PDF

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL HERBA
PUGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) TERHADAP

PROLIFERASI SEL PADA AORTA TIKUS HIPERGLIKEMIA
MELALUI EKSPRESI Ki-67
SKRIPSI
OLEH:
YOLANDA KRISTINE. P
NIM 141501173
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018
Universitas Sumatera Utara

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL HERBA
PUGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) TERHADAP
PROLIFERASI SEL PADA AORTA TIKUS HIPERGLIKEMIA
MELALUI EKSPRESI Ki-67
SKRIPSI
Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh

gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
YOLANDA KRISTINE. P
NIM 141501173
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2018
ii

iii

KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan kasih-Nya
sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi yang
berjudul Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Herba Puguntano (Picria fel-terrae
Lour.) terhadap Proliferasi Sel Pada Aorta Tikus Hiperglikemia melalui Ekspresi
Ki-67.
Pada kesempatan ini dengan ketulusan hati, penulis tidak lupa
menyampaikan rasa terimakasih kepada Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt., selaku
Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Bapak Dr. Panal Sitorus,
M.Si., Apt., selaku Kepala laboratorium Biologi yang telah memberi izin untuk
melakukan penelitian di Laboratorium Farmakognosi Fakultas Farmasi
Universitas Sumatra Utara.
Penulis juga menyampaikan ucapan terimakasih kepada Ibu Dr. Poppy
Anjelisa Zaitun Hasibuan, M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing yang telah
membimbing penulis dengan penuh kesabaran selama penelitian hingga
selesainya penulisan skripsi ini.
Penulis juga berterimakasih kepada Ibu Yuandani, M.Si., Ph.D., Apt., dan
Ibu Khairunnisa, M.Pharm., Ph.D., Apt., sebagai tim penguji yang sangat banyak
memberikan masukan dan saran atas skripsi ini.
Penulis mengucapkan terimakasih kepada Bapak Popy Patilaya, S.Si.,
M.Sc., Apt., sebagai dosen penasihat akademik, beserta seluruh dosen pengajar di
Fakultas Farmasi atas arahan, bimbingan, dan ilmu yang diberikan kepada penulis
selama duduk di bangku perkuliahan.
iv

Terimakasih penulis ucapkan kepada Ayahanda Elman Krisos Pakpahan,
S.E., Ibunda Evinain Lumbantobing, S.T., adik-adik saya Gracella Ajani dan
Richard Gabriel, serta tante saya Tiorida Lumbantobing yang selalu memberikan
doa dan dukungan penuh kepada penulis tanpa henti selama ini.
Penulis juga berterimakasih kepada teman-teman seperjuangan penulis
Kia, Sifa, Donna, Nadya, Vega, Rehu, Mitra, dan teman-teman SMA penulis
Belinda Adman Daleni, S.Farm., Devin Sitompul, A.md., Michael Simamora, dan
Nicolas Maruli Simanungkalit, serta rekan-rekan Farmasi angkatan 2014 yang
telah memberikan semangat dan doa serta kebersamaannya selama ini.
Semoga Tuhan Yang Maha Esa memberikan balasan yang berlipat ganda
atas kebaikan yang telah diberikan. Akhirnya penulis berharap semoga skripsi ini
dapat bermanfaat bagi kita semua.
Medan, Mei 2018

Penulis,
Yolanda Kristine. P
NIM 141501173

SURAT PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT
Saya yang bertandatangan dibawah ini :
Nama : Yolanda Kristine
Nomor Induk Mahasiswa : 141501173
Program Studi : S-1 Reguler Farmasi
Judul Skripsi : Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Herba

Puguntano (Picria fel-terrae Lour.) terhadap
Proliferasi Sel Pada Aorta Tikus Hiperglikemia
melalui Ekspresi Ki-67.
Dengan ini menyatakan bahwa skripsi ini ditulis berdasarkan data dan hasil
pekerjaan yang saya lakukan sendiri, dan belum pernah diajukan orang lain untuk
memperoleh gelar kesarjanaan di perguruan tinggi lain, dan bukan plagiat karena
kutipan yang ditulis telah disebutkan sumbernya di dalam daftar pustaka.
Apabila di kemudian hari ada pengaduan dari pihak lain karena di dalam skripsi
ini ditemukan plagiat akibat kesalahan saya sendiri, maka saya bersedia menerima
sanksi apapun oleh Program Studi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas
Sumatera Utara, dan bukan menjadi tanggung jawab pembimbing.
Demikian surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya untuk dapat
digunakan jika diperlukan sebagaimana mestinya.
Medan, Mei 2018

Yang membuat pernyataan
Yolanda Kristine. P
NIM 141501173
vi

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL HERBA PUGUNTANO
(Picria fel-terrae Lour.) TERHADAP PROLIFERASI SEL PADA AORTA
TIKUS HIPERGLIKEMIA MELALUI EKSPRESI Ki-67
ABSTRAK
Diabetes melitus dapat menyebabkan perubahan struktur dan fungsi

vaskular melalui kerusakan sel yang diakibatkan oleh stres oksidatif. Ekspresi Ki-
67 merupakan marker terhadap pertumbuhan sel. Puguntano (Picria fel-terrae
Lour.) adalah salah satu tanaman yang memiliki efek antidiabetes. Tujuan
penelitian ini adalah untuk mengamati pengaruh pemberian ektrak etanol herba
puguntano (Picria fel-terrae Lour.) terhadap gambaran histopatologi aorta tikus
hiperglikemia dan menghitung ekspresi protein Ki-67 yang menggambarkan
proliferasi sel terhadap aorta tikus yang diinduksi streptozotosin (STZ).
Ekstrak diperoleh dengan cara maserasi dengan pelarut etanol 96%.
Pengujian dilakukan terhadap 12 tikus jantan, yang dibagi menjadi 4 kelompok.
Kelompok 1 sebagai kontrol negatif diberikan CMC-Na 1%, kelompok 2 sebagai
kontrol positif yang diberikan metformin dosis 45 mg/kg BB, kelompok 3 sebagai
kelompok perlakuan yang diberikan ekstrak etanol herba puguntano (EEHPT)
dosis 200 mg/kg BB, dan kelompok 4 sebagai kelompok tikus normal yang tidak
diinduksi dengan streptozotosin. Aorta tikus diamati dengan pewarnaan HE
(Hematoksilin-Eosin) dan dihitung ekspresi protein Ki-67 secara IHC (Immuno
Histo Chemistry).
Gambaran mikroskopik histopatologi (HE) aorta tikus diabetes
menunjukkan adanya sel busa pada daerah tunika intima dan kelompok perlakuan
EEHPT dosis 200 mg/kgBB menunjukkan penurunan sel busa yang paling baik.
Skor ekspresi Ki-67 kelompok puguntano menunjukkan perbedaan yang
signifikan dengan kelompok metformin (sign 0,000; p< 0,05) dan kelompok
kontrol negatif (sign. 0,000; p<0,05). Perhitungan skor ekspresi Ki-67 dari
terendah hingga tertinggi yaitu kelompok kontrol negatif (9,833 ± 3,5119),
kelompok metformin (30,167 ± 2,8431), kelompok EEHPT (47 ± 4,4441), dan
kelompok normal (78,000 ± 3,5).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa EEHPT dosis 200 mg/kgBB dapat
mengurangi sel busa pada aorta tikus diabetes dan dapat memperbaiki sel yang
rusak akibat diabetes dengan cara meningkatkan proliferasi sel.
Kata kunci : Puguntano (Picria fel-terrae Lour.), histopatologi aorta, ekspresi Ki-
67, proliferasi sel, diabetes melitus.
vii

THE EFFECT OF ETHANOL EXTRACT OF PUGUNTANO (Picria fel-
terrae Lour.) HERBS TOWARD CELL PROLIFERATION IN AORTA OF
HYPERGLYCEMIA RATS THROUGH Ki-67 EXPRESSION
ABSTRACT
Diabetes mellitus causes alterations in vascular structure and function

through cell damage that caused by oxidative stress. Ki-67 expression is a marker
for cell proliferation. Puguntano (Picria fel-terrae Lour.) is a plant that has
antidiabetic effect. The purposes of this study were to observe the aorta
histopatological of diabetic rats and to count Ki-67 expression that describe the
cell proliferation in aorta rats that induced by streptozotocin (STZ).
Extract was obtained by maceration with ethanol 96%. The test were done
with 12 male rats and divided into 4 groups. Group 1 as negative control with
CMC-Na 1%, group 2 as positive control with metformin dose 45 mg/kgBB,
group 3 were given with ethanol extract of puguntano herbs (EEHPT) dose 200
mg/kgBB, group 4 as normal rats that didn‟t induced by streptozotocin. The aorta
rats were observed by HE (Haematoxyllin-Eosin) stained and the Ki-67
expression was counted by IHC (Immuno Histo Chemistry).
The microscopic result of aorta histopatology (HE) of diabetic rats showed
that there were foam cells in tunica intima area and EEHPT group dose 200
mg/kgBB showed the best reduction of foam cells. The score expression of Ki-67
EEHPT group showed there was significantly different with metformin group
(sign 0.000; p<0.05) and with negative control group (sign. 0.000; p<0.05).
Calculation of Ki-67 score expression from the lowest to highest: negative control
group (9.833 ± 3.5119), metformin group (30.167 ± 2.8431), EEHPT group (47 ±
4.4441), and normal group (78.000 ± 3.5).
The result of this study showed that EEHPT dose 200 mg/kgBB can
reduced foam cells on aorta diabetic rats and repaired damage cells caused by
diabetes through increase the cell proliferation.
Keywords : Puguntano (Picria fel-terrae Lour.), aorta histopatology, Ki-67

expression, cell proliferation, diabetes mellitus.
viii

DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ..................................................................................................... i
HALAMAN JUDUL................................................................................. ii
LEMBAR PENGESAHAN ..................................................................... iii
KATA PENGANTAR ............................................................................. iv
SURAT PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT ......................................... v
ABSTRAK ............................................................................................... vii
ABSTRACT ............................................................................................. viii
DAFTAR ISI ............................................................................................ ix
DAFTAR TABEL .................................................................................... xiv
DAFTAR GAMBAR ............................................................................... xv
DAFTAR GRAFIK .................................................................................. xvi
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................ xvii
BAB I PENDAHULUAN ................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ............................................................ 5
1.3 Hipotesis ........................................................................... 5
1.4 Tujuan Penelitian .............................................................. 5
1.5 Manfaat Penelitian ............................................................ 6
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ................................................. 6
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................... 8
2.1 Uraian Tumbuhan .............................................................. 8
2.1.1 Sistematika Tumbuhan ............................................ 8
ix

2.1.2 Nama Daerah dan Nama Asing Tumbuhan ............. 8
2.1.3 Morfologi Tumbuhan .............................................. 9
2.1.4 Kandungan Kimia Tumbuhan ................................. 9
2.1.5 Khasiat Tumbuhan ................................................... 9
2.2 Simplisia ............................................................................ 10
2.3 Maserasi ............................................................................. 10
2.4 Streptozotosin .................................................................... 11
2.5 Diabetes Melitus ................................................................ 12
2.5.1 Patogenesis Komplikasi pada Diabetes ................... 12
2.5.2 Komplikasi pada Diabetes Melitus .......................... 14
2.6 Stres Oksidatif ................................................................... 15
2.6.1 Antioksidan .............................................................. 15
2.7 Metformin .......................................................................... 16
2.8 Pewarnaan Hematoksilin-Eosin ......................................... 16
2.9 Imunohistokimia ................................................................ 17
2.9.1 Protein Ki-67 ........................................................... 17
BAB III METODE PENELITIAN ......................................................... 18
3.1 Alat Dan Bahan ................................................................ 18
3.1.1 Alat-alat ................................................................ 18
3.1.2 Bahan .................................................................... 19
3.2 Pembuatan Pereaksi dan Bahan Uji .................................. 19
3.2.1 Pereaksi Besi (III) klorida 1% .............................. 19
3.2.2 Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N ......................... 19
3.2.3 Pereaksi Asam Klorida 2 N .................................. 19

3.2.4 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M ........................ 19
3.2.5 Pereaksi Asam Sulfat 2 N ...................................... 19
3.2.6 Pereaksi Mayer ...................................................... 20
3.2.7 Pereaksi Mollish ................................................... 20
3.2.8 Pereaksi Dragendorff ............................................. 20
3.2.9 Pereaksi Bouchardat ............................................. 20
3.2.10 Pereaksi Liebermann-Bourchard ........................... 20
3.3 Pengumpulan dan Pengelolaan Bahan Tumbuhan ............ 21
3.3.1 Pengambilan Bahan Tumbuhan ........................... 21
3.3.2 Pembuatan Simplisia ............................................. 21
3.3.3 Pembuatan dan Karakteristik Ekstrak .................... 21
3.3.3.1 Pembuatan EEHPT ................................... 21
3.3.3.2 Pemeriksaan Makroskopik ....................... 22
3.3.3.3 Penetapan Kadar air .................................. 22
3.3.3.4 Penetapan Kadar Sari yang Larut dalam

Air .............................................................. 23
3.3.3.5 Penetapan Kadar Sari yang Larut dalam

Etanol ......................................................... 23
3.3.3.6 Penetapan Kadar Abu Total ...................... 23
3.3.3.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut dalam

Asam .......................................................... 24
3.4 Skrining Fitokimia EEHPT .............................................. 24
3.4.1 Pemeriksaan Alkaloid ........................................... 24
3.4.2 Pemeriksaan Flavonoid.......................................... 24
3.4.3 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid ......................... 25
3.4.4 Pemeriksaan Saponin ............................................ 25
xi

