UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI ETIL ASETAT,

FRAKSI n-HEKSAN, DAN FRAKSI AIR DAUN TEH HIJAU

(Camelia sinensis L) TERHADAP Pseudomonas aeruginosa ATCC
27853

SKRIPSI

Disusun Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Dalam Menyelesaikan

Program Studi S1 Farmasi

Oleh :
Yuni Elmaya Santi
200209168

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS DUTA BANGSA
2022
 PENGESAHAN

Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat, Fraksi n-heksan, dan Fraksi Daun Teh
Hijau (Camelia Sinensis L) Terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Oleh :

Yuni Elmaya Santi

200209168

Telah Dipertahankan di Hadapan Dewan Penguji Proposal Skripsi Program Studi

S1 Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Duta Bangsa Surakarta dan
Diterima untuk Memenuhi Syarat Guna Memperoleh Gelar Sarjana (S.Farm)

Pada Tanggal :

Dewan Penguji :
Penguji I : Tatiana Siska Wardani, S.Farm.,M.Farm ……………………..
Penguji II : apt. Anita Dwi Septriani, M., Farm ……………………..

Mengesahkan,
Dekan Ketua Program Studi
Fakultas Ilmu Kesehatan S1 Farmasi
Universitas Duta Bangsa Surakarta

Warsi Maryati, S.K.M., MPH Tatiana Siska Wardani, M.Farm

ii
 LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI SKRIPSI

Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui skripsi saya,

dengan judul :
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI ETIL ASETAT, FRAKSI n-
HEKSAN, DAN FRAKSI AIR DAUN TEH HIJAU (Camelia sinensis L)
TERHADAP Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Untuk dipublikasikan atau ditampilakan di internet atau media lain yaitu

Digital Library Perpustakaan Universitas Duta Bangsa untuk kepentingan
akademik sebatas sesuai dengan Undang-Undang Hak Cipta.
Demikian pernyataan persetujuan publikasi SKRIPSI ini saya buat dengan
sebenarnya.

Surakarta, 31 Juli 2022

Materai 10.000

Yuni Elmaya Santi

200209168

iii
 SURAT PERNYATAAN

Saya yang bertanda tangan dibawah ini,

Nama : Yuni Elmaya Santi
NIM : 200209168
Fakultas : Farmasi
Menyataka dengan sesungguhnya bahwa hassil skripsi yang saya tulis dengan
judul:
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI ETIL ASETAT, FRAKSI n-
HEKSAN, DAN FRAKSI AIR DAUN TEH HIJAU (Camelia sinensis L)
TERHADAP Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Adalah benar-benar merupakan karya saya sendiri. Apabila dikemudian hari
diketahui bahwa skripsi ini merupakan hasil plagiarisme, maka saya bersedia
menerima sangsi berupa pembatalan kelulusan dan atau pencabutan gelar yang
saya peroleh.
Demikian surat pernyataan ini saya buat untuk dipergunakan sebagaimana
mestinya.

Surakarta, 31 Juli 2022

Materai 10.000

Yuni Elmaya Santi

200209168

iv
 KATA PENGANTAR

Segala puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT, atas rahmat dan
karuniaNya sehingga skripsi ini dapat diselesaikan dengan sebaik-baiknya.
Dengan selesainya skripsi yang berjudul “UJI AKTIVITAS
ANTIBAKTERI FRAKSI ETIL ASETAT, FRAKSI N-HEKSAN, DAN FRAKSI
DAUN TEH HIJAU (CAMELIA SINENSIS L) TERHADAP PSEUDOMONAS
AERUGINOSA ATCC 27853” ini, perkenankanlah saya .mengucapkan terima
kasih yang sebesar-besarnya kepada :
1. Bapak Dr. H. Singgih Purnomo, M.M selaku Rektor Universitas Duta Bangsa
Surakarta.
2. Ibu Warsi Maryati, S,KM., MPH selaku Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Duta Bangsa Surakarta,
3. Ibu Tatiana Siska Wardani, M.Farm selaku Ketua Program Studi S1 Farmasi
Universitas Duta Bangsa Surakarta.
4. Ibu Tatiana Siska Wardani, M.Farm selaku pembimbing I yang telah
memberikan bimbingan dan mengarahkan dalam penyusunan Skripsi ini
5. Ibu Apt. Anita Dwi Septiarini, M.,Farm Pembimbing II yang telah
memberikan bimbingan dan mengarahkan dalam penyusunan Skripsi ini.
6. Dosen dan staff pengajar Universitas Duta Bangsa Surakarta yang telah
memberikan bimbingan serta ilmu pengetahuan kepada penulis.
7. Bapak dan Ibu tercinta yang selalu memanjatkan doa sehingga penulis dapat
menyelesaikan Skripsi ini.
8. Rekan-rekan seperjuangan dan semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan
satu per satu.

v
 Penulis menyadari bahwa penulisan dan penyusunan Skripsi ini masih jauh
dari sempurna dan masih banyak kekurangannya. Oleh karena itu, penulis
mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun. Akhirnya penulis
memohon maaf apabila dalam penyusunan Tugas Akhir ini terdapat kesalahan
kata dan semoga Tugas Akhir ini dapat berguna dan bermanfaat bagi semua
pembaca.

Surakarta, Juli 2022

Penulis

vi
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL.........................................................................................i
PERSETUJUAN.................................................Error! Bookmark not defined.
PENGESAHAN................................................................................................ii
DAFTAR ISI....................................................................................................ii
DAFTAR TABEL............................................................................................ii
DAFTAR GAMBAR.......................................................................................ii
BAB I PENDAHULUAN.................................................................................2
A. Latar Belakang.......................................................................................2
B. Rumusan Masalah..................................................................................2
C. Tujuan Penelitian...................................................................................2
D. Hipotesis................................................................................................2
E. Manfaat Penelitian.................................................................................2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA.....................................................................2
A. Uraian Tanaman.....................................................................................2
B. Senyawa Metabolit Sekunder................................................................2
C. Metode Ekstraksi...................................................................................2
D. Fraksinasi...............................................................................................2
E. Cairan Penyari........................................................................................2
F. Bakteri....................................................................................................2
G. Pseudomonas aeruginosa.......................................................................2
H. Antibakteri.............................................................................................2
I. Uji Aktivitas Antibakteri........................................................................2
J. Keaslian Penelitian.................................................................................2
K. Alur Penelitian.......................................................................................2
BAB III METODE PENELITIAN.................................................................2
A. Waktu dan Tempat Penelitian................................................................2
B. Variabel Penelitian.................................................................................2

vii
 C. Alat dan Bahan.......................................................................................2
D. Prosedur Penelitian................................................................................2
E. Uji Fitokimia Daun Teh Hijau Secara KLT...........................................2
F. Fraksinasi Ekstrak Daun Teh Hijau.......................................................2
G. Penyiapan Alat.......................................................................................2
H. Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif...................................2
I. Pembuatan Standar MC. Farland...........................................................2
J. Pembuatan MHA dan MHB...................................................................2
K. Pembuatan Suspensi Pseodomonas aeruginosa....................................2
L. Pembuatan Variabel Konsentrassi Ekstrak dan
Fraksi Daun Teh Hijau…...…………………………………………. 2
M. Uji Aktivitas Antibakteri........................................................................2
N. Cara pengolahan dan Analisis Data.......................................................2
Rencana Pelaksanaan Penelitian......................Error! Bookmark not defined.
DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................2

viii
 DAFTAR TABEL

Tabel 2. 1 Kategori Diameter Zona Hambat...............................................................................

Tabel 2. 2 Keaslian Penelitian.....................................................................................................

viii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2. 1 Tanaman Daun Teh Hijau......................................................................................

Gambar 2. 2 Rumus Bangun Katekin..........................................................................................
Gambar 2. 3 Rumus Bangun Alkaloid........................................................................................
Gambar 2. 4 Sapogenin...............................................................................................................
Gambar 2. 5 Hasil Pemisahan Partisi..........................................................................................
Gambar 2. 6 Bakteri Pseudomonas aeruginosa..........................................................................
Gambar 2. 7 Diagram Alir Penelitian..........................................................................................
Gambar 2. 8 Diagram Alir Penelitian Uji Aktivitass Antibakteri Difusi Cakram......................
Gambar 2. 9 Diagram Alir Penelitian Uji Aktivitass Antibakteri Dilusi Cair............................

ix
 BAB I
PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Teh menjadi bahan minum paling terkenal di seluruh dunia. Beberapa
senyawa kimia paling besar peranannya dalam pembentukan cita rasa dan
berbagai khasiat istimewa teh adalah katekin. Multikhasiat senyawa katekin
membuka peluang besar pasar baru sehingga teh digunakan secara luas dan bukan
sekedar minuman pemberi nikmat. Industri yang mengandalkan senyawa katekin
teh sebagai bahan baku kini meluas, meliputi farmasi, kimia, makanan dan
industri kosmetik. Teh hijau dapat membantu membangun respon tubuh terhadap
obat-obatan antibiotik yang dikonsumsi untuk mengobati infeksi (syah, 2005).
Infeksi adalah penyakit yang disebabkan oleh adanya mikroba. Penggunaan
antibiotik dalam mengatasi penyakit bakterial akan menyebabkan organisme
menjadi resistensi obat. Maka dikembangkan tanaman herbal teh hijau yang dapat
mengembalikan tubuh dari resistensi (kebal) terhadap antibiotik (Zen et al.,
2015). Pseudomonas aeruginosa adalah patogen bakteri yang menyebabkan
infeksi saluran pernapasan. Bakteri ini membuat tubuh menjadi kebal (resisten)
terhadap antibiotik dari waktu ke waktu. Para peneliti mengklaim telah
menemukan antioksidan alami yakni epigallocatechin (EGCG) dalam teh hijau
yang dapat melawan dan membunuh bakteri yang kebal antibiotik. EGCG dalam
teh hijau memiliki efek antibiotik yang bekerja langsung dengan cara merusak
membran sel bakteri, menghambat sintesis asam lemak dan menghambat aktivitas
enzim pada bakteri sehingga mampu menghambat pertumbuhan bakteri, antibiotik
yang biasa digunakan untuk mengobati infeksi yang disebabkan oleh P.
Aeruginosa (Noriko, 2013).

1
 2

Pada penelitian sebelumnya membuktikan bahwa hasil uji antibakteri

menunjukkan bahwa isolat 2 dari ekstrak daun teh memberikan efektivitas terbaik
sebagai antibakteri Pseodomonas fluorescens dengan zona hambat 23,3 mm (Elly,
2016). Penelitian oleh Iloh (2021) membuktikan bahwa ekstrak etanolik daun
kelor, daun teh hijau, daun binahong, dan meniran hijau memiliki aktivitas
antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 dengan daya hambat
berturut-turut adalah 20,6 mm, 17,3 mm, 15,6 mm, dan 22,6 mm. Ekstrak etanolik
meniran hijau memiliki aktivitas antibakteri paling aktif.
Berdasarkan uraian diatas, maka perlu dilakukan penelitian mengenai uji
aktivitas antibakteri fraksi etil asetat, fraksi n-heksan dan fraksi air daun teh hijau
(camellia sinensis L) terhadap Pseudomonas aeruginosa yang bertujuan untuk
mengetahui diantara pelarut tersebut fraksi mana yang memiliki daya hambat
paling besar terhadap nilai Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) dan Konsentrasi
Bunuh Minimal (KBM). Penelitian ini merupakan salah satu upaya untuk
mengoptimalkan pemanfaatan bahan alam hayati Indonesia. Pencarian eluen
terbaik juga perlu dalam pemisahan senyawa aktif khususnya senyawa katekin
sehingga diketahui fraksi aktif yang mempunyai potensi sebagai antibakteri.

B. Rumusan Masalah
Adapun rumusan masalah dari penelitian ini :
1. Apakah fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, dan fraksi air daun teh hijau
mempunyai daya antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC
27853?
2. Berapakah Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) dan Konsentrasi Bunuh
Minimal (KBM) fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, dan fraksi air daun teh
hijau terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853?
 3

C. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah :
1. Mengetahui daya antibakteri fraksi etil asetat, fraksi n-heksan dan ftraksi air
daun teh hijau terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
2. Mengetahui nilai Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) dan Konsentrasi
Bunuh Minimal (KBM) fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, dan fraksi air daun
teh hijau terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

D. Hipotesis
Penelitian ini dapat ditarik hipotesis antara lain :
1. Fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, dan fraksi air daun teh hijau memiliki
aktivitas antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
2. Fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, dan fraksi air daun teh hijau memiliki nilai
Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimal
(KBM) terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

E. Manfaat Penelitian
1. Bagi Peneliti
Menambah pengetahuan tentang kemampuan tanaman obat tradisional
khususnya ekstrak daun teh hijau dalam menghambat pertumbuhan
Pseudomonas aeruginosa yang merupakan bakteri kariogenik.
2. Bagi Institusi
Menambah bahan bacaan dan sebagai referensi untuk penelitian lebih lanjut
mengenai efektivitas daun teh hijau dibidang sediaan farmasi obat tradisional.
3. Bagi Masyarakat
Menambah informasi mengenai potensi daun teh hijau sebagai bahan obat
alternatif dalam pengobatan terhadap penyakit akibat bakteri Pseudomonas
aeruginosa.
 4

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. Uraian Tanaman
1. Tanaman Teh Hijau (Camellia sinensis L)

Gambar 2. 1 Tanaman Daun Teh Hijau (Dokumentasi Pribadi)

