PENINGKATAN AKTIVITAS ALKILTRANSFERASE

DALAM SISTEM PERBAIKAN DNA OLEH SEDUHAN

TEH HIJAU

SKRIPSI

Disusun Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Dalam Menyelesaikan

Program Studi S1 Farmasi

Oleh:

AGUNG PRIAMBODO
050711284

PROGRAM STUDI SI FARMASI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS DUTA BANGSA SURAKARTA
2021
 PENGESAHAN

Peningkatan Aktivitas Alkiltransferase Dalam Sistem Perbaikan Dna

Oleh Seduhan Teh Hijau

Oleh : Agung Priambodo

050711284

Telah Dipertahankan di Hadapan Dewan Penguji Skripsi Program Studi S1

Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Duta Bangsa Surakarta dan
Diterima untuk Memenuhi Syarat Guna Memperoleh Gelar Sarjana (S.Farm)
Pada Tanggal :

Dewan Penguji :
Penguji I : apt. Tiara Ajeng Listyani, M.Farm ……………………..
Penguji II : apt. Weri Veranita, M.Farm ……………………..

Mengesahkan,
Dekan Ketua Program Studi
Fakultas Ilmu Kesehatan S1 Farmasi
Universitas Duta Bangsa Surakarta

Warsi Maryati, S.K.M., MPH Tatiana Siska Wardani, M.Farm

ii
 LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI SKRIPSI

Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui skripsi saya,

dengan judul:

PENINGKATAN AKTIVITAS ALKILTRANSFERASE DALAM SISTEM

PERBAIKAN DNA OLEH SEDUHAN THE HIJAU

untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu Digital
Library Perpustakaan Universitas Duta Bangsa untuk kepentingan akademik
sebatas sesuai dengan Undang-Undang Hak Cipta.
Demikian pernyataan persetujuan publikasi SKRIPSI ini saya buat
dengan sebenarnya.

Surakarta, 31 Juli 2021

Materai Rp. 10000,-

Agung Priambodo
05071128

iii
 SURAT PERNYATAAN

Saya yang bertanda tangan di bawah ini,

Nama : Agung Priambodo
NIM 050711284
Fakultas : Farmasi
menyatakan dengan sesungguhnya bahwa hasil skripsi yang saya tulis
dengan judul :
PENINGKATAN AKTIVITAS ALKILTRANSFERASE DALAM SISTEM
PERBAIKAN DNA OLEH SEDUHAN TEH HIJAU
adalah benar-benar merupakan hasil karya saya sendiri. Apabila di kemudian hari
diketahui bahwa skripsi ini merupakan hasil plagiarisme, maka saya bersedia
menerima sangsi berupa pembatalan kelulusan dan atau pencabutan gelar yang
saya peroleh.
Demikian surat pernyataan ini saya buat untuk dipergunakan sebagaimana
mestinya.

Surakarta, 31 Juli 2011

Materai 10.000

Agung Priambodo
050711284

iv
 KATA PENGANTAR

Segala puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT, atas rahmat dan
karuniaNya sehingga skripsi ini dapat diselesaikan dengan sebaik-baiknya.
Dengan selesainya skripsi yang berjudul “PENINGKATAN
AKTIVITAS ALKILTRANSFERASE DALAM SISTEM PERBAIKAN DNA
OLEH SEDUHAN TEH HIJAU” ini, perkenankanlah saya .mengucapkan terima
kasih yang sebesar-besarnya kepada :
1. Bapak Dr. H. Singgih Purnomo, M.M selaku Rektor Universitas Duta
Bangsa Surakarta.
2. Ibu Warsi Maryati, S,KM., MPH selaku Dekan Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Duta Bangsa Surakarta,
3. Ibu Tatiana Siska Wardani, M.Farm selaku Ketua Program Studi S1
Farmasi Universitas Duta Bangsa Surakarta.
4. Ibu apt. Tiara Ajeng L, M.Farm selaku pembimbing 1 yang telah
memberikan bimbingan dan mengarahkan dalam penyusunan Skripsi ini
5. Ibu apt. Weri Veranita, M.Farm selaku Pembimbing II yang telah
memberikan bimbingan dan mengarahkan dalam penyusunan Skripsi ini.
6. Dosen dan staff pengajar Universitas Duta Bangsa Surakarta yang telah
memberikan bimbingan serta ilmu pengetahuan kepada penulis.
7. Bapak dan Ibu tercinta yang selalu memanjatkan doa sehingga penulis
dapat menyelesaikan Skripsi ini.
8. Rekan-rekan seperjuangan dan semua pihak yang tidak dapat penulis
sebutkan satu per satu.
Penulis menyadari bahwa penulisan dan penyusunan Skripsi ini masih jauh
dari sempurna dan masih banyak kekurangannya. Oleh karena itu, penulis
mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun. Akhirnya penulis
memohon maaf apabila dalam penyusunan Tugas Akhir ini terdapat kesalahan
kata dan semoga Tugas Akhir ini dapat berguna dan bermanfaat bagi semua
pembaca.

