Metode Pemeriksaan HbA1c

TESIS
PENGARUH KOMBINASI EKSTRAK DAUN PIRDOT

(Saurauia vulcani Korth.) DAN HERBA POGUNTANO (Picria
fel-terrae Lour.) TERHADAP KADAR SOD, HbA1c, EKSPRESI
INSULIN PADA TIKUS HIPERGLIKEMIA
OLEH :
CHEMAYANTI SURBAKTI
NIM 167014007
PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2019
i
Universitas Sumatera Utara
TESIS
Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

Gelar Magister dalam Ilmu Farmasi pada Fakultas Farmasi
OLEH:
CHEMAYANTI SURBAKTI
NIM 167014007
PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2019
ii
LEMBAR PERSETUJUAN TESIS

OLEH:
CHEMAYANTI SURBAKTI
NIM 167014007
Medan, 22 Januari 2019

Disetujui Oleh:
Komisi Pembimbing, Komisi Penguji,
Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt. Dr. Poppy Anjelisa Z. Hasibuan, M.Si., Apt.
NIP 195310301980031002 NIP 197506102005012003
Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt.
NIP 195103261978022001 NIP 195709091985112001
Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt.

NIP 195310301980031002
Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.

NIP 195103261978022001
Mengetahui: Disahkan oleh:

Ketua Program Studi, Dekan,
Prof. Dr. Urip Harahap., Apt. Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt.
NIP 195301011983031004 NIP 195707231986012001
iii
LEMBAR PENGESAHAN TESIS
Nama Mahasiswa : Chemayanti Surbakti
Nomor Induk Mahasiswa : 167014007
Program Studi : Magister Farmasi
Judul Tesis : Pengaruh Kombinasi Ekstrak Daun Pirdot

(Saurauia vulcani Korth.) dan Herba
Poguntano (Picria fel-terrae Lour.) terhadap
Kadar SOD, HbA1c, Ekspresi Insulin pada
Tikus Hiperglikemia
Telah diuji dan dinyatakan LULUS di depan Komisi Penguji Tesis pada
hari Selasa tanggal dua puluh dua bulan Januari tahun dua ribu sembilan belas.
Mengesahkan:
Komisi Penguji Tesis
Ketua Komisi Penguji : Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt.
Sekretaris Komisi Penguji : Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.
Anggota Komisi Penguji : Dr. Poppy Anjelisa Z. Hasibuan, M.Si., Apt.
Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt
iv
SURAT PERNYATAAN
Saya yang bertanda tangan dibawah ini:
Nama Mahasiswa : Chemayanti Surbakti
Nomor Induk Mahasiswa : 167014007
Program Studi : Magister Farmasi
Judul Tesis : Pengaruh Kombinasi Ekstrak Daun Pirdot

(Saurauia vulcani Korth.) dan Herba
Poguntano (Picria fel-terrae Lour.) terhadap
Kadar SOD, HbA1c, Ekspresi Insulin pada
Tikus Hiperglikemia
Dengan ini menyatakan bahwa tesis yang saya buat adalah asli karya saya
sendiri, bukan plagiat dan apabila dikemudian hari diketahui tesis saya tersebut
plagiat karena kesalahan saya sendiri maka saya bersedia diberi sanksi apapun
oleh Program Studi Magister Farmasi Fakultas Farmasi USU. Saya tidak akan
menuntut pihak manapun atas perbuatan saya tersebut.
Demikian surat pernyataan ini saya perbuat dengan sebenarnya dan dalam
keadaan sehat.

Yang membuat pernyataan,
Chemayanti Surbakti
NIM 167014007
v
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang telah memberikan
karunia yang berlimpah sehingga penulis dapat menyelesaikan tesis dengan judul
“PENGARUH KOMBINASI EKSTRAK DAUN PIRDOT (Saurauia vulcani
Korth.) DAN HERBA POGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) TERHADAP
KADAR SOD, HbA1c, EKSPRESI INSULIN PADA TIKUS
HIPERGLIKEMIA”. Tesis ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk
memperoleh gelar Magister Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sumatera
Utara. Selama menyelesaikan penelitian dan tesis ini, penulis telah banyak
mendapatkan bantuan dan dorongan dari berbagai pihak baik moril maupun
materil. Untuk itu penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya
kepada:
1. Bapak Rektor Prof. Dr. Runtung, S.H., M.Hum. selaku Rektor Universitas
Sumatera Utara, yang telah memberikan kesempatan dan fasilitas kepada
penulis untuk mengikuti dan menyelesaikan Program Studi Magister.
2. Ibu Prof. Dr. Masfria, M.S., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas
Sumatera Utara, yang telah menyediakan fasilitas kepada penulis untuk
mengikuti dan menyelesaikan Program Studi Magister di Fakultas Farmasi.
3. Bapak Prof. Dr. Urip Harahap, Apt. selaku Ketua Program Studi Magister
Farmasi dan Ibu Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt. selaku Sekretaris Program
Studi Magister Farmasi yang telah banyak memberikan motivasi dan
bimbingan sehingga penulis dapat menyelesaikan pendidikan ini.
4. Bapak Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt. dan Ibu Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.
selaku ketua dan anggota komisi pembimbing yang telah banyak membantu
vi
memberikan saran, koreksi dan bimbingan kepada penulis dalam
menyelesaikan tesis ini.
5. Ibu Dr. Marline Nainggolan., M.Si., Apt. dan Ibu Dr. Poppy Anjelisa Z.
Hasibuan, S.Si, M.Si., Apt. selaku anggota komisi penguji yang telah banyak
memberikan saran, dan koreksi kepada penulis dalam menyelesaikan tesis ini.
6. Bapak dan Ibu staf pengajar Program Studi Magister Farmasi atas
bimbingannya selama penulis menjalani pendidikan.
7. Suami saya Sugih Yarto, S.T. dan anak kami tercinta Dyandra Athaya
Sugema yang telah mendoakan saya tanpa henti serta memberi dukungan dan
semangat kepada penulis dalam menjalani pendidikan, penelitian dan
penyelesaian tesis ini.
8. Rekan-rekan Program Studi Magister Farmasi atas kerjasama, bantuan, doa
dan kekompakannya selama pendidikan dan seluruh teman-teman yang tidak
dapat penulis sebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa tesis ini masih banyak kekurangan dan perlu
mendapatkan masukan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis berharap
adanya kritik dan saran membangun demi kesempurnaan tesis ini.

Penulis,
Chemayanti Surbakti
NIM 167014007
vii
ABSTRAK
Diabetes melitus (DM) adalah penyakit kronis yang disebabkan oleh

ketidakmampuan tubuh untuk memproduksi hormon insulin atau karena
penggunaan yang tidak efektif dari insulin. Hiperglikemia persisten akan
menyebabkan peningkatan produksi radikal bebas terutama reactive oxygen
species (ROS). Superoxide Dismutase (SOD) merupakan enzim yang berperan
sebagai antioksidan dengan menangkap salah satu ROS yaitu anion superoksida.
HbA1c juga merupakan pemeriksaan terbaik untuk menilai risiko terhadap
kerusakan jaringan yang disebabkan oleh tingginya kadar glukosa darah. Daun
pirdot dan herba poguntano digunakan untuk mengobati berbagai penyakit salah
satunya sebagai antidiabetes. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh
kombinasi ekstrak daun pirdot dan herba poguntano terhadap kadar SOD, HbA1c,
ekspresi insulin pada tikus yang diinduksi NA dan STZ.
Serbuk simplisia daun pirdot dan herba poguntano diekstraksi dengan
metode maserasi dengan pelarut etanol 96%. Pengujian dilakukan terhadap tikus
jantan, yang terdiri dari 8 kelompok. Kelompok 1 sebagai kontrol negatif
diberikan Na-CMC 0,5 %, kelompok 2 diberikan EEDP 100 mg/kg bb, kelompok
3 diberikan EEHP 100 mg/kg bb, kelompok 4 diberikan EEDP:EEHP (25:75)
mg/kg bb, kelompok 5 diberikan EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb, kelompok 6
diberikan EEDP:EEHP (75:25) mg/kg bb, kelompok 7 sebagai kontrol positif
yang diberikan glibenklamid dosis 0,45 mg/kg bb, dan kelompok 8 sebagai
kelompok normal.
Hasil analisis statistik menunjukkan bahwa pemberian kombinasi EEDP
dan EEHP menunjukkan efek penurunan kadar glukosa darah (KGD) tikus yang
tidak berbeda signifikan dibandingkan kelompok kontrol positif (p < 0,05), dari
hasil pengujian kelompok perlakuan kombinasi 75:25 mg/kg bb yang paling
maksimal menurunkan KGD sebesar 258,5 mg/dL. Kombinasi EEDPP dan EEHP
(75:25) dapat meningkatkan kadar SOD maksimal sebesar 67,75 pg/mL. EEDP
dan EEHP (50:50) mg/kg bb berpengaruh menurunkan konsentrasi HbA1c,
dimana konsentrasi HbA1c pada kelompok yang diberi ekstrak kombinasi sebesar
25,87 ng/mL yang menunjukkan tidak terdapat perbedaan yang signifikan dengan
kelompok EEDP:EEHP (75:25) dan normal. Ekspresi insulin pada sel beta
Langerhans pankreas EEDP:EEHP (75:25) memiliki persentase ekspresi insulin
tertinggi sebesar 80,00% dengan jumlah ekspresi insulin 160 sel/lapang.
Kata kunci: HbA1c, Insulin, Picria fel-terrae Lour., Saurauia vulcani, Korth.,
SOD.
viii
TEST COMBINATION STUDY OF EEFECT EXTRACT OF
PIRDOT LEAVES (Saurauia vulcani Korth.) AND
POGUNTANO HERBS (Picria fel-terrae Lour.) AGAINST SOD,
HbA1c LEVELS, INSULIN EXPRESSION IN
HYPERGLYCEMIA RATS
ABSTRACT
Diabetes mellitus (DM) is a chronic disease caused by the body inability