Teh merupakan sebutan yang lazim digunakan untuk daun tanaman teh
(Camellia sinensis L) yang telah dipetik dan diolah dengan proses pengolahan
tertentu. Terkadang teh dapat diartikan sebagai minuman yang dihasilkan dengan
menyeduh hasil olahan daun teh tersebut dengan air mendidih. Tanaman teh memiliki
berbagai macam jenis berdasarkan proses pengolahannya, yaitu teh putih, teh hijau,
teh oolong, teh hitam dan teh wangi. Teh hijau merupakan jenis teh yang diperoleh
tanpa proses fermentasi (oksidasi enzimatis). Sebelum menjadi teh hijau yang kering
dan dapat dikonsumsi secara praktis, teh hijau mengalami beberapa tahapan proses
yaitu proses pemetikan dilakukan dengan tangan agar lebih selektif, proses
pelayuan yang bertujuan untuk inaktivasi enzim (Azizah et al., 2020). Proses
penggulungan teh hijau dilakukan dengan open top roller selama 15-17 menit, agar
memecah sel daun sehingga menghasilkan rasa sepet. Tahap terakhir proses
pengeringan dilakukan dua tahap. Pertama dilakukan pada suhu 110-135 oC selama 30
menit. Tahap berikutnya pemanasan 70-90 oC selama 90 menit. selnjutnya proses
 5

sortassi dan pengemasan (Pratiwi, 2018). Teh hitam merupakan hasil pengolahan dari
pucuk dan daun pertama daun teh segar dengan mengusahakan agar senyawa
polifenol yang terdapat dalam pucuk daun teh mengalami proses fermentasi
sempurna. Teh oolong dihasilkan dari Taiwan, yang dapat digolongkan sebagai mutu
antara teh hijau dan teh hitam, karena hanya memperoleh proses fermentasi sedikit.
Teh yang dibuat dari pucuk daun yang tidak mengalami proses oksidasi dan sewaktu
belum dipetik dilindungi dari sinar matahari untuk menghalangi pembentukan
klorofil. Teh putih berasal dari daun teh muda atau pucuk teh yang dilapisi dengan
bulu halus bewarna silver, dipanen 1 tahun sekali awall musim semi, dilindungi dari
sinar matahari sehingga mengurangi pembentukan klorofil, sehingga memberu warna
putih. Teh putih diproduksi dalam jumlah lebih sedikit dibandingkan teh jenis lainnya
sehingga harga menjadi lebih mahal polifenol oksidase dan mengurangi kadar air
hingga 60-70% (Atmojo, 2012).
2. Klasifikasi Tanaman
Secara taksonomi, tanaman teh di klasifikasikan sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Super Divisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Dicotylledoneae
Ordo : Theales
Famili : Theaceae
Genus : Camellia
Spesies : Camellia sinensis L. (Pratiwi, 2018).
3. Morfologi Tanaman
Tanaman teh memiliki ciri-ciri batangnya tegak, berkayu, bercabang-cabang,
ujung ranting dan daun mudanya berambut halus. Daun tanaman teh berbentuk daun
tunggal, bertangkai pendek, letaknya berseling, helai daunnya kaku seperti kulit tipis,
panjangnya 6-18 cm, lebarnya 2-6 cm, warnanya hijau, dan permukaan mengkilap.
Teh yang dihasilkan dari bagian pucuk (peko) ditambah 2-3 helai daun muda, karena
 6

pada daun muda tersebut kaya akan senyawa polifenol, kafein serta asam amino.
Senyawa - senyawa inilah yang akan mempengaruhi kualitas warna, aroma dan rasa
dari teh. Adapun jenis teh yang umumnya dikenal dalam masyarakat adalah teh hijau,
teh oolong, teh hitam, dan teh putih. Daun teh hijau merupakan pohon berdaun hijau
yang memiliki tinggi 10 - 15 meter di alam bebas dan tinggi 0,6 - 1,5 meter jika
dibudayakan sendiri. Daun dari tanaman ini berwarna hijau muda dengan panjang 5 -
30 cm dan lebar sekitar 4 cm. Tanaman ini memiliki bunga yang berwarna putih
dengan diameter 2,5 - 4 cm dan biasanya berdiri sendiri atau saling berpasangan dua-
dua. Buahnya berbentuk pipih, bulat, dan terdapat satu biji dalam masing-masing
buah dengan ukuran sebesar kacang (Mahmood et al., 2010).
4. Kandungan Kimia
Teh hijau terdiri atas kandungan kimia yang kompleks. Teh hijau
mengandung alkaloid, saponin, tanin, katekin polifenol 15-20% protein dan 1-4%
asam amino seperti asam glutamat, triptopan, glycine, serin, tirosin, valin, leucine,
threonin dan arginin. Selain itu, terdapat unsur karbohidrat seperti selulosa, glukosa,
pektin dan fruktosa. Teh hijau juga mengandung berbagai macam mineral dan
vitamin (B, C dan E), lipid, pigmen berupa klorofil dan enzim-enzim yang berperan
sebagai katalisator contohnya enzim amilase, protease, peroksidase dan polifenol
oksidase. Daun teh mengandung zat-zat yang larut dalam air, seperti katekin, kafein,
asam amino, dan berbagai gula. Kandungan utama dalam teh adalah polifenol 30–
35%, sisanya berupa karbohidrat 25%, kafein 3,5%, protein 15%, asam amino 4%,
lignin 6,5%, asam organik 1,5%, lipid 2%, klorofil 0,5%, karotenoid kurang dari
0,1% dan senyawa-senyawa volatil 0,1%. Polifenol yang merupakan senyawa
terbanyak di dalam teh memiliki keluarga senyawa yang disebut dengan flavonoid.
Flavonoid telah diketahui menunjukkan sejumlah besar aktivitas di alam, salah
satunya sebagai bahan antibakteri. Teh hijau memiliki banyak manfaat dalam bidang
kesehatan, diantaranya yaitu teh hijau memiliki peran sebagai anti radang, anti
penggandaan sel, anti agregasi, menurunkan kadar kolesterol LDL, mencegah proses
aterosklerosis, meningkatkan sistem kekebalan tubuh, menurunkan berat badan dan
 7

juga sebagai antibakteri (Towaha, 2013).

5. Khasiat Tumbuhan
Teh hijau memiliki beberapa manfaat antara lain sebagai antikanker,
antibakteri, menurunkan kolesterol, serta meningkatkan kekebalan tubuh. Komponen
medis yang penting dari teh hijau adalah polifenol. Polifenol yang paling banyak
ditemukan dalam teh hijau adalah flavanol, yaitu katekin. Katekin dalam teh hijau
terdiri atas epigallocatechin-3 gallate (EGCG), epigallatocatechin (EGC),
epicatechin-3- gallate (ECG), dan epicatechin (EC). Dalam teh hijau, EGCG
merupakan kandungan yang paling tinggi, yaitu sekitar 59% dari total katekin.
Kemudian EGC sekitar 19%, ECG, 13,6%; dan EC sebesar 6,4%.20 Senyawa
polifenol di dalam teh sebagian besar merupakan senyawa golongan flavonoid
subgolongan flavan-3-ol dan flavonol. Katekin yang terkandung dalam teh hijau
dapat bersifat bakteriostatik atau bakterisid yang dapat bekerja dengan cara merusak
dinding sel bakteri dan membran sitoplasma sehingga menyebabkan denaturasi
protein (Amriani & Sari, 2015).
Teh hijau memiliki khasiat yang sangat berpengaruh bagi kesehatan manusia,
diantaranya antioksidan, mempertahankan berat tubuh ideal, mereduksi kolestrol,
menurunkan LDL (Low Density Lipoprotein), meningkatkan HDL (High Density
Lipoprotein), mengurangi kadar gula darah, menurunkan tekanan darah, mengurangi
stres, antitrombosis, dan antikanker (Herwin et al., 2018).
B. Senyawa Metabolit Sekunder
1. Katekin
Katekin adalah segolongan metabolit sekunder yang secara alami dihasilkan
oleh tumbuhan dan termasuk dalam golongan flavonoid. Senyawa ini dapat
membunuh bakteri dengan cara menghambat bakteri dengan merusak membran
sitoplasma bakteri yang tersusun oleh 60 protein dan 40% lipid yang umumnya
berupa fosfolipid. Senyawa katekin meruksa membran plasma yang menyebabkan
bocornya metabolit penting yang mengaktifkan sistem enzim bakteri. Kerusakan pada
 8

membran sitoplasma dapat mencegah masuknya bahan-bahan makanan atau nutrisi

yang diperlukan bakteri untuk menghasilkan energi akibatnya bakteri akan
mengalami hambatan pertumbuhan dan bahkan kematian (Rustanti et al.,2013).
(Azizah et al., 2020). Katekin cepat diserap ke dalam tubuh dan berhubungan dengan
beberapa potensi manfaat kesehatan teh. Mekanisme polifenol teh sebagai
antioksidan yaitu dengan menangkap oksigen, nitrogen reaktif dan senyawa khelat
sehingga dapat mengurangi risiko berbagai penyakit, termasuk kanker dan penyakit
jantung koroner (Gupta et al., 2009). Sebagai obat herbal, teh hijau ini sering
digunakan untuk mengurangi ketidaknyamanan perut, muntah dan untuk
menghentikan diare (Namita, 2012).

Sumber : (Fadhilah et al., 2021)

Gambar 2. 2 Rumus Bangun Katekin

2. Alkaloid
Alkaloid adalah senyawa metabolit sekunder megandung unsur nitrogen (N)
biasanya pada cincin heterosiklis dan bersifat basa. Senyawa alkaloid kebanyakan
berbentuk padatan dan berwarna putih, tetapi ada yang berupa cairan yaitu nikotin,
ada juga yang berwarna kuning, seperti berberin dan serpetin, sedangkan kolkisin dan
risinin merupakan akaloid bersifat tidak basa. Senyawa efedrin dan meskalin
merupakan contoh alkaloid dengan unsur N pada rantai alifatik yang sering disebut
dengan istilah aminakaloid atau protokaloid. Senyawa yang memiliki atom N, tetapi
tidak termasuk dalam golongan alkalod antara lain asam amino, asam nukleat,
nukleotida, porfirin, senyawa nitro dan nitroso (Hanani, 2015). Rumus Bangun
Alkaloid dapat dilihat pada Gambar 2.2
 9

Sumber : (Hanani, 2015)

Gambar 2. 3 Rumus Bangun Alkaloid

Senyawa golongan alkaloid yang berasal dari tanaman, umumnya merupakan

amina tersier yang terdiri dari nitrogen primer, sekunder, dan quartener. Alkaloid
minimal mengandung atom nitrogen yang bersifat basa dan sebagian besar memiliki
cincin aromatis. Pelarut non polar (n-heksana) dikenal efektif terhadap alkaloid,
selain itu alkaloid juga dapat terlarut dalam senyawa semi polar (etil asetat) dan polar
(metanol). Senyawa alkaloid sebagai antibakteri memiliki mekanisme menghambat
enzim topoisomerase bakteri dan menghambat replikasi DNA. Penghambatan
replikasi DNA akan menyebabkan DNA tidak dapat membelah dan menghambat
pertumbuhan bakteri (Ernawati, 2015).
3. Saponin
Saponin adalah glikosida triterpenoid dan sterol. Saponin mula-mula diberi nama
demikian karena sifatnya menyerupai sabun (bahasa Latin sapo berarti sabun).
Saponin merupakan senyawa aktif permukaan yang kuat, yang menimbulkan busa
jika dikocok dalam air dan pada konsentrasi yang rendah sering menimbulkan
hemolisis sel darah merah, dalam larutan yang sangat encer. Pencarian saponin dalam
tumbuhan telah dirangsang oleh kebutuhan akan sumber sapogenin yang mudah
diperoleh dan dapat diubah dilaboratorium menjadi sterol hewan yang berkhasiat
penting (misalnya kortison, estrogen kontraseptif, dan lain-lain). Pola glikosida
saponin kadang-kadang rumit, banyak saponin yang mempunyai satuan gula sampai
lima dan komponen yang umum ialah asam glukoronat. Senyawa saponin secara
umum dapat diidentifikasi dari warna yang dihasilkannya dengan pereaksi
 10

Liebermann Burchard. Warna biru-hijau menunjukkan adanya senyawa saponin

steroida, dan warna merah, merah muda, atau ungu menunjukkan adanya senyawa
saponin triterpenoida. Saponin triterpenoida dan saponin steroida memiliki hubungan
glikosidik pada atom C-3 dan memiliki asal usul biogenetika yang sama lewat asam
mevalonat dan satuan-satuan isoprenoid. Kedua jenis saponin ini larut dalam air dan
etanol tetapi tidak larut dalam eter. Aglikonnya diperoleh dengan hidrolisis dalam
suasana asam atau enzim, dan tanpa gula ciri kelarutannya sama dengan ciri sterol
lain. Tipe aglikon senyawa saponin dapat dilihat pada gambar di bawah ini :

Sumber : (Hanani, 2015)

Gambar 2. 4 Sapogenin

4. Fenol
Fenol merupakan metabolit sekunder pada tanaman yang terdiri dari satu atau
lebih turunan hidroksi dari cincin benzena. Senyawa fenol tersebar luas pada seluruh
bagian tanaman dan digunakan sebagai pertahanan diri. Fenol dalam kesehatan
memiliki berbagai macam aktivitas seperti antibakteri dan antifungi (Christina dkk,
2010). Fenol larut dalam air pada temperatur kamar, selain itu fenol larut dalam
benzena, dan sangat larut dalam kloroform, eter, gliserol, dan karbon disulfida (Cichy
dan Szymanowski, 2002). Senyawa fenol sebagai antibakteri memiliki mekanisme
denaturasi protein sel. Ikatan fenol yang terbentuk antara fenol dan protein
mengakibatkan struktur menjadi rusak, sehingga menyebabkan terjadinya lisis pada
sel dikarenakan terganggunya permeabilitas dinding sel dan membran sitoplasma
(Palczar and Chan, 2008).
 11

C. Metode Ekstraksi
Ekstrak merupakan material hasil penarikan oleh pelarut air atau pelarut organik
dari bahan kering atau dikeringkan. Pelarut dari hasil penyarian dapat dihilangkan
dengan cara penguapan menggunakan alat evaporator. Pelarut organik akan
menghasilkan ekstrak kental, sedangkan pelarut air didapatkan hasil serbuk yang pada
tahap akhirnya menggunakan alat freeze dryer (Paju et al ., 2013). Ekstraksi adalah
metode yang digunakan dalam proses pemisahan suatu komponen dari suatu tanaman
atau hewan menggunakan sejumlah massa bahan (pelarut) yang tepat sebagai
pemisah. Pelarut pilihan utama untuk mengekstraksi metabolit sekunder yang belum
diketahui strukturnya dan untuk tujuan skrining adalah metanol, etanol 70%, dan
etanol 96%. Jika tujuannya mengisolasi dan memurnikan senyawa target dapat
menggunakan pelarut organik lain, seperti butanol, etil setat, kloroform, dan n-
heksana) (Saifuddin, 2014).
Tujuan ekstraksi adalah menarik atau memisahkan senyawa dari campurannya
atau simplisia. Pemilihan metode dilakukan dengan memperhatikan anatara lain sifat
senyawa, suhu dan tekanan yang merupakan faktor perlu diperhatikan dalam
melakukan ekstraksi. Metode ekstraksi yang dipilih untuk mendapatkan senyawa
bahan alam tergantung pada jenis sampel tumbuhan yang ada misalnya senyawa
berupa cairan yang mudah menguap berbeda dengan cairan yang tidak menguap
(Hanni, 2015). Ekstrak adalah sediaan cairan kental yang diperoleh dengan
mengektraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan
pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa
atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang
telah ditetapkan (Departemen Kesehatan RI, 2000). Hal yang perlu diperhatikan
dalam membuat ekstrak yaitu jumlah simplisia yang akan diekstrak, derajat kehalusan
simplisia, jenis pelarut yang digunakan, temperatur suhu penyari yang akan
menentukan jumlah dan kecepatan, penyaringan, lama waktu penyaringan dan proses
ektraksi (Hanani, 2015).
 12

Menurut (Hanani, 2015). Ada beberapa metode ekstraksi yaitu :

1. Cara dingin
a. Maserasi merupakan proses perendaman sampel menggunakan pelarut organik
pada suhu ruangan. Proses ini sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa
bahan alam karena melalui perendaman sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan
dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel
sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam
pelarut organik dan ekstraksi senyawa akan sempurna karena dapat diatur lama
perendaman yang dilakukan. Pemilihan pengekstrak untuk proses maserasi akan
memberikan efektifitas yang tinggi melalui cara memerhatikan kelarutan senyawa
bahan alam pelarut tersebut. Maserasi merupakan metode ekstraksi dengan proses
perendaman bahan dengan pelarut yang sesuai dengan senyawa aktif yang akan
diambil dengan pemanasan rendah atau tanpa adanya proses pemanasan. Faktor-
faktor yang mempengaruhi ekstraksi antara lain waktu, suhu, jenis pelarut,
perbandingan bahan dan pelarut, dan ukuran partikel (Suharto et al., 2016).
Umumnya ekstraksi metode maserasi menggunakan suhu ruang pada prosesnya,
namun dengan menggunakan suhu ruang memiliki kelemahan yaitu proses
ekstraksi kurang sempurna yang menyebabkan senyawa menjadi kurang terlarut
dengan sempurna. Dengan demikian perlu dilakukan modifikasi suhu untuk
mengetahui perlakuan suhu agar mengoptimalkan proses ekstraksi (Ningrum,
2017). Kelarutan zat aktif yang diekstrak akan bertambah besar dengan bertambah
tingginya suhu. Akan tetapi, peningkatan suhu ekstraksi juga perlu diperhatikan,
karena suhu yang terlalu tinggi dapat menyebabkan kerusakan pada bahan yang
sedang diproses (Margaretta et al., 2011).
b. Perkolasi adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan alat perkolator
dengan pelarut yang selalu baru sampai terjadi penyarian sempurna yang
umumnya dilakukan pada temperatur kamar. Proses perkolasi terdiri dari tahap
pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya
(penetesan/penampungan ekstrak), terus-menerus sampai diperoleh perkolat.
 13

2. Cara Panas
a. Refluks adalah proses penyarian simplisia dengan pelarut pada temperatur titik
didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan
dengan adanya pendingin balik.
b. Digesti adalah proses penyarian simplisia dengan pengadukan kontinu pada
temperatur lebih tinggi dari temperatur kamar, yaitu 40-50°C.
c. Sokletasi adalah proses penyarian menggunakan pelarut yang selalu baru, yang
umumnya dilakukan dengan menggunakan alat soklet sehingga terjadi ekstraksi
kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
d. Infudasi adalah proses penyarian dengan pelarut air pada temperatur 90°C
selama 15 menit
e. Dekoktasi adalah proses penyarian dengan pelarut air pada temperatur 90°C
selama 30 menit.