3.4.5 Pemeriksaan Tanin ............................................... 25
3.4.6 Pemeriksaan Glikosida .......................................... 25
3.5 Uji Aktivitas Proliferasi Sel .............................................. 26
3.5.1 Penyiapan Hewan Uji ............................................ 26
3.5.2 Pembuatan Suspensi Ekstrak dan Streptozotosin

(STZ) ..................................................................... 26
3.5.3 Penentuan Jaringan Aorta Tikus Hiperglikemia

untuk Pengujian IHC ............................................. 26
3.5.3.1 Pembuatan Blok Parafin ............................ 27
3.5.3.2 Pemeriksaan Histologi Aorta Tikus .......... 28
3.5.3.3 Pengujian Aktivitas Proliferasi Ki-67

dengan menggunakan IHC ........................ 29
3.6 Analisis Data .................................................................... 30
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................... 31
4.1 Hasil Identifikasi Sampel ................................................. 31
4.2 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Herba

Puguntano (Picria fel-terrae Lour.) .................................. 31
4.2.1 Hasil Pemeriksaan Makroskopik ............................. 31

Puguntano ......................................................................... 31
4.4 Skrining Fitokimia ........................................................... 33
4.5 Hasil Pengujian Gambaran Histopatologi dan Skor

Ekspresi Ki-67 Aorta Tikus Hiperglikemia ..................... 33
4.5.1 Gambaran Histopatologi Aorta Tikus

Hiperglikemia ....................................................... 33
4.5.2 Skor Ekspresi Ki-67 pada Aorta Tikus

Hiperglikemia ....................................................... 36
Bab V KESIMPULAN DAN SARAN ............................................... 41
xii

5.1 Kesimpulan ....................................................................... 41
5.2 Saran ................................................................................. 41
DAFTAR PUSTAKA .............................................................................. 42
LAMPIRAN .............................................................................................. 46
xiii

DAFTAR TABEL
Tabel
Halaman

Puguntano .............................................................................. 31
4.2 Hasil Skrining Fitokimia SHPT dan EEHPT ........................ 33
4.3 Perhitungan Skor Ekspresi Ki-67 Aorta Tikus ....................... 39
xiv

DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Kerangka Pikir Penelitian ........................................................... 7
4.1 Gambaran Histopatologi Aorta Tikus ......................................... 35
4.2 Gambaran Mikroskopik Ekspresi Ki-67 pada Aorta Tikus

Dengan Perbesaran 10x dan 40x ................................................ 38
xv

DAFTAR GRAFIK
Grafik Halaman
4.1 Grafik Batang Rata-rata Skor Ekspresi Ki-67 Aorta Tikus

(% SD) ..................................................................................... 39
xvi

DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran
Halaman
1 Surat Rekomendasi Persetujuan Etik Penelitian Kesehatan .... 46
2 Surat Hasil Identifikasi Tumbuhan .......................................... 47
3 Gambaran Makroskopik Herba Puguntano ............................. 48
4 Bagan Pembuatan Simplisia ..................................................... 49
5 Bagan Pembuatan Ekstrak ........................................................ 50
6 Perhitungan Pemeriksaan Karakteristik Serbuk Simplisia

Herba Puguntano ...................................................................... 51
7 Contoh Perhitungan Dosis ........................................................ 54
8 Hasil Analisis Statistik Data Ekspresi Ki-67 ........................... 57
xvii

BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Hiperglikemia adalah suatu kondisi medik berupa peningkatan kadar
glukosa dalam darah melebihi batas normal. Hiperglikemia merupakan salah satu
tanda khas penyakit diabetes melitus, meskipun juga mungkin didapatkan pada
beberapa keadaan yang lain. Diabetes melitus (DM) merupakan suatu kelompok
penyakit metabolik dengan karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena
kelainan sekresi insulin, kerja insulin atau keduanya. Diabetes melitus merupakan
penyakit menahun yang akan disandang seumur hidup. WHO memprediksi
kenaikan jumlah penyandang DM di Indonesia dari 8,4 juta pada tahun 2000
menjadi 21,3 juta pada tahun 2030. Sedangkan International Diabetes Federation
(IDF) memprediksi adanya kenaikan jumlah penyandang DM di Indonesia dari
9,1 juta pada tahun 2014 menjadi 14,1 juta pada tahun 2035. Dengan angka
tersebut Indonesia menempati peringkat ke-5 di dunia, atau naik dua peringkat
dibandingkan data IDF tahun 2013 yang menempati peringkat ke-7 di dunia
dengan 7,6 juta orang penyandang DM (Perkeni, 2015).
Diabetes Tipe 2 merupakan tipe diabetes yang lebih umum, lebih banyak
penderitanya dibandingkan dengan DM Tipe 1. Penderita DM Tipe 2 mencapai
90-95% dari keseluruhan populasi penderita diabetes, umumnya berusia diatas 45
tahun, tetapi akhir-akhir ini penderita DM Tipe 2 dikalangan remaja dan anak-
anak populasinya meningkat. Berbeda dengan DM Tipe 1, pada penderita DM
Tipe 2, terutama yang berada pada tahap awal, umumnya dapat dideteksi jumlah

insulin yang cukup di dalam darahnya, disamping kadar glukosa yang juga tinggi.
Jadi, awal patofisiologis DM Tipe 2 bukan disebabkan oleh kurangnya sekresi
insulin, tetapi karena sel-sel sasaran insulin gagal atau tak mampu merespon
insulin secara normal. Keadaan ini lazim disebut sebagai “Resistensi Insulin”
(Depkes RI, 2005).
Diabetes merupakan faktor risiko penyakit kardiovaskular. Risiko
kardiovaskular meningkat 2-3 kali pada pasien diabetes. Komplikasi diabetes
ditandai dengan perubahan struktur dan fungsi vaskular, yaitu adanya disfungsi
endotelial (Ellenberg, 2005). Diabetes memberikan akibat yang berat pada sistem
pembuluh darah. Ciri khas dari penyakit makrovaskular diabetik adalah
aterosklerosis yang timbul lebih cepat, mengenai aorta dan pembuluh darah
berukuran besar dan sedang. Infark miokardium yang disebabkan oleh
aterosklerosis merupakan penyebab kematian tersering pada penderita diabetes
(Kumar, et al., 2013).
Stres oksidatif memiliki peran dalam komplikasi diabetes baik
mikrovaskular maupun makrovaskular. Perubahan metabolik yang abnormal
menyebabkan produksi superoksid yang berlebihan pada sel endotelial.
Peningkatan produksi superoksid merupakan pusat dan mediator utama terjadinya
kerusakan jaringan pada diabetes. (Giacco, 2011). Selain itu, terbentuknya ROS
(Reactive Oxygen Species) oleh karena kondisi diabetes juga disebabkan oleh
pembentukan advanced glycation end (AGE), aktivasi protein kinase C, dan
adanya gangguan sistem poliol yang mengakibatkan stres oksidatif (Kumar, et al.,
2013).

Streptozotosin adalah senyawa diabetogenik yang permanen, yang
dihasilkan oleh bakteri gram positif Streptomyces achromogenes. Streptozotosin
apabila diinduksi ke dalam tubuh tikus akan menyebabkan diabetes melitus
dengan cara merusak produksi insulin oleh sel beta pankreas. Streptozotosin
merupakan analog glukosa yang toksik yang akan terakumulasi di dalam sel beta
pankreas melalui ikatan yang lemah dengan glukosa transporter GLUT2.
Streptozotosin bersifat toksik karena menghasilkan radikal bebas yang akan
merusak sel beta pankreas dengan alkilasi DNA (Goud, 2015).
Proliferasi sel dipicu oleh beberapa faktor seperti protein Ki-67 atau MIB
I, dan beberapa Cyclin. Proliferasi sel dapat diukur dengan pemeriksaan antigen
Ki-67 inti melalui analisis immunohistochemistry (IHC). Protein Ki-67 adalah
suatu protein inti non-histon yang diekspresikan selama semua fase aktif siklus
sel, kecuali G0 (Darmayani, 2016). Berdasarkan penelitian Shams, et al (2016),
didapatkan bahwa ekspresi Ki-67 negatif pada kondisi diabetes, ekspresi Ki-67
positif pada kondisi kontrol (normal), ekspresi Ki-67 sedang (moderate) pada
kondisi diabetes yang diberikan zink, dan ekspresi Ki-67 rendah pada kondisi
diabetes yang diberikan insulin. Hal ini menunjukkan bahwa pada kondisi
diabetes, ekspresi Ki-67 menurun yang disebabkan oleh kerusakan organ.
Salah satu tumbuhan yang berkhasiat obat adalah puguntano (Curanga
fel-terrae Merr.) suku Scrophulariaceae dimana daunnya sering digunakan oleh
masyarakat Desa Tiga Lingga Kabupaten Dairi Provinsi Sumatera Utara sebagai
obat antidiabetes. Selain itu, tanaman ini juga diyakini dapat berkhasiat sebagai
penghilang rasa sakit di badan, meningkatkan daya tahan tubuh, bahkan sebagai
anti-aging agar kelihatan awet muda (Harfina, 2012).

Berdasarkan penelitian Sibagariang (2017), didapatkan bahwa puguntano
mempunyai efek menurunkan kadar gula darah dan meningkatkan enzim
antioksidan SOD. Hasil penelitian sebelumnya menunjukkan puguntano
mengandung senyawa metabolit sekunder seperti flavonoid, saponin, tanin,
glikosida, steroid (Harahap, 2013). Penelitian Harfina (2012) menunjukkan bahwa
pada simplisia puguntano terdapat senyawa fitosterol yang berperan dalam
merangsang sensitifitas insulin, meningkatkan produksi insulin, dan sebagai
antioksidan untuk mengurangi kerusakan yang terjadi pada sel-sel di Langerhans.
Penelitian Suhatri dkk (2009) menyatakan bahwa perbaikan kerusakan sel
endotelial mungkin disebabkan oleh kandungan polifenol (flavonoid dan metil
galat) dari fraksi etil asetat dengan aktivitas antioksidannya yang tinggi. Berbagai
penelitian juga menunjukkan bahwa suatu sampel bekerja sebagai antioksidan
dikarenakan mengandung senyawa flavonoid (Asih, 2015; Dewi, 2014; Selawa,
2013; Redha, 2010).
Berdasarkan uraian diatas, maka peneliti tertarik untuk mengamati efek
ekstrak etanol herba puguntano terhadap pencegahan terbentuknya sel busa dan
mengevaluasi kemampuan ekstrak dalam peningkatan proliferasi sel pada aorta
tikus hiperglikemia.

1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang diatas maka dapat diambil perumusan masalah
sebagai berikut:
a. Apakah ekstrak etanol herba puguntano (Picria fel-terrae Lour.) dapat
mengurangi terbentuknya sel busa pada tikus hiperglikemia?
b. Apakah ekstrak etanol herba puguntano (Picria fel-terrae Lour.)
meningkatkan proliferasi sel pada aorta tikus hiperglikemia?
1.3 Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah diatas maka dibuat hipotesis analisis
sebagai berikut:
a. Ekstrak etanol herba puguntano (Picria fel-terrae Lour.) dapat mengurangi
terbentuknya sel busa pada aorta tikus hiperglikemia.
b. Ekstrak etanol herba puguntano (Picria fel-terrae Lour.) dapat meningkatkan
proliferasi sel pada aorta tikus hiperglikemia.
1.4 Tujuan Penelitian
Adapun tujuan penelitian ini adalah
a. Mengamati efek pemberian ekstrak etanol herba puguntano (Picria fel-terrae
Lour.) terhadap pembentukan sel busa pada aorta tikus hiperglikemia.
b. Menghitung skor ekspresi Ki-67 pada aorta tikus hiperglikemia yang
menggambarkan jumlah sel yang berproliferasi.

1.5 Manfaat Penelitian
Adapun manfaat yang diperoleh dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
a. Diperoleh bukti ilmiah pengaruh pemberian ekstrak etanol herba puguntano
(Picria fel-terrae Lour.) dalam meningkatkan proliferasi sel pada aorta tikus
hiperglikemia.
b. Diperoleh ekstrak terstandar sebagai antidiabetes.
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Penelitian ini menggunakan tikus jantan sebagai hewan uji. Variabel bebas
dalam penelitian ini adalah kelompok perlakuan EEHPT dengan dosis 200
mg/kgBB, suspensi CMC-Na 1% BB, metformin dengan dosis 45 mg/kgBB, dan
tikus normal. Variabel terikat pada penelitian ini adalah gambaran histopatologi
melalui penurunan sel busa, dan proliferasi sel melalui ekspresi Ki-67. Adapun
kerangka penelitian ini dapat dilihat pada Gambar 1.1.