to produce the hormone insulin or because of ineffective use of insulin. Persistent
hyperglycemia will cause increased production of free radicals, especially reactive
oxygen species (ROS). Superoxide Dismutase (SOD) is an enzyme that acts as an
antioxidant by capturing one of the ROS, namely superoxide anion. HbA1c is also
the best test to assess the risk of tissue damage caused by high blood sugar levels.
Pirdot leaves and poguntano herbs are used to treat various diseases, one of which
is antidiabetic. This study aims to determine the effect of the combination of
pirdot leaf extract and poguntano herbs on the levels of SOD, HbA1c, insulin
expression in NA and STZ induced rats.
Pirdot leaf simplicia powder and poguntano herb were extracted using
96% ethanol maceration solvent method. Tests were carried out on male rats,
which consisted of 8 groups. Group 1 as a negative control was given 0.5% Na-
CMC, group 2 was given EEDP 100 mg / kg bw, group 3 was given EEHP 100
mg / kg bw, group 4 was given EEDP: EEHP (25:75) mg / kg bw, group 5 was
given EEDP: EEHP (50:50) mg / kg bw, group 6 was given EEDP: EEHP (75:25)
mg / kg bw, group 7 as positive control given glibenclamide dose 0.45 mg / kg
bw, and group 8 as a normal group.
The results of the statistical analysis showed that the combination of
EEDP and EEHP showed the effect of decreasing blood glucose levels (KGD) in
rats that did not differ significantly compared to the positive control group (p
<0.05), from the results of group testing of combination treatments 75:25 mg / kg
bw the maximum reduces KGD by 258.5 mg / dL. The combination of EEDPP
and EEHP (75:25) can increase SOD levels to a maximum of 67.75 pg / mL.
EEDP and EEHP (50:50) mg / kg bw had an effect on reducing the concentration
of HbA1c, where the concentration of HbA1c in the group given combination
extract was 25.87 ng / mL which showed no significant difference with the EEDP
group: EEHP (75:25) and normal. Insulin expression in Langerhans pancreatic
beta cells EEDP: EEHP (75:25) has the highest percentage of insulin expression at
80.00% with 160 cell / field insulin expression.
Keywords: HbA1c, Insulin, Picria fel-terrae Lour., Saurauia vulcani, Korth.,
SOD.
ix
DAFTAR ISI
Halaman
JUDUL ....................................................................................................... i
LEMBAR PERSETUJUAN TESIS ........................................................... iii
LEMBAR PENGESAHAN TESIS ............................................................ iv
SURAT PERNYATAAN ........................................................................... v
KATA PENGANTAR ............................................................................... vi
ABSTRAK ................................................................................................. viii
ABSTRACT ............................................................................................... ix
DAFTAR ISI .............................................................................................. x
DAFTAR TABEL ...................................................................................... xvi
DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xviii
DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................. xx
DAFTAR SINGKATAN ........................................................................... xxi
BAB I PENDAHULUAN ....................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .................................................................... 1
1.2 Perumusan Masalah ............................................................ 6
1.3 Hipotesis ............................................................................. 6
1.4 Tujuan Penelitian ................................................................. 7
1.5 Manfaat Penelitian .............................................................. 7
1.6 Kerangka Pikir Penelitian ................................................... 8
BAB II TINJAUAN PUSTAKA .............................................................. 9
2.1 Diabetes Melitus ................................................................. 9
2.1.1 Klasifikasi Diabetes Melitus ................................ 9
2.1.2 Penyebab Diabetes ............................................... 10
x
2.1.3 Diagnosis diabetes ................................................ 11
2.1.4 Manajemen Pengobatan Diabetes Melitus ........... 11
2.1.5 Komplikasi Diabetes Melitus ............................... 14
2.1.5.1 Hipoglikemia ............................................ 14
2.1.5.2 Retinopati diabetik ................................... 15
2.1.5.3 Nefropati diabetik ..................................... 15
2.1.5.4 Neuropati diabetik .................................... 15
2.1.5.5 Gangguan pada pembuluh darah .............. 16
2.1.5.6 Gangguan fungsi jantung ......................... 16
2.1.6 Kadar Glukosa ...................................................... 16
2.1.6.1 Penilaian Pengontrolan Glukosa Darah ..... 16
2.1.7 Insulin ................................................................... 17
2.2 Pembentukan Senyawa Oksigen Reaktif pada

Diabetes Melitus ................................................................. 19
2.3 SOD (Superoxide Dismutase) ............................................. 19
2.4 Hemoglobin glikosilat (HbA1c) ......................................... 22
2.4.1 Definisi HbA1c .................................................... 22
2.4.2 Pembentukan HbA1c ............................................ 22
2.4.3 Metode Pemeriksaan ............................................ 24
2.5 Induksi Nicotinamida-Streptozotosin ................................. 25
2.5.1 Mekanisme Streptozotosin Menginduksi

Diabetes Melitus ................................................... 25
2.5.2 Mekanisme Nicotinamida Melindungi Sel Beta

Pankreas ............................................................... 26
2.6 Glibenklamid ...................................................................... 27
2.7 Uraian Tumbuhan ............................................................... 28
xi
2.7.1 Sistematika Tumbuhan ......................................... 28
2.7.2 Nama Daerah ........................................................ 29
2.7.3 Morfologi Tumbuhan ........................................... 29
2.7.4 Kandungan Kimia ................................................ 31
2.7.4.1 Flavonoida ................................................ 31
2.7.4.2 Tanin ......................................................... 31
2.7.4.3 Saponin ..................................................... 32
2.7.4.4 Steroida/triterpenoida ............................... 32
2.7.4.5 Glikosida .................................................. 32
2.8 Ektraksi ............................................................................... 32
2.9 Metode ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) .... 34
2.10 Imunohistokimia ................................................................. 36
2.11 Kerangka Teori Penelitian .................................................. 37
BAB III METODE PENELITIAN ............................................................ 39
3.1 Alat – alat ........................................................................... 39
3.2 Bahan – bahan .................................................................... 40
3.3 Pembuatan Pereaksi ............................................................ 40
3.3.1 Pereaksi Bouchardat ............................................. 40
3.3.2 Pereaksi Dragendorff ............................................ 40
3.3.3 Pereaksi Mayer ..................................................... 40
3.3.4 Pereaksi Besi (III) Klorida 1% b/v ....................... 41
3.3.5 Pereaksi Molisch .................................................. 41
3.3.6 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M ........................ 41
3.3.7 Pereaksi Asam Klorida 2 N .................................. 41
3.3.8 Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N ........................ 41
xii
3.3.9 Pereaksi Asam Sulfat 2 N ..................................... 41
3.3.10 Pereaksi Liebermann-Burchard ............................ 41
3.3.11 Larutan Kloralhidrat ............................................. 41
3.3.12 Buffer Formalin .................................................... 42
3.4 Penyiapan Sampel .............................................................. 42
3.4.1 Pengumpulan Bahan Tumbuhan .......................... 42
3.4.2 Identifikasi Tumbuhan ......................................... 42
3.4.3 Pembuatan Simplisia ............................................ 42
3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia .................................. 42
3.5.1 Pemeriksaan Makroskopik dan Organoleptik ...... 43
3.5.2 Pemeriksaan Mikroskopik .................................... 43
3.5.3 Penetapan Kadar Air ............................................ 43
3.5.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air ................. 44
3.5.5 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol ........... 44
3.5.6 Penetapan Kadar Abu Total ................................. 45
3.5.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Dalam Asam . 45
3.6 Skrining Fitokimia Simplisia .............................................. 45
3.6.1 Pemeriksaan Flavonoid ........................................ 45
3.6.2 Pemeriksaan Alkaloid .......................................... 46
3.6.3 Pemeriksaan Saponin ........................................... 47
3.6.4 Pemeriksaan Tanin ............................................... 47
3.6.5 Pemeriksaan Glikosida ......................................... 47
3.6.6 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid ........................ 48
3.7 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Pirdot (EEDP) dan

Ekstrak Etanol Herba Poguntano (EEHP) .......................... 48
xiii
3.8 Pembuatan Sediaan Uji ....................................................... 48
3.8.1 Sediaan Suspensi Na-CMC 0,5% ......................... 48
3.8.2 Pembuatan Suspensi Glibenklamid ...................... 49
3.8.3 Pembuatan Larutan Nicotinamida (NA) .............. 49
3.8.4 Pembuatan Larutan Streptozotosin (STZ) ............ 49
3.8.5 Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Pirdot

(EEDP) dan Ektrak Etanol Herba
Poguntano (EEHP) ............................................... 49
3.9 Penyiapan Hewan Uji ......................................................... 49
3.10 Pengujian Efek Antidiabetes Ekstrak Etanol Daun Pirdot

(EEDP) dan Ekstrak Etanol Herba Poguntano (EEHP) ...... 50
3.10.1 Pengukuran Kadar Glukosa Darah (KGD) ........... 50
3.10.2 Penginduksian Hewan Uji .................................... 50
3.11 Uji Aktivitas Antidiabetes Kombinasi EEDP dan EEHP ... 50
3.12 Penetapan Kadar SOD dan HbA1c...................................... 51
3.12.1 Pengambilan Plasma Darah Tikus ........................ 51
3.12.2 Pembuatan Larutan Uji ......................................... 52
3.12.2.1 Pembuatan Larutan Wash Buffer ............ 52
3.12.2.2 Pembuatan Larutan Standar ................... 52
3.12.2.3 Pembuatan Larutan Antibodi Biotin ...... 52
3.12.2.4 Pembuatan Larutan Horseradish

Peroxidase (HRP)–Streptavidin
Conjugate (SABC)................................ 52
3.12.3 Pengukuran kadar SOD, Insulin dan HbA1c ....... 52
3.13 Pengujian Ekspresi Insulin dengan Metode