D. Fraksinasi
Fraksinasi dapat diartikan sebagai pemisahan komponen-komponen dalam ekstrak
berdasarkan perbedaan tingkat kepolaran. Pada prinsipnya senyawa polar diekstraksi
dengan pelarut polar, sedangkan pelarut non polar diekstraksi dengan senyawa non
polar. Ekstrak kental yang telah didapatkan dari proses ekstraksi masih berpa ekstrak
kasar dan isinya masih kompleks, untuk itu perl dilakukan fraksinasi cair- cair atau
partisi. Pemisahan yang dilakukan berdasarkan tingkat kepolaran, dimulai dari non
polar, semi polar, hingga polar. Ekstrak metanol atau etanol harus dilarutkan dengan
air terlebih dahulu. Dalam pelaksanaan fraksinasi partisi, untuk memisahkan dua
pelarut yang konstanta dielektriknya berjauhan dianjurkan menggunakan corong
pisah bentuk buah pear atau yang lebih bulat. Pelarut yang konstanta dielektriknya
berdekatan, pada saat partisi dianjurkan menggunakan corong pisah yang bentuknya
lebih memanjang. Hasil pemisahan partisi yang memiliki konstanta dielektrik lebih
tinggi akan berada pada posisi atas, sedangkan yang memiliki konstanta dielektrik
lebih rendah akan berada pada posisi bawah corong pisah (Saifuddin, 2014).
 14

Sumber : (Saifudin, 2014).

Gambar 2. 5 Hasil Pemisahan Partisi

E. Cairan Penyari
Dalam melakukan proses ektraksi diperlukan jenis pelarut yang sesuai dengan
komponen yang ingin diekstrak. Hal ini sesuai dengan prinsip dari ektraksi like
dissolve like, dimana pelarut non polar akan melarutkan komponen polar dan
sebaliknya, komponen non polar akan larut pada pelarut non polar. Pemilihan pelarut
harus disesuaikan dengan komponen bioaktif yang ingin diekstrak. Pelarut yang baik
harus memiliki nilai toksisitas yang rendah, mudah diuapkan pada suhu rendah,
bersifat mengawetkan, dan tidak menyebabkan ekstrak terurai. Pelarut yang paling
umum digunakan dalam penelitian aktivitas antimikroba adalah metanol, etanol dan
air pelarur seperti etanol bersifat polar akan mengektraksi senyawa fenol. Pelarut
semi polar mampu mengektrak senyawa fenol, terpenoid, alkaloid, aglikon, dan
glikosida. Sedangkan pelarut non polar dapat mengektraksi senyawa kimia seperti
lilin, lipid dan minyak yang mudah menguap (Anwar, 2013).

F. Bakteri
Nama bakteri berasal dari bahasa Yunani “bacterium” yang berarti batang. Saat
ini, nama tersebut digunakan untuk menyebut sekelompok mikroorganisme bersel
satu. Tubuhnya bersifat prokariotik, yaitu terdiri atas sel yang tidak mempunyai
pembungkus inti. Bakteri berkembang biak dengan membelah diri, karena begitu
 15

kecil maka hanya dapat dilihat menggunakan mikroskop. Bakteri walaupun bersel
satu tetapi mempunyai beberapa organel yang dapat digunakan untuk melaksanakan
beberapa fungsi hidup (Waluyo, 2004). Salah satu komponen penting penyusun sel
bakteri adalah peptidoglikan. Peptidoglikan ini memberikan bentuk dan menyebabkan
kakunya dinding sel. Susunan kimiawi dan struktur peptidoglikan khas untuk setiap
bakteri, sehingga perbedaan pada dinding sel inilah yang dimanfaatkan dalam
mengelompokkan bakteri berdasarkan teknik pewarnaan gram. Berdasarkan teknik
tersebut bakteri dibagi dua kelompok, yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram
negatif (Pelczar dan Chan, 1986).

G. Pseudomonas aeruginosa

Sumber : (Saifudin, 2014).

Gambar 2. 6 Bakteri Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas merupakan bakteri gram negatif yang bersifat motil karena

memiliki flagel dan bersifat aerubik. P. aeruginosa terlihat sebagai bentuk tunggal,
ganda, dan kadang-kadang dalam rantai pendek. P aeruginosa berbentuk batang dan
berukuran sekitar 0,6 x 2 μm. P aeruginosa tumbuh dengan baik pada suhu 37-42°C.
P. aeruginosa merupakan penyebab infeksi terutama pada pasien dengan mekanisme
sistem imun yang menurun. Bakteri ini merupakan patogen nosokomial utama, yaitu
kejadian infeksi yang berasal dari rumah sakit dan fasilitas pelayanan kesehatan
lainnya. Bakteri ini menyebabkan beberapa penyakit serius, seperti pneumonia,
infeksi paru-paru kronis, infeksi keratitis, ulseratid, infeksi saluran kemih, dan
 16

bakterimia pada pasien dengan luka bakar (Lyczak et al., 2000).

1. Klasifikasi Pseudomonas aeruginosa
Menurut (Ashri, 2017) klasifikasi P. aeruginosa adalah sebagai berikut :
Kingdom : Bacteria
Filum : Proteobacteria
Kelas : Gamma Proteobacteria
Ordo : Pseudomonadales
Famili : Pseudomonadaceae
Genus : Pseudomonas
Species : Pseudomonas aeruginosa
2. Morfologi dan Patogenesis Pseudomonas aeruginosa
Pseudomonas aeruginosa merupakan bakteri gram negatif yang bersifat motil
karena memiliki flagel dan bersifat aerobik. P. aeruginosa berbentuk sel tunggal,
ganda, dan kadang-kadang dalam rantai pendek. Berbentuk batang dan berukuran
sekitar 0,6 x 2 µm. Pseudomonas aeruginosa tumbuh dengan baik pada suhu 37-42 oC.
Bakteri ini muncul berpasangan, terkadang sebagai bakteri tunggal yang membentuk
rantai pendek. P. aeruginosa merupakan bakteri yang mudah tumbuh pada berbagai
lingkungan karena kebutuhan nutrisinya yang sangat sederhana. Bakteri ini ditemui
pada luka bakar, infeksi telinga, serta luka-luka pasca operasi (Prestianti, 2017). P.
aeruginosa merupakan bakteri penyebab infeksi pada pasien dengan mekanisme
sistem imun yang menurun. Bakteri ini menyebabkan beberapa penyakit serius,
seperti pneumonia, infeksi paru-paru kronis, infeksi keratitis ulseratif, infeksi saluran
kemih, dan bakterimia pada pasien luka bakar (Sandhori, 2018). Penanganan bakteri
P. aeruginosa dapat dilakukan dengan pemberian antibiotik (Faradina et al., 2019).

H. Antibakteri
Antibakteri adalah suatu senyawa yang digunakan untuk mengobati penyakit
infeksi dengan cara mempengaruhi pertumbuhan, perkembangbiakan, dan
kelangsungan hidup mikroorganisme, tanpa membahayakan kesehatan
 17

penggunaannya. Mekanisme penghambatan antibaketi secara umum meliputi inhibisi

sintesis dinding sek atau sintesis asam nukleat, inhibisi fungsi ribosom atau fungsi
membran sel. Antibakteri dikategorikan menjadi 2 berdasarkan aktivitas
spektrumnya, yaitu berspektrum sempit (narroow spectrum) dan berspektrum luas
(broad spectrum). Antibakteri berspektrum sempit hanya bekerja efektif pada salah
satu golongan bakteri, baik yang Gram positif ataupun Gram negatif saja. Sedangkan
antibskteri berspektrum luas dapat secara efektif melawan keduanya. Senyawa
antibakteri diproduksi oleh tanaman dalam bentuk senyawa fitokimia sebagai respon
pertahanan terhadap stress lingkungan mikroorganisme patogen. Senyawa fitokimia
tanaman dikategorikan menjadi metabolit primer dan sekunder. Senyawa metabolite
sekunder banyak dimanfaatkan dalam produksi obat-obatan untuk mengatasi berbagai
macam penyakit khususnya penyakit infeksi. Senyawa metabolit sekunder dari
tanaman telah banyak dibuktikan memiliki aktivitas terapeutik yang luas terhadap
mikroogranisme patogen. Secara langsung, senyawa metabolt sekunder berinteraksi
dengan beberapa reseptor, sel membran dan asam nukleat pada mikroorganisme
patogen (Maulidina, 2020). Menurut (Rusmiati, 2010). Berdasarkan mekanisme
kerjanya dalam menghambat pertumbuhan mikroorganisme, antibakteri
digolongkan sebagai berikut:
a. Antibakteri yang dapat menghambat sintesis dinding sel
Dinding sel bakteri sangat penting untuk mempertahankan struktur sel bakteri.
Oleh karena itu, zat yang dapat merusak dinding sel akan melisiskan dinding
sel sehingga dapat mempengaruhi bentuk dan struktur sel, yang pada akhirnya
dapat membunuh sel bakteri tersebut.
b. Antibakteri yang dapat menganggu atau merusak membran sel Membran sel
mempunyai peranan penting dalam mengatur transportasi nutrisi dan metabolit
yang dapat keluar masuk sel. Membran sel juga berfungsi sebagai tempat
berlangsungnya respirasi dan aktivitas biosintesis dalam sel. Beberapa jenis
antibakteri dapat mengganggu membran sel sehingga dapat mempengaruhi
kehidupan sel bakteri.
 18

c. Antibakteri yang dapat menganggu biosintesis asam nukleat

Proses replikasi DNA di dalam sel merupakan siklus yang sangat penting bagi
kehidupan sel. Beberapa jenis antibakteri dapatmengganggu metabolisme asam
nukleat tersebut sehingga mempengaruhi seluruh fase pertumbuhan sel bakteri.
d. Antibakteri yang menghambat sintesis protein
Sintesis protein merupakan suatu rangkaian proses yang terdiri atas proses
transkripsi (yaitu DNA ditranskripsi menjadi mRNA) dan proses translasi (yaitu
mRNA ditranslasi menjadi protein). Antibakteri dapat menghambat proses-
proses tersebut akan menghambat sintesis protein.
Daya antibakteri dapat ditentukan berdasarkan nilai KHM dan KBM terhadap
pertumbuhan suatu bakteri. Konsentrasi minimal yang diperlukan untuk menghambat
pertumbuhan banteri dikenal sebagai konsentrasi/ kadar hambat minimal (KHM).
Konsentrasi minimal yang diperlukan untuk membunuh 99,9% pertumbuhan bakteri
dikenal sebagai konsentrasi bunuh minimal (KBM). Suatu zat aktif dikatakan
memiliki potensi yang tinggi sebagai antibakteri jika pada konsentrasi rendah
memiliki daya hambat yang besar. Menurut Nasri (2011) dalam Hapsari (2015),
kriteria kekuatan antibakteri adalah sebagai berikut:
Tabel 2. 1 Kategori Diameter Zona Hambat (Susanto et al., 2012).

