon GP, Kandouz M, Meram A and Honn KV. Mechanisms controlling cell cycle arrest and induction
of apoptosis after 12-lipoxygenase inhibition in prostate cancer cells. Cancer Res. (2002) 62: 2721-2727.

Green DR. Apoptotic pathways: paper wraps stone blunts scissors. Cell (2000) 102: 1-4.
Whiteman M, Chu SH, Siau JL , Rose P, Sabapathy K, Schantz JT, Cheung NS, Spencer JP and Armstrong
JS. The pro-inflammatory oxidant hypochlorous acid induces Bax-dependent mitochondrial
permeabilisation and cell death through AIF-/EndoG-dependent pathways. Cell Signal. (2007) 19: 705-
707.