Imunohistokimia ............................................................... 53
3.14 Analisis Data ...................................................................... 55
xiv
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................... 56
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan .............................................. 56
4.2 Karakterisasi Simplisia ....................................................... 56
4.2.1 Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia Daun

Pirdot (Saurauia vulcani Korth.) .......................... 56
4.2.2 Hasil Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Herba

Poguntano ............................................................. 58
4.3 Hasil Ekstraksi .................................................................... 59
4.4 Hasil Skrining Fitokimia .................................................... 59
4.4.1 Hasil Skrining Fitokimia Daun Pirdot .................. 59
4.4.2 Hasil Skrining Fitokimia Herba Puguntano ......... 60
4.5 Hasil Pengujian Aktivitas Antidiabetes Kombinasi

EEDP dan EEHP ................................................................ 60
4.6 Pengaruh Kombinasi EEDP dan EEHP terhadap kadar

SOD pada tikus ................................................................... 80
4.7 Pengaruh Kombinasi EEDP dan EEHP terhadap kadar

HbA1c pada tikus ............................................................... 84
4.8 Ekspresi Insulin dengan Pewarnaan Imunohistokimia ....... 88
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ..................................................... 93
5.1 Kesimpulan ......................................................................... 93
5.2 Saran ................................................................................... 94
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................ 95
xv
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
2.1 Kriteria pengendalian DM ........................................................... 17
4.1 Hasil karakterisasi simplisia daun pirdot ..................................... 57
4.2 Hasil karakterisasi simplisia herba poguntano ............................. 58
4.3 Hasil skrining fitokimia simplisia dan EEDP .............................. 59
4.4 Hasil skrining fitokimia simplisia dan EEHP .............................. 60
4.5 Hasil pengukuran KGD puasa rata-rata tikus dan KGD

setelah diinduksi NA dan STZ ..................................................... 61
4.6 Hasil KGD rata-rata dan uji beda variasi perlakuan tikus
hari ke-4 ....................................................................................... 64
hari ke-8 ....................................................................................... 66
hari ke-12 ..................................................................................... 68
hari ke-16 ..................................................................................... 70
hari ke-20 ..................................................................................... 72
hari ke-24 ..................................................................................... 74
hari ke-28 ..................................................................................... 76
4.13 Absorbansi standar SOD ............................................................. 80
4.14 Konsentrasi SOD pada darah tikus ............................................. 81
4.15 Absorbansi standar HbA1c ......................................................... 85
4.16 Konsentrasi HbA1c pada darah tikus ........................................... 86
xvi
4.17 Perhitungan skor ekspresi insulin tikus ………. ......................... 88
4.18 Persentase skor ekspresi insulin pada Pulau Langerhans .......... 89
xvii
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1.1 Kerangka pikir penelitian ............................................................. 8
2.1 Skema pengaturan glukosa darah ................................................. 18
2.2 Mekanisme pertahanan antioksidan endogen SOD, katalase

dan glutation peroksidase terhadap radikal bebas ........................ 20
2.3 Pembentukan HbA1c ................................................................... 23
2.4 Struktur kimia streptozotosin dan nicotinamida .......................... 25
2.5 Skema aksi sitotoksik streptozotosin dan aksi proteksi

nicotinamida ............................................................................... 27
2.6 Tumbuhan (a) Pirdot; (b) Poguntano ........................................... 30
2.7 Kerangka Teori Penelitian ........................................................... 38
4.1 Grafik KGD tikus pada hari ke-0 ................................................. 61
4.4 Grafik KGD tikus pada hari ke-12 ............................................... 67
4.9 Grafik penurunan KGD ................................................................ 77
4.10 Kurva standar SOD ...................................................................... 81
4.11 Pengaruh kelompok perlakuan terhadap aktivitas SOD .............. 82
4.12 Kurva standar HbA1c .................................................................. 85
xviii
4.13 Pengaruh kelompok perlakuan terhadap konsentrasi HbA1c .. ... 87
4.14 Gambaran histopatologi pankreas dengan pengecatan

imunohistokimia .......................................................................... 90
xix
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1 Surat rekomendasi persetujuan etik penelitian kesehatan .......... 103
2 Surat hasil identifikasi tumbuhan ............................................... 104
3 Gambar tumbuhan daun pidot .................................................... 106
4 Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun pirdot................... 108
5 Gambar makroskopik herba poguntano ..................................... 109
6 Hasil pemeriksaan mikroskopik daun pirdot .............................. 110
7 Hasil pemeriksaan mikroskopik herba poguntano ..................... 111
8. Perhitungan pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia

daun pirdot dan herba puguntano .............................................. 112
9. Contoh perhitungan dosis .......................................................... 117
10. Hasil analisis data statistik pengukuran KGD ........................... 120
11. Gambar alat microplate reader dan reagen SOD ...................... 126
12. Data hasil pengukuran konsentrasi SOD sampel ....................... 127
13. Hasil analisis data statistik pengukuran konsentrasi SOD ........ 128
14. Gambar kit HbA1c dan reagen HbA1c ...................................... 129
15. Data hasil pengukuran HbA1c sampel ...................................... 130
16. Hasil analisis data statistik pengukuran HbA1c ........................ 131
17. Hasil analisis data statistik ekspresi insulin ............................... 132
xx
DAFTAR SINGKATAN
DM Diabetes melitus
ADA American Diabetes Association
IDF International Diabetes Federation
EEDP Ekstrak etanol daun pirdot
EEHP Ekstrak etanol herba poguntano
IHC Immunohistochemistry/Imunohistokimia
i.p. Intraperitoneal
KGD Kadar glukosa darah
NA Nicotinamide
STZ Streptozotosin
SOD Superoxide dismutase
HbA1c Hemoglobin A1c
ROS Reactive oxygen species
CAT Catalase
GSH Glutathione subhidril
GPx Glutathione peroxidase
Ab Antibodi
Ag Antigen
GLUT 2 Glucose transporter 2
GLUT 4 Glucose transporter 4
ELISA Enzyme Linked Immunosorbent Assay
DAB Dimetil amino benzaldehid
Na-CMC Natrium Carboxy methyl cellulose
ATP Adenosine triphosphate
NAD Nicotinamide adenine dinucleotide
ADP Adenosine diphosphate
NO Nitric oxide
DNA Deoxyribonucleic acid
AGEs Advanced Glycation End-Products
xxi
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Diabetes melitus (DM) adalah penyakit kronis yang disebabkan oleh
ketidakmampuan tubuh untuk memproduksi hormon insulin atau karena
penggunaan yang tidak efektif dari insulin. Hal ini ditandai dengan tingginya kadar
glukosa dalam darah (Tan dan Rahardja, 2002). Diabetes melitus merupakan
penyakit gangguan metabolik yang terkait dengan sejumlah komplikasi kronis
seperti nefropati, neuropati, retinopati dan kardiomiopati. Kondisi ini merupakan
akumulasi adanya kerusakan berbagai organ, bahkan termasuk penyakit yang
tergolong berisiko tinggi karena dapat menyebabkan kematian sehingga disebut
juga silent killer (Kuzuya et al., 2002).
Berdasarkan data menurut IDF menunjukkan bahwa pada tahun 2017,
jumlah populasi diabetes di dunia 415 juta orang, terjadi kenaikan empat kali lipat
dari 108 juta di tahun 1980. Pada tahun 2040 diperkirakan jumlahnya akan
menjadi 642 juta. Peningkatan jumlah penderita diabetes melitus juga terjadi di
Indonesia. Data pada tahun 2017 yang lalu, menunjukkan bahwa jumlah populasi
diabetes di Indonesia mencapai 10 juta jiwa, diperkirakan pada tahun 2030
prevalensi diabetes melitus di Indonesia mencapai 21,3 juta orang (IDF, 2017).
Keadaan hiperglikemia cenderung menimbulkan efek yang tidak baik bagi
kesehatan tubuh, sebab kadar glukosa darah yang tinggi cenderung mendorong
terbentuknya radikal bebas atau spesies oksigen reaktif melalui mekanisme
oksidasi reduksi dengan mendorong lebih banyak donor elektron ke dalam rantai
transport elektron di mitokondria (Brownlee, 2001). Hiperglikemia persisten
1
menyebabkan peningkatan produksi radikal bebas terutama reactive oxygen
species (ROS). Peningkatan kadar ROS pada diabetes bisa disebabkan oleh
produksi yang meningkat atau penurunan antioksidan nonenzimatik dan enzimatik:
superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) dan reduced glutathione (GSH).
Tingkat enzim antioksidan sangat mempengaruhi kerentanan berbagai jaringan
terhadap stres oksidatif dan berhubungan dengan perkembangan komplikasi
diabetes (Kangralkar et al., 2010).
Kadar glukosa darah yang baik belum dapat menggambarkan bahwa
regulasi glukosa darah juga sudah baik. Pemantauan status glikemik jangka
panjang penderita DM dapat dilakukan dengan suatu pengukuran protein terglikasi
dalam bentuk Hemoglobin A1c (HbA1c), dimana akan diketahui kualitas
pengendalian glukosa darah jangka panjang (Soegondo dkk, 2004). Kadar HbA1c
yang semakin tinggi menimbulkan komplikasi. Diabetes Control and
Complications Trial (DCCT) dan United Kingdom Prospective Diabetes Study
(UKPDS) mengungkapkan bahwa penurunan HbA1c akan banyak sekali
memberikan manfaat. Setiap penurunan HbA1c sebesar 1% akan mengurangi
risiko kematian akibat diabetes sebesar 21%. Menurut American Diabetes
Association (ADA) nilai sasaran kadar HbA1c pada pasien DM dewasa adalah
<7,0% sebagai tanda status kendali metabolik yang baik, pedoman umum untuk
mengurangi risiko komplikasi mikrovaskular (nefropati, neuropati, retinopati) dan
makrosvaskular (penyakit jantung koroner, penyakit serebrovaskuler, dan penyakit
vaskular perifer) (ADA, 2012).
Hiperglikemia diketahui merupakan penyebab utama peningkatan
konsentrasi radikal bebas pada pasien diabetes, sehingga dengan kontrol glikemik
yang lebih baik maka akan meningkatkan enzim antioksidan. Penelitian yang
2
dilakukan oleh Farah J. dkk (2013) mendapatkan korelasi positif yang signifikan
antara HbA1c dan SOD. Wan Ting Hsu dkk (2006) meneliti pada pasien DM
dengan HbA1c < 8,5 memiliki nilai rerata SOD yang lebih tinggi bila
dibandingkan dengan pasien DM dengan HbA1c ≥ 8,5. Sementara Ahmed dkk
(2016), menyimpulkan bahwa kontrol glikemik yang buruk pada diabetes
berhubungan dengan penurunan SOD.
Pemanfaatan obat tradisional terus meningkat dan berkembang dengan
pesat di masyarakat. Hal ini didukung oleh berbagai faktor dan isu yang
berkembang saat ini berupa sikap kembali ke alam (back to nature). Pemanfaatan
obat tradisional di berbagai daerah merupakan warisan turun temurun berdasarkan
pengalaman/empirik selanjutnya pembuktian ilmiah melalui uji praklinik dan uji
klinik. Untuk itu perlu dilakukan pengembangan obat tradisional secara
berkelanjutan dan terpadu sehingga kekayaan alam Indonesia dapat dimanfaatkan
secara maksimal untuk meningkatkan pelayanan masyarakat.
Salah satu tanaman yang berkhasiat sebagai antidiabetes adalah Pirdot
(Saurauia vulcani Korth.) salah satu tumbuhan liar di hutan Sumatera Utara.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Sitorus (2015), ekstrak etanol daun
pirdot dosis 200 mg/kg bb, menunjukkan hasil yang baik sebagai efek antidiabetes,
Penelitian Farid dkk (2012), diperoleh bahwa genus Saurauia memiliki efek
sebagai antioksidan dan antidiabetes. Penelitian tersebut juga menunjukkan bahwa
genus Saurauia mengandung bebeberapa metabolit sekunder seperti, flavonoid,
glikosida, terpenoid, steroid, saponin dan tanin.
Menurut Robertus, 2016, senyawa flavonoid yang terkandung dalam daun
pirdot diisolasi dengan metode ekstraksi dan pemisahan kromatrografi lapis tipis
menggunakan pengembang n-butanol: asam asetat: air dengan perbandingan 4:1:5
3
dan penjerap silika gel 60 F254 menghasilkan bercak noda flavonoid yang terisolasi
pada bilangan Rf 0,94 dan menunjukkan flavonoid yang ditelaah adalah golongan
isoflavon. Menurut Brahmachari, 2012, isoflavon bekerja menurunkan glukosa
darah dengan menginhibisi enzim α-glukosidase. Senyawa flavonoid yang
terkandung dalam daun pirdot memiliki potensi dalam penanganan diabetes karena
kemampuannya untuk menghentikan radikal bebas dan mengurangi stres oksidatif,
sehingga dapat mencegah kerusakan atau komplikasi lebih lanjut (Lavle et al.,
2016).
Tanaman poguntano (Picria fel-terrae Lour.) telah digunakan sebagai obat
tradisional merupakan tanaman yang banyak terdapat di Sumatera Utara dan
menjadi tanaman endemik yang digunakan sebagai obat kolik (mulas mendadak),
malaria, antelmintik, diuretik, demam, amenorrhea dan gangguan pada kulit
(Patilaya, dkk., 2012). Daun puguntano di Sumatera Utara umumnya digunakan
sebagai obat diabetes melitus (Sitorus, dkk., 2014) . Golongan senyawa metabolit
sekunder ekstrak etanol poguntano yang teridentifikasi telah dilaporkan oleh
beberapa peneliti yaitu glikosida (Zou et al., 2005), flavonoid (Huang et al., 1999),
saponin (Fang et al., 2009) dan terpenoid (Wang et al., 2006).
Diduga senyawa cucurbitacin dalam glikosida yang terkandung pada
tumbuhan inilah yang memberikan efek penurunan kadar gula darah pada serbuk
simplisia poguntano tersebut. Menurut Pan, 2017, kemampuan senyawa tersebut
dalam menurunkan kadar gula darah dengan menghambat glukoneogenesis di hati.
Saponin bertindak sebagai antioksidan dengan menangkap superoksida dan
membentuk hidroksiperoksida yang mencegah kerusakan biomolekuler yang
diakibatkan radikal bebas (Khan et al., 2012).
4
Sibagariang (2017), telah melakukan observasi klinis bahwa terdapat
pengaruh pemberian ekstrak daun poguntano selama 12 minggu terhadap kadar
SOD pada pasien DM tipe 2. Lindarto dkk (2016) juga telah membuktikan bahwa
setelah pemberian ekstrak poguntano (Curanga fel-terrae Lour.) selama 12
minggu efektif menurunkan kadar glukosa darah puasa, HbA1c pada penderita
DM tipe 2.
Penelitian ini menggunakan penginduksi streptozotosin-nicotinamida.
Streptozotosin menyebabkan kematian sel β pankreas melalui proses alkilasi DNA,
meningkatkan produksi stress oksidatif dan nitrit oksida (NO). Penginduksian
nikotinamida berfungsi mengurangi efek sitotoksik streptozotosin sehingga
penginduksi model tersebut memiliki keuntungan yaitu terjadi pengurangan sel β
pankreas (sekitar 40%) dan hiperglikemia yang stabil sehingga tikus hanya akan
menjadi diabetes melitus tipe 2 (Masiello et al., 1998). Kombinasi tumbuhan yang
sudah ada di pasaran Inlacin® yaitu ekstrak Lagerstroemia speciosa dan
Cinnamomum burmanii sudah terbukti berkhasiat dalam perbaikan resistensi
insulin.
Berdasarkan uraian tersebut maka penelitian kombinasi ekstrak etanol daun
pirdot (Saurauia vulcani Korth.) dan herba poguntano (Picria fel-terrae Lour.)
dapat dijadikan alternatif pengobatan diabetes diharapkan agar masing-masing
tumbuhan dapat memperkuat efek farmakologis yang diinginkan sehingga
memberikan hasil yang lebih efektif. Penelitian kombinasi ekstrak tumbuhan ini
untuk mengetahui pengaruh ekstrak kombinasi terhadap kadar SOD, HbA1c dan
jumlah ekspresi insulin pada sel beta pankreas dengan metode ELISA dan
pewarnaan imunohistokimia.
5
1.2 Perumusan Masalah
Berdasarkan uraian di atas, maka rumusan masalah dalam penelitian ini
adalah sebagai berikut:
a. apakah kombinasi ekstrak etanol daun pirdot (EEDP) dan ekstrak etanol
herba poguntano (EEHP) dapat meningkatkan kadar SOD tikus yang
diinduksi nikotinamida dan streptozotosin?
b. apakah kombinasi EEDP dan EEHP dapat menurunkan HbA1c pada tikus
yang diinduksi nikotinamida dan streptozotosin?
c. apakah kombinasi ekstrak etanol daun pirdot (EEDP) dan ekstrak etanol
herba poguntano (EEHP) dapat meningkatkan jumlah ekspresi insulin pada
sel beta langerhans pankreas tikus yang diinduksi nikotinamida dan
streptozotosin?
1.3 Hipotesis
Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis penelitian ini
adalah:
a. EEDP dan EEHP dapat meningkatkan kadar SOD pada tikus yang
diinduksi nikotinamida dan streptozotosin.
b. EEDP dan EEHP terhadap kadar dapat menurunkan HbA1c pada tikus
yang diinduksi nikotinamida dan streptozotosin.
c. EEDP dan EEHP dapat meningkatkan jumlah ekspresi insulin pada sel beta
langerhans pankreas pada tikus yang diinduksi nikotinamida dan
streptozotosin.
6
1.4 Tujuan Penelitian
Adapun tujuan dari penelitian ini adalah:
a. mengetahui efek peningkatan kadar SOD pada tikus yang diinduksi
nikotinamida dan streptozotosin.
b. mengetahui efek penurunan kadar HbA1c pada tikus yang diinduksi
nikotinamida dan streptozotosin.
c. mengetahui efek peningkatan jumlah ekspresi insulin pada sel beta
langerhans pankreas pada tikus yang diinduksi nikotinamida dan
streptozotosin.
1.5 Manfaat Penelitian
Adapun manfaat yang diperoleh dari penelitian ini adalah sebagai berikut:
a. diperoleh bukti ilmiah pengaruh kombinasi estrak etanol daun pirdot dan
herba poguntano terhadap kadar SOD, HbA1c dan jumlah ekspresi insulin
pada sel beta.
b. diperoleh kombinasi estrak etanol daun pirdot dan herba poguntano sebagai
alternatif pengobatan diabetes.
c. menunjang program pemerintah dalam pengembangan obat tradisional dan
dapat digunakan dalam pelayanan kesehatan masyarakat.
7
1.6 Kerangka Pikir Penelitian
Pada penelitian ini terdapat dua variabel yaitu variabel bebas dan variabel
terikat. Variabel bebas yaitu beberapa variasi konsentrasi ekstrak sedangkan
variabel terikat adalah KGD, SOD, HbA1c dan ekspresi insulin disajikan pada
Gambar 1.1.
Variable bebas Variable terikat Parameter
NA &
STZ
Tikus Kadar KGD tikus