Daya Hambat Antibakteri Kategori Daya Hambat Antibakteri

≥ 20 mm Sangat kuat

10-20 mm Kuat
5-10 mm Sedang
≤ 5 mm Lemah

I. Uji Aktivitas Antibakteri

Antibakteri dalam definisi yang luas diartikan suatu zat yang dapat mencegah
terjadinya pertumbuhan dan reproduksi bakteri. Mikroorganisme dapat dihambat atau
 19

dibunuh dengan proses fisik dan kimia. Cara kerja antibakteri antara lain dengan
merusak dinding sel, merubah permeabilitas sel, merubah molekul protein dan asam
nukleat, menghambat kerja enzim, serta menghambat sintesis asam nukleat dan
protein (Rahmadani, 2015). Semakin tinggi konsentrasi suatu zat antimikroba akan
semakin cepat sel mikroorganisme terbunuh atau terhambat pertumbuhannya.
Aktivitas antimikroba dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain, konsentrasi atau
intensitas zat antimikroba, jumlah mikroorganisme, keasaman atau kebasaan (pH),
potensi suatu zat antimikroba dalam larutan yang diuji dan kepekaan suatu mikroba
terhadap konsentrasi antibakteri. Adapun macam cara pengujian antibakteri adalah
sebagai berikut.
1) Metode Difusi
a. Cara Cakram (disc) bertujuan untuk menentukan aktivitas agen antibakteri.
Metode ini dilakukan dengan meletakkan piringan yang berisi antibakteri agar
berdifusi kedalam media agar (Pratiwi, 2008). Setelah itu diinkubasi pada suhu
37oC selama 18-24 jam. Daerah bening disekitar cakram menunjukkan adanya
hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen antibakteri (Maradona, 2013).
b. Cara Parit (ditch) Metode ini dilakukan dengan meletakkan sampel uji berupa
agen antibakteri kedalam parit yang dibuat dengan memotong media agar dalam
cawan petri pada bagian tengah secara membujur, kemudian bakteri digoreskan
kearah parit yang berisi agen antibakteri (Pratiwi, 2008). Langkah selanjutnya
yaitu diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Adanya daerah bening
disekitar parit menunjukkan hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen
antibakteri (Maradona, 2013).
c. Cara Sumur (cup) Cara sumur ini mirip dengan cara parit, yaitu dengan dibuat
sumur pada media agar yang telah ditanami mikroorganisme dan pada sumur
tersebut telah diberi agen antibakteri yang akan diuji (Pratiwi, 2008). Selanjutnya
diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Adanya daerah bening disekitar
parit menunjukkan hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen antibakteri
(Maradona, 2013). Metode sumur ini memiliki kelebihan, yaitu lebih mudah
 20

digunakan untuk mengukur zona hambat yang terbentuk karena isolat

beraktivitas tidak hanya dipermukaan atas media agar tetapi juga dibagian bawah
(Listari, 2009).
2) Metode Dilusi
a. Metode Dilusi Cair (broth dilution test) Metode ini bertujuan untuk mengukur
Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM). Proses
dilakukannya cara ini adalah dengan membuat seri pengenceran agen antibakteri
pada media cair yang ditambahkan dengan bakteri uji. KHM dapat ditentukan dari
kadar terkecil agen antibakteri yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan
mikroba uji. Selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa penambahan media
uji ataupun agen antibakteri dan diinkubasi selama 18-24 jam. Daerah bening
pada media cair setelah diinkubasi menunjukkan KBM (Pratiwi, 2008).
b. Metode Dilusi Padat (solid dilution test) Metode ini mirip dengan metode dilusi
cair, perbedaanya untuk metode ini menggunakan media padat. Keuntungan dari
metode ini adalah untuk menguji beberapa bakteri uji dapat hanya menggunakan
satu agen antibakteri (Pratiwi, 2008).
 21

J. Keaslian Penelitian
Tabel 2. 2 Keaslian Penelitian

No Peneliti Judul Metode Hasil Peneliti

1 Monica Uji Aktivitas Metode Hasil pengujian aktivitas antibakteri dengan
Sandy, Antibakteri Ekstrak, difusi dan metode difusi menunjukkan ekstrak, fraksi
Tatiana Siska Fraksi N- heksan, Metode n-heksan, fraksi etil asetat dan fraksi air
Wardani, Fraksi etil asetat , dilusi daun pegagan dapat menghambat
Anita Dwi fraksi air Daun konsentrasi. pertumbuhan bakteri dengan adanya daya
Septiarini Pegagan (centella hambat. Fraksi etil asetat 20% paling efektif
asiatica (L.) Urb) karena memiliki rata-rata daya hambat
Terhadap paling besar yaitu 13,67 mm. Hasil uji
escherichia coli metode dilusi menunjukkan nilai KBM
ATCC 25922 fraksi etil asetat yaitu 12,5%. Berdasarkan
hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa
fraksi etil asetat adalah fraksi teraktif.
2 Iloh Antarini, Uji Aktivitas Metode Hasil penelitian menunjukkan ekstrak
Nony Antibakteri Ekstrak difusi etanolik daun kelor, daun teh hijau, daun
Puspawati, Etanolik Daun Kelor sumuran binahong, dan meniran hijau memiliki
Rahmat Budi (Moringa Oleifera aktivitas antibakteri terhadap Pseudomonas
Nugroho. Lamk.), Daun Teh aeruginosa ATCC 27853 dengan daya
Hijau (Camellia hambat berturut-turut adalah 20,6 mm, 17,3
Sinensis L.), Daun mm, 15,6 mm, dan 22,6 mm. Ekstrak
Binahong (Anredera etanolik meniran hijau memiliki aktivitas
Cordifolia (Tenore) antibakteri paling aktif
Steen.), Dan Meniran
Hijau (Phyllanthus
niruri L.) Terhadap
Pseudomonas
aeruginosa ATCC
27853
3 Gabriella M. Uji Aktivitas Metode Hasil uji aktivitas antibakteri dianalisa
J. Torar, Antibakteri Ekstrak difusi agar dengan metode analisa varians satu arah
Widya Astuty Etanol Biji Pepaya (difusi (one way anova). Data Anova menunjukkan
Lolo, Gayatri (Carica Papaya L.) Kirby dan bahwa konsentrasi ekstrak 20%, 40%, 60%
Citraningtyas. Terhadap Bakteri Bauer yang dan 80% telah memberikan aktivitas
Pseudomonas dimodifikas menghambat pertumbuhan bakteri uji. Hasil
 22

aeruginosa dan i) dengan pengujian aktivitas antibakteri menunjukkan

Staphylococcus cara bahwa setiap seri konsentrasi ekstrak etanol
aureus sumuran. biji pepaya (Carica papaya L.) memiliki
aktivitas antibakteri dengan kategori daya
hambat sedang terhadap Pseudomonas
aeruginosa dan Staphylococcus aureus.
Ifan A. Skrining Fitokimia metode Hasil Ekstrak mengandung
Maulana, dan Uji Aktivitas mikrodilusi terpenoid/steroid, flavonoid, polifenol.
Bawon Antibakteri Ekstrak untuk Fraksi n-heksana dan diklorometana
Triatmoko dan Fraksi Tanaman menentukan mengandung terpenoid/steroid. Fraksi etil
dan Ari S. Senggugu (Rotheca nilai IC50. asetat dan residu mengandung flavonoid dan
Nugraha serrata (L.) Steane & polifenol. Nilai IC50 terendah dicapai oleh
Mabb.) terhadap fraksi n-heksana sebesar 176,919 ± 6,303
Pseudomonas µg/mL. Ekstrak dan fraksi senggugu
aeruginosa memiliki aktivitas antibakteri yang moderat.
5 Herwin, Aktivitas Antibakteri Metode Hasil pengujian aktivitas antibakteri ekstrak
Zulhisda Ekstrak Etanol Daun difusi agar etanol daun dan ampas teh hijau secara
Premeita Dan Ampas Teh difusi agar terhadap bakteri
Sari, Siska Hijau (Camellia Propionibacterium acne dan
Nuryanti sinensis L. ) Staphylococcusc epidermidis dengan enam
Terhadap Bakteri seri konsentrasi yaitu 0,1%, 0,5%, 1%, 2%,
Penyebab Jerawat 4% dan 8%, diperoleh diameter zona hambat
(Propionibacterium terhadap Propionibacterium acne yaitu pada
acne) dan kosentrasi 8% sebesar 18.11 mm.
(Staphylococcus
epidermidis) Secara
Difusi Agar
 23

K. Alur Penelitian

Gambar 2. 7 Diagram Alir Penelitian

 24

Gambar 2. 8 Diagram Alir Penelitian Uji Aktivitass Antibakteri Difusi Cakram

 25

Replikasi 3 kali

Gambar 2. 9 Diagram Alir Penelitian Uji Aktivitass Antibakteri Dilusi Cair

 BAB III
METODE PENELITIAN

A. Waktu dan Tempat Penelitian

1) Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biologi Politeknik Indonusa
Surakarta dan Laboratorium Universitas Duta Bangsa Surakarta.
2) Waktu Penelitian
Waktu penelitian mulai dari Juni – Agustus 2022.

B. Variabel Penelitian
1) Variabel Independen
Variabe Independen dari penelitian ini adalah konsentrasi 25% b/v, 12,5% b/v
dan 6,25% b/v fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, dan fraksi air dari daun teh hijau.
2) Variabel Dependen
Variabel Dependen dari penelitian ini adalah diameter zona hambat (mm),
KHM (Kadar Hambat Minimum) dan KBM (Kadar Bunuh Minimum) amtibakteri
fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, dan fraksi air dari daun teh hijau.
3) Variabel Terkendali
Variabel terkendali dari penelitian ini adalah media biakan P.aeruginosa yang
digunakan ialah Muller Hinton Agar (MHA), serta suhu dan lama inkubasi sampel
yaitu 37oC selama 1 x 24 jam.

26
 27

C. Alat dan Bahan

1) Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain rotary evaporator, Laminar
Air Flow (LAF), autoklaf, beaker glass, botol maserasi 2,5 liter, cawan petri, dry
heat oven, hot plate, tabung erlenmeyer, corong, gelas ukur, inkubator, janka sorong,
jarum ose, kapas lidi steril, lampu spiritus, pinset, pipet tetes, gunting, tabung reaksi
dan raknya, penjepit tabung reaksi, timbangan analitik, timbangan kasar, vial, cotton
bud steril, vorteks, kertas saring wathman, tangkrus, Crusible porselen 30 ml, neraca
analitik, oven, desikator, corteks, pipet volume 10 ml, spatel.
2) Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain adalah simplisia daun teh
hijau, bakteri Pseudomonas aeruginosa, etanol 96%, tablet ciprofloxacin 500 mg,
handscoon, kapas, kassa steril, kertas cakram, kertas saring, masker, media NB
(Nutrient Broth), media MHA (Mueller Hinton Agar), peresksi mayer, etanol, serbuk
magnesium, HCl pekat, aquadest, larutan FeCl3, kloroform, asam asetat, anhidrat,
H2SO4, aquadest, n-heksan, etil asetat, NaCl 0,9%, Kliger Iron Agar, Sulfide Indol
Mptilitas, Lisin Iron Agar, Citrate, reagen Erlich, Mc Farland 0,5%. kertas cakram,
silika gel GF254, spiritus.

D. Prosedur Penelitian
Tahapan penelitian ini meliputi determinasi tanaman, pengumpulan simplisia,
penyiapan alat, pembuatan ekstrak, uji organoleptis, pemeriksaan karaktersitik
ekstrak, identifikasi senyawa, fraksinasi dan uji aktivitas antibakteri.
1) Determinasi Tanaman
Identifikasi dan determinasi tanaman teh hijau dilakukan di Laboratorium
Universitas Setia Budi.
 28

2) Pembuatan Simplisia
Daun teh hijau diambil di Desa Kemuning, Ngargoyoso, Kabupaten Karanganyar.
Daun teh hijau dipilih, dipisahkan dari material lainnya misalnya akar dan daun,
kemudian dicuci bersih dengan air mengalir, dipotong kecil-kecil kemudian dikering
anginkan selama kurang lebih 10 hari, setelah itu, daun teh hijau hasil pengeringan
dihaluskan menggunakan blender, kemudian diayak dengan ayakan mesh No 60.
(Departemen Kesehatan RI, 1985).
3) Susut Pengeringan
Susut pengeringan adalah pengurangan berat bahan setelah dikeringkan dengan
cara yang telah ditetapkan. Tujuan susut pengeringan adalah untuk memberikan
batasan maksimal (rentang) tentang banyaknya senyawa yang hilang pada saat proses
pengeringan. Sebanyak 3 g serbuk daun teh hijau dimasukkan ke dalam piringan
logam yang telah dilapisi oleh aluminium foil secara merata. Kemudian piringan
logam kedalam moisture balance. Atur suhu 105 oC selama 30 menit kemudian baca
hasil (Depkes, 2000).
4) Ekstraksi Daun Teh Hijau
Ekstrak dibuat dengan metode maserasi. Simplisia dimasukkan kedalam dua buah
botol berwarna coklat sebanyak masing-masing 250 gram. Kemudian ditambahkan
cairan penyari yaitu etanol 96% hingga seluruh simplisia terendam ditandai hingga
terdapat selapis pelarut diatasnya (2,5 liter). Botol ditutup rapat, kemudian disimpan
ditempat yang terlindung matahari selama 5 hari. Selama penyimpanan, kocok botol 3
kali sehari selama 15 menit. Pengocokan dilakukan untuk mempercepat proses
pelarutan komponen kimia yang terdapat dalam sampel.
Setelah 5 hari, hasil maserasi disaring dan ampasnya diperas, kemudian dilakukan
remaserasi selama 2 hari. Hasil yang diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator
sampai pelarutnya menguap dan dilanjutkan proses pengeringan sisa pelarut pada
ekstrak menggunakan oven pada suhu 40 oC agar diperoleh ekstrak kental (Ditjen
POM, 1979).
 29

Randemen Ekstrak dapat dihitung dengan rumus :

berat ekstrak ( gram)
Randemen = x 100 %
berat simplisia kering( gram)
(Departemen Kesehatan RI, 2000).
5) Uji Kadar Air
Ekstrak kental daun teh hijau 2 gram ditimbang dengan wadah yang sudah ditara
sebelumnya. Kemudian ekstrak dikeringkan dengan suhu 105oC selama 1 jam, dan
ditimbang. Lanjutkan pengeringan dan timbang pada jarak 1 jam sampai perbedaan 2
penimbangan berturut-turut tidak lebih dari 0,25% (Depkes RI, 2000).
Perhitungan kadar air sebagai berikut :
A−B
kadar air = x 100 %
A
Keterangan :
A= Berat sampel sebelum dipanaskan
B= Berat sampel setelah dipanaskan
(Depkes RI, 2000).
6) Uji Bebas Etanol
Uji bebas etanol dilakukan untuk membebaskan ekstrak dari etanol sehingga
didapatkan ekstrak murni tanpa ada kontaminasi. Ekstrak ditambah beberapa tetes
H2SO4 dan CH3COOH, kemudian dipanaskan. Tidak adanya bau khas ester
menunjukkan hasil negatif (Antarini et al., 2021).

E. Uji Fitokimia Daun Teh Hijau Secara KLT

1) Alkaloid
Ekstrak daun teh hijau ditambahkan HCl 2N sebanyak 1,7 mL dan dipanaskan
sekitar 3 menit. Sebanyak 0,1 gram NaCl ditambahkan, disaring, kemudian filtratnya
ditotolkan pada lempeng KLT dan dieluasi dengan campuran etil asetat:metanol:air
(9:2:2). Hasil positif alkaloid apabila terdapat noda berwarna jingga setelah disemprot
dragendorf (Maulana et al., 2020).
 30

2) Katekin
Analisa kualitatif katekin digunakan fase diam berupa plat silika gel GF254 dan
fase gerak etil asetat: air: esam format dengan perbandingan (18:1:1 v/v). Noda-noda
pada proses elusi diamati di bawah sinar UV 254 nm dan 366 nm, serta diuji kimia
dengan menyemprotkan larutan FeCl3, warna biru kehitaman menunjukkan adanya
katekin (Rustanti et al., 2013).
3) Saponin
Identifikasi senyawa saponin dilakukan menggunakan KLT, fase diam silika gel
GF254 dan fase geraknya fase gerak kloroform : metanol : air (13:7:2) dengan
pereaksi semprot Liberman Bourchardat (LB) Senyawa saponin akan terlihat ungu
atau noda gelap pada sinar UV 254 nm dan UV 366 nm. Pada sinar tampak bercak
berwarna merah, kuning, biru tua, ungu, hijau atau kuning coklat (Endarini, 2019).
4) Fenol
Uji kualitatif menggunakan metode KLT. Larutkan ekstrak ditotolkan pada plat
KLT dengan menggunakan pipa kapiler pada jarak 1 cm dari garis bawah. Plat KLT
yang digunakan terbuat dari silika gel GF254 dengan ukuran 6,5 cm x 2 cm.
Selanjutnya dielusi menggunakan fasa gerak yaitu n-heksan: etil asetat: metanol
dengan perbandingan (2:7:2). Setelah terelusi lempeng diangkat dan dikeringkan,
diamati bercak pada lampu UV254 nm dan UV366 nm dengan penampak bercak besi
(III) klorida (FeCl3). Hasil positif fenol jika noda berwarna hijau, merah, ungu, biru
atau hitam yang kuat.