Surakarta, Februari 2021

v
 Penulis

vi
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI ETIL ASETAT, FRAKSI
n-HEKSAN, DAN FRAKSI AIR DAUN TEH HIJAU (Camelia sinensis
L) TERHADAP Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Yuni Elmaya Santi1), Tatiana Siska Wardani2), Anita Dwi Septiarini3)
123
Fakultass Ilmu Kesehatan, Universitas Duta Bangsa Surakarta, Jl. Pinang Raya No. 47,
Cemani Sukoharjo, Kota Surakarta, Jawa Tengah, Indonesia
*email : yuni.anfarma@gmail.com

Abstrak

Daun teh hijau (Camelia sinensis L) adalah salah satu tanaman yang
dapat digunakan sebagai antibakteri. Daun teh hijau memiliki kandungan kimia
katekin,
(-)-Epigallocatechin gallate (EGCG) adalah komponen utama teh hijau,
yang dilaporkan dapat menghambat perkembangan kanker yang disebabkan oleh
karsinogen kimia. Namun, masih belum diketahui bagaimana mekanismenya.
Dalam penelitian ini, peran EGCG terhadap peningkatan O6-alkilguanin-DNA
alkiltransferase (AGT) pada kultur sel hati tikus terutama dievaluasi menggunakan
metode Liquid Scintillation Counter. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada
rentang 12-48 jam setelah berbagai konsentrasi (8,3-66,7 ppm) perlakuan EGCG
dosis tunggal, AUC (area di bawah kurva) aktivitas AGT meningkat 1,4- menjadi
2,8 kali lipat (p < 0,01 ) dari tingkat konstitutif. Untuk memastikan bahwa ekspresi
AGT meningkat dengan perlakuan EGCG, dapat ditunjukkan dengan penurunan
O6-methylguanine-DNA yang diinduksi oleh N-methyl-N-nitrosourea (MNU).
Bukti menunjukkan bahwa pembentukan O6-metilguanin-DNA oleh MNU pada
konsentrasi tertinggi (48 M) dapat dicegah 92,6 % oleh EGCG 66,7 ppm dalam
media kultur. Selanjutnya, mutasi K-ras pada kodon 12 yang terbukti paling sering
terjadi mutasi yang disebabkan oleh karsinogen kimia juga dianalisis
menggunakan metode PCR-SSCP, selanjutnya dilanjutkan dengan sekuensing
DNA. Konsentrasi EGCG 16,6 ppm dapat mencegah mutasi K-ras yang
disebabkan oleh MNU 32 M. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa EGCG
memiliki aktivitas anti-kanker yang substansial karena meningkatkan ekspresi
AGT.

Kata Kunci : ektrak green tea, alkyltransferase, Sistem DNA, PCR- SSCP

vii
 ABSTRACT
Enhancement of Alkyltransferase Activity in DNA Repair System by
Water Extract of Green Tea

Agung Priambodo

(-)-Epigallocatechin gallate (EGCG) is a major component of green tea,

which was reported to inhibit cancer development induced by chemical
carcinogen. However, it is still not known how does the mechanism occur. In this
study, the role of EGCG on the enhancement of O 6-alkylguanine-DNA
alkyltransferase (AGT) in primarily rat liver cell culture was evaluated using
Liquid Scintillation Counter method. The result showed that in the range of 12-
48 hour after various concentrations (8.3-66.7 ppm) of single dose EGCG
treatments, the AUC (area under curve) of AGT activity was increased by 1.4- to
2.8-fold (p < 0.01) than the constitutive level. To confirm that the expression of
AGT increased by EGCG treatment, it could be shown by the decreased of O 6-
methylguanine-DNA induced by N-methyl-N-nitrosourea (MNU). The evidence
showed that the formation of this O6-methylguanine-DNA by MNU at the highest
concentration (48 µM) could be prevented 92,6 % by EGCG 66,7 ppm in the
culture media. Furthermore, mutation of K-ras in codon 12th which had been
proven the most frequent mutation caused by chemical carcinogen was also
analyzed using PCR-SSCP method, subsequently continued by DNA sequencing.
EGCG concentration of 16.6 ppm could prevent K-ras mutation induced by MNU
32 µM. Result of these studies indicate that EGCG has substantial anti-cancer-
initiating activity due to enhancing the AGT expression.