glukosa
Putih darah ↓ (mg/dL)
Ekstrak Kombinasi Kadar SOD

Kadar SOD
EEDP & EEHP ↑ (pg/mL)
100 mg/kg bb
Kadar
Tikus Kadar HbA1c
HbA1c ↓ (ng/mL)
Diabetes
Glibenklamid 0,45
mg/kg bb Persentase
Jumlah
Ekspresi skor
insulin ↑ ekspresi
(%)
Gambar 1.1 Kerangka pikir penelitian
Keterangan:
STZ : Streptozotosin
NA : Nicotinamida
EEDP : Ekstrak etanol daun pirdot
EEHP : Ekstrak etanol herba poguntano
8
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Diabetes Melitus
Diabetes Melitus (DM) adalah suatu penyakit metabolik dimana terdapat
adanya gangguan dalam metabolisme lemak, karbohidrat, dan protein akibat
penurunan dalam sekresi insulin, sensitivitas insulin, atau keduanya (Triplitt et al.,
2008). Sindrom resistensi insulin adalah suatu kondisi dimana terjadi penurunan
sensitivitas jaringan terhadap kerja insulin sehingga terjadi peningkatan sekresi
insulin sebagai bentuk kompensasi sel β pankreas. Intoleransi glukosa merupakan
salah satu manifestasi sindrom metabolik yang dapat menjadi awal suatu diabetes
melitus (Manaf, 2010). Diabetes melitus (DM) mempunyai sindroma klinik yang
ditandai adanya poliuria, polidipsia, dan polifagia, disertai peningkatan kadar
glukosa darah atau hiperglikemia (kadar glukosa puasa ≥ 126 mg/dL atau
postprandial ≥ 200 mg/dL atau glukosa sewaktu ≥ 200 mg/dL) (Triplitt et al.,
2008).
2.1.1 Klasifikasi Diabetes Melitus
Klasifikasi diabetes melitus berdasarkan etiologinya menurut American
Diabetes Association (2012) meliputi:
a. DM tipe 1 adanya destruksi sel β langerhans pada pankreas, umumnya
menjurus ke defisiensi insulin absolut, akibat kelainan autoimun (antibodi
sel islet, antibodi insulin, dan antibodi asam glutamat dekarboksilase).
b. DM tipe 2, bervariasi mulai dari yang predominan resistensi insulin disertai
defisiensi insulin relatif sampai yang predominan gangguan sekresi insulin
bersama resistensi insulin.
9
c. Diabetes kehamilan (Diabetes Gestasional) adalah diabetes yang timbul
selama kehamilan. Penderita DM gestasional kebanyakan memiliki
homeostatis glukosa yang normal selama trimester pertama kehamilan dan
mengalami defisiensi insulin relatif pada bulan keempat dan kelima. Pada
umumnya kadar glukosa darah kembali normal setelah melahirkan.
d. DM tipe lain, akibat defek genetik fungsi sel β, defek genetik kerja insulin,
penyakit eksokrin pankreas, endokrinopati, karena obat/zat kimia, infeksi,
imunologi, sindroma genetik lain. Bentuk ini biasanya disebabkan oleh
adanya malnutrisi disertai kekurangan protein.
2.1.2 Penyebab diabetes
Diabetes melitus dapat disebabkan oleh beberapa hal sebagai berikut
(Waspadji, 2002):
a. Usia diatas 45 tahun
Usia diatas 45 tahun fungsi organ tubuh semakin menurun, hal ini
diakibatkan aktivitas sel beta pankreas untuk menghasilkan insulin menjadi
berkurang dan sensitifitas sel-sel jaringan menurun.
b. Obesitas
Kegemukan menyebabkan aktivitas jaringan lemak dan otot menurun
sehingga dapat memicu munculnya diabetes melitus tipe 2. Obesitas, berkaitan
dengan resistensi insulin menyebabkan kemungkinan besar gangguan toleransi
glukosa.
c. Pola makan
Pola yang serba instan yang serba instan sangat digemari oleh sebagian
masyarakat. Pola makan yang tidak sesuai dengan kebutuhan tubuh dapat menjadi
penyebab DM.
10
d. Riwayat DM pada keluarga
Sekitar 15-20% penderita diabetes tipe 2 mempunyai riwayat keluarga DM,
sedangkan diabetes tipe 1 sebanyak 57 % berasal dari keluarga DM.
e. Kurangnya berolahraga atau beraktivitas
Kurang berolahraga mengakibatkan penumpukan lemak dalam tubuh yang
dapat menurunkan sensitivitas sel terhadap insulin sehingga dapat menyebabkan
DM.
2.1.3 Diagnosis diabetes
Diagnosis DM termasuk salah satu dari berikut ini :
i. Kadar A1c 6,5% atau lebih.
ii. Pada saat puasa (tidak ada asupan kalori minimal 8 jam) kadar glukosa
plasma 126 mg/dL (7,0 mmol/L) atau lebih.
iii. Kadar glukosa plasma selama dua jam 200 mg/dL (11,1 mmol/L) atau
lebih selama uji toleransi glukosa oral menggunakan glukosa yang
ekuivalen dengan 75 gram glukosa anhidrat terlarut dalam air.
iv. Konsentrasi glukosa plasma darah acak 200 mg/dL (11,1 mmol/L) atau
lebih dengan gejala klasik hiperglikemia (Wells et al., 2015).
2.1.4 Manajemen Pengobatan Diabetes Melitus
Langkah pertama dalam mengelola diabetes melitus dimulai dengan
pendekatan non farmakologi, yaitu berupa perencanaan makan/terapi nutrisi
medik, olahraga, dan penurunan berat badan. Bila dengan langkah tersebut sasaran
terapi pengendalian DM belum tercapai, maka dilanjutkan dengan penggunaan
obat atau intervensi farmakologis. Dalam melakukan pemilihan intervensi
farmakologis perlu diperhatikan titik kerja obat sesuai dengan macam penyebab
11
terjadinya hiperglikemia (Manaf, 2010). Obat yang sering digunakan dalam
mengatasi penyakit diabetes melitus adalah insulin dan non insulin.
1. Insulin (parentral)
Penderita DM tipe 1 sering kali memerlukan insulin eksogen untuk
mengatasi keadaan hiperglikemia. Kebanyakan penderita tipe 2 tidak memerlukan
insulin eksogen untuk kelangsungan hidupnya tetapi insulin eksogen hanya
digunakan untuk mencapai kesehatan optimum. Pada beberapa pasien, insulin
digunakan sebagai alternatif dari terapi hipoglikemik oral.
2. Obat antidiabetik oral
Obat antidiabetik oral digolongkan menjadi beberapa golongan, yaitu:
a) Pemacu Sekresi Insulin (Insulin Secretagogue)
i. Golongan sulfonilurea
Golongan ini bekerja dengan merangsang produksi insulin pada sel ß
pankreas untuk mempertinggi sekresi insulinnya. Oleh karena itu, obat
golongan sulfonilurea ini hanya efektif pada penderita diabetes melitus tipe
II yang sel-sel-ß pulau langerhansnya masih dapat berfungsi karena
merangsang sekresi insulin di pankreas. Obat-obat yang termasuk golongan
sulfonylurea seperti klorpropamida, tolbutamid, glibenklamid,
asetoheksamida dan lain-lain (Katzung, 2001).
ii. Meglitinid
Obat ini memodulasi pelepasan insulin dari sel β dengan mengatur efluks
kalium melalui kanal kalium. Terdapat tumpang tindih tempat kerja
molekularnya dengan sulfonilurea karena meglitinid memiliki dua tempat
pengikatan yang sama dengan sulfonilurea dan satu tempat pengikatan
yang berbeda (Nolte dan Karam, 2010).
12
iii. Derivat D-Fenilalanin
Nateglinid merangsang pelepasan insulin secara cepat dan berlangsung
sementara dari sel β melalui penutupan kanal K+ yang sensitif-ATP. Obat
ini memiliki keuntungan dalam hal keamanan penggunaannya pada pasien
dengan penurunan berat pada fungsi ginjal (Nolte dan Karam, 2010).
b) Peningkat Sensitivitas terhadap Insulin
i. Biguanida
Berbeda dengan sulfonilurea, obat ini kerjanya dalam menurunkan kadar
glukosa darah tidak tergantung pada sel β pankreas yang berfungsi.
Metformin bekerja dengan menurunkan glukoneogenesis di hati dan ginjal,
perlambatan absorbsi glukosa dari saluran cerna dengan peningkatan
konversi glukosa menjadi laktat oleh enterosit, stimulasi langsung glikolisis
di jaringan dengan peningkatan bersihan glukosa dari darah dan penurunan
kadar glukagon plasma (Nolte dan Karam, 2010).
ii. Thiazolidindion
Obat golongan ini bekerja dengan mengurangi resistensi insulin dan
meningkatkan sensitivitas jaringan perifer untuk insulin (insulin
sensitizers) (Nolte dan Karam, 2010).
c) Penghambat absorpsi glukosa di saluran pencernaan:
i. Glukosidase-inhibitors
Obat golongan ini bekerja dengan merintangi enzim alfa-glukosidase di
mukosa duodenum, sehingga reaksi penguraian polisakarida menjadi
monosakarida terhambat. Dengan demikian glukosa dilepaskan lebih
lambat dan absorbsinya ke dalam darah juga kurang cepat, lebih rendah dan
13
merata, sehingga puncak kadar glukosa darah dapat dihindarkan (Nolte dan
Karam, 2010).
ii. Penghambat DPP-4 (dipeptidylpeptidase-4 blockers)
Obat golongan baru ini bekerja dengan menghambat enzim DPP-4
sehingga produksi hormon incretin tidak menurun. Adanya hormon incretin
berperan utama dalam produksi insulin di pankreas dan pembentukan
hormon GLP-1 (glukagon-like peptide-1) dan GIP (glucose-dependent
insulinotropic polypeptide) di saluran cerna yang juga berperan dalam
produksi insulin. Dengan penghambatan enzim DPP-4 akan mengurangi
penguraian dan inaktivasi incretin, GLP-1 dan GIP, sehingga kadar insulin
akan meningkat (Tan dan Rahardja, 2002).
iii. Penghambat SGLT-2 (Sodium Glucose Co-transporter 2)
Obat golongan penghambat SGLT-2 merupakan obat antidiabetes oral
jenis baru yang menghambat penyerapan kembali glukosa di tubuli distal
ginjal dengan cara menghambat kinerja transporter glukosa SGLT-2. Obat
yang termasuk golongan ini antara lain: Canagliflozin, Empagliflozin,
Dapagliflozin, Ipragliflozin (PERKENI, 2015).
2.1.5 Komplikasi Diabetes Melitus
2.1.5.1 Hipoglikemia
Hipoglikemia ditandai dengan menurunnya kadar glukosa darah < 60
mg/dL. Hipoglikemia timbul akibat peningkatan kadar insulin yang kurang tepat,
baik sesudah penyuntikan insulin atau karena obat yang meningkatkan insulin
seperti sulfonilurea (Soemadji, 2009). Pada pasien DM tipe 2 jarang terjadi
hipoglikemia berat, lebih sering terjadi pada pasien DM tipe 1. Insiden
hipoglikemia sebagai komplikasi dapat dikurangi dengan meningkatkan
14
pemantauan glukosa darah. Gejala hipoglikemia berupa berkeringat, rasa bergetar
disekitar mulut, tremor, pucat, berdebar – debar, lemas, sakit kepala, gangguan
penglihatan, sulit berkonsentrasi, lelah, mengantuk, mudah marah, bingung, kejang
dan koma (Rustama dkk, 2010).
2.1.5.2 Retinopati diabetik
Retinopati diabetik disebabkan oleh perubahan dalam pembuluh -
pembuluh darah kecil pada retina mata. Retina merupakan bagian mata yang
menerima bayangan dan mengirimkan informasi bayangan tersebut ke otak
(Smeltzer et al., 2001). Retinopati diabetik sering tidak bergejala hingga kelaianan
yang berat atau kerusakan retina yang ireversible sudah terjadi (Rustama dkk,
2010). Retinopati diabetik merupakan penyebab kebutaan paling sering ditemukan
pada usia 20 – 74 tahun. Resikonya 25 kali lebih mudah mengalami kebutaan
dibandingkan dengan nondiabetes. Setelah 10 tahun, prevalensi meningkat
menjadi 40-50% dan setelah 20 tahun > 90% pasien. Pada diabetes tipe 2 setelah
20 tahun meningkat menjadi 60% (Pandelaki, 2010).
2.1.5.3 Nefropati diabetik
Di Amerika dan Eropa nefropati merupakan penyebab utama gagal ginjal
dan merupakan salah satu penyebab kematian tertinggi diantara semua komplikasi
DM. Pada DM tipe 1 sering memperlihatkan tanda – tanda penyakit ginjal setelah
15-20 tahun kemudian, sementara pada DM tipe 2 dapat terkena gagal ginjal dalam
waktu 10 tahun sejak diagnosa DM (Suyono, 2009).
2.1.5.4 Neuropati diabetik
Neuropati diabetik merupakan salah satu komplikasi kronis yang paling
sering ditemukan pada DM. Persentase neuropati meningkat bersamaan dengan
pertambahan usia penderita dan lamanya penyakit DM (Smeltzer et al., 2002).
15
2.1.5.5 Gangguan pada pembuluh darah
Kerusakan pada pembuluh darah kerena DM akan mengakibatkan masalah
pada jantung dan otak, serta gangguan pada pembuluh darah kaki akibatnya
sirkulasi terganggu dan terjadi peningkatakan tekanan darah (hipertensi).
Penyempitan pembuluh darah disebabkan adanya tumpukan lemak pada dinding
pembuluh darah sehingga menyebabkan aterosklorosis (Tobing dkk, 2008).
2.1.5.6 Gangguan fungsi jantung
Gangguan pada pembuluh darah akan mengakibatkan aliran darah ke
jantung terhambat atau terjadi kekurangan oksigen di otot jantung, timbul angina
pectoris bahkan akhirnya dapat menyebabkan serangan jantung (Tobing dkk,
2008).
2.1.6 Kadar glukosa
Kadar glukosa serum puasa normal adalah 70 sampai 110 mg/dL.
Hiperglikemi didefenisikan sebagai kadar glukosa puasa yang lebih tinggi dari 110
mg/dL, sedangkan hipoglikemi bila kadarnya lebih rendah dari 70 mg/dl. Glukosa
difiltrasi oleh glomerulus ginjal dan hampir semuanya diabsorbsi oleh tubulus
ginjal selama kadar glukosa dalam plasma tidak melebihi kadar ini. Jika glukosa
keluar bersama urin, maka merupakan pertanda DM (Price dan Wilson, 2006).
2.1.6.1 Penilaian Pengontrolan Glukosa Darah
Metode yang digunakan untuk menentukan pengontrolan glukosa pada
semua tipe DM adalah pengukuran glikat hemoglobin (HbA1c). Untuk mengetahui
apakah sasaran terapi telah tercapai dapat digunakan pengukuran kontrol kadar
glukosa darah berdasarkan kadar glukosa darah puasa (PERKENI, 2015). Berikut
ini merupakan kriteria kontrol glukosa darah (pengendalian DM).
16
Tabel 2.1 Kriteria pengendalian DM
Baik Sedang Buruk