F. Fraksinasi Ekstrak Daun Teh Hijau

Fraksinasi dilakukan dengan metode FCC (Fraksinasi Cair-Cair) dengan pelarut
n-heksan (pelarut non polar), etil asetat (pelarut semi polar), dan air (pelarut polar).
Ekstrak kental daun teh hijau sebanyak 10 gram dimasukkan dalam air 75 mL.
Kemudian difraksinasi sebanyak 3 kali dengan n-heksan. Lalu, corong pisah dikocok
secara perlahan sampai pelarut tercampur dengan sekali-kali membuka kran corong
 31

pisah. Setelah didiamkan, akan terjadi pemisahan antara farksi n-heksan dan fraksi
air. Kemudian diambil fraksi n-heksan yang berada dibagian atas corong pisah (BJ n-
heksan lebih kecil daripada air. Ulangi fraksinasi n-heksan hingga 3 kali penyarian
disatukan.
Fraksi etanol air dari hasil ekstraksi dengan n-heksan dimasukkan kembali
kedalam corong pisah. Kemudian ditambahkan pelarut etil asetat sebanyak pada
corong pisah, lalu dikocok secara perlahan sampai pelarut tercampur dengan sekali-
kali membuka kran corong pisah. Setelah didiamkan, akan terjadi pemisahan antara
fraksi etil asetat dan fraksi air. Kemudian ambil fraksi etil asetat yang berada
dibagian atas corong pisah (BJ etil asetat lebih kecil daripada air). Ulangi fraksinasi
etil asetat hingga 3 kali sampai larutan berwarna bening. Fraksi etil asetat yang
diperoleh dari 3 kali penyarian disatukan.
Hasil fraksinasi yang telah pekat masing-masing diencerkan dengan
dimetilsulfoksida (DMSO) hingga diperoleh konsentrasi 25% b/v. Selanjutnya
dilakukan pengenceran kembali untuk mendapatkan 12,5% b/v, dan 6,25% b/v.
G. Penyiapan Alat
Alat berbahan kaca yang digunakan untuk uji aktivitas antibakteri disetrilkan
terlebih dahulu menggunakan oven pada suhu 170 oC selama 2 jam dan untuk alat
yang didalamnya berisi media disetrilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121 oC
selama 15 menit. Jarum ose disterilisasi dengan cara pemijaran dengan jalan
melewatkan pada nyala api (Harti, 2015).

H. Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif

a. Kontrol positif dibuat dari sediaan obat tablet ciprofloxacin 500 mg. satu tablet
digerus, lalu ditimbang dan disetarakan dengan 500 mg. kemudian serbuk halus
dilarutkan dalam aquades steril untuk memperoleh larutan ciprofloxacin 5 µg/50
µl (Torar et al., 2017).
b. Kontrol negatif dibuat dari Larutan DMSO 10% (v/v) dibuat dengan cara
melarutkan 10 ml larutan DMSO absolut dalam air suling hingga 100 ml (Sari,
 32

2017).

I. Pembuatan Standar MC. Farland

Diambil aquadest kira-kira setengah dari tabung reaksi. Kemudian ditambah
H2SO4 sebanyak 9950 µL dan BaCl2 sebanyak 50 µL. Campur kedua larutan dalam
tabung tersebut, dikocok sampai homogen dan terbentuk larutan keruh. Larutan ini
dipakai sebagai baku pembanding suspensi bakteri dengan tingkat kekeruhan 108
CFU/mL (Cockerill et al.,2012).
J. Pembuatan MHA dan NB
1) Pembuatan Mueller Hinton Agar (MHA)
Sebanyak 3,8 gram media Mueller Hinton Agar dilarutkan dalam 100 ml
aquadest. Media disterilisasi menggunakan autoklaf selama 15 menit pada suhu
1210C. Dinginkan sampai suhu 500C, selanjutnya dimasukkan kedalam cawan petri.
Setelah dingin, medium padat disimpan dalam kulkas.
2) Pembuatan Nutrient Broth (NB)
Sebanyak 1,3 gram bubuk NB dilarutkan dengan 100 ml aquadest dalam
erlenmeyer kemudian diaduk. Setelah itu medium NB disterilkan dengan autoklaf
pada suhu 1210C selama 15 menit.

K. Pembuatan Suspensi Pseudomonas aeruginosa

Biakan P.aeruginosa didapatkan dari Universitas Setia Budi. Diambil media kira-
kira 150 mL dari Muller Hinton Borth (MHB) yang telah dibuat dan dipanaskan pada
suhu 30oC sampai 40oC. Kemudian ditambahkan biakan murni P.aeruginosa 10-15
(3-5 koloni) kedalam media tersebut. Suspensi tersebut distandarkan lebih dahulu
kekeruhannya dengan MC Farland 0,5.

L. Pembuatan Variabel Konsentrasi Fraksi Daun Teh Hijau

Larutan masing-masing fraksi daun teh hijau dibuat konsentrasi 25% b/v, 12,5%
b/v, dan 6,45% b/v.
 33

M. Pewarnaan Gram Negatif

Buat sediaan pada objek gelas, keringkan, kemudian rekatkan (fiksasi) 3x diatas
api bunsen. Kemudian tuangkan dengan larutan karbol-gentian-violet (sesudah
sediaan dingin), biarkan selama 5 menit. Zat warna dibuang dan bubuhi dengan
larutan mordant (lugol), diamkan selama kira-kira 1-3 menit. Lugol dibuang dan
preparat dicelupkan kedalam alkohol 96%, sampai warna gentian violet lepas
(sampai gentian tidak ada luntur lagi ). Cuci dengan air kran sampai bersih,
kemudian bubuhi dengan cat-penutup (counter stain) larutan water-fuchsin, biarkan
kira-kira 1-2 menit. Cuci dengan air kran, keringkan dalam temperatur kamar, lihat
dengan mikroskop memakai lensa rendam minyak. Gram Positif = ungu. Gram
negatif = merah.

N. Uji Biokimia SIM, LIA, KIA dan CITRAT

1) Media SIM (Sulfide Indol Motilitas)

Pada media SIM biakan bakteri diinokulasikan pada permukaan media dengan
cara inokulasi tusukan dan goresan. Inkubasi selama 24 jam pada suhu 370C.
Identifikasi bertujuan untuk mengetahui adanya sulfida, indol, dan motilitas bakteri.
Uji sulfida positif jika berwarna hitam. Uji indol positif jika terbentuk warna merah
setelah ditambah reagen Ehrlich. Uji motilitas positif jika terjadi pertumbuhan bakteri
pada bekas tusukan menggunakan jarum.
2) Media LIA
Pada medium LIA dilakukan inokulasi berupa tusukan dan goresan dengan bakteri
P.aeruginosa dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C. Identifikasi bertujuan
untuk mengetahui adanya deaminasi lisin dan sulfida. Amati pada bagian lereng serta
terbentuknya warna hitam pada media. Reaksi positif ditunjukkan dengan lereng akan
berwarna coklat (ditulis R). Berwarna ungu yang berarti suasananya basa disertai
terbentuknya warna hitam pada media (ditulis S+).
 34

3) Media KIA
Pada medium KIA dilakukan inokulasi berupa tusukan dan goresan dengan bakteri
P.aeruginosa dan di inkubasi selama 24 jam pada suhu 370C. Identifikasi bertujuan
untuk mengetahui adanya fermentasi karbohidrat dan sulfida. Diamati pada bagian
lereng dasar, terdapatnya gas serta terbentuknya warna hitam pada media. Uji positif
bila pada bagian lereng akan berwarna merah (ditulis K), bagian dasar berwarna
kuning (ditulis A), terbentuknya gas ditandai dengan pecahnya media (ditulis G+),
sulfida positif terbentuk warna hitam pada media (ditulis G+).
4) Media CITRAT
Pada medium CITRAT biakan bakteri dilakukan inokulasi berupa tusukan dan
goresan dengan bakteri P.aeruginosa dan diinkubasi selam 24 jam pada suhu 370C.
sitrat nya menghasilkan warna biru atau positif.

O. Uji Aktivitas Antibakteri

1) Penentuan Zona Hambat Bakteri Metode Difusi Cakram
Media Mueller Hinton Agar (MHA) dituangkan kedalam cawan petri masing-
masing 10 mL dan dibiarkan memadat sebagai lapisan dasar. Kemudian diambil
suspensi P.aeruginosa dan ditorehkan pada permukaan media Muller Hinton Agar
(MHA) secara merata dalam keadaan aseptis dan dibiarkan mengering.
Selanjutnya dicelupkan kedalam masing-masing tabung yang berisi etil asetat
fraksi n-heksan, dan fraksi air daun teh hijau yang telah dibuat dalam konsentrasi
25% b/v, 12,5% b/v, dan 6,25% b/v. Satu kertas cakram lain dicelupkan kedalam
DMSO sebagai kontrol negatif, dan satu lagi digunakan disk antibiotik ciprofloxacin
5 µg/50 µl sebagai kontrol positif.
Kertas cakram dibiarkan terendam selama 1 menit lalu dikeringkan dan
dianginkan, diletakkan menggunakan pinset diatas media agar yang telah diinokulasi
dengan P.aeruginosa. Inkubasikan cawan petri selama 48 jam pada suhu 30 – 37 oC.
Selanjutnya dilakukan pengamatan dan pengukuran terhadap zona bening yang
terbentuk disekitar cakram menggunakan jangka sorong dan hasil pengukuran lalu
 35

diinterprestasikan berdasarkan tabel kategori diameter zona hambat (Susanto, 2012).

2) Penentuan Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum

(KBM) Metode Dilusi
Media yang digunakan pada uji dilusi cair adalah Muller Hinton Broth. Dibuat
seri pengenceran bertingkat fraksi daun teh hijau yang memiliki zona hambat terbaik
dari konsetrasi terkecil sampai 4 seri kadar uji kebawah.
Di siapkan 6 tabung reaksi. Tabung reaksi 1-4 digunakan untuk uji dan tabung
reaksi 5-6 untuk kontrol. Tabung reaksi 1-4 diisi 2 ml media dan tabung reaksi 5-6 di
isi 1 ml media. Selanjutnya tabung reaksi yang telah berisi media ditutup
menggunakan kapas dan aluminium foil media kemudian di sterilisasi menggunakan
autoklaf.
Tabung reaksi 1 ditambahkan ekstrak sebanyak 2 ml, Kemudian dari tabung
reaksi 1 diambil 2 ml ditambah kan ke tabung reaksi 2 begitu seterusnya sampai
tabung reaksi 4 lalu dari tabung reaksi 4 dibuang 2 ml tabung. reaksi 5 ditambahkan 1
ml ciprofloxacin sebagai kontrol positif dan tabung reaksi 6 diisi 2 ml DMSO 10%
sebagai kontrol negatif.
Kemudian seluruh tabung reaksi 20 µL suspensi bakteri. Suspensi bakteri yang
ditambahkan sebelumnya telah distandarkan terlebih dahulu kekeruhannya. Dengan
MC farland 0,5. Setelah itu dilakukan Inkubasi selama 24 jam pada Pada suhu 37°C.
Konsentrasi terkecil bahan uji pada tabung yang menunjukkan tidak adanya
kekeruhan Disebut sebagai konsentrasi hambat minumum (KHM).
Selanjutnya kadar bunuh minimum KBM dihitung dengan mensubkultur sampel
pada media Muller Hinton Agar (MHA), Diinkubasi pada suhu 37°C selama 2 x 24
jam. P. augereus Yang tumbuh pada media MHA dihitung dan jumlah koloni bakteri
dinyatakan dalam satuan CFU/ml. Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali.
 36

P. Cara pengolahan dan Analisis Data

Data penelitian ini adalah dari penelitian akan diuji secara statistik menggunakan
metode One Way Anova pada Program SPSS 23. Data diuji terlebih dahulu dengan
pengujian normalitas kemudian homogenitas sebagai persyaratan analisis data
sebelum melakukan uji ANOVA. Uji normalitas bertujuam untuk memperlihatkan
bahwa data yang dilakukan memiliki distribusi normal atau tidak. Normalitas
dipenuhi jika hasil uji signifikasi dengan taraf signifikasi. Selanjutnya dilakukan uji
homogenitas, bertujuan untuk mengetahui varian dari beberapa populasi
menunjukkan sama atau tidak.
 37

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman Daun Teh Hijau (Camelia sinensis L)

Determinasi tanaman bertujuan untuk mengambil kebenaran dan kesesuaian identitas

sampel daun teh hijau (Camelia sinensis L) yang akan digunakan penelitian, untuk
menghindari kesalahan dalam pengambilan bahan serta menghindari tercampurnya bahan
dengan tanaman lain pada saat pengumpula bahan. Determinasi tanaman daun teh hijau ini
dilakukan di Laboratorium Universitas Setia Budi. Hasil determinasi dapat dilihat pada
lampiran 1.
B. Pembuatan Simplisia dan pembuatan Serbuk Daun Teh Hijau

Sampel daun teh hijau diambil di Desa Kemuning, Ngargoyoso, Kabupaten Karanganyar.
Daun teh hijau dipilih, dipisahkan dari material lainnya misalnya akar dan daun, kemudian
dicuci bersih dengan air mengalir, dipotong kecil-kecil kemudian dikering anginkan selama
kurang lebih 10 hari, setelah itu, daun teh hijau hasil pengeringan dihaluskan menggunakan
blender, kemudian diayak dengan ayakan mesh No 60. Pengeringan dilakukan untuk
mengurangi kadar air agar tidak mudah terjadi pertumbuhan bakteri serta jamur (Gunawan &
Mulyani, 2004).
Tabel 4.1 Persentase bobot kering terhadap bobot basah daun teh hijau
Bobot basah (g) Bobot Kering (g) Persentase (%)
3000 (g) 1000 (g) 33,3%

Berdasarkan tabel 4.1 dapat diketahui bahwa daun teh hijau dengan bobot basah
3000 gram dikeringkan diperoleh bobot kering sebesar 1000 gram. Persentase bobot
kering terhadap bobot basah sebesar 33,3%. Perhitungan persentase bobot basah
terhadap bobot kering dapat dilihat pada lampiran 3
Daun teh hijau yang telah kering dibuat serbuk dengan cara diblender sampai
halus dan diayak dengan ayakan mesh nomor 60 untuk memperkecil ukuran partikel
serbuk. Hal ini dikarenakan semakin kecil ukuran partikel maka semakin halus serbuk
yang digunakan akan menghasilkan randemen yang tinggi, selain itu ukuran bahan
 38

yang sesuai akan menjadikan proses ekstraksi berlangsung dengan baik dan tidak
memakan waktu yang lama.
C. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Daun Teh Hijau