Variabel Bebas Variabel Terikat Parameter
Ekstrak Etanol
Herba Puguntano Gambaran
200 mg/kgBB histopatologi Penurunan
aorta sel busa
Metformin dosis
45 mg/kgBB
Tikus yang diinduksi
STZ dengan dosis 35
mg/kgBB
CMC-Na 1% BB
Ekspresi
Proliferasi Sel
Normal Ki-67
Gambar 1.1 Kerangka Pikir Penelitian

BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan
2.1.1 Sistematika Tumbuhan
Sistematika tumbuhan puguntano adalah sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledonae
Subkelas : Asteridae
Ordo : Scrophulariales
Famili : Linderniaceae
Genus : Picria
Spesies : Picria fel-terrae Lour.
Sinonim : Curanga amara Juss., Curanga torenioides Steud., Gratiola
amara (Juss.) Roxb., Curanga fel-terrae (Lour.) Merr., Curanga
melissiafolia A. Juss. (Anonim, 2012).
2.1.2 Nama Daerah dan Nama Asing Tumbuhan
Nama lain tumbuhan ini yaitu Tamah Raheut (Sunda), daun Kukurang
(Maluku), Papaita (Ternate). Nama asing tumbuhan ini yaitu Kong Saden (Laos),
Hempedu Tanah, Gelumak Susu, Rumput Kerak Nasi (Malaysia), Thanh, M[aaj]t
d[aas]t (Vietnam) (Anonim, 2015).

2.1.3 Morfologi Tumbuhan
Puguntano adalah herba tahunan yang tingginya kurang dari 1 meter.
Cabangnya tipis, jarang-jarang dengan panjang 60-90 cm. Akar disimpul.
Daunnya berbentuk oval dengan panjang 3-6 cm dan lebar 2-3 cm. Ujung daun
melancip, tepi daun bergigi. Pembungaan berupa tandan diujung atau dibatang.
Panjang kelopak bunga 6 mm, dua kali lipat panjangnya di dalam buah. Kelopak
daun bagian luar berbentuk seperti telur dan hati. Mahkota bunga berwarna coklat
gelap kemerahan. Buahnya berbentuk kapsul, seperti telur, pipih, panjang 3-4
mm, berkelopak 2 dengan beberapa biji. Biji berbentuk bulat dengan diameter 0.6
mm dengan 8 lubang persegi panjang (Anonim, 2015).
2.1.4 Kandungan Kimia Tumbuhan
Penelitian yang dilakukan oleh Juwita (2009) menunjukkan bahwa
tumbuhan puguntano mengandung senyawa kimia golongan flavonoid, glikosida,
saponin, tanin, dan steroid/triterpenoid. Penelitian yang dilakukan oleh Zou, et al
(2006) ditemukan senyawa cucurbitacin pada puguntano yaitu picfeltarraenone II
(1), picfeltarraegenin I (2), picfeltarraenin IA (3), picfeltarraenin IB (4),
picfeltarraenin IV (5).
2.1.5 Khasiat Tumbuhan
Daun puguntano secara empiris digunakan sebagai obat untuk penyakit
diabetes melitus oleh masyakarat, terutama masyarakat Dairi Provinsi Sumatera
Utara (Harfina, 2012). Puguntano digunakan sebagai tanaman obat untuk
mengatasi penyakit degeneratif dan metabolik (Furqan, 2014). Puguntano juga
memiliki aktivitas antelmintik (Patilaya, 2017).

2.2 Simplisia
Simplisia adalah bahan alam yang digunakan sebagai obat yang belum
mengalami pengolahan apapun juga, kecuali dinyatakan lain berupa bahan yang
telah dikeringkan. Simplisia terbagi menjadi 3 golongan yaitu simplisia nabati
yang dapat berupa tanaman utuh, bagian tanaman, eksudat tanaman, atau
gabungan antara ketiganya, simplisia hewani yang berupa hewan utuh atau zat-zat
berguna yang dihasilkan oleh hewan dan belum berupa bahan kimia murni, dan
simplisia mineral yang berupa mineral yang belum diolah atau telah diolah
dengan cara sederhana dan belum berupa bahan kimia murni (Depkes RI, 1979).
2.3 Maserasi
Maserasi merupakan metode ekstraksi dengan cara dingin. Ekstraksi
merupakan proses penarikan kandungan kimia dari suatu bahan tumbuhan dengan
pelarut cair. Proses pengekstraksi simplisia dengan metode maserasi yaitu dengan
perendaman menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengadukan pada
temperatur ruangan. Proses perendaman dilakukan selama 5 hari dengan pelarut
sesuai sehingga lebih dari 95% zat terlarut terekstraksi. Cairan yang diperoleh
disebut maserat. Maserat diuapkan pelarutnya sampai diperoleh ekstrak (Depkes
RI, 2000).
Metode maserasi dan perkolasi merupakan metode ekstraksi yang paling
mudah digunakan dibandingkan metode lainnya terutama untuk bahan tumbuhan
yang belum pernah diekstraksi. Hal ini disebabkan karena ekstraksi dilakukan
pada suhu ruangan sehingga mencegah terbentuknya senyawa artifak akibat
peruraian oleh panas. Pelarut dalam metode maserasi dan perkolasi menembus
10

dinding sel dan masuk ke dalam sel, melarutkan senyawa-senyawa yang
diekstraksi. Zat-zat terlaut akan dibawa keluar dari sel berdasarkan perbedaan
konsentrasi antara di luar dan dalam sel (Depkes RI, 2000).
2.4 Streptozotosin
Streptozotosin adalah senyawa diabetogenik yang permanen, yang
dihasilkan oleh bakteri gram positif Streptomyces achromogenes. Streptozotosin
apabila diinduksi ke dalam tubuh tikus akan menyebabkan diabetes melitus
dengan cara merusak produksi insulin oleh sel beta pankreas. Streptozotosin
merupakan analog glukosa yang toksik yang akan terakumulasi di dalam sel beta
pankreas dan bersifat toksik karena menghasilkan radikal bebas yang akan
merusak sel beta pankreas dengan alkilasi DNA (Goud, 2015).
Streptozotosin merupakan agen pengalkilasi yang kuat, yang dapat
merusak sel bahkan menyebabkan kematian sel. Setelah streptozotosin masuk
kedalam tubuh akan terurai membentuk molekul isosianat dan molekul
metildiazohidroksida. Molekul isosianat menyebabkan karbamolasi interseluler
=> mengubah struktur protein => kerusakan fungsi biologis. Sementara itu,
molekul metildiazohidroksida akan terurai membentuk ion karbonium reaktif
(CH3+) yang menjadi kunci alkilasi DNA => DNA rusak => aktivasi NAD+ yang
berlebihan untuk memperbaiki DNA => ATP habis untuk mengisi ulang NAD+
yang habis => ATP dan NAD+ habis => perubahan fungsi seluler => kematian sel
beta => diabetes (Goud, 2015).
11

2.5 Diabetes Melitus
Diabetes mellitus merupakan suatu kelompok penyakit metabolik dengan
karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena kelainan sekresi insulin, kerja
insulin atau kedua-duanya. Hiperglikemia adalah suatu kondisi medik yang
ditandai dengan peningkatan kadar glukosa dalam darah yang melebihi batas
normal (Perkeni, 2015). Hiperglikemia menahun dan deregulasi metabolik pada
diabetes melitus dapat berkaitan dengan kerusakan sekunder disistem organ
multipel, khususnya ginjal, mata, saraf, dan pembuluh darah (Kumar, et al., 2013).
Sebagian besar kasus diabetes termasuk pada salah satu dari dua kelompok
besar yaitu diabetes melitus tipe 1 (DMT1) dan diabetes melitus tipe 2 (DMT2).
Diabetes melitus tipe 1 ditandai oleh defisiensi absolut sekresi insulin yang
disebabkan karena kerusakan sel beta pankreas, biasanya akibat suatu serangan
autoimun/idiopatik. DMT1 ini mencakup sekitar 10% seluruh kasus. Diabetes
melitus tipe 2 ditandai oleh defisiensi insulin relatif yang disebabkan karena sel
beta pankreas yang tidak adekuat. Sekitar 80% hingga 90% pasien diabetes
melitus adalah DMT2 (Soegondo, et al., 2004).
2.5.1 Patogenesis Komplikasi pada Diabetes
Diabetes dapat merupakan suatu penyakit yang berbahaya oleh karena
metabolisme glukosa yang abnormal dan gangguan metabolisme lainnya memiliki
efek patologis yang serius hampir diseluruh sistem dalam tubuh. Komplikasi
diabetes yang paling penting adalah abnormalitas pembuluh darah, kerusakan
ginjal, dan lesi yang mengenai saraf perifer dan mata. Terdapat tiga jalur
metabolisme yang berbeda yang tampaknya terlibat dalam patogenenesis
komplikasi jangka panjang, masing-masing jalur berperan melalui pola yang
12

bersifat spesifik terhadap organ yaitu pembentukan advanced glycation end
(AGE), aktivasi protein kinase C, dan gangguan sistem poliol (Kumar, et al.,
2013).
Laju pembentukan AGE yang alami sangat dipercepat oleh adanya
hiperglikemia. AGE dibentuk sebagai akibat dari reaksi non-enzimatis antara
prekursor intrasel yang berasal dari glukosa (glioksal, metilglioksal, dan 3-
deoksiglukoson) dengan kelompok amino dari protein intrasel dan ekstrasel. AGE
berikatan dengan reseptor spesifik (RAGE), yang diekspresikan pada sel inflamasi
(makrofag dan sel T) dan pada endotel serta otot polos pembuluh darah. Efek
merusak aksis pengisyaratan AGE-RAGE pada kompartemen pembuluh darah
meliputi: pelepasan sitokin dan faktor pertumbuhan proinflamasi dari makrofag
pada intima, terbentuknya ROS pada sel endotel, peningkatan aktivasi
prokoagulan pada sel endotel dan makrofag, peningkatan proliferasi otot polos
pembuluh darah dan sintesis matriks ekstrasel. Selain efek yang diperantarai oleh
reseptor, AGE dapat secara langsung berikatan silang dengan protein matriks
ekstrasel, sehingga menurunkan pembuangan protein sembari meningkatkan
deposit protein. Protein yang berikatan silang dengan AGE dapat menjebak
protein interstisial/protein plasma lain, contohnya LDL terperangkap di dalam
dinding pembuluh darah besar yang dimodifikasi oleh AGE sehingga
mempercepat terjadinya ateroskeloris (Kumar, et al., 2013).
Pada beberapa jaringan yang tidak memerlukan insulin untuk transpor
glukosa (contoh saraf, lensa, ginjal, dan pembuluh darah), hiperglikemia
menyebabkan peningkatan glukosa intrasel yang kemudian akan dimetabolisme
oleh enzim aldose reduktase menjadi sorbitol, suatu poliol, dan pada akhirnya
13

akan menjadi fruktosa, pada suatu reaksi yang menggunakan NADPH (bentuk
reduksi dari nikotinamida dinukleotida fosfat) sebagai suatu kofaktor. NADPH
juga diperlukan oleh enzim glutation reduktase pada suatu reaksi yang
menghasilkan glutation tereduksi (GSH). GSH merupakan salah satu mekanisme
antioksidan intrasel dan setiap reduksi GSH akan meningkatkan kerentanan sel
terhadap stres oksidatif (Kumar, et al., 2013).
2.5.2 Komplikasi pada Diabetes Mellitus
Komplikasi diabetes ditandai dengan perubahan struktur dan fungsi
vaskular, kemudian dilanjutkan dengan kerusakan dan kematian organ. Secara
spesifik, ada dua tipe komplikasi vaskular yang disebabkan oleh diabetes yaitu
komplikasi makrovaskular dan komplikasi mikrovaskular (Ellenberg dan Rifkin‟s,
2005).
Diabetes memberikan akibat yang berat pada sistem pembuluh darah. Ciri
khas dari penyakit makrovaskular diabetik adalah aterosklerosis yang timbul lebih
cepat, mengenai aorta dan pembuluh darah berukuran besar dan sedang. Infark
miokardium yang disebabkan oleh aterosklerosis arteri koronaria merupakan
penyebab kematian tersering pada penderita diabetes. Diabetes melitus
meningkatkan radikal bebas, meningkatkan kadar kolesterol di dalam darah.
Radikal bebas mengakiabtkan kerusakan sel endotelial kemudian menyebabkan
peningkatan permeabilitas, peningkatan pelekatan leukosit dan trombosis,
akumulasi lipoprotein (LDL) terutama LDL teroksidasi dan kristal kolesterol,
pelekatan monosit ke endotel bermigrasi ke intima dan berdiferensiasi menjadi
makrofag dan sel busa (Kumar, et al., 2013). Sel busa merupakan lapisan yang
mengandung makrofag yang bermuatan lipid dan sel-sel otot polos yang
14

sitoplasmanya membesar oleh lipid (Lapatta, 2013).
Komplikasi mikrovaskular diabetes sering juga disebut mikroangiopati
diabetes. Salah satu gambaran morfologik diabetes mikrovaskular adalah
penebalan difus membran basal. Penebalan ini paling nyata pada kapiler kulit, otot
skeletal, retina, glomerulus ginjal, dan medula ginjal. Walaupun terdapat
peningkatan ketebalan membran basal, namun pembuluh kapiler pasien diabetes
lebih mudah membocorkan protein plasma daripada kapiler normal (Kumar, et al.,
2013).
2.6 Stres Oksidatif
Stres oksidatif adalah keadaan dimana jumlah radikal bebas di dalam
tubuh melebihi kapasitas tubuh untuk menetralkannya. Radikal bebas merupakan
spesies kimia mengandung sebuah elektron tanpa pasangan pada orbit terluar.
Situasi kimia demikian amat tidak stabil dan radikal bebas akan segera bergabung
dengan zat kimia anorganik atau organik. Apabila timbul dalam sel, radikal bebas
tersebut akan menyerang asam nukleat dan juga berbagai protein sel dan lipid.
Disamping itu, radikal bebas juga mengakibatkan molekul yang bereaksi
dengannya akan berubah menjadi radikal bebas lain, sehingga terjadi suatu
rangkaian kerusakan (Kumar, et al., 2013).
2.6.1 Antioksidan
Sel membentuk berbagai mekanisme untuk menghilangkan radikal bebas
dan dengan demikian akan mengurangi jejas. Radikal bebas tidak stabil dan akan
rusak dengan sendirinya. Sistem enzim yang berperan sehingga radikal bebas
menjadi nonaktif yaitu superoksida dismutase (SOD) yang dijumpai pada
15