Glukosa darah puasa (mg/dL) 80-100 100-125 ≥126
Glukosa darah 2 jam (mg/dL) 80-144 145-179 ≥180
Kadar HbA1c (%) <6,5 6,5-8 >8
Kadar Insulin (mg/dL) <7 - -
Kolesterol Total (mg/dL) <200 200-239 ≥240
Kolesterol LDL (mg/dL) <100 100-129 ≥130
Pria: >40
Kolesterol HDL (mg/dL) - -
Wanita: >50
Trigeliserida (mg/dL) <150 150-199 ≥200
IMT (kg/m2) 18,5- <23 23-25 >25
>130-140/
Tekanan darah (mmHg) ≤130/80 >140/90
>80-90
Sumber: PERKENI, 2015
2.1.7 Insulin
Insulin merupakan hormon yang terdiri dari rangkaian asam amino,
dihasilkan oleh sel β pankreas. Dalam keadaan normal, bila ada rangsangan pada
sel β pankreas, insulin disintesis dan kemudian disekresikan ke dalam darah sesuai
kebutuhan tubuh untuk keperluan regulasi glukosa darah (Manaf, 2010).
Campbell et al., 2004, menyatakan, baik insulin dan glukagon
mempengaruhi glukosa darah melalui berbagai mekanisme. Beberapa mekanisme
tersebut adalah 1) Insulin menurunkan kadar glukosa dengan cara merangsang sel
tubuh (kecuali sel-sel otak) untuk mengambil glukosa dari darah, 2)
memperlambat perombakan glikogen dalam hepar dan 3) menghambat perubahan
asam amino dan asam lemak menjadi gula. Proses dari keduanya diharapkan
mampu memberikan keseimbangan pengaturan glukosa, sehingga tidak terjadi
hiperglikemia. Peran insulin mempermudah masuknya glukosa ke dalam sebagian
besar sel. Skema pengaturan glukosa baik di hepar maupun di pankreas dapat
dilihat pada gambar 2.1 berikut ini.
17
Gambar 2.1 Skema pengaturan glukosa darah (Price dan Wilson, 2006).
Ketika terjadi peningkatan glukosa darah di atas titik normal maka akan
merangsang pankreas untuk mensekresikan insulin yang dihasilkan oleh sel beta
pulau langerhans, sehingga memicu sel-sel hepar untuk segera mengambil
kelebihan glukosa darah. Sel-sel hepar akan mengambil glukosa darah yang
berlebihan jika insulin berikatan dengan reseptor. Insulin akan berikatan dengan
reseptor, sebagai akibatnya kanal akan membuka sehingga dilewati oleh glukosa
darah. Setelah glukosa darah masuk, terjadi fosforilasi awal yang menggunakan
bantuan enzim glukokinase, dimana glukosa akan terjerat sementara di dalam sel-
sel hepar sehingga tidak dapat berdifusi kembali melewati membran sel. Setelah
itu terjadi peningkatan aktivitas enzim-enzim sintesis glikogen, termasuk enzim
glikogen sintase, yang bertanggung jawab untuk polimerisasi dari unit-unit
monosakarida untuk membentuk molekul-molekul glikogen, sehingga glukosa
darah akan normal kembali (Campbell et al., 2004).
18
Apabila terjadi penurunan glukosa darah di bawah titik normal, maka
pankreas akan merespons dengan cara mengeluarkan glukagon yang dihasilkan
oleh sel alfa pulau langerhans. Glukagon akan mempengaruhi hepar untuk
menaikkan glukosa darah dengan merombak glikogen menjadi glukosa dan
dilepaskan kembali ke dalam aliran darah. Ketika kadar glukosa darah naik hingga
titik normal stimulus untuk pelepasan glukagon berkurang (Muraay et al., 2003).
2.2 Pembentukan Senyawa Oksigen Reaktif pada Diabetes Melitus
Penurunan sekresi dan atau efektivitas kerja hormon insulin mengakibatkan
seluruh glukosa yang dikonsumsi di dalam tubuh akan meningkat. Peningkatan
kadar glukosa darah disebabkan oleh kerusakan sel-β pankreas sehingga tidak
dapat menghasilkan insulin atau akibat adanya resistensi insulin. Kerusakan
pankreas ini dapat disebabkan oleh meningkatnya senyawa radikal bebas akibat
kadar glukosa darah yang meningkat pada kasus DM. Schalkwijk dan Stehouwer
(2005) menyatakan, bahwa peningkatan stress oksidatif terjadi melalui empat
mekanisme yaitu: melalui jalur sorbitol/polyol pada saraf perifer, jalur
hexosamine, jalur aktivasi protein kinase C (PKC) dan jalur peningkatan produksi
Advanced glycation end products (AGEs) atau dikenal juga glyoxylation pathway.
2.3 SOD (Superoxide Dismutase)
Enzim SOD merupakan enzim antioksidan endogen yang mempunyai
peranan penting secara langsung melindungi sel dari gangguan radikal bebas, dan
secara tidak langsung memelihara keseimbangan oksigen yang bersifat toksik
(Wresdiyati et al., 2002). Pengukuran kandungan enzim antioksidan SOD
merupakan cara untuk mengetahui kondisi pertahanan sel terhadap radikal bebas.
19
Aktivitas SOD bervariasi pada beberapa organ. Aktivitas SOD tertinggi terdapat
pada hepar, diikuti kelenjar adrenal, ginjal, darah, limpa, pankreas, otak, paru-
paru, usus, ovarium, dan timus (Haliwell & Gutteridge, 1999).
SOD adalah metaloenzim yang mengkatalis dismutasi radikal anion
superoksida (O2-) menjadi hidrogen peroksida (H2O2) dan oksigen (O2) di dalam
mitokondria. Selanjutnya H2O2 di dalam mitokondria akan mengalami
detoksifikasi oleh enzim katalase menjadi senyawa H2O dan O2, sedangkan H2O2
yang berdifusi ke dalam sitosol akan didetoksifikasi oleh enzim glutation
peroksidase (Pandey dan Rizvi, 2010). Mekanisme pertahanan antioksidan
ditunjukkan pada Gambar 2.2.
Gambar 2.2 Mekanisme pertahanan antioksidan endogen SOD, katalase dan