Penetapan susut pengeringan dilakukan dengan cara penimbang 2 gram serbuk

simplisia kemudian dimukur dengan alat Moisture Balance dengan suhu diatur 1050C,
ditunggu sampai alat berbunyi memandakan analisis telah selesai.
Tabel 4.2 Hasil Susut Pengeringan Daun Teh Hijau
Berat Serbuk (g) Susut Pengeringan (%)
2g 5,02%
Hasil susut pengeringan diperoleh sebesar 5,02%. Susut pengeringan memenuhi
persyaratan Farmakope Herbal Indonesia bila suatu serbuk simplisia tidak lebih dari
10%, jika terlalu tinggi dapat merubah komposisi kimia dari simplisia sehingga
menurunkan kualitas simplisia dan mudah ditumbuhi bakteri. Hasil Susut
pengeringan dapat dilihat pada lampiran 4.
D. Pembuatan Ekstrak Etanol 96% Daun Teh Hijau

Pembuatan ekstrak dibuat dengan metode maserasi. Serbuk dimasukkan kedalam

dua buah botol berwarna coklat sebanyak masing-masing 250 gram. Kemudian
ditambahkan cairan penyari yaitu etanol 96% hingga seluruh simplisia terendam
ditandai hingga terdapat selapis pelarut diatasnya (2,5 liter). Maserasi dilakukan
selama 5 hari sesekali sambil diaduk, setelah itu disaring dengan kain flanel diperoleh
hasil maserasi, kemudian hasil maserasi tadi disaring lagi menggunakan kertas saring
agar tidak ada endapan pada hasil maserasi akhir. Hasil yang diperoleh dipekatkan
dengan rotary evaporator sampai pelarutnya menguap dan dilanjutkan proses
pengeringan sisa pelarut pada ekstrak. Hasil dapat dilihat pada tabel 4.3
Tabel 4.3 Hasil Ekstrak Etanol 96% Daun Teh Hijau
Bobot Serbuk Bobot Ekstrak Randemen Ekstrak
500 g 146,456 g 29,3%
 39

Berdasarkan hasil pada tabel 4.2 menunjukkan persentase randemen ekstrak

etanol 96% pada daun teh hijau diperoleh sebanyak 29,3%. Organoleptis ekstrak
berwarna hijau tua dan bentuk kental. Rendemen dikatakan baik jika nilainya lebih
dari 10%. Oleh karena itu rendemen ekstrak kental yang didapatkan
dinyatakan baik karena hasil rendemen >10% (Depkes RI, 2000). Hasil perhitungan
persentase randemen ekstrak etanol 96% daun teh hijau dapat dilihat pada lampiran 5.
E. Penetapan Kadar Air Ekstrak Daun Teh Hijau

Penetapan kadar air ekstrak daun teh hijau 2 gram ditimbang dengan wadah yang
sudah ditara sebelumnya. Kemudian ekstrak dikeringkan dengan suhu 105oC selama 1 jam,
dan ditimbang. Lanjutkan pengeringan dan timbang pada jarak 1 jam sampai perbedaan 2
penimbangan berturut-turut. Hasil dapat dilihat pada tabel 4.4
Tabel 4.4 Hasil Kadar Air Ekstrak Etanol 96% Daun Teh Hijau
Berat Ekstrak Kadar Air %
1,03%
2g 1,14%
1,19%

Hasil Uji kadar air didapatkan pada setiap pengulangan sampai berat konstan
adalah 1,03%, 1,14%, dan 1,19%. Hasil uji kadar air teh hijau memenuhi syarat yaitu
selisih setiap penimbangan < 0,25% (Departemen Kesehatan RI, 2000). Hasil
perhitungan kadar air dapat dilihat pada lampiran 6.
F. Uji Bebas Etanol Daun Teh Hijau

Uji bebas etanol dilakukan dengan cara ekstrak kental dau teh hijau ditambahkan
dengan H2SO4 pekat dan CH3COOH 1% kemudian dipanaskan. Hasil uji bebas etanol
daun teh hijau dilihat pada tabel 4.5
 40

Tabel 4.5 Hasil Uji Bebas Etanol

Uji Bebas Etanol Hasil Pengamatan
Ekstrak biji pepaya + H2SO4 + (+) Tidak tercium bau ester yang khas dari
CH3COOH, dipanaskan etanol

Hasil Uji bebas etanol menunjukkan bahwa ekstrak teh hijau sudah bebas dari pelarut
etanol 96% yang ditunjukkan tidak ada bau ester yang khas dari etanol. Tujuan uji bebas
etanol adalah untuk didapatkan ekstrak yang murni tanpa ada kontaminasi, selain itu etanol
sendiri bersifat sebagai antibakteri dan antifungi sehingga tidak akan menimbulkan positif
palsu pada perlakuan sampel (Kurniawati, 2015). Hasil uji bebas etanol dauh teh hijau dapat
dilihat pada lamiran 7

G. Hasil Fitokimia Daun Teh Hijau Secara KLT

Identifikasi terhadap kandungan kimia dengan uji kromatografi lapis tipis (KLT)
dilakukan pada ekstrak kental daun teh hijau (Camelia sinensis L) tujuannya untuk
mengetahui adanya kandungan senyawa katekin, alkaloid, saponin dan fenol pada ekstrak teh
hijau tersebut. Hasil identifikasi kandungan kimia senyawa ekstrak daun teh hijau dapat
dilihat pada tabel 4.6 dan gambar identifikasi KLT bisa dilihat pada lampiran 8
Tabel 4.6 Hasil Uji Fitokimia Daun Teh Hijau
Kandungan Penampakan UV
Fase gerak Rf UV 254 Ket
Kimia Noda 366

etil Jingga
Hijau
Alkaloid asetat:metanol: 0,75 Jingga kekuni +
muda
air (9:2:2) ngan

etil
Biru
Katekin asetat:air:asan 0,875 Hitam Hitam +
kehitaman
format (18:1:1)
 41

kloroform :
Merah
Saponin metanol : air 0,525 Merah ungu - +
ungu
(13:7:2)

n-heksan: etil
Biru
Fenol asetat: metanol 0,95 Hitam Hitam +
kehitaman
(2:7:2)

KLT merupakan metode pemisahan senyawa kimia dengan menggunakan fase diam dan
kepolaran noda, pemisahan ini didasarkan pada sifat kepolaritas senyawa. Senyawa dengan
fase geraknya akan terelusi terlebih dahulu dibandingkan senyawa dengan sifat polaritas yang
berbeda dengan fase geraknya. Hal ini mengakibatkan nilai Rf dari masing-masing noda
berbeda dengan fase geraknya tergantung pada polaritasnya.

Hasil dari uji fitokimia daun teh hijau pada uji alkaloid, warna yang dihasilkan adalah
berwarna jingga yang menandakan uji positif pada golongan alkaloid dalam ekstrak.
Memberikan hasil positif yang ditandai dengan timbulnya noda berwarna jingga (Rf = 0,75),
setelah plat KLT disemprot dengan pereaksi dragendorff. Selanjutnya pengamatan dengan
sinar tampak, berwarna jingga pada UV 254 nm dan berwarna hijau muda pada UV 366 nm
menegaskan adanya kandungan alkaloid pada ekstrak etanol teh hijau (Endarini, 2019).
Alkaloid positif bila timbul noda berwarna coklat atau jingga setelah penyemprotan
Dragendorff. Pada pengujian senyawa golongan katekin, Jika timbul warna hitam setelah
penyemprotan pereaksi FeCl 3 menunjukkan adanya senyawa katekin dalam ekstrak
(Marliana, 2007). Terdapat noda dengan Rf 0,825 dugaan adanya katekin ditunjukkan dengan
adanya warna hijau kehitaman atau biru tinta (Harborne, 1987). Pada kromatografi lapis tipis
(KLT) senyawa saponin akan membentuk warna merah muda hingga ungu atau violet setelah
disemprot dengan senyawa saponin akan membentuk warna merah muda hingga ungu atau
violet setelah disemprot dengan H 2SO4 10% dan dipanaskan (Endarini, 2019). Terdapat
timbul noda dengan Rf 5,25 berwarna merah ungu pada pengamatan dengan sinar tampak
berwarna merah pada UV 366 nm. Jika timbul warna ungu-merah atau ungu setelah
penyemprotan pereaksi anisaldehid asam sulfat menunjukkan adanya saponin,
terpenoid/steroid dalam ekstrak (Endarini, 2019). Pada pengujian senyawa golongan fenol
dan tanin, Jika timbul warna hitam setelah penyemprotan pereaksi FeCl menunjukkan adanya
 42

senyawa polifenol dalam ekstrak (Marliana, 2007). Terdapat noda dengan Rf 0,95
Dugaan adanya gugus fenol ditunjukkan dengan adanya warna hijau kehitaman atau
biru tinta (Harborne, 1987).

H. Fraksinasi Ekstrak Daun Teh Hijau

Ekstrak kental daun teh hijau ditimbang sebanyak 10 gram untuk dilakukam
fraksinasi. Senyawa-senyawa yang bersifat non polar akan masuk pelarut polar,
begitu pula senyawa bersifat non polar akan masuk ke pelarut non polar dan senyawa
semi polar akan masuk ke pelarut semi polar. Kemudian dilarutkan dengan pelarut air
sebanyak 75 mL kemudian difraksinasi dengan pelarut n-heksan sebanyak 75 mL.
dengan corong pisah digojog selama 15 menit sampai terjadi pemisahan. Hasil fraksi
n-heksan diuapkan dan residu yang didapat dilakukan fraksinasi lanjutan dengan etil
asetat sebanyak 75 mL digojog sampai terjadi pemisahan kemudian hasil fraksi etil
asetat dan air diuapkan. Hasil perhitungan persentase randemen fraksinasi dari fraksi
etil asetat daun teh hijau diperoleh persentase yaitu 39,95%, kemudian pada fraksi n-
heksan hijau diperoleh persentasse rata-rata yaitu 12,02%. Hasil randemen yang
berbeda dari tiap fraksi berkaitan dengan banyaknya senyawa yang terkandung
didalam daun teh hijau. Hasil hitungan randemen fraksinasi dapat dilihat pada
lampiran 9.

Tabel 4.7 Hasiil randemen fraksinasi etil asetat, n-heksan dan air daun
hijau
Pelarut Rata-rata Randemen (%)

Etil asetat 24,48%

n-heksan 44,37%

Air 35,61%
 43

I. Hasil Perwarnaan Gram Negatif

Pewarnaan Gram bertujuan untuk membedakan antara 2 kelompok bakteri yaitu

bakteri Gram positif dan Gram negatif. Pewarnaan Gram menggunakan 4 jenis
reagen, Gram A (larutan kristal violet), Gram B (larutan lugol iodin), Gram C
(alkohol), Gram D (larutan safranin). Bakteri Gram positif dapat mempertahankan
warna ungu dari kristal violet sehingga saat diamati dengan mikroskop akan
menunjukkan warna ungu sedangkan bakteri Gram negatif tidak akan
mempertahankan warna ungu kristal violet, tetapi zat safranin dapat terserap pada
dinding sel sehingga pada saat dilihat menggunakan mikroskop akan bewarna merah.
Hasil pewarnaan gram menunjukkan bahwa pewarnaan Gram pada bakteri
P.aeruginosa ATCC 27853 adalah bakteri Gram negatif dengan ciri sel bakteri
bewarna merah, berbentuk batang (bacil), dengan susunan menyebar. Prinsip dari
metode ini adalah perbedaan struktur pada dinding sel bakteri. Bakteri gram negatof
berwarna merah karena memiliki dinding sel yang relatif tipis, membran luar dilapisi
oleh lipopolisakarida dan tidak dapat mempertahankan zat warna, sehingga pada saat
penambahan Gram C warna dari kristal violet luntur dan sewaktu diberi pewarnaan
Gram D maka bakteri akan tampak berwarna merah. Hasil identifikasi dengan
pewarnaan Gram dapat dilihat pada lampiran 14.

J. Hasil Biokimia SIM, LIA, KIA dan CITRAT

Uji biokimia bakteri merupakan suatu cara atau perlakuan yang dilakukan untuk
mengindetifikasi dan mendeterminasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi melalui
sifat-sifat fisiologinya. Hasil Identifikasi biokimia P.aeruginosa ATCC 27853 dapat
dilihat pada tabel 4.7
 44

Tabel 4.7 Hasil Uji Biokimia SIM, LIA, KIA dan CITRAT pada bakteri
P.aeruginosa
Media Hasil Uji
SIM --+
KIA K/K S-
LIA K/K S-
CITRAT +

Pada pengujian media Sulfide Indol Motilitas (SIM) untuk mengetahui

terbentuknya sulfida, indol, dan motilitas. Hasil pengujian media SIM setelah
diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C menunjukkan hasil positif bakteri P.
aeruginosa yang ditunjukkan dengan sulfida negatif, indol negatif, dan motilitas
positif (--+). Sulfide Indol Motilitas (SIM) artinya pada uji sulfida bakteri P.
aeruginosa tidak dapat mereduksi thiosulfat sehingga tidak menghasilkan hydrogen
sulfide sehingga media tidak berwarna hitam. Uji indol dengan menambahkan tiga
tetes Erlich A dan B, permukaan media tidak terdapat adanya cincin berwarna merah .
Hasil uji motilitas P. aeruginosa adalah positif, karena adanya pertumbuhan bakteri
disekitar area penusukan. Pergerakan dari baketri tersebut karena media semisolid (uji
motilitas) dirancang dengan mengurangi konsentrasi agar pada media yaitu sekitar
0,4% pada media yang hanya cukup untuk mempertahankan bentuknya sementara
memungkinkan pergerakan bakteri bergerak (Leboffe, 2011).
Pengujian pada media Kliger’s Iron Agar (KIA) bertujuan untuk mengetahui
bakteri dapat melakukan fermentasi karbohidrat terutama dalam bentuk gula.
Pengujian dengan KIA setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C
menunjukkan hasil positif P. aeruginosa yang ditunjukkan dengan (K/KS-). K/K
artinya pada lereng dan dasar media bewarna merah, menunjukkan bahwa bakteri
tidak mampu mengurai laktosa dan glukosa, sehingga tidak membentuk warna hitam
(S-) (Usnaini, 2017).
Pengujian pada media Lysin Iron Agar (LIA) untuk mengetahui deaminasi lisin
dan sulfida. Pengujian dengan LIA setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C
 45

menunjukkan hasil positif P.aeruginosa (K/KS-), K/K artinya pada lereng dan dasar
media bewarna ungu, hal ini menunjukkan bahwa bakteri tidak mendeaminasi lisin
tetapi mendekarboksilasi lisin yang menyebabkan reaksi basa (warna ungu) diseluruh
media. Tanda S- artinya uji H2S negatif ditunjukkan dengan tidak adanya warna hitam
pada media LIA (Maneak, 2018).
Pengujian pada media citrate untuk mengetahui kemampuan bakteri
menggunakan citrat sebagai sumber karbon tunggal. Hasil pengujian pada media
citrate yang telah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 370C menunjukkan hasil
positif. Hasil menunjukkan bahwa P.aeruginosa menggunakan citrate sebagai
sumber karbon tunggal (Bridson, 2006). Hasil gambar identifikasi biokimia dapat
dilihat pada lampiran 14.

K. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

1) Pengujian aktivitas antibakteri secara difusi
Pengujian aktivitas antibakteri fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, dan fraksi air
terhadap pertumbuhan P.aeruginosa ATCC 27853 dengan pembanding
ciprofloxacin. Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan di Laboratorium Politeknik
Indonusa Surakarta menggunakan metode difusi untuk mendapat Konsentrasi Hambat
Minimum (KHM) dari fraksi paling aktif. Media yang digunakan adalah Mueller
Hinton Agar (MHA). Daerah yang tidak ditumbuhi bakteri disekitas kertas cakram
menandakan bahwa kandungan dari fraksi memiliki daya hambat terhadap bakteri uji
Konsentrasi yang digunakan pada pengujian ini yaitu 25%, 12,5% dan 6,25%.
Kontrol positif yang digunakan yaitu ciprofloxacin 5 dan DMSO 10% sebagai kontrol
negatif. Hasil Perhitungan konsentrasi larutan dapat dilihat pada lampiran 12.
Suspensi bakteri P. aeruginosa ATCC 27853 dengan diambil sebanyak 0,3 ml
menggunakan micropipet ke permukaan media yang berada dalam cawan petri, lalu
ratakan dengan spreader. Cakram kosong/blank disc diambil menggunakan pinset
steril lalu dicelupkan pada sampel fraksi teh hijau tunggu hingga terdifusi. Letakkan
cakram tersebut menggunakan pinset steril ke media MHA yang telah di inokulasi
 46

pada cawan petri. Setelah inkubasi 370C selama 24 jam, zona bening yang terdapat
disekitar cakram menunjukkan bahwa fraksi teh hijau mampu menghambat
pertunbuhan bakteri P. aeruginosa ATCC 27853
Hasil pengujian aktivitas antibakteri diperoleh hasil bahwa fraksi etil asetat, fraksi
n-heksan, fraksi dan fraksi air dari daun teh hijau dapat menghambat pertumbuhan P.
aeruginosa dengan menunjukkan adanya daya hambat disekitas kertas cakram.
Berdasarkan hasil pada tabel 4.8 pengujian aktivitas bakteri dapat dilihat semakin
besar konsentrasi maka semakin besar daya hambat pada masing-masing kelompok.
Kemampuan antibakteri dalam menghambat mikroorganisme tergantung pada
konsentrasi dan jenis antibakteri. Semakin tinggi konsentrasi suatu antibakteri, maka
daya hambat yang terbentuk semakin besar. Semakin tinggi konsentrasi pada bahan
antibakteri, maka zat aktif yang terkandung semakin banyak, sehingga akan semakin
meningkat dalam menghambat bakteri dan dapat membentuk zona bening yang lebih
luas (Rastina et al., 2015).
Tabel 4.8 Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Secara Difusi Terhadap
Bakteri Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Pelarut Konsentrasi Hasil Zona Hambat Rata-rata
I II III
6,25% 12,5 13 12,5 12,8
Etil Asetat 12,5% 14,5 15,5 15,5 15,5
25% 20 20,5 21 20,5
6,25% 6 6,5 6,5 6,2
N-Heksan 12,5% 8,8 8,5 8,5 8,6
25% 10,5 12,3 12,5 11,7
6,25% 6,3 7,5 7,7 7,1
Air 12,5% 9 9,4 9 9,1
25% 14 15 15,5 14,8
Kontrol (-)
10% 0 0 0 0
DMSO
Kontrol (+)
5µL 29 28,5 29 28,8
ciprofloxacin

Berdasarkan pada tabel 4.8 hasil menunjukkan bahwa fraksi n-heksan, etil asetat
 47

dan air memiliki efek dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Hasil analisis etil
asetat yang paling efektif membunuh bakteri karna memiliki daya hambat paling
besar dengan rata-rata diameter 20,5 mm. Etil asetat merupakan pelarut yang bersifat
semi polar kemungkinan dapat menarik senyawa polar dan non polar. (Murdiyansah,
et al., 2020). Hal tersebut mengakibatkan fraksi etil asetat menjadi fraksi teraktif
dengan membentuk daya hambat paling besar dibandingkan dengan fraksi yang lain.
Hal ini dapat terjadi karna senyawa katekin termasuk senyawa polifenol, yang
mana senyawa ini dapat menghambat bakteri dengan cara merusak membran
sitoplasma bakteri yang tersusun oleh 60 % protein dan 40 % lipid yang umumnya
berupa fosfolipid. Senyawa katekin merusak membran sitoplasma yang menyebabkan
bocornya metabolit penting yang menginaktifkan sistem enzim bakteri. Kerusakan
pada membran sitoplasma dapat mencegah masuknya bahan-bahan makanan atau
nutrisi yang diperlukan bakteri untuk menghasilkan energi akibatnya bakteri akan
mengalami hambatan pertumbuhan dan bahkan kematian. Senyawa katekin juga
menghambat salah satu enzim bakteri yaitu DNA gyrase yang berfungsi sebagai
katalisator untuk membuka ikatan double helix agar untai DNA dapat direplikasi dan
ditranskirpsi. Katekin menempel pada situs pengikat ATP, sehingga ATP tidak bisa
terikat pada enzim. Hal itu menyebabkan pertumbuhan bakteri menjadi terlambat
(Rustanti et al., 2013).
Kontrol positif yang digunakan pada penelitian ini adalah disc ciprofloxacin.
Pemilihan ciprofloxacin sebagai kontrol positif karna ciprofloxacin merupakan salah
satu antibiotik yang dapat digunakan untuk pengobatan P.aeruginosa ATCC 27853.
Ciprofloxacin membunuh bakteri dengan cara mengikat enzim DNA gyrase yang
diperlukan DNA untuk berubah dari bentuk spiral ganda menjadi bentuk spiral
tunggal pada saat pembelahan sel. Kontrol negatif yang digunakan pada penelitian ini
adalah DMSO 10% yang bertujuan untuk mengetahui pelarut yang dipakai untuk
mengencerkan fraski tidak memiliki aktivitas antibakteri. Hal ini dibuktikan dengan
menunjukkan bahwa DMSO 10% tidak memiliki zona hambat terhadap P.aeruginosa
ATCC 27853.
 48

Data yang diperoleh selanjutnya dilakukan uji analisis data. Analisis data
menggunakan uji One Way ANOVA pada SPSS 23. Uji tersebut bertujuan untuk
mengetahui ada atau tidak perbedaan yang signifikan antara fraksi etil asetat, n-
heksan, dan air dengan kontrol positif ciprofloxacin. Hasil uji One-Sample
Kolmogorov-Smmirnov diperoleh signifikan 0,112 > 0,05 maka H 0 diterima, data
tersebut terdistribusi normal sehingga dapat dilanjutkan uji One Way ANOVA. Hasil
uji Homogeneity Of Variences adalah 0,184 > 0,05 yang artinya ketiga sampel
memiliki varian yang sama atau homogen. Hasil signifikan dari data uji ANOVA
yaitu 0,000 < 0,05 yang artinya ketiga sampel ada perbedaan dalam diameter zona
hambat.
2) Pengujian aktivitas antibakteri secara dilusi
Pengujian aktivitas antibakteri secara dilusi ini menggunakan hasil yang diperoleh
dari uji difusi yaitu fraksi etil asetat yang paling aktif terhadap pertumbuhan
P.aeruginosa ATCC 27853. Pengujian aktivitas antibakteri metode dilusi untuk
mengetahui Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh
Minimum (KBM).
Pembuatan konsentrasi yaitu dengan larutan stok etil asetat 25%. Kemudian
diencerkan dengan pelarut DMSO 10%. Larutan stok tersebut dibuat konsentrasi
pengenceran yaitu 6,25%, 3,12%, 1,56% dan 0,78%. Kontrol positif yaitu
Ciprofloxacin sebagai kontrol positif dan DMSO 10% sebagai kontrol negatif.
Perhitungan pembuatan konsentrasi dapat dilihat dilampiran 5
Konsentrasi Hambat Minimum dapat ditentukan dari kadar terendah larutan uji
yang terlihat jernih, setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37℃ . Hasil
pengujian aktivitas antibakteri dari fraksi etil asetat daun teh hijau dengan metode
dilusi dapat dilihat pada tabel 4.9
Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) yang menunjukkan adanya aktivitas
antibakteri dapat diketahui dengan menginokulasikan sediaan dari tabung uji pada
media MHA pada cawan petri, kemudian diinkubasi selama 24 jam dengan suhu
37℃. Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ditentukan pada media MHA dengan
 49

konsentrasi minimum yang tidak menunjukkan pertumbuhan P.aeruginosa ATCC

27853. Hasil menunjukkan bahwa fraksi etil asetat memiliki konsentrasi bunuh
minimum adalah 6,25%.

Tabel 4.9 Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat Secara
Dilusi Terhadap Pseoudomonas aeruginosa ATCC 27853
Replikasi
Konsentrasi
I II III
Kontrol (+) - - -
6,25% - - -
3,125% + + +
1,56% + + +
0,78% + + +
Kontrol (-) + + +
Keterangan : (+) ada pertumbuhan bakteri
(-) tidak ada pertumbuhan bakteri
Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dapat ditentukan dari kadar terendah
larutan uji yang terlihat jernih, setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C hasil
menunjukkan terdapat larutan uji yang terlihat jernih yaitu konsentrasi 6,25%.
Konsentrasi Bunuh Minimum ditentukan pada media MHA dengan konsentrasi
minimum yang tidak menunjukkan pertumbuhan bakteri. Hasil menunjukkan bahwa
fraksi etil asetat memiliki konsentrasi bunuh minimum sebesar 12,5%. Gambar hasil
uji aktivitas antibakteri secara dilusi dapat dilihat pada lampiran 17.
 50

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian uji aktivitas antibakteri fraksi etil asetat, fraksi n-
heksan, dan fraksi air dari daun teh hijau (Camelia sinensis L) terhadap Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853 dapat disimpulkan bahwa:
1. Fraksi etil asetat, fraksi n-heksan, dan fraksi air dari daun teh hijau (Camellia
sinensis L) mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853.
2. Fraksi etil asetat dari ekstrak daun teh hijau (Camelia sinensis L) pada
konsentrasi 25% mempunyai aktivitas antibakteri teraktif terhadap Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853.
3. Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) fraksi etil asetat dari ekstrak daun teh
hijau (Camellia sinensis L) sebagai antibakteri terhadap Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853 yaitu sebesar 6,25% dan Konsentrasi Bunuh Minimum
(KBM) fraksi etil asetat dari ekstrak daun teh hijau (Camellia sinensis L) sebagai
antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 yaitu sebesar
6,25%.

B. Saran

1. Perlu dilakukan lebih lanjut tentang uji aktivitas antibakteri daun teh hijau
(Camelia sinensis L) terhadap bakteri lain.
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentanng aktivitas antibakteri daun teh
hijau (Camelia sinensis L) dengan menggunakan metode penyari yang lain.
 51

DAFTAR PUSTAKA

Afriliana, A. (2018). Teknologi Pengolahan Kopi Terkini. Penerbit Budi Utama

Anggota IKAPI, Yogyakarta.

Amriani & Sari, L. P. (2015). Uji Efek Antibakteri Ekstrak Daun Teh (Camellia
sinensis L.) terhadap Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli. Jurnal Ilmiah
PANNMED, 9(3), 210-14.

Atmojo, E.D. (2012). Analisis Sikap dan Kepuasan Konsumen Terhadap The Celup
Merek Sarimurni. Skripsi. Fakultas Ekonomi dan Manajemen, Bogor.

Awrangga F. A., I. A. R. A. Asih & I. W. Sudiarta. (2016). Analisis Kandungan

Kafein Pada Kopi di Desa Sesaot Narmada Menggunakan Spektrofotometri
UV-VIS. Jurnal Kimia. 10 : 110-114.

Azizah, A. N., Ichwanuddin, & Marfu'ah, N. (2020). Aktivitas Antibakteri Ekstrak

Etanol Teh Hijau (Camellia sinensis) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus
epidermidis. Pharmasipha, 4(2), 15-23.

Bistani, D. A. (2006). Efek Diuretik Kopi Susu Pada Tikus Putih (Rattus Norvegicus)
dengan Variasi Jenis Susu. Skripsi. Universitas Sebelas Maret, Surakarta.

Cockerill, F.R., Matthew A. W., Jeff A., Michael N.D George M.E., Mary J.. F.,
(2012), Performance Standars for Antimicrobial Disk Susceptibility Test;
Approved Standard. Edisi 8. CLSI document M02-A11. Wayne, PA: Clinical
and Laboratory Standards Institute.Aulia, S. S., S. I. Iyan & Muchtaridi. 2014.

Damayanti, J. D. (2015). Dekafeinasi Biji Kopi Robusta Melalui Proses Ekstraksi

Dengan Pelarut Aquadest. Skripsi. Institut Sains & Teknologi Akprind,
Yogyakarta.
 52

Devi, S., & Mulyani, T. (2017). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Pacar
Kuku (Lawsonia inermis Linn) pada Bakteri Pseudomonas aeruginosa.
Journal of Current Pharmaceutical Sciences. 1(1), 30–35.
journal.umbjm.ac.id/index.php/jcps.

Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Edisi I.
Jakarta. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan

Departemen Kesehatan RI. (1985). Cara Pembuatan Simplisia. Direktorat Jendral

Pengawasan Obat dan Makanan.

Diandra, Y. (2012). Efek Kafein Terrhadap Kontrasktilitas Otot Polos Kandungan

Kemih Guinea Pig In Vitro. Skripsi. UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta.

Dima, L. L. R., Fatimawali, & Lolo, W. A. (2016). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak
Daun Kelor (Moringa oleifera L.) terhadap Bakteri Escherichia coli dan
Staphylococcus aureus. Pharmacon:Jurnal Ilmiah Farmasi. 5(2), 282–289.

Fadhilah, Z. H., F. Perdana & R. A. M. R. Syamsudin. (2021). Review: Telaah

Kandungan Senyawa Katekin dan Epigalokatekin Galat (EGCG) sebagai
Antioksidan pada Berbagai Jenis Teh. Jurnal Pharmascience. 1(8). 31-44

Fatoni, A. (2015). Analisis secara Kualitatif dan Kuantitatif Kadar Kafein dalam
Kopi Bubuk Lokal yang Beredar di Kota Palembang menggunakan
Spektrofotometer UV-Vis. STIFI Bhakti Pertiwi Palembang, Palembang.

Fithriyah, N. (2013). Analisis Α-Tokoferol (Vitamin E) Pada Minyak Biji Kelor

(Moringa Oleifera Lam.) Secara Kromatografi Cair Kinerja Tinggi. Skripsi.
UIN Syarif Hidayatullah, Jakarta.

Gandjar, I.G & A. Rohman. (2007). Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar,
Yogyakarta.
 53

Gandjar, I.G & A. Rohman. (2012). Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar,
Yogyakarta.

Gritter, R.J., J.M.Bobbitt, & A.E. Schwarting. (1991). Pengantar Kromatografi. Edisi
Kedua. Penerbit ITB, Bandung.

Hanani, M.S.E. (2015). Analisis Fitokimia . Jakarta: Buku Kedokteran EGC

Hasnaeni, Wisdawati, & Usman, S. (2019). Pengaruh Metode Ekstraksi terhadap

Rendemen dan Kadar Fenolik Ekstrak Tanaman Kayu Beta-Beta (Lunasia
amara Blanco). Jurnal Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) (e-
Journal), 5(2), 175–182.