Keywords: green tea extract, alkyltransferase, DNA Repair System, PCR-

SSCP

viii
 DAFTAR ISI

Halaman
HALAMAN JUDUL..........................................................................i
HALAMAN PENGESAHAN...........................................................ii
LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI SKRIPSI.....................iii
SURAT PERNYATAAN..................................................................iv
KATA PENGANTAR.......................................................................v
RINGKASAN.....................................................................................vi
ABSTRACT.......................................................................................vii
DAFTAR ISI.....................................................................................viii
DAFTAR TABEL..............................................................................ix
DAFTAR GAMBAR..........................................................................x
DAFAR LAMPIRAN........................................................................xi
BAB I. PENDAHULUAN..................................................................1
1.1 Latar Belakang Permasalahan................................................3
1.2 Rumusan Masalah..................................................................5
1.3 Tujuan Penelitian...................................................................6
1.4 Manfaat Penelitian.................................................................7
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA......................................................8
2.1 Tinjauan Tentang EGCG dari Teh Hijau...............................8
2.2 Tinjauan Tentang Mutasi.......................................................15
2.3 Onkogen..................................................................................16
2.4 Proto-onkogen K-ras...............................................................20
BAB III. METODE PENELITIAN..................................................24
3.1 Populasi, Sampel dan Besar Sampel......................................24
3.2 Variabel Penelitian..................................................................24
3.3 Bahan Penelitian....................................................................25
3.4 Alat Penelitian........................................................................26
3.5 Lokasi dan Waktu Penelitian.................................................27
3.6 Desain Penelitian....................................................................28
3.7 Prosedur Pengumpulan Data..................................................35
3.8 Analisis Data...........................................................................29
BAB IV. HASIL PENELITIAN.....................................................
4.1 Karakterisasi EGCG................................................................73
4.2 Penentuan Kadar DNA............................................................80
3
4.3 Penentuan Aktifitas Radioaktif [H ]MNU...........................81
BAB V. PEMBAHASAN
5.1. Karakterisasi EGCG..............................................................109
5.2. Kadar EGCG Pada Teh Hijau...............................................110
5.3. Peningkatan Aktifitas AGT Oleh EGCG.............................112
BAB VI. KESIMPULAN DAN SARAN
6.1. Kesimpulan............................................................................125
6.2. Saran......................................................................................126
DAFTAR PUSTAKA.........................................................................127
LAMPIRAN........................................................................................130

ix
 DAFTAR TABEL

Tabel Halaman
1.1. Kelompok onkogen berdasarkan fungsinya........................................24
1.2. Mekanisme aktifasi proto-onkogen menjadi onkogen........................24
1.3. Pereaksi, pelepas dan pemutus rantai pada metode Maxam &
Gilbert..................................................................................................53
1.1. Dummy table penentuan aktifitas AGT........................................ 62
1.2. Dummy table pengaruh EGCG terhadap kadar O -metil.....................65 6

1.4. Pembacaan serapan beberapa konsentrasi baku DNA pada

panjang gelombang maksimum 258,4 nm..........................................83

x
 DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman
2.1. Struktur kimia beberapa katekin yang terdapat pada teh hijau........... 12
2.2. Silent mutation, kodon ke-5 TTA berubah menjadi TTG,
namun tidak merubah asam amino yang dihasilkan............................ 17
2.3. Missense mutation terjadi pada kodon ke-2 urutan basa ke-4............. 18
2.4. Mutasi pada urutan basa ke-14 menyebabkan terbentuknya kodon
terminasi TGA sehingga pembentukan asam amino terhenti............... 19
2.5. Insersi dan delesi menyebabkan pergeseran pembacaan kodon............ 20
2.6. Metilasi pada posisi O6-guanin menyebabkan mutasi GC→AT
protoonkogen K-ras, basa ke-2, kodon 12 ekson 1............................... 27
2.7. Skema umum mekanisme karsinogenesis kimiawi............................... 31

xi
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman
1 Rangkaian alat sintesis..................................................................138
2 Bagan alir sintesis benzoiltiourea............................................ 145
3 Perhitungan hasil sintesis benzoiltiourea secara teoritis................149
4 Perhitungan senyawa siklasi tahap II-A secara teoritis.................155
5 Contoh perhitungan persen hasil benzoiltiourea dan senyawa
siklis................................................................................................156

xii
 BAB I
PENDAHULUAN

1
2