glutation peroksidase terhadap radikal bebas (Pandey dan Rizvi, 2010).
Superoksida dismutase (SOD) bekerja dengan cara membersihkan radikal
bebas atau spesies oksigen reaktif (ROS) dengan reaksi enzimatis dan
mengubahnya menjadi produk yang lebih stabil (Halliwell, 2006). ROS (Reactive
Oxygen Species) merupakan atom atau molekul kecil yang tidak memiliki
20
pasangan elektron yang siap menerima elektron lain atau mentransfer elektron
yang tidak berpasangannya ke molekul lain. ROS secara normal diproduksi dari
metabolisme sel, namun perubahan dalam jumlah dan sifat ROS dilepaskan pada
berbagai keadaan penyakit. Di antara ROS yang dihasilkan oleh sel-sel hidup, O2•-
merupakan senyawa proinflamasi yang merusak sel. O2•- merusak sel endotel,
meningkatkan permeabilitas mikrovaskuler dan mempromosikan migrasi neutrofil
pada fokus inflamasi (Afonso et al., 2007).
Konsentrasi ROS diatur oleh keseimbangan antara produksi dan eliminasi
ROS oleh antioksidan. Keseimbangan yang tepat sangat penting untuk sel normal
dan fungsi jaringan. ROS diproduksi pada banyak proses metabolisme termasuk
respirasi mitokondria dan aktivitas enzim (sitokrom P-450, NADPH oksidase,
myeloperoxidase, NO sintase, dan xanthine oxidase). Enzim antioksidan
menangkap ROS yang ada dalam tubuh termasuk; SOD, glutation peroksidase, dan
katalase. Selain itu, antioksidan larut air (glutation, vitamin C, dan asam urat) dan
antioksidan larut lemak (vitamin E, karotenoid, dan bilirubin) sangat penting untuk
melindungi membran sel dan lipoprotein plasma (Afonso et al., 2007).
Enzim SOD melindungi sel-sel tubuh dan mencegah terjadinya peradangan
yang diakibatkan oleh radikal bebas. Sebenarnya enzim ini telah ada dalam tubuh,
namun memerlukan bantuan zat-zat gizi mineral seperti mangan (Mn), seng (Zn),
dan tembaga (Cu) agar bisa bekerja. Enzim SOD terdapat dalam semua organisme
aerob, dan sebagian besar berada dalam tingkat subseluler (intraseluler).
Berdasarkan adanya logam yang berperan pada sisi aktif enzim, enzim SOD dapat
dikelompokkan menjadi 3, yaitu Cu/Zn-SOD, Mn-SOD, dan Fe-SOD (Winarsi,
2007). SOD berefek sangat kuat dan merupakan pertahanan tubuh pertama dalam
menghadapi serangan radikal bebas. Penurunan kadar SOD berimplikasi pada
21
beberapa kondisi dan penyakit seperti reumatid artritis, anemia Fanconi, infeksi
saluran pernafasan, katarak dan infertil. Jadi, pengukuran SOD dapat dipakai untuk
membantu menegakkan diagnosis penyakit seperti kanker, jantung koroner,
hepatitis, diabetes, distrofi muscular, abnormalitas hemoglobin, schizophrenia,
depresi, dan down syndrome (Winarsi, 2007).
2.4 Hemoglobin Glikosilat (HbA1c)
2.4.1 Definisi HbA1c
Hemoglobin glikosilat atau HbA1c adalah substraksi dari hemoglobin A
(Hb A) yang mengalami proses glikosilasi. Hemoglobin A paling umum
ditemukan pada orang dewasa dengan 91-95 % dari jumlah total hemoglobin.
Hemoglobin A terdiri atas dua rantai α dan dua rantai β. Sekitar 6% dari total HbA
disebut HbA1. HbA1 terdiri atas tiga fraksi yaitu HbA1a, HbA1b, dan HbA1c.
Sebanyak 70% HbA1c memiliki bentuk terglikosilasi (Emma, 2012).
Glikosilasi adalah proses ketika satu gugus glukosa berikatan kovalen
dengan valin N-terminal rantai β molekul hemoglobin secara ireversibel dan
terjadi secara spontan. Pada orang normal, hemoglobin akan ditemukan
terglikosilasi sebanyak 2-3 %. Jumlah hemoglobin yang terglikosilasi bergantung
pada jumlah glukosa darah yang tersedia. Jika kadar glukosa darah meningkat
dalam waktu yang lama, eritrosit akan tersaturasi dengan glukosa menghasilkan
glikohemoglobin (HbA1c) (Suryathi, 2015).
2.4.2 Pembentukan HbA1c
Pembentukan HbA1c melibatkan proses glikasi nonenzimatik atau disebut
juga Maillard reaction yang terjadi terus menerus secara in vivo. Proses glikasi
nonenzimatik diawali ketika glukosa dalam bentuk rantai terbuka berikatan dengan
22
N-terminal valin rantai β hemoglobin untuk membentuk senyawa aldimine (Schiff
base) yang tidak stabil. Schiff base melakukan penyusunan membentuk ketoamine
yang lebih stabil yang kemudian menghasilkan produk Amadori (HbA1c).
Pembentukan HbA1c dapat dilihat pada Gambar 2.3.
Gambar 2.3 Pembentukan HbA1c (Italy, 2009)
Proses glikasi nonenzimatik akan meningkat saat kadar glukosa darah
tinggi pada pasien DM. Pada tahap akhir glikasi, AGE (Advanced glycation end-
product) dapat terbentuk secara ireversibel melalui reaksi oksidasi, dehidrasi dan
siklisasi. Advanced glycation end-product memiliki peranan dalam patogenesis
komplikasi DM seperti retinopati, nefropati, neuropati dan kardiomiopati (Singh et
al., 2014).
Hemoglobin glikosilat dibentuk saat eritrosit matur dan berlangsung
sepanjang waktu hidup eritrosit. Hemoglobin glikosilat memiliki umur yang cukup
panjang yaitu 120 hari sesuai dengan usia eritrosit dan tidak dipengaruhi oleh
fluktuasi glukosa darah harian. Eritrosit yang tua memiliki kadar HbA1c lebih
23
tinggi daripada eritrosit muda. Hal ini disebabkan karena eritrosit yang tua berada
dalam sirkulasi pembuluh darah lebih lama daripada eritrosit yang masih muda
(Suryathi, 2015).
Kadar HbA1c dapat dipengaruhi oleh faktor genetik dan penyakit
hematologi. Penurunan jumlah eritrosit dapat menyebabkan penurunan kadar
HbA1c. Pasien dengan hemolisis episodik atau kronis, gagal ginjal kronis, anemia
menyebabkan darah mengandung lebih banyak eritrosit muda sehingga kadar
HbA1c dapat dijumpai dalam kadar yang sangat rendah (Suryathi, 2015; WHO,
2011).
2.4.3 Metode Pemeriksaan HbA1c
Menurut Suryathi (2015) terdapat beberapa metode yang sering digunakan
dalam pemeriksaan kadar HbA1c antara lain:
a) Metode Kromatografi Pertukaran Ion ( Ion Exchange Chromatography)
b) Metode HPLC (High Performance Liquid Chromatography)
c) Metode Agar Gel Elektroforesis
d) Metode Affinity Chromatography
e) Metode Analisis Kimiawi dengan Kolorimetri
f) Metode Spektrofotometri
g) Metode Immunoassay (EIA)
Pemeriksaan HbA1c lebih stabil dalam pemeriksaan kadar glukosa darah
dibandingkan pemeriksaan glukosa darah puasa. Pemeriksaan laboratorium yang
menangkap paparan glikemik jangka panjang memberikan penanda yang lebih
baik untuk keberadaan dan tingkat keparahan penyakit daripada pemeriksaaan
konsentrasi glukosa tunggal (WHO, 2011).
24
2.5 Induksi Nicotinamida-Streptozotosin
Gambar 2.4 Struktur kimia streptozotosin dan nicotinamida (Szkudelski, 2012)
Streptozotosin adalah suatu analog nitrosourea yang sering digunakan
untuk menginduksi diabetes pada hewan percobaan. Induksi percobaan diabetes
menggunakan streptozotosin sangat mudah untuk dilakukan (Szkudelski, 2012).
Beberapa metode penelitian dengan menggunakan hewan coba telah
dikembangkan untuk mempelajari diabetes melitus atau menguji agen antidiabetes.
Metode ini meliputi kimia, bedah (pankreatektomi) dan manipulasi genetik pada
beberapa spesies hewan. Obat-obatan diabetogenik (penginduksi diabetes) yang
digunakan meliputi monohidrat aloxan, streptozotosin dengan atau tanpa
nicotinamida, nitrolotriasetat besi, ditizona dan serum anti insulin. Induksi
streptozotosin-nicotinamida dilakukan secara intraperitonial (Etuk, 2010).
2.5.1 Mekanisme Streptozotosin Menginduksi Diabetes Melitus
Penyuntikan streptozotosin akan menunjukkan gejala hiperglikemia ringan
dan hilangnya sensitivitas sel β terhadap glukosa. Transportasi streptozotosin ke
dalam sel beta pankreas melalui glucose transporter 2 (GLUT 2), dimana sebagian
nitrosamide dari streptozotosin (methylnitrosourea) berperan toksik terhadap sel β
25
pankreas (Szkudelski, 2012). Struktur streptozotosin sangat mirip dengan molekul
glukosa sehingga akan ditranspor ke dalam sel oleh glucose transporter 2
(GLUT2), dan akan menyebabkan kerusakan fragmen DNA (Elsner et al., 2000).
Elsner et al (2000), melaporkan bahwa penyebab kematian sel-sel β
pankreas hasil induksi STZ adalah alkilasi DNA. Di samping itu kerusakan DNA
pada sel β diduga juga akibat aktivitas senyawa oksigen reaktif dari nitrit oksida
(NO). Senyawa STZ adalah donor NO yang telah ditemukan sebagai penyebab
kerusakan sel β pulau Langerhans pankreas, dengan cara meningkatkan aktivitas
guanilil siklase. Dalam mitokondria, NO juga akan meningkatkan aktivitas xanthin
oksidase dan menurunkan oksigen yang berdampak pada penghambatan siklus
Krebs, sehingga terjadi pembatasan produksi ATP dalam mitokondria yang
kemudian menyebabkan deplesi nukleotida dalam sel β dan pada akhirnya
mengakibatkan kerusakan DNA.
2.5.2 Mekanisme Nicotinamida Melindungi Sel Beta Pankreas
Nicotinamida (pyridine-3-carboxamide) adalah amida dari vitamin B3
(Niacin). Efek protektif nicotinamida dalam melindungi sel beta pankreas, telah
dibuktikan. Banyak penelitian in vitro dan in vivo menyimpulkan bahwa
nicotinamida dapat melindungi sel beta pankreas terhadap efek toksik
Streptozotosin (Szkudelski, 2012).
Data dari literatur menyimpulkan bahwa mekanisme proteksi nicotinamida
terhadap kerusakan sel beta pankreas yang ditimbulkan oleh streptozotosin,
melalui 2 mekanisme; yaitu inhibisi PARP-1 dan peningkatan NAD+, dimana
mekanisme lain kurang berperan (Szkudelski, 2012). Mekanisme proteksi
nicotinamida terhadap streptozotosin dapat dilihat pada gambar 2.5 berikut ini.
26
Gambar 2.5 Skema aksi sitotoksik streptozotosin dan aksi proteksi nicotinamida
(Szkudelski, 2012)
Keterangan: PARP-1= poly (adenosine triphosphate [ADP]-ribose) polymerase-1,