berbagai sel, peroksida glutathione (GSH) yang memiliki tugas utama melindungi
sel dari kerusakan oksidatif, katalase yang dijumpai pada peroksisom mampu
mendegradasi jutaan molekul H2O2 tiap detik. Selain itu, terdapat pula antioksidan
eksogen seperti vitamin E, vitamin A, vitamin C, dan beta-karoten yang dapat
menghalangi pembentukan radikal bebas atau memusnahkannya apabila telah
terbentuk (Kumar, et al., 2013).
2.7 Metformin
Metformin merupakan obat anti hiperglikemia oral yang bekerja dengan
meningkatkan sensitifitas insulin. Metformin mempunyai efek utama mengurangi
produksi glukosa hati (glukoneogenesis), dan memperbaiki ambilan glukosa di
jaringan perifer. Metformin merupakan pilihan pertama pada sebagian besar kasus
diabetes melitus tipe 2 (Perkeni, 2015). Tidak seperti golongan sulfonilurea,
metformin (golongan biguanida) tidak memberikan efek hipoglikemik dan tikdan
meningkatkan berat badan. Fenformin dan buformin tidak dipakai lagi karena efek
samping asidosis laktat yang timbulkan, sedangkan metformin memiliki
kemungkinan yang kecil terjadinya asidosis laktat (Soegondo, et al., 2004).
2.8 Pewarnaan Hematoksilin-Eosin
Pewarnaan komponen jaringan dengan muatan anionik (negatif) lebih
mudah dipulas dengan pewarna basa yang disebut basofilik, sedangkan komponen
jaringan dengan muatan kationik lebih mudah dipulas dengan pewarna asam yang
disebut asidofilik. Dari semua pewarna, kombinasi hematoksilin dan eosin (HE)
paling banyak dipakai. Hematoksilin memulas DNA intisel dan struktur asam
16

lainnya disel (seperti bagian sitoplasma yang kaya RNA dan matriks tulang
rawan) menjadi biru. Sebaliknya eosin memulas sitoplasma dan kolagen menjadi
merah muda (Junqueira, 2014).
2.9 Imunohistokimia
Pada imunohistokimia, sediaan jaringan yang diduga mengandung protein
tertentu diinkubasi dalam larutan yang mengandung antibodi terhadap protein
tersebut. Interaksi yang sangat spesifik antar molekul adalah interaksi yang terjadi
antara antigen dan antibodinya. Oleh sebab itu, metode yang menggunakan
antibodi berlabel ternyata sangat berguna untuk menentukan dan memperlihatkan
letak protein spesifik yang dapat ditentukan oleh metode ini (Junqueira, 2014).
Metode IHC yang paling standar dan sering digunakan yaitu dengan
menggunakan pereaksi ABC, yaitu pemberian antibodi yang belum di label,
kemudian memberi label biotin untuk berikatan dengan antibodi, dan membentuk
kompleks dengan avidin-biotin peroksidase yang mana warna peroksidase
ditingkatkan dengan DAB (diaminobenzidine) (IHCworld, 2011).
2.9.1 Protein Ki-67
Protein Ki-67 adalah suatu protein inti non-histon yang diekspresikan
selama fase aktif siklus sel, kecuali G0. Antigen ini ditemukan pertama kali pada
tahun 1980-an di kota Kiel oleh Gerdes dan kawan-kawan (sehingga disebut „Ki‟).
Metode imunohistokimia dapat digunakan untuk melihat ekspresi Ki-67. Sel yang
mengekspresikan Ki-67 terlihat berwarna coklat (Darmayani, 2016).
17

BAB III
METODE PENELITIAN
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental untuk mengamati
pengaruh EEHPT terhadap penurunan sel busa pada aorta tikus hiperglikemia dan
menghitung ekspresi Ki-67 pada aorta pada tikus hiperglikemia. Tahap penelitian
meliputi pengumpulan bahan uji, pengelolaan bahan, pembuatan simplisia dan
ekstrak, pemeriksaan karakteristik simplisia, skrining fitokimia, pengamatan
gambaran histopatologi, dan penghitungan skor ekspresi Ki-67. Penelitian ini
akan dilakukan di Laboratorium Farmakognosi, Laboratorium Farmakologi
Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, dan di Rumah Sakit Murni Teguh.
Penelitian dilaksanakan setelah mendapatkan persetujuan Komite Etik Penelitian
Bidang Kesehatan Universitas Sumatera Utara. Waktu penelitian dilakukan
selama lebih kurang 3 (tiga) bulan.
3.1 Alat dan Bahan
3.1.1 Alat-alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat-alat gelas laboratorium
(Iwaki pyrex), aluminium foil, blender (Philips), desikator, oven, mikroskop,
Glucometer (EasyTouch®GCU), Glucotest strip (EasyTouch®GCU strip test),
rotary evaporator (Stuart), alat destilasi, sentrifuge, neraca analitis (Boeco
Germany), kertas bebas abu, krus porselen, penangas air, oral sonde, mortir dan
stamfer, freeze dryer (Edwards), alat PK air, seperangkat alat bedah hewan, tanur,
kandang hewan, lemari pengering.
18

3.1.2 Bahan
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah herba puguntano
(Picria fel-terrae Lour.), bahan kimia yang digunakan kecuali dinyatakan lain
adalah berkualitas pro analisis, yaitu : air suling, etanol 96% (Merck),
streptozotosin (bioWORLD), tablet metformin (Hexpharm Jaya), strip glukosa,
ketamin (Bernofarm), hematoksilin eosin, Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67
Antigen Clone MIB-1.
3.2 Pembuatan Pereaksi dan Bahan Uji
3.2.1 Besi (III) klorida 1% b/v
Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air suling sampai 100 ml
(Depkes RI, 1995).
3.2.2 Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N
Sebanyak 8 g kristal natrium hidroksida dilarutkan dengan air suling
sebanyak 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.2.3 Larutan Asam Klorida 2N
Sebanyak 17 ml asam klorida pekat diencerkan dengan air suling sampai
100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.4 Timbal (II) Asetat 0,4 M
Timbal (II) asetat sebanyak 15,17 g dilarutkan dalam air suling bebas CO2
hingga 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.5 Pereaksi Asam Sulfat 2 N
Sebanyak 5,5 mL larutan asam sulfat pekat ditambahkan air suling sampai
100 mL (Depkes RI, 1995).
19

3.2.6 Pereaksi Mayer
Sebanyak 1,4 g raksa (II) klorida, kemudian dilarutkan dalam air suling
hingga 60 ml. Pada wadah lain ditimbang sebanyak 5 g kalium iodida lalu
dilarutkan dalam 10 ml air suling. Kedua larutan dicampurkan dan ditambahkan
air suling hingga diperoleh larutan 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.7 Pereaksi Molish
Sebanyak 3 g -naftol dilarutkan dalam asam nitrat 0.5 N hingga 100 ml
(Depkes RI, 1995).
3.2.8 Pereaksi Dragendorff
Sebanyak 0.8 g bismut (III) nitrat dilarutkan dalam asam nitrat pekat 20 ml
kemudian dicampurkan dengan larutan kalium iodida sebanyak 27,2 g dalam 50
ml air suling. Campuran didiamkan sampai memisah sempurna. Larutan jernih
diambil dan diencerkan dengan air suling secukupnya hingga 100 ml (Depkes RI,
1995).
3.2.9 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida dilarutkan dalam air suling secukupnya
kemudian ditambahkan 2 g iodida sedikit demi sedikit, cukupkan dengan air
suling sampai 100 ml (Depkes RI, 1995).
3.2.10 Pereaksi Liebermann-Bouchard
Sebanyak lima bagian volume H2SO4 pekat dicampurkan dengan 50
bagian volume etanol 96%. Kemudian ditambahkan dengan hati-hati 5 bagian
volume asam asetat anhidrida ke dalam campuran tersebut dan dinginkan (Depkes
RI,1995).
20

3.3 Pengumpulan dan Pengelolaan Bahan Tumbuhan
3.3.1 Pengambilan Bahan Tumbuhan
Pengambilan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif, yaitu tanpa
membandingkan dengan daerah lain. Bahan tumbuhan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah simplisia herba puguntano (Picria fel-terrae Lour.) yang
diperoleh dari Desa Tiga Lingga Kabupaten Dairi Provinsi Sumatera Utara.
Identifikasi tumbuhan dilakukan oleh Pusat Penelitian Biologi Lembaga Ilmu
Pengetahuan Indonesia (LIPI) Jakarta.
3.3.2 Pembuatan Simplisia
Tumbuhan puguntano (Picria fel-terrae Lour.) dibersihkan dari bagian
akar, dikumpulkan dan dicuci hingga bersih pada air mengalir dan ditiriskan,
kemudian dikeringkan dengan cara diangin-anginkan. Bahan dimasukkan di
dalam lemari pengering dengan temperatur 40-50ºC hingga kering yang ditandai
apabila dipatahkan telah rapuh. Simplisia selanjutnya dihaluskan dengan
menggunakan blender menjadi serbuk hingga agak halus lalu dimasukkan ke
dalam wadah tertutup dan disimpan di tempat kering.
3.3.3 Pembuatan dan Karakteristik Ekstrak
Karakteristik ekstrak meliputi pemeriksaan makroskopik, penetapan kadar
air, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut etanol, penetapan
kadar abu total dan penetapan kadar abu tidak larut asam (WHO, 1992).
3.3.3.1 Pembuatan EEHPT
Pembuatan ekstrak dilakukan secara maserasi menggunakan pelarut etanol
96%. Sebanyak 600 g serbuk simplisia herba puguntano (Picria fel-terrae Lour.)
dimasukkan ke dalam sebuah bejana, dituangi dengan 4,5 liter etanol 96%, ditutup
21

dan dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil berulang-ulang diaduk
lalu diserkai, ampas diperas dan dicuci dengan etanol 96% sebanyak 1,5 liter. Sari
dipindahkan kedalam bejana tertutup, dibiarkan ditempat sejuk dan terlindung dari
cahaya selama 2 hari. Dienaptuangkan dan disaring. Dipekatkan dengan alat
rotary evaporator suhu 40 ºC sampai diperoleh ekstrak kental (Depkes RI, 1979).
3.3.3.2 Pemeriksaan Makroskopik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk, tekstur
dan ukuran serta pemeriksaan organoleptik dengan mengamati warna, rasa dan
bau dari tumbuhan segar, simplisia dan serbuk simplisia herba puguntano.
3.3.3.3 Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Azeotropi (destilasi
toluena). Cara kerja:
a. Penjenuhan toluena
Sebanyak 200 ml toluen dan 2 ml air suling dimasukkan kedalam labu alas
bulat, dipasang alat penampung dan pendingin, kemudian didestilasi selama 2
jam. Destilasi dihentikan dan dibiarkan dingin selama 30 menit, kemudian volume
air dalam tabung penerima dibaca dengan ketelitian 0,05 ml.
b. Penetapan kadar air simplisia
Sebanyak 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama, dimasukkan
ke dalam labu yang berisi toluena jenuh tersebut. Lalu dipanaskan hati-hati selama
15 menit. Setelah toluena mendidih, kecepatan tetesan diatur 2 tetes untuk tiap
detik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi
dinaikkan sampai 4 tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam
pendingin dibilas dengan toluena. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian
22

tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluena
memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua
volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan
yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (WHO, 1992).
3.3.3.4 Penetapan Kadar Sari yang Larut dalam Air
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml
air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu
bersumbat, dikocok sesekali selama 6 jam pertama. Dibiarkan selama 18 jam,
disaring. Sejumlah 20 ml filtrat pertama diuapkan sampai kering dalam cawan
penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan
pada suhu 1050C sampai bobot tetap. Kadar dalam persen dari yang larut dalam
air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.3.3.5 Penetapan Kadar Sari yang Larut dalam Etanol
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dengan 100 ml
etanol 96% di dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali kemudian dibiarkan
selama 18 jam. Disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20
ml filtrat diuapkan dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah
dipanaskan dan ditara sampai kering. Sisa yang diperoleh dipanaskan pada suhu
1050C sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam etanol 96%
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.3.3.6 Penetapan Kadar Abu Total
Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dan ditimbang seksama
dimasukkan dalam krus porselen yang telah dipijar dan ditara, kemudian
diratakan. Krus dipijar perlahan sampai arang habis, pijaran dilakukan pada suhu
23