Hasnaeni, Wisdawati, & Usman, S. (2019). Pengaruh Metode Ekstraksi terhadap

Rendemen dan Kadar Fenolik Ekstrak Tanaman Kayu Beta-Beta (Lunasia
amara Blanco). Jurnal Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) (e-
Journal), 5(2), 175–182.

Hayati, Z., Jannah, S. N., & Suprihadi, A. (2016). Isolasi Bakteriofag Spesifik
Pseudomonas sp. DA1 dari Biofilm pada Sistem Pengisian Air Minum Isi
Ulang. Jurnal Biologi, 5(3), 29–35.

Hipertensi Pada Pekerja Pria di PT Deltomed Laboratories Kecamatan Selogiri,

Winogiri Tahun 2012. Karya Tulis Ilmiah. Universitas Sebelas Maret,
Surakarta.

Ifriana, F. N., & Kumala, W. (2018). Pengaruh ekstrak biji pala (Myristica fragrans
Houtt) sebagai antibakteri terhadap pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa.
Jurnal Biomedika Dan Kesehatan, 1(3), 172–178.

Irving, W., D. Ala’Aldeen, dan T. Boswell. 2006. Medical Microbiology. New York:
Taylor & Francis Group.
 54

Jawetz, and Melnick. 2007. Mikrobiologi Kedokteran. EGC: Jakarta.

Kemenkes RI. (2016). Farmakognisi dan Fitokimia. Kementerian Kesehatan

Republik Indonesia.

Kemenkes RI. (2017). Farmakope Herbal Indonesia Edisi 2 (II). Kementerian

Kesehatan Republik Indonesia.

Kurniawati, E. (2015). Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Tunas Bambu Apus terhadap
Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus secara In Vitro. Jurnal
Wiyata, 2(2), 193– 199.

Lidani, A. (2016). Perbandingan Pengukuran Kadar Air Metode Moisture Analyzer

dengan Metode Oven pada Produk Biskuit Sandwich Cookies di PT Mondelez
Indonesia Manufacturing. Skripsi. Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan,
Bogor.

Pratiwi, S. R. (2018). Uji Antibakteri dari. Kombinasi Ekstrak Teh Hijau (Camellia

sinensis. L.) dan Kitosan terhadap Staphylococcus aureus. Skripsi. Fakultas
Farmasi Universitas Hasanuddin. Makassar.

Puspitasari, L., D.A, S., & C.I.A., A. (2013). Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 95%
Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.). Jurnal Farmasi Udayana, 2(3),
1–5.

Putri, A. A. S., & Hidajati, N. (2015). Uji Aktivitas Antioksidan Senyawa Fenolik
Ekstrak Metanol Kulit Batang Tumbuhan Nyiri Batu (Xylocarpus
moluccensis). UNESA : Journal of Chemistry, 4(1), 41.

Radji, M., Agustama, R. A., Elya, B., & Tjampakasari, C. R. (2013). Antimicrobial
Activity of Green Tea Extract Against Isolates of Methicillin- Resistant
Staphylococcus aureus and Multi-Drug Resistant Pseudomonas aeruginosa.
 55

Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 3(8), 663–667.

Rivai, H., Septika, R., & Boestari, A. (2013). Karakterisasi Ekstrak Herba Meniran
(Phyllanthus niruri Linn). Jurnal Farmasi Higea, 5(2), 15–23.

Robinson, T. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi Edisi VI. ITB, Bandung.

Rustanti, E., A.Jannah & A.G. Fasya. 2013. Uji Aktivitas Antibakteri Senyawa
Katekin dari Daun Teh (Cameliasinensis L. Var assamica) Terhadap Bakteri
Micrococcusluteleus. Jurnal ALCHEMY. 2(2). 138-149.

Safitri, N. A., Dewi, S. S., & Wardoyo, F. A. (2019). Aktivitas Ekstrak Meniran
(Phyllanthus niruri L.) terhadap Pertumbuhan Klebsiella pneumoniae dan
Pseudomonas aeruginosa. Prosiding Mahasiswa Seminar Nasional Unimus, 2,
76–82.

Sapara, T. U., Waworuntu, O., & Juliatri. (2016). Efektivitas Antibakteri Ekstrak
Daun Pacar Air (Impatiens balsamina L.) terhadap Pertumbuhan
Porphyromonas gingivalis. Pharmacon:Jurnal Ilmiah Farmasi, 5(4), 10–17.

Sari, D. P., Rahmawati, & P.W, E. R. (2019). Deteksi dan Identifikasi Genera Bakteri
Coliform Hasil Isolasi dari Minuman Lidah Buaya. Jurnal Labora Medika,
3(1), 29–35.

Sulviana, A. W., Puspawati, N., & Rukmana, R. M. (2017). Identifikasi Pseudomonas

aeruginosa dan Uji Sensitivitas terhadap Antibiotik dari Sampel Pus Infeksi
Luka Operasi di RSUD Dr. Moewardi. Biomedika, 10(02), 18–24.
www.biomedika.ac.id

Surbakti, P. A. A., Queljoe, E. De, & Boddhi, W. (2018). Skrining Fitokimia dan Uji
Toksisitas Ekstrak Etanol Daun Binahong (Andredera cordifolia (Ten.)
Steenis) dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Pharmacon:
 56

Jurnal Ilmiah Farmasi, 7(3), 22–31. Daun Binahong, Skrining Fitokimia,

Toksisitas, BSLT, LC50.

Sutrisno, E., Adnyana, I., Sukandar, E. Y., Fidrianny, I., & Lestari, T. (2014). Kajian
Aktivitas Penyembuhan Luka dan Antibakteri Binahong (Anredera cordifolia
(Ten.) Steenis, Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) serta Kombinasinya
terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa dari
Pasien Luka Kaki Diabetes. Bionatura-Jurnal Ilmu-Ilmu Hayati Dan Fisik,
16(2), 78–82.

Syah. 2005. Manfaat dan Bahaya Bahan Tambahan Pangan. Himpunan Alumni

Fakultas Teknologi Pertanian IPB, Bogor. 

Torar, G.M.J., W.A.Lolo & G. Citraningtyas. (2017). Uji Aktivitas Antibakteri

Ekstrak Etanol Biji Pepaya (Carica papaya L.) Terhadap Bakteri
Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus. Jurnal Ilmiah Farmasi.

Towaha, J. (2013). Kandungan Senyawa Kimia Pada Daun Teh (Camellia sinensis).
Warta Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri, 19(3), 12-6.
57
 58

LAMPIRAN
 59

Lampiran 1. Surat Determinasi Tanaman

 60

Lampiran 2. Tanaman Daun Teh Hijau

Lampiran 3. Hasil persentase bobot kering terhadap bobot basah

Perhitungan bobot kering terhadap bobot basah adalah:
Bobot Kering (g)
% Bobot Kering = x 100 %
Bobot Basah( g)
1000 g
% Bobot Kering = x 100 % = 33,3%
3000 g

Lampiran 4. Hasil Susut Pengeringan

Lampiran 5. Hasil uji bebas etanol daun teh hijau

 61

Lampiran 6. Hasil perhitungan randemen ekstrak etanol daun teh

Hijau

Randemen ekstrak daun teh hijau yang diperoleh sebesar 29,3%

Berat cawan : 151,874 g
Berat cawan + ekstrak : 298,330 g
Berat Ekstrak : 146,456 g
146,456 g
Randemen = x 100 % = 29,3%
500 g
Lampiran 7. Perhitungan Kadar Air

Berat krus kosong = 52,353 g

Berat Krus + ekstrak sebelum pengeringan = 54,357 g
Berat Krus + ekstrak sesudah pengeringan = 53,803 g (1)
= 53,735 g (2)
= 53,706 g (3)
 62

( B . Krus+ekstrak sebelum pengeringan ) −( B . Krus+ ekstrak setelah pengeringan)

x 100 %
B . Krus+ Ekstrak Sebelum pengeringan
54,357 g−53,803 g
1. x 100 %=1,03 %
54,357 g
54,357 g−53,735 g
2. x 100 %=1,14 %
54,357 g
54,357 g−53,706 g
3. x 100 %=1,19 %
54,357 g

Lampiran 8. Gambar hasil fitokimia daun teh hijau Secara KLT

Saponin Alkaloid Fenol Katekin

Perhitungan RF

Perhitungan Rf

( jarak yang ditempuh eluen )

=
( jarak yang ditempuh eluen tandabatas)

3
1. Rf Alkaloid = =0,75
4
3,3
2. Rf Katekin = =0,825
4
3,8
3. Rf Saponin = =0,95
4
2,1
4. Rf Fenol = =0,525
4
 63

Lampiran 9. Hasil perhitungan persen randemen fraksi daun teh hijau

bobot fraksi( g)
Randemen Fraksi = x 100 %
bobot ekstrak (g)

1. Hasil perhitungan persen randemen n-heksan daun teh hijau

2,405 g
Randemen 1 = x 100 %=23,82 %
10,095
2,430 g
Randemen 2 = x 100 %=24,05 %
10,103
2,475
Randemen 3 = x 100 %=24,48 %
10,109

23,82+ 24,05+ 24,48

= 24,11%
3
2. Hasil perhitungan persen randemen etil asetat daun teh hijau
4,595 g
Randemen 1 = x 100 %=45,51 %
10,095
4,499 g
Randemen 2 = x 100 %=44,53 %
10,103
4,356
Randemen 3 = x 100 %=43,09 %
10,109

45,51+44,53+ 43,09
= 44,37%
3
3. Hasil perhitungan persen randemen air daun teh hijau
 64

3,780 g
Randemen 1 = x 100 %=37,74 %
10,095
3,635 g
Randemen 2 = x 100 %=35,98 %
10,103
3,348
Randemen 3 = x 100 %=33,11 %
10,109

37,74+35,98+33,11
= 35,61%
3

Lampiran 10. Sertifikat hasil uji bakteri Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
65
 66

Lampiran 11. Perhitungan konsentrasi secara difusi

1. Konsentrasi 25%
V 1 . C1 = V 2 . C2
V1. 100% = 5 ml x 25%
5 x 25 %
V1 = =1,25 g
100 %
Dilarutkan dengan DMSO 10% sampai 5 ml

2. Konsentrasi 12,5%
V 1 . C1 = V 2 . C2
V1. 100% = 5 ml x 12,5%
5 x 12,5 %
V1 = =0,625 g
100 %
Dilarutkan dengan DMSO 10% sampai 5 ml

3. Konsentrasi 6,25%
V 1 . C1 = V 2 . C2
V1. 100% = 5 ml x 6,25%
5 x 6,25 %
V1 = =0,3125 g
100 %
Dilarutkan dengan DMSO 10% sampai 5 ml

4. Pembuatan kontrol negatif DMSO 10% sebanyak 50 ml

V 1 . C1 = V 2 . C2
V1. 100% = 50 ml x 10%
10 ml x 10 %
V1 . = =5 ml
100 %
Diambil 5 ml DMSO murni dilarutkan aquades sampai 45 ml
 67

Lampiran 12. Perhitungan konsentrasi secara dilusi

kontrol positif ciprofloxacin
1 tablet mengandung 500 mg ciprofloxacin
Larutan antibiotik ciprofloxacin dibuat dengan konsentrasi 0,5%:
0,5 g 500 mg
=
100 ml 100 ml
5 mg
=5 mg
1 ml
Ditimbang 5 mg tablet ciprofloxacin dimasukkan kedalam vial, kemudian
ditambahkan aquades steril sampai 1 ml.
Larutan baku induk 25%
V1 . N1 = V2 . N2
V1 x 25% = 2 x 12,5%
2 x 25 %
V1 = =¿ 1 ml
25 %
Dipipet 1 ml dari larutan baku induk dimasukkan kedalam vial, kemudian
ditambahkan DMSO 10% ad 2 ml
1. Konsentrasi 6,25%
V1 . N1 = V2 . N2
V1 x 12,5% = 2 x 6,25%
2 x 6,25 %
V1 = =¿ 1 ml
12,5 %
Dipipet 1 ml dari sediaan awal (12,5%) kemudian ditambahkan media NB 2ml
2. Konsentrasi 3,12%
V1 . N1 = V2 . N2
V1 x 6,25% = 2 x 3,12%
2 x 3,12%
V1 = =¿ 1 ml
6,25 %
Dipipet 1 ml dari sediaan awal (6,25%) kemudian ditambahkan media NB 2 ml
 68

3. Konsentrasi 1,56%
V1 . N1 = V2 . N2
V1 x 3,12% = 2 x 1,56%
2 x 1,56 %
V1 = =¿ 1 ml
3,12 %
Dipipet 1 ml dari sediaan awal (3,12%) kemudian ditambahkan media NB 2 ml
4. Konsentrasi 0,78
V1 . N1 = V2 . N2
V1 x 1,56% = 2 x 0,78%
2 x 0,78 %
V1 = =¿ 1 ml
1,56 %
Dipipet 1 ml dari sediaan awal (1,56%) kemudian ditambahkan media NB 2 ml
Lampiran 13. Hasil pengenceran fraksi n-heksan, etil asetat dan air

fraksi n-heksan 25%, 12,5% dan 6,25%

fraksi etil asetat 25%, 12,5% dan 6,25%

 69

fraksi air 25%, 12,5% dan 6,25%

Lampiran 14. Hasil gambar suspensi bakteri identifikasi bakteri Pseudomonas
aeruginosa ATCC 27853

Suspensi bakteri dalam cawan petri Suspensi bakteri dan Mc Farland

Identifikasi bakteri secara mikroskopis Identifikasi bakteri dengan

dengan pewarnaan gram uji biokimia
 70

Lampiran 15. Hasil pengujian aktivitas antibakteri secara difusi teh hijau
terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

1. Hasil aktivitas antibakteri fraksi etil asetat teh hijau

R1
R2
R3

25%
25% 6,25% 6,25%
6,25% 25%

12,5% 12,5% 12,5%

2. Hasil aktivitas antibakteri fraksi n-heksan teh hijau

12,5%
+

12,5% 12,5%

R1
25% R2
R3

6,25%
25%
6,25%
6,25%
25%

3. Hasil aktivitas antibakteri fraksi air teh hijau

12,5% 6,25%
12,5%
12,5% 25%

R1
R2 -
6,25%
R3

25% 6,25%
25%
 71

Lampiran 16. Hasil pengujian aktivitas antibakteri secara difusi teh hijau
terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

1. Hasil KHM (Konsentrasi Hambat Minimum)

2. Hasil KBM (Konsentrasi Bunuh Minimum)

 72

Lampiran 17. Hasil uji SPSS

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

Unstandardized Residual

N 33
Normal Parameters a,b
Mean .0000000
Std. Deviation 6.63641634
Most Extreme Differences Absolute .174
Positive .142
Negative -.174
Test Statistic .174
Asymp. Sig. (2-tailed) .112

a. Test distribution is Normal.

b. Calculated from data.

Test of Homogeneity of Variances

zona hambat

Levene Statistic df1 df2 Sig.

1.561 10 22 .184

ANOVA
zona hambat

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 1719.348 10 171.935 732.110 .000

Within Groups 5.167 22 .235
Total 1724.515 32