PRPP= 5-phosphoribosylpyrophosphate, NMN= nicotinamida mononucleotide,
Nampt= nicotinamida phosphoribosyltransferase, Nmnat= nicotinamida/ nicotinic
acid mononucleotide adenyltransferase, ↑ = meningkatkan/ aktivasi, ↓ =
menurunkan/ inaktivasi.
2.6 Glibenklamid
Glibenklamid adalah antidiabetik oral generasi kedua dari golongan
sulfonilurea. Mekanisme kerja sulfonilurea termasuk: (a) merangsang pelepasan
insulin dari sel-β pankreas, (b) mengurangi kadar glukagon dalam serum, dan (c)
meningkatkan insulin pada jaringan target dan reseptor. Obat-obat ini terikat pada
protein serum, dimetabolisme oleh hati dan di ekskresikan oleh hati atau ginjal.
Kontra indikasi pemakaian obat-obat ini adalah pada pasien insufiensi hati atau
ginjal karena ekskresi obat tersebut terlambat, mengakibatkan akumulasi dan dapat
menimbulkan hipoglikemia (Mycek, 2001).
Mekanisme aksi dari glibenklamid adalah membentuk ikatan dari molekul
obat dengan reseptor pada sel beta. Ikatan yang terbentuk dapat merangsang
27
keluarnya hormon insulin dari granul-granul sel beta pulau Langerhans pada
pankreas (Pfeifer et al., 1980). Kerjanya dapat bertahan sampai 24 jam.
Pengobatan jangka pendek meningkatkan sekresi insulin dari sel-β pankreas.
Pengobatan jangka panjang meningkatkan efek insulin terhadap jaringan perifer
dan penurunan glukosa darah dari hati (Katzung, 2001). Oleh karena itu, syarat
pemakaian glibenklamid pada penderita diabetes melitus adalah jika pankreas
penderita diabetes masih dapat memproduksi insulin. Efek samping antidiabetik
oral golongan sulfonilurea umumnya ringan dan frekuensinya rendah, antara lain
gangguan saluran cerna dan gangguan susunan syaraf pusat, cenderung
meningkatkan berat badan (Pfeifer et al., 1980).
2.7 Uraian Tumbuhan
Uraian tumbuhan meliputi sistematika tumbuhan, nama daerah, morfologi
tumbuhan dan kandungan tumbuhan.
2.7.1 Sistematika Tumbuhan
Sistematika tumbuhan pirdot adalah sebagai berikut adalah
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledoneae
Bangsa : Ericales
Famili : Actinidiacae
Genus : Saurauia
Spesies : Saurauia vulcani Korth. (Marpaung, 2016).
28
Berikut adalah sistematika poguntano (Lestari, 2013):
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Subdivisi : Angiospermae
Kelas : Dicotyledoneae
Subkelas : Asteridae
Ordo : Scrophulariales
Famili : Linderniaceae
Genus : Picria
Spesies : Picria fel-terrae Lour.
Sinonim : Curanga amara Vahl., Curanga amara Juss., Curania amara
R&S., Gratiola amara Roxb., Curanga fel-terrae Lour., Torenia
cardiosepala Benth., Curanga fel-terrae Merr.
2.7.2 Nama Daerah
Pirdot (Saurauia vulcani Korth) dikenal juga dengan nama pirdot (bahasa
Batak), ki leho (bahasa Sunda), lotrok (bahasa Jawa), soyogik (bahasa Manado),
(Balitbang, 2017).
Nama daerah dari Picria fel-terrae Lour. adalah pogun tanoh, pugun tana,
puguntano, poguntano (Dairi), tamah raheut (Sunda), daun kukurang (Maluku) dan
papaita (Ternate), (Anonim, 2009).
2.7.3 Morfologi Tumbuhan
Pirdot mempunyai ciri-ciri morfologi sebagai berikut: berbentuk pohon
namun memiliki dahan yang gampang patah. Daunnya berukuran lebar dengan
lebar 12-15 cm dan panjang 27-29 cm dan memiliki dua sisi warna yang berbeda.
Sisi daun bagian atas berwarna hijau dan sisi daun bagian bawah berwarna
29
kecoklatan. Pirdot memiliki buah kecil yang jika sudah matang buahnya dapat
dimakan. Buah yang matang berisi lendir bening dan biji-biji kecil halus seperti
biji dalam buah naga (Niel, 2013).
(a)
(b)
Gambar 2.6 Tumbuhan (a) Pirdot; (b) Poguntano
Tumbuhan poguntano merupakan herba tahunan, tinggi lebih dari 40 cm,
batang dengan cabang yang jarang, tegak, segiempat, berbulu halus yang padat.
Daun tunggal berhadapan, bundar telur, pangkal daun membaji sampai
membundar, ujung daun agak melancip, tepi daun beringgitan, berbulu halus.
Pembungaan berupa tandan di ujung atau di batang, jumlah bunga 2-16, daun
gagang kecil, berbibir rangkap, gundul bagian luar, bagian dalam ada kelenjar
bulu, bibir atas berwarna coklat kemerah-merahan, bibir bagian bawah berwarna
putih. Buah kapsul lonjong, padat, berkatup dua, dengan beberapa biji. Biji
membulat, diameter sekitar 0,6 mm (Anonim, 2009).
30
2.7.4 Kandungan Kimia
2.7.4.1 Flavonoida
Flavonoida merupakan salah satu golongan fenol alam yang mengandung
15 atom karbon dalam inti dasarnya, yang tersusun dalam konfigurasi C 6-C3-C6,
yaitu dua cincin aromatik yang dihubungkan oleh satuan tiga karbon yang dapat
atau tidak dapat membentuk cincin ketiga, pada umumnya tersebar luas pada
tumbuhan hijau (Markham, 1988).
Umumnya senyawa flavonoida dalam tumbuhan terikat dengan gula
disebut sebagai glikosida dan aglikon. Flavonoida yang berbeda-beda mungkin
saja terdapat pada satu tumbuhan dalam beberapa bentuk kombinasi glikosida.
Oleh karena itu dalam menganalisis flavonoida biasanya lebih baik memeriksa
aglikon yang telah dihidrolisis dibandingkan dalam bentuk glikosida dengan
kerumitan strukturnya (Harborne, 1987). Flavonoida berkhasiat sebagai antifungi,
antioksidan, antibakteri dan antiinflamasi (Robinson, 1995).
2.7.4.2 Tanin
Tanin didefinisikan sebagai makromolekul senyawa fenolik yang larut
dalam air yang mempunyai sifat khusus yaitu kemampuannya mengendapkan
alkaloid, gelatin dan protein lainnya. Metabolit sekunder ini dibagi menjadi 2
kelompok utama yaitu tanin terhidrolisis dan tanin terkondensasi. Tanin dan
senyawa turunannya bekerja dengan jalan