600C 3 jam kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap.
Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.3.3.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam
Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml
asam klorida encer selama 5 menit. Bagian yang tidak larut asam dikumpulkan,
disaring melalui kertas saring, dipijarkan, kemudian didinginkan dan ditimbang
sampai bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut asam dihitung terhadap bahan
yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.4 Skrining Fitokimia EEHPT
Skrining fitokimia dilakukan menurut Depkes RI (1995) dan Farnsworth
(1966) untuk mengetahui golongan senyawa alkaloid, glikosida, saponin, tanin,
flavonoid, dan steroid/triterpenoid.
3.4.1 Pemeriksaan Alkaloid
Serbuk ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml asam
klorida 2N dan 9 ml air suling, dipanaskan diatas penangas air selama 2 menit,
didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk uji alkaloida:
diambil tabung reaksi, lalu kedalamnya dimasukkan 0,5 ml filtrat. Pada masing-
masing tabung reaksi ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer, Bouchardat, dan
Dragendorff. Alkaloid positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada paling
sedikit dua dari tiga percobaan diatas (Depkes RI, 1995).
3.4.2 Pemeriksaan Flavonoid
Sebanyak 10 g serbuk simplisia ditambahkan 10 ml air panas, dididihkan
selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, kedalam 5 ml filtrat
24

ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil
alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoid positif jika terjadi warna
merah, kuning, atau jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966).
3.4.3 Pemeriksaan Steroid/triterpenoid
Serbuk ditimbang sebanyak 1 g, dimaserasi dengan 20 ml n-heksana 2
jam, disaring, filtrat diuapkan dalam cawan penguap, dan pada sisanya
ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard. Positig jika terbentuk warna ungu
atau merah yang berubah menjadi biru ungu atau biru hijau (Harborne, 1987).
3.4.4 Pemeriksaan Saponin
Serbuk ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
lalu ditambahkan 10 ml air panas, dinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama
10 detik. Jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak kurang dari 10
menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N
menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1995).
3.4.5 Pemeriksaan Tanin
Serbuk daun ditimbang sebanyak 1 g, dididihkan selama 3 menit dalam
100 ml air suling lalu didinginkan dan disaring. Pada filtrat ditambahkan 1-2 tetes
pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru kehitaman atau hijau
kehitaman menunjukkan adanya tanin (Farnsworth, 1966).
3.4.6 Pemeriksaan Glikosida
Serbuk ditimbang sebanyak 3 g, lalu disari dengan 30 ml campuran etanol
95% dengan air (7:3) dan 10 ml asam klorida 2 N, direfluks 2 jam, didinginkan
dan disaring. Diambil 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal
(II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan
25

20 ml campuran isopropanol dan CHCl3 (2:3), dilakukan berulang 3 kali. Sari air
dikumpulkan dan diuapkan pada temperatur tidak lebih dari 500C. Sisanya
dilarutkan dalam 2 ml metanol. Larutan sisa digunakan untuk percobaan berikut:
0,1 ml larutan percobaan dimasukkan dalam tabung reaksi dan diuapkan diatas
penangas air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes pereaksi Molish.
Kemudian secara perlahan-lahan ditambahkan 2 ml asam sulfat pekat melalui
dinding tabung, terbentuknya cincin berwarna ungu pada batas kedua cairan
menunjukkan glikosida (Depkes RI, 1995).
3.5 Uji Aktivitas Proliferasi Sel pada Aorta Tikus Hiperglikemia
3.5.1 Penyiapan Hewan Uji
Hewan yang digunakan adalah tikus putih jantan dengan berat 180-200
gram. Sebelum percobaan, tikus terlebih dahulu dipelihara selama 2 minggu
dalam kandang yang baik untuk menyesuaikan lingkungannya, yaitu dengan
penerimaan cahaya 12 jam gelap dan 12 jam terang (Depkes RI, 1995).
3.5.2 Pembuatan Suspensi Ekstrak dan Streptozotosin (STZ)
Suspensi ekstrak dibuat dengan menggunakan CMC-Na 1% dalam
konsentrasi tertentu. Larutan STZ dibuat dengan melarutkan STZ dengan akuades
dengan dosis 35 mg/kgBB (Asniman, 2017). Tikus dibagi kedalam 4 kelompok
perlakuan (EEHPT dosis 200 mg/kgBB, metformin dosis 45 mg/kgBB, CMC-Na
1%, dan tikus normal), masing-masing kelompok terdiri dari 3 ekor tikus.
Suspensi EEHPT, metformin, dan CMC-Na diberikan setiap hari selama 15 hari.
26

3.5.3 Penentuan Jaringan Aorta Tikus Hiperglikemia untuk Pengujian IHC
Tikus DM yang akan diuji untuk melihat proliferasi sel yang terjadi pada
aorta ditentukan berdasarkan uji antidiabetes. Uji antidiabetes dilakukan terhadap
25 ekor tikus yang dibagi kedalam 5 kelompok perlakuan dan diberi EEHPT
untuk melihat penurunan kadar gula darah (Asniman, 2017). Berdasarkan
penelitian Asniman (2017), EEHPT dengan dosis 200 mg/kgBB memberikan efek
penurunan kadar gula darah yang paling optimal. Tikus yang diberikan EEHPT
dengan dosis 200 mg/kgBB, tikus CMC-Na, tikus metformin, dan tikus normal
dibedah dan diambil aortanya untuk diamati sel yang mengalami proliferasi.
Pengamatan proliferasi sel dilakukan dengan metode immunohistochemistry, yang
diawali dengan pembuatan blok parafin, pembuatan preparat HE, dan dilanjutkan
dengan immunohistochemistry menggunakan protein Ki-67.
3.5.3.1 Pembuatan Blok Parafin
Langkah-langkah pembuatan blok parafin adalah sebagai berikut
(Hasibuan, 2014):
a. Sampel diambil pada jaringan aorta tikus yang mengalami diabetes, lalu
direndam dengan buffer formalin 10% selama 2-4 jam.
b. Sampel diambil pada jaringan aorta tikus, lalu direndam dengan buffer
formalin 10% selama 2-4 jam.
c. Dilakukan proses dehidasi dengan alkohol bertingkat. Pada masing-masing
proses dilakukan selama 30 menit sampai 1 jam.
d. Tahap selanjutnya adalah pencucian dengan menggunakan larutan xylol yaitu
xylol I, xylol II, dan xylol III masing-masing selama 1-2 jam.
27

e. Proses penanaman. Caranya: sampel direndam dalam campuran xylol dan
parafin cair pada suhu 60-700C, dengan perbandingan xylol:parafin berturut-
turut 3:1 , 1:1, dan 1:3 masing-masing selama 2 jam.
f. Dilakukan pencetakan dan dibiarkan membeku, kemudian blok parafin
dipotong dengan menggunakan alat mikrotom dengan ketebalan irisan 5-7
3.5.3.2 Pemeriksaan Histologi Aorta Tikus
Pemeriksaan histologi aorta tikus dengan pembuatan preparat histologi
dengan pewarnaan Haematoxyllin-Eosin (HE). Proses pembuatan preparat
histologi dan pewarnaan HE (Hasibuan, 2014):
a. Jaringan yang telah diblok parafin dimasukkan ke dalam waterbath, kemudian
organ diambil menggunakan object glass dan disimpan dalam inkubator
dengan suhu 370C selama 24 jam.
b. Dideparafinasi dengan larutan xylol (I dan II) selama 2 menit.
c. Kemudian dilakukan proses rehidrasi dengan cara merendamkan sediaan ke
dalam alkohol bertingkat selama 1 menit. Kemudian sediaan dicuci dengan air
yang mengalir (air kran) selama 1 menit.
d. Preparat direndam dalam larutan Mayer’s Haematoxyllin selama 8 menit.
e. Dicuci dengan air mengalir (air kran) selama 30 detik.
f. Dicelupkan kedalam larutan lithium carbonat selama 15-30 detik.
g. Dicuci dengan air mengalir (air kran) selama 2 menit.
h. Direndam dalam larutan eosin selama 2-3 menit.
i. Dicuci dengan air mengalir (air kran) selama 30-60 detik.
j. Preparat dicelupkan kedalam larutan alkohol 95% dan alkohol absolut
sebanyak 10 kali celupan selama 2 menit.
28

k. Kemudian dicelupkan ke dalam xylol I selama 1 menit dan xylol II selama 2
menit.
l. Setelah pewarnaan, sediaan ditetesi perekat Canada balsem (Entellan®) dan
ditutup dengan cover glass.
m. Diamati dengan menggunakan mikroskop cahaya.
3.5.3.3 Pengujian Ekspresi Ki-67 dengan metode IHC
Langkah-langkah pengerjaan pulasan Ki-67 untuk mengamati proliferasi
sel adalah sebagai berikut (Hasibuan, 2014):
a. Deparafinasi slide (xylol I, xylol II, xylol III) masing-masing 5 menit.
b. Dilakukan rehidrasi masing-masing 4 menit kemudian dicuci dengan air
mengalir selama 5 menit.
c. Dimasukkan slide ke dalam PT Link Dako Epitop Retrieval kemudian
dilakukan set up pre heat 650C, kemudian running time 980C selama 15 menit.
Waktu yang dibutuhkan proses ini adalah selama lebih kurang 1 jam.
d. Kemudian dilakukan Pap Pen dan segera dimasukkan dalam Tris Buffered
Saline pH 7,4 selama 5 menit.
e. Dilakukan blocking dengan hidrogen peroksida, inkubasi selama 5-10 menit.
f. Dicuci dalam Tris Buffered Saline pH 7,4 selama 5 menit.
g. Dilakukan blocking dengan Normal Horse Serum (NHS) 3% selama 5 menit.
h. Dicuci kembali dengan TBS pH 7,4 selama 5 menit.
i. Diinkubasi dengan antibodi monoklonal MIB-1 (untuk pulasan Ki-67)
konsentrasi 0,4 mg/ml pengenceran 1:50 selama 1 jam.
j. Dicuci dengan TBS pH 7,4 selama 5 menit.
k. Dako Real Envision Rabbit/Mouse dilabel biotin selama 30 menit.
29

l. Dicuci dengan TBS pH 7,4 selama 5-10 menit.
m. Diinkubasi dengan konjugat avidin-peroksidase suhu kamar selama 30 menit.
n. Dicuci dengan TBS pH 7,4 / Tween 20 selama 5-10 menit.
o. Diinkubasi dengan campuran substrat-kromogen solution (20 DAB : 1000
substrat hidrogen peroksida 0,01%) selama 10 menit suhu kamar.
p. Dicuci dengan air mengalir selama 10 menit lalu dilakukan counterstain
dengan hematoksilin selama 15 menit dan dicuci kembali dengan air mengalir
selama 5 menit
q. Dimasukkan dalam larutan lithium carbonat selama 2 menit.
r. Preparat dicuci dengan air mengalir selama 5 menit lalu dilakukan dehidrasi
masing-masing 5 menit.
s. Dilakukan clearing dengan xylol I, xylol II, xylol III masing-masing selama 5
menit.
t. Dilakukan mounting dan ditutup dengan cover glass.
3.6 Analisis Data
Data hasil penelitian ditentukan homogenitas dan normalitasnya untuk
menentukan analisis statistik yang digunakan. Data dianalisis dengan
menggunakan uji ANOVA satu arah untuk menentukan perbedaan rata-rata
diantara perlakuan menggunakan program SPSS 21.0. Jika terdapat perbedaan,
dilanjutkan dengan menggunakan uji Post Hoc Tukey untuk mengetahui
perbedaan antar kelompok perlakuan. Berdasarkan nilai signifikasi, p<0,05
dianggap signifikan. Analisis data penelitian dapat dilihat pada Lampiran 8,
halaman 57.
30

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Identifikasi Sampel
Hasil identifikasi sampel yang telah dilakukan oleh peneliti sebelumnya
oleh Denny Satria di Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan
Indonesia (LIPI) Bogor, menyatakan bahwa tumbuhan yang diteliti merupakan
tumbuhan Puguntano yang termasuk suku Linderniaceae jenis Picria fel-terrae
Lour. Hasil identifikasi sampel dapat pada Lampiran 2, halaman 47.
4.2 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Herba Puguntano (Picria fel-

terrae Lour.)
4.2.1 Hasil Pemeriksaan Makroskopik
Hasil pemeriksaan makroskopik herba puguntano adalah daun berwarna
hijau, berbentuk bulat telur, tepi daun beringgit, permukaan daun kasar dan
berbulu, batang berwarna coklat muda, batang bercabang tunggal yang dapat
dilihat pada Lampiran 3, halaman 48.
4.3 Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Herba Puguntano
Tabel 4.1 Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia herba puguntano

No Uraian Simplisia (%) Syarat (MMI)
1. Kadar air 5,54 ≤ 10%
2. Kadar sari yang larut air 18,51 -
3. Kadar sari yang larut etanol 7,19 -
4. Kadar abu total 8,43 -
5. Kadar abu yang tidak larut asam 0,57 -
31

Pembuatan simplisia dilakukan dengan proses pengeringan sehingga
mendapatkan simplisia yang tidak mudah rusak dan dapat disimpan dalam jangka
waktu yang lama. Standardisasi kadar air simplisia memenuhi syarat yaitu tidak
lebih dari 10% (Depkes RI, 1986). Hasil penetapan kadar air simplisia herba
puguntano adalah 5,54%. Penetapan kadar air bertujuan untuk memberikan
batasan minimal kandungan air yang masih dapat ditolerir oleh simplisia. Kadar
air yang tinggi dapat menyebabkan ketidakstabilan pada sediaan dan merupakan
media pertumbuhan mikroorganisme.
Penetapan kadar sari larut air dilakukan menggunakan pelarut air untuk
mengetahui kadar senyawa kimia yang bersifat polar yang terkandung dalam
simplisia. Sedangkan penetapan kadar sari larut etanol dilakukan menggunakan
pelarut etanol untuk mengetahui kadar senyawa kimia yang bersifat polar maupun
nonpolar yang terkandung dalam simplisia. Kadar sari larut air dan kadar sari larut
etanol pada simplisia herba puguntano berturut-turut adalah 18,51% dan 7,19%.
Penetapan kadar abu dimaksudkan untuk mengetahui kandungan mineral
internal (abu fisiologis) yang berasal dari tanaman itu sendiri, dan eksternal (abu
nonfisiologis) yang berasal dari luar seperti pasir dan tanah yang terdapat dalam
sampel (WHO, 1992). Hasil penetapan kadar abu dalam simplisia herba
puguntano adalah 8,43%. Penetapan kadar abu tidak larut asam dimaksudkan
untuk menunjukkan jumlah silikat, khususnya pasir yang ada pada simplisia
(WHO,1992). Hasil penetapan kadar abu tidak larut asam pada simplisia herba
puguntano adalah 0,57%. Kadar logam berat yang tinggi dapat membahayakan
kesehatan sehingga diperlukan penetapan kadar abu dan kadar abu tidak larut
asam untuk menjamin sediaan tidak berbahaya jika digunakan.
32

4.4 Skrining Fitokimia
Skrining fitokima terhadap SHPT dan EEHPT dapat dilihat pada Tabel
4.2. Pada Tabel 4.2 menunjukkan bahwa SHPT positif terhadap senyawa
golongan flavonoid, saponin, tanin, steroid/triterpenoid, dan glikosida. Sedangkan
pada EEHPT positif terhadap senyawa golongan flavonoid, saponin, tanin,
steroid/triterpenoid, dan glikosida.
Tabel 4.2 Hasil skrining fitokimia simplisia herba puguntano (SHPT) dan ekstrak
etanol herba puguntano (EEHPT).
No Skrining Pereaksi SHPT EEHPT
Dragendorff (-) endapan coklat (-) endapan coklat
(-) endapan
1. Alkaloid Bouchardat (-) endapan kuning
kuning
Mayer (-) endapan putih (-) endapan putih
2. Flavonoid Zn+ HCl pekat (+) merah (+) merah
(+) hijau (+) hijau
3. Tanin FeCl3 1%
kehitaman kehitaman
Triterpeno Liebermann-
4. (+) merah ungu (+) merah ungu
id/Steroid Bouchard
5. Saponin Air panas, dikocok (+) busa (+) busa
6. Glikosida Molish (+) coklat (+) coklat
4.5 Hasil Pengujian Gambaran Histopatologi dan Skor Ekspresi Ki-67 Aorta
Tikus Hiperglikemia
4.5.1 Gambaran Histopatologi Aorta Tikus Hiperglikemia
Hasil pengujian aktivitas antidiabetes ekstrak etanol herba puguntano
(Picria fel-terrae Lour.) berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Asniman
(2017) menyatakan bahwa EEHPT dengan dosis 100, 200, dan 400 mg/kgBB
dapat menurunkan KGD tikus yang diinduksi STZ. Hal ini dapat terjadi karena
adanya senyawa saponin pada herba puguntano. EEHPT dengan dosis 200
mg/kgBB memberikan efek penuruan kadar gula darah yang paling optimal.
Berbagai hasil penelitian menunjukkan bahwa tanaman puguntano
berkhasiat menurunkan kadar gula darah. Dalam penelitian yang dilakukan oleh
33

Harfina (2012) diduga senyawa glikosida yang terkandung dalam serbuk
simplisia puguntano memberikan efek penurunan kadar gula darah yaitu dengan
merangsang sekresi insulin. Selain itu, terdapat juga golongan senyawa fitosterol
yang berperan dalam merangsang sensitifitas insulin, meningkatkan produksi
insulin, dan sebagai antioksidan untuk mengurangi kerusakan yang terjadi pada
sel-sel di Langerhans.
Dalam penelitian yang dilakukan oleh Billy Stinggo (2017) pemberian
puguntano dapat menurunkan nilai HOMA-IR pada pasien penderita DM tipe II.
HOMA-IR merupakan metode yang telah tervalidasi untuk menilai resistensi
insulin pada penderita diabetes. Dalam penelitian yang dilakukan oleh
Sitoningrum (2017) pemberian ekstrak puguntano pada pasien DM tipe II dapat
meningkatkan kadar adiponektin yang merupakan produk adiposit penting yang
dapat mempengaruhi sensitivitas dan resistensi insulin.
Dalam penelitian ini digunakan pewarnaan histopatologi menggunakan
kombinasi pewarna hematoksilin eosin. Hematoksilin memulas DNA intisel dan
struktur asam lainnya disel (seperti bagian sitoplasma yang kaya RNA dan
matriks tulang rawan) menjadi biru. Sebaliknya eosin memulas sitoplasma dan
kolagen menjadi merah muda (Junqueira, 2014). Kemudian diamati gambaran
histopatologi aorta tikus yang diinduksi streptozotosin untuk melihat apakah
terdapat sel busa di tunika intima.
Sel busa merupakan lapisan yang mengandung makrofag yang bermuatan
lipid dan sel-sel otot polos yang sitoplasmanya membesar oleh lipid. Sel busa
terbentuk akibat terjadinya oksidasi LDL yang akan meningkatkan timbunan
lemak di dalam sel dan luar sel (Lapatta, 2013). Berdasarkan penelitian yang
34

dilakukan oleh Fatmawati (2008), terjadi peningkatan kadar LDL tikus yang
diabetes dimana setelah pemberian ekstrak herba sambiloto menurunkan kadar
LDL dan meningkatkan kadar HDL dikarenakan herba sambiloto mengandung
flavonoid yang dapat bekerja sebagai antioksidan.
(a) (b)
(c) (d)
Gambar 4.1 menunjukkan gambaran histopatologi aorta tikus
Keterangan:
(a) : gambaran histopatologi aorta tikus kontrol negatif dengan CMC-Na 1%
(b) : gambaran histopatologi aorta tikus dengan pemberian metformin
(c) : gambaran histopatologi aorta tikus dengan pemberian EEHPT
(d) : gambaran histopatologi aorta tikus normal
Panah merah menunjukkan sel busa yang berwarna putih
Hasil pengamatan gambaran histopatologi aorta tikus yang diinduksi
streptozotosin dan tidak diberi perlakuan, menunjukkan adanya sel busa yang
sangat banyak pada tunika intima (gambar a). Pada tikus yang diberi perlakuan
dengan metformin, masih terdapat sel busa yang sedikit pada tunika intima
(gambar b). Sementara untuk tikus yang diberi perlakuan dengan EEHPT tidak
35

menunjukkan adanya sel busa pada tunika intima menandakan adanya perbaikan
sel (gambar c). Pada tikus normal yang tidak diinduksi dengan streptozotosin
menunjukkan gambaran aorta normal yang tidak ada sel busanya (gambar d).
Gambaran histopatologi aorta tikus dapat dilihat pada Gambar 4.1
Diabetes dapat menyebabkan komplikasi makrovaskular yang disebabkan
karena adanya perubahan struktur dan fungsi vaskular, yang berujung pada
kerusakan dan kematian organ (Ellenberg, 2015). Resistensi insulin akibat
diabetes menyebabkan terjadinya peningkatan produksi reactive oxygen species
dari asam lemak bebas sehingga mengakibatkan terjadinya kondisi stres oksidatif.
Produksi ROS yang meningkat mengakibatkan terjadinya inaktivasi enzim anti-
aterosklerosis (Giacco,2011). Produksi ROS yang berlebihan juga akan
mengoksidasi LDL ekstraseluler. Oksidasi LDL yang mengalami kematian akibat
fagositosis oleh makrofag kemudian terakumulasi membentuk sel busa (foam cell)
(Kumar, et al., 2013).
Penelitian yang dilakukan oleh Lapatta (2013) menyatakan bahwa tikus
wistar yang dipapari asap rokok dengan dosis 24 batang/hari selama
30 hari secara histopatologi menunjukan pembentukan sel busa pada tunika intima
sampai media pembuluh darah aorta tikus. Asap rokok dapat menimbulkan radikal
bebas di dalam tubuh yang dapat mencetuskan terjadinya aterosklerosis pada
pembuluh darah sehingga dapat mengakibatkan penyumbatan.
4.5.2 Skor Ekspresi Ki-67 pada Aorta Tikus Hiperglikemia
Oksidatif stres yang disebabkan oleh kondisi diabetes mengakibatkan
disfungsi endotel. Disfungsi endotel diartikan sebagai ketidakseimbangan antara
faktor relaksasi dan kontraksi. Sementara itu, di dalam sumsum tulang dan aliran
36

darah tepi terdapat sel-sel yang mampu membelah dan berdiferensiasi menjadi
sel-sel endotel dan memperbaiki jaringan iskemik akibat rusaknya dinding
pembuluh darah dengan mekanisme reendotelialisasi melalui proses angiogenesis.
Sel-sel ini disebut Endothelial Progenitor Cell (EPC) (Athiroh dan Nur, 2012).
Peningkatan produksi Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) akan
menstimulasi proses angiogenesis. VEGF merupakan mediator penting dalam
pembentukan pembuluh darah. VEGF kemudian meningkatkan aktivitas enzim
protease dan migrasi sel endotel. Sel endotel bermigrasi ke matriks yang telah
terdegradasi. Proses tersebut diikuti dengan proliferasi sel endotel (Nugroho,
2016). Ki-67 merupakan marker terhadap proliferasi sel yang diekspresikan
selama semua fase aktif siklus sel, kecuali G0 (Darmayani, 2016).
Dalam penelitian ini dihitung skor ekspresi Ki-67 aorta tikus untuk
melihat apakah terdapat peningkatan proliferasi sel sehingga dapat memperbaiki
sel yang rusak akibat diabetes. Semakin tinggi nilai skor ekspresi Ki-67, maka
semakin besar pula proliferasi selnya sehingga sel-sel yang rusak mengalami
perbaikan.
Gambaran mikroskopik pulasan aorta dengan protein Ki-67 dapat dilihat
pada Gambar 4.2. Skor ekspresi Ki-67 pada aorta tikus yang diinduksi
streptozotosin dapat dilihat pada Tabel 4.3. Perhitungan skor ekspresi Ki-67 pada
tiap-tiap kelompok perlakuan dilakukan menggunakan mikroskop cahaya dengan
perbesaran 40x dan dibagi menjadi 4 lapangan pandang. Dihitung persentase sel
yang mengekspresikan Ki-67 (berwarna coklat) dari 200 sel yang diamati dengan
bantuan aplikasi Image Raster.
37

(1a) (1b)
(2a) (2b)
(3a) (3b)
(4a) (4b)
Gambar 4.2 Gambaran mikroskopik ekspresi Ki-67 pada aorta tikus dengan
perbesaran 10x dan 40x
Keterangan:
1 : Kelompok kontrol negatif
2 : Kelompok metformin
3 : Kelompok EEHPT
4 : Kelompok normal
a : Perbesaran mikroskop 10x
b : Perbesaran mikroskop 40x
Panah merah menunjukkan ekspresi Ki-67 yang berwarna coklat
38

Tabel 4.3 Perhitungan skor ekspresi Ki-67 aorta tikus
Skor Ekspresi Ki-67 Rata-rata Skor Ekspresi
Perlakuan
(%) (% SD)
13,5
Kontrol Negatif
9,5 9,833 3,512a
(CMC-Na)
6,5
31,0
Metformin 32,5 30,167 2,843b
27,0
52,0
EEHPT 45,5 47,000 4,444ab
43,5
76,5
Normal 82,0 78,000 3,500ab
75,5
Keterangan:
a. Sig (p) < 0,05 = ada perbedaan yang signifikan dengan kelompok metformin
b. Sig (p) < 0,05 = ada perbedaan yang signifikan dengan kelompok kontrol
negatif
90
Rata-Rata Skor Ekspresi Ki-67
78.000
80
70
60
47.000
50
40 30.167 Rata-rata Skor
30 Ekspresi Ki-67
20 9.833 (%±SD)
10
0
Kontrol Negatif Metformin EEHPT Normal
Perlakuan
Grafik 4.1 Grafik batang rata-rata skor ekspresi Ki-67 aorta tikus (% SD).
Pada Tabel 4.3 terdapat perbedaan skor ekspresi Ki-67 pada masing-
masing perlakuan. Pada kelompok perlakuan tikus normal menunjukkan skor
ekspresi Ki-67 yang berbeda signifikan dengan kelompok metformin (sign 0,000;
p<0,05), berbeda signifikan dengan kelompok EEHPT (sign 0,000; p<0,05), dan
berbeda signifikan dengan kelompok kontrol negatif (sign 0,000; p<0,05). Skor
ekspresi Ki-67 pada kelompok perlakuan tikus normal menunjukkan angka
39

tertinggi (78,000 3,500). Hal ini menunjukkan bahwa pada tikus normal
proliferasi sel sangat cepat.
Pada Tabel 4.3 tikus dengan kelompok EEHPT menunjukkan skor
ekspresi yang berbeda signifikan dengan kelompok metformin (sign 0,002;
p<0,05), dan berbeda signifikan dengan kelompok kontrol negatif (sign 0,000;
p<0,05). Namun, skor ekspresi pada kelompok EEHPT menunjukkan angka yang
lebih tinggi yaitu 47,000 4,444, dibandingkan dengan kelompok metformin
(30,167 2,843) dan kelompok perlakuan kontrol negatif (9,833 3,512).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian EEHPT pada tikus
diabetes memberikan skor ekspresi Ki-67 yang lebih tinggi dibandingkan dengan
pemberian metformin. Hal ini menunjukkan bahwa EEHPT lebih baik dalam
memperbaiki sel yang rusak akibat diabetes.
Penelitian Suhatri, dkk., (2009) menyatakan bahwa perbaikan kerusakan
sel endotelial mungkin disebabkan oleh kandungan polifenol (flavonoid dan metil
galat) dari fraksi etil asetat dengan aktivitas antioksidannya yang tinggi. Penelitian
Athiroh dan Nur (2012) menunjukkan bahwa flavonoid dari benalu teh diduga
mampu memperbaiki disfungsi endotel melalui mekanisme reendotelisasi.
Penelitian Nugroho (2016) mendapatkan kandungan flavonoid dan saponin dari
mentimun meningkatkan kerja VEGF sehingga dapat meningkatkan angiogenesis
yang kemudian diikuti oleh proliferasi sel.
Berdasarkan urairan diatas diduga EEHPT memiliki aktivitas yang sama
dalam memperbaiki sel yang rusak dengan meningkatkan VEGF karena EEHPT
positif mengandung flavonoid.
40

BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Telah diteliti pengaruh ekstrak etanol herba puguntano terhadap skor
ekspresi Ki-67 pada aorta tikus yang diinduksi streptozotosin. Adapun kesimpulan
dari hasil penelitian ini adalah:
a. EEHPT dapat mengurangi sel busa yang terbentuk akibat stres oksidatif pada
kondisi diabetes.
b. EEHPT menunjukkan proliferasi sel yang lebih baik dibandingkan dengan
kelompok perlakuan metformin dan kontrol negatif berdasarkan perbedaan
rata-rata skor ekspresi Ki-67.
5.2 Saran
Sebaiknya dilakukan penelitian lanjutan untuk melihat ekspresi ROS
(reactive oxygen species) pada sel aorta menggunakan metode imunositokimia.
41

DAFTAR PUSTAKA
Anonim. (2012). Picria fel-terrae Lour. Diunduh dari laman http://www.

theplantlist.org/tpl1.1/record/kew-2549224. Diakses pada tanggal 17
Januari 2018.
Anonim. (2015). Sagai-Uak. Diunduh dari laman http://www.stuartxchange.org/

Sagai-uak.html. Diakses pada tanggal 17 januari 2018.
Asih, I. A. R. A., Sudiarta, I. W., dan Suci, A. A. W. (2015). Aktivitas

Antioksidan Senyawa Golongan Flavonoid Ekstrak Etanol Daging Buah
Terong Belanda (Solanum betaceum Cav.). Jurnal Kimia, (9)1: 39.
Asniman, N. (2018). Pengaruh Ekstrak Etanol Herba Puguntano (Picria fel-terrae

Lour.) Terhadap Kadar Soluble Receptor Advanced Glycation End
Product Pada Tikus Hiperglikemia. Skripsi. Program Studi Ekstensi
Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Athiroh, N., dan Nur, P. (2012). Mekanisme Kerja Benau Teh Pada Pembuluh
Darah. Jurnal Kedokteran Brawijaya, (27)1: 1-5.
Darmayani, P. R. (2016). Indeks Mitosis dan Indeks Proliferasi Protein Ki-67

Lebih Tinggi pada Karsinoma Sel Basal Tipe Agresif Dibandingkan Tipe
Non Agresif. Tesis. Program Pasca Sarjana Universitas Udayana. Hal. 34.
Depkes RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi Ketiga. Jakarta: Departemen

Kesehatan. Hal. 29-31, 33, 649, 748.
Depkes RI. (1986). Materia Medika Indonesia. Jilid IV. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI. Hal. 300-306, 321, 325, 333-337.
Depkes RI. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi Keempat. Jakarta: Departemen

Kesehatan. Hal. 29-31, 33, 649, 748.
Depkes RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI. Hal. 300-306, 321, 325, 333-337.
Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan
Pertama. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 10-11.
Depkes RI. (2005). Pharmaceutical Care Untuk Penyakit Diabetes Mellitus.

Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 16.
Dewi, N. W. O. A. C., Puspawati, N. M., Swantara, I. M. D., Asih, I. A. R. A.,

dan Rita, W. S. (2014). Aktivitas Antioksidan Senyawa Flavonoid Ekstrak
Etanol Biji Terong Belanda (Solanum betaceum, syn) dalam Menghambat
Reaksi Peroksidasi Lemak pada Plasma Darah Tikus Wistar. Indonesian
E-Journal of Applied Chemistry, (2)1: 7.
42

Ellenberg dan Rifkin‟s. (2005). The Diabetes Mellitus Manual. Edisi Keenam.
New York: The McGraw-Hill Companies. Hal. 408, 421, 422.
Farnsworth, N. R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants.

Journal of Pharmaceutical Sciences, (55)3: 260-264.
Fatmawati, E. (2008). Pengaruh Lama Pemberian Ekstrak Daun Sambiloto

(Andrographis paniculata Ness.) terhadap Kadar Kolesterol, LDL (Low
Density Lipoprotein), HDL (High Density Lipoprotein), dan Trigliserida
Darah Tikus (Rattus novergicus) Diabetes. Skripsi. Jurusan Biologi
Fakultas Sains dan Teknologi UIN.
Furqan, M., Hadisahputra, S., dan Rosidah. (2014). Effects of Inhibition Cell
Cycle and Apoptosis of Poguntano leaves Ethylacetate Extract (Picria fel-
terrae Lour.) on Breast Cancer Cells. International Journal of PharmTech
Research, (6)3: 1096.
Giacco, F., dan Michael B. (2011). Oxidative Stress and Diabetic Complications.
New York: American Heart Association, Inc. Hal. 1066.
Goud, B.J., Swamy, B.K.C., dan Dwarakanath, V. (2015). Streptozotocin – A

Diabetogenic Agent in Animal Model. International Journal of Pharmacy
& Pharmaceutical Research, (3)1: 253, 258-264.
Harahap, U., Patilaya, P., Marianne., Yuliasmi, S., Husori, D. I., Prasetyo, B. E.,
Sumantri, I. B., dan Wahyuni, H. S. (2013). Profil Fitokimia Ekstrak
Etanol Daun Puguntano (Curanga fel-terrae Lour.) yang Berpotensi
Sebagai Antiasma. Seminar Nasional Sains dan Teknologi V. Hal. 425.
Harborne, J. B. (1987). Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisis

Tumbuhan. Edisi kedua. Bandung: ITB-Press. Hal. 6,71, 76, 84-85, 94-97.
Harfina, F., Bahri, S., dan Saragih, A. (2012). Pengaruh Serbuk Daun Puguntano
(Curanga fel-terrae Merr.) pada Pasien Diabetes Mellitus. Journal of
Pharmaceutics and Pharmacology, (1)2: 113, 117.
Hasibuan, P. A. Z. (2014). Aktivitas Antioksidan dan Antikanker Ekstrak Daun

Bangun-Bangun (Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng.) Terhadap
Kanker Payudara Secara In Vitro dan In Vivo. Disertasi. Program Studi
Doktor Ilmu Farmasi USU. Hal. 80-85.
Hezer, S., Wijaya, I., dan Widjayahadi, N. (2014). Ekspresi Caspase 3 dan Ki-67
pada Adenokarsinoma Mammae Mencit C3H dengan Pemberian Ekstrak
Akar Salvia milthiorrhiza Bunge. J Indon Med Assoc, (64)5: 234-239.
IHCWorld. (2011). Standar Immunohistochemistry Staining Method Avidin

Biotion Complex (ABC) Method. Diunduh dari laman http://ihcworld.com
/protocols/general_IHC/standard_abc_method.htm. Diakses pada tanggal
21 Maret 2018.
43

Junqueira. (2014). Histologi Dasar. Edisi 12. Jakarta: EGC. Hal. 1-3, 12-13.
Juwita, N.A. (2009). Pengujian Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Pugun
Tano (Curanga fel- terrae Merr.) terhadap Mencit Putih. Skripsi. Medan:
Fakultas Farmasi USU.
Kumar., Abbas., dan Aster. (2013). Buku Ajar Patologi. Edisi 9. Singapura:
Elsevier Inc. Hal. 13-14, 329-335, 728-729.
Lapatta, N., Loho, L., dan Lintong, P. (2013). Gambaran Histopatologi Aorta
Tikus Wistar yang Terpapar Asap Rokok. Jurnal e-Biomedik, (1)2: 1021-
2022.
Nugroho, A. M., Ulfa, E., dan Rena, N. (2016). Pengaruh Gel Ekstrak dan Serbuk
Mentimun (Cucumis sativus) Terhadap Angiogenesis Pada Penyembuhan
Luka Bakar Derajat IIB Pada Tikus Wistar. E-Jurnal Pustaka Kesehatan,
(4)3: 443-447.
Patilaya, P., Husori, D. I., dan Sumantri, I. B. (2017). The Anthelmintic effects of
ethanol extract of Curanga fel-terrae leaves on Ascaridia galli. Asian
Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, (10)2: 118.
Perkeni. (2015). Pengelolaan dan Pencegahan Diabetes Mellitus Tipe 2 di

Indonesia. Jakarta: PB-Perkeni. Hal. 1, 28.
Redha, A. (2010). Flavonoid: Struktur, Sifat Antioksidatif, dan Peranannya dalan

Sistem Biologis. Jurnal Belian, (9)2: 196.
Selawa, W., Runtuwene, M. R. J., dan Citraningtyas, G. (2013). Kandungan

Flavonoid dan Kapasitas Antioksidan Total Ekstrak Etanol Daun
Binahong (Anredera cordifolia (T en.)Steenis.). Pharmacon: Jurnal
Ilmiah Farmasi, (2)1: 18.
Shams, A. S., Mohammed, M. H., Loka, M. M., dan Rahman, G. M. A. (2016).

Assessment of the Protective Role of Prenatal Zinc versus Insulin
Supplementation on Fetal Cardiac Damage Induced by Maternal Diabetic
in Rat Using Caspase-3 and Ki-67 Immunohitochemical Stains.
Cardiology Research and Practice, (16): 8.
Sibagariang, H. E. (2017). Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Puguntano

(Curanga fel-terrae Lour.) terhadap Kadar Superoxide Dismutase (SOD)
pada Penderita Diabetes Mellitus Tipe 2. Tesis. Program Magister
Kedokteran Klinik USU.
Soegondo, S., Pradana, S., dan Imam, S. (2004). Penatalaksanaan Diabetes

Melitus Terpadu. Jakarta: Balai Penerbit FKUI. Hal. 25, 38-39.
Stinggo, B., dan Dharma, L. (2017). Pengaruh Puguntano terhadap HOMA-IR

pada Pasien Diabetes Mellitus yang Baru di Diagnosis. Divisi Endokrin
dan Metabolik Departemen Ilmu Penyakit Dalam USU, (49)2: 70-71.
44

Sudiana, I. (2005). Teknologi Ilmu Jaringan dan Imunohistokimia. Jakarta: CV
Sagung Seto. Hal. 6, 24-27.
Suhatri., Netty, M., Delva, Y., dan Rahmi, Y. (2009). Efek Proteksi Fraksi Etil
Asetat Daun Surian (Toona sureni (Blume) Merr.) Terhadap
Aterosklerosis. Jurnal Sains Farmasi dan Klinis, (1)1: 10-19.
Warsito dan Wuryastuti. (2014). Antibodi dan Imunohistokimia. Yogyakarta:

Rapha Publishing. Hal. 46-51.
World Health Organization. (1992). Quality Control Methods For Medicinal

Plant Material. Switherland: WHO.
Zou, J. M., Wang, L. S., Ma, X. M., Guo, Y. J., dan Shi, R. B. (2006). A new
Cucurbitacin from Picria fel-terrae. US National Library of Medicine,
(8)4: 367-371.
45

Lampiran 1. Surat rekomendasi persetujuan etik penelitian kesehatan
46

Lampiran 2. Surat hasil identifikasi tumbuhan
47

Lampiran 3. Gambar makroskopik herba puguntano
B C
Keterangan:
A: herba puguntano segar
B: simplisia herba puguntano
C: serbuk simplisia herba puguntano
48

Lampiran 4. Bagan pembuatan simplisia
Herba Puguntano
Dicuci dari pengotor sampai bersih
Ditiriskan
Dipotong kecil-kecil
Ditimbang berat basah
Dikeringkan
Ditimbang berat kering
Simplisia
Dihaluskan dengan blender
Disimpan
Serbuk Simplisia
49

Lampiran 5. Bagan pembuatan ekstrak
Serbuk Simplisia Herba

Puguntano 600 g
Dimasukkan kedalam bejana
Ditambahkan etanol 96% 4,5 liter
Didiamkan selama 5 hari dengan sesekali

pengadukan tanpa terkena sinar matahari
Disaring, ampas diperas dan dicuci

dengan 1,5 liter etanol 96%
Filtrat Residu
Dimasukkan kedalam rotary evaporator
Ekstrak Etanol Residu
Diuapkan diatas penangas air
Ekstrak Kental
95,395 g
50

Lampiran 6. Perhitungan pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia herba
puguntano
1. Perhitungan kadar air serbuk simplisia herba puguntano
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙 (𝑚𝑙)

% = Kadar etanol simplisia = x 100%
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑔)
No. Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml)
1. 3, 0030 1,15 1,30
2. 3, 0024 1,30 1,50
3. 3, 0009 1,50 1,65
1 30 ; 1 15
a. Kadar air = x 100% = 4,99%
3 0030
1 50 ;1 30
b. Kadar air = x 100% = 6,66 %
3 0024
1 65 ;1 50
c. Kadar air = x 100% = 4,99%
3 0009
4 99 :6 66 :4 99
% Rata-rata = = 5,54%
3
2. Perhitungan kadar sari larut dalam air
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑟𝑖 (𝑔) 100

% = Kadar sari larut dalam air = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑔) x x 100%
20
No. Berat sampel (g) Berat sari (g)

1. 5,0129 0,1813
2. 5,0118 0,2136
3. 5,0120 0,1619
0 1813 100
a. Kadar sari larut dalam air = 5 0129 100% = 18,08%
20
0 2136 100
b. Kadar sari larut dalam air = 5 0118 100% = 21,30%
20
0 1619 100
c. Kadar sari larut dalam air = 5 0120 100% = 16,15%
20
18 08 :21 30 :16 15
% Rata-rata kadar sari larut dalam air = = 18,51%
3
51

Lampiran 6. (Lanjutan)
3. Perhitungan kadar sari larut dalam etanol

𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑟𝑖 (𝑔) 100
% = Kadar sari larut dalam etanol = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑔) x x 100%
20
No. Berat sampel (g) Berat sari (g)

1. 5,0180 0,0742
2. 5,0183 0,0750
3. 5,0183 0,0674
0 0742 100
a. Kadar sari larut dalam etanol = 5 0180 100% = 7,39%
20
0 0750 100
b. Kadar sari larut dalam etanol = 5 0183 100% = 7,47%
20
0 0674 100
c. Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 6,71%
5 0183 20
7 39 :7 47 :6 71
% Rata-rata kadar sari larut dalam etanol = = 7,19%
3
4. Perhitungan kadar abu total
berat abu (g)

% Kadar abu total = berat simplisia (g) 100%
No. Berat sampel (g) Berat abu (g)

1. 1,0026 0,0892
2. 1,0569 0,0846
3. 1,0221 0,0861
0 0892
1. Kadar abu total = 1 0026 100% = 8,89%
0 0846
2. Kadar abu total = 1 0569 100% = 8,00%
0 0861
3. Kadar abu total = 1 0221 100% = 8,42%
8 89 :8 00 : 8 42
% Rata-rata kadar abu total = = 8,43%
3
52

5. Perhitungan kadar abu simplisia tidak larut dalam asam
berat abu (g)

% Kadar abu tidak larut dalam asam = berat simplisia (g) x 100%
No. Berat sampel (g) Berat abu (g)

1. 1,0026 0,0071
2. 1,0569 0,0047
3. 1,0221 0,0059
0 0071
1. Kadar abu tidak larut dalam asam = 1 0026 x 100% = 0,70%
0 0047
0 0059
0 70 :0 44 :0 57
% Rata-rata kadar abu tidak larut dalam asam = = 0,57%
3
53

Lampiran 7. Contoh perhitungan dosis
Tabel konversi dosis antara jenis hewan dengan manusia
Dosis pada hewan yang dicari

Dosis
Men Kelin Manu
yang Tikus Marmot Kucing Kera Anjing
cit ci sia
diket
20 g 200 g 400 g 1,5 kg 2,0 kg 4 kg 12 kg 70 kg
Mencit 1,0 7,0 12,25 27,8 29,7 64,1 124,2 387,9
Tikus 0,14 1,0 1,74 3,3 4,2 9,21 17,8 56,0
Marmot 0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5
Kelinci 0,04 0,25 0,44 1,0 1,06 2,4 4,5 14,2
Kucing 0,03 0,23 0,41 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0
0,01
Kera 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1
6
0,00
Manusia 0,018 0,031 0,07 0,076 0,16 0,32 1,0
26
1. Perhitungan dosis ekstrak etanol herba puguntano (EEHP)
- Dosis suspensi EEHP yang akan dibuat adalah 200 mg/kgBB
Dihitung dosis yang diperlukan, yaitu: 200 mg/kgBB/ 1 ml/ tikus
BB = 200 gram = 0,2 kg
Dosis 200 mg/kgBB x 0,2 kgBB = 40 mg / 1 ml/ tikus
Untuk 3 tikus maka: 40 mg x 3 = 120 mg
Untuk 7 hari maka : 120 mg x 7 = 840 mg
Aquades : 1 tikus = 1 ml
3 tikus = 3 ml
Untuk 7 hari maka: 3 ml x 7 = 21 ml
- Cara pembuatan suspensi EEHP :
- Ditimbang ekstrak
- Ditambahkan CMC-Na 1 % secukupnya sebagai emulgator
- Digerus hingga homogen
- Ditambahkan aquades sampai batas kalibrasi perhitungan dosis.
54

2. Perhitungan dosis metformin
- Dosis Manusia = 500 mg
Nilai konversi dosis manusia ke dosis tikus = 0,018
Maka, dosis untuk 200 gram tikus = 500 mg x 0,018 = 9 mg

1000
Maka dosis untuk 1 kg tikus = 200
- Menurut FI edisi III keseragaman bobot = 20 tablet, maka diambil 20
tablet metformin, digerus dan ditimbang berat totalnya = 9521 mg
- Berat bahan aktif metformin dalam 20 tablet metformin:
500 mg/tab x 20 tab = 10000 mg
9521
- Serbuk tablet metformin yang ditimbang: 10000 45 mg
X = 43 mg/kgBB
Maka: 43mg/kgBB x 0,2 kg = 8,6 mg metformin/ tikus
Untuk 3 tikus = 8,6 mg/ tikus x 3 tikus = 25,8 mg ≈ 26 mg
Untuk 7 hari = 26 mg x 7 = 182 mg metformin
Aquades: Untuk 7 hari = 1 ml x 7 = 7 ml
Untuk 3 tikus = 7 ml x 3 = 21 ml
- Cara pembuatan suspensi metformin :
Ditimbang 182 mg metformin dilarutkan dalam 21 ml aquades
3. Perhitungan larutan streptozotocin untuk diinduksi secara

intraperitoneal (i.p)
- Dosis STZ untuk tikus = 35 mg/kgBB/ 0,5ml
- Cara pembuatan :
Dihitung dosis yang diperlukan, yaitu :
55

35 mg/kgBB x 0,2 kgBB = 7 mg
Untuk 9 tikus maka : 7 mg x 9 = 63 mg
Aquades: untuk 1 tikus = 0,5 ml
untuk 9 tikus = 0,5 ml x 9 = 4,5 ml
- Ditimbang STZ
- Ditambahkan aquades dan kocok hingga larut
4. Perhitungan larutan ketamin untuk menganastesi tikus
- Dosis ketamin yang akan diberikan = 70 mg/kgBB
- Ketamin yang digunakan dalam bentuk larutan injeksi berupa vial
sebanyak 10 ml, dimana tiap ml nya mengandung sebanyak 100 mg
ketamin
- Jumlah ketamin yang diberikan 70 mg/kgBB x 0,2 kg = 14 mg

14
Maka jumlah ketamin yang diambil: 100 ml/ tikus
- Ketamin 0,14 ml dilarutkan dalam larutan fisiologis NaCl 0,9% sebanyak
0,3 ml
- Volume ketamin yang diberikan pada tikus 0,14 ml + 0,3 ml = 0,44 ml
56

Lampiran 8. Hasil analisis data statistik ekspresi Ki-67
1. Uji Deskriptif
Descriptives
skor Ki-67
N Mean Std. Std. 95% Confidence Min Max
Deviation Error Interval for Mean
Lower Upper
Bound Bound
CMC-Na 3 9.833 3.5119 2.0276 1.109 18.557 6.5 13.5
Metformin 3 30.167 2.8431 1.6415 23.104 37.229 27.0 32.5
EEHPT 3 47.000 4.4441 2.5658 35.960 58.040 43.5 52.0
Normal 3 78.000 3.5000 2.0207 69.306 86.694 75.5 82.0
Total 12 41.250 26.2596 7.5805 24.565 57.935 6.5 82.0
2. Uji Normalitas
Tests of Normality
perlakuan Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk
thd tikus Statistic df Sig. Statistic df Sig.
CMC-Na .204 3 . .993 3 .843
Metformin .282 3 . .936 3 .510
skor Ki-67
EEHPT .299 3 . .915 3 .433
Normal .333 3 . .862 3 .274
a. Lilliefors Significance Correction
3. Uji ANOVA
ANOVA
skor Ki-67
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 7480.417 3 2493.472 190.281 .000
Within Groups 104.833 8 13.104
Total 7585.250 11
57

4. Uji Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
Dependent Variable: skor Ki-67
(I) (J) Mean Std. Sig. 95% Confidence
perlakuan perlakuan Differenc Error Interval
thd tikus thd tikus e (I-J) Lower Upper
Bound Bound
Metformin -20.3333* 2.9557 .001 -29.798 -10.868
CMC-Na EEHPT -37.1667* 2.9557 .000 -46.632 -27.702
Normal -68.1667* 2.9557 .000 -77.632 -58.702
CMC-Na 20.3333* 2.9557 .001 10.868 29.798
Metformin EEHPT -16.8333* 2.9557 .002 -26.298 -7.368
Tukey Normal -47.8333* 2.9557 .000 -57.298 -38.368
HSD CMC-Na 37.1667* 2.9557 .000 27.702 46.632
EEHPT Metformin 16.8333* 2.9557 .002 7.368 26.298
Normal -31.0000* 2.9557 .000 -40.465 -21.535
CMC-Na 68.1667* 2.9557 .000 58.702 77.632
Normal Metformin 47.8333* 2.9557 .000 38.368 57.298
EEHPT 31.0000* 2.9557 .000 21.535 40.465
Metformin -20.3333* 2.9557 .000 -27.149 -13.517
CMC-Na EEHPT -37.1667* 2.9557 .000 -43.983 -30.351
Normal -68.1667* 2.9557 .000 -74.983 -61.351
CMC-Na 20.3333* 2.9557 .000 13.517 27.149
Metformin EEHPT -16.8333* 2.9557 .000 -23.649 -10.017
Normal -47.8333* 2.9557 .000 -54.649 -41.017
LSD
CMC-Na 37.1667* 2.9557 .000 30.351 43.983
EEHPT Metformin 16.8333* 2.9557 .000 10.017 23.649
Normal -31.0000* 2.9557 .000 -37.816 -24.184
CMC-Na 68.1667* 2.9557 .000 61.351 74.983
Normal Metformin 47.8333* 2.9557 .000 41.017 54.649
EEHPT 31.0000* 2.9557 .000 24.184 37.816
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
58

59

PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL HERBA

PUGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) TERHADAP

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

Diajukan untuk melengkapi salah satu syarat untuk memperoleh

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

Universitas Sumatera Utara

Universitas Sumatera Utara

sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi yang

berjudul Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Herba Puguntano (Picria fel-terrae

Pada kesempatan ini dengan ketulusan hati, penulis tidak lupa

melakukan penelitian di Laboratorium Farmakognosi Fakultas Farmasi

Universitas Sumatra Utara.

Penulis juga menyampaikan ucapan terimakasih kepada Ibu Dr. Poppy

membimbing penulis dengan penuh kesabaran selama penelitian hingga

selesainya penulisan skripsi ini.

memberikan masukan dan saran atas skripsi ini.

Penulis mengucapkan terimakasih kepada Bapak Popy Patilaya, S.Si.,

selama duduk di bangku perkuliahan.

Universitas Sumatera Utara

Penulis juga berterimakasih kepada teman-teman seperjuangan penulis

Nicolas Maruli Simanungkalit, serta rekan-rekan Farmasi angkatan 2014 yang

telah memberikan semangat dan doa serta kebersamaannya selama ini.

dapat bermanfaat bagi kita semua.

Medan, Mei 2018

Universitas Sumatera Utara

Saya yang bertandatangan dibawah ini :

Nama : Yolanda Kristine

Nomor Induk Mahasiswa : 141501173

Program Studi : S-1 Reguler Farmasi

Judul Skripsi : Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol Herba

Medan, Mei 2018

Universitas Sumatera Utara

Diabetes melitus dapat menyebabkan perubahan struktur dan fungsi

Universitas Sumatera Utara

Diabetes mellitus causes alterations in vascular structure and function

Keywords : Puguntano (Picria fel-terrae Lour.), aorta histopatology, Ki-67

Universitas Sumatera Utara

LEMBAR PENGESAHAN ..................................................................... iii

KATA PENGANTAR ............................................................................. iv

SURAT PERNYATAAN TIDAK PLAGIAT ......................................... v

ABSTRAK ............................................................................................... vii

ABSTRACT ............................................................................................. viii

DAFTAR ISI ............................................................................................ ix

DAFTAR TABEL .................................................................................... xiv

DAFTAR GAMBAR ............................................................................... xv

DAFTAR GRAFIK .................................................................................. xvi

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................ xvii

BAB I PENDAHULUAN ................................................................... 1

1.1 Latar Belakang .................................................................. 1

1.2 Rumusan Masalah ............................................................ 5

1.3 Hipotesis ........................................................................... 5

1.4 Tujuan Penelitian .............................................................. 5

1.5 Manfaat Penelitian ............................................................ 6

1.6 Kerangka Pikir Penelitian ................................................. 6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .......................................................... 8

2.1 Uraian Tumbuhan .............................................................. 8

2.1.1 Sistematika Tumbuhan ............................................ 8

Universitas Sumatera Utara

2.1.3 Morfologi Tumbuhan .............................................. 9

2.1.4 Kandungan Kimia Tumbuhan ................................. 9

2.1.5 Khasiat Tumbuhan ................................................... 9

2.2 Simplisia ............................................................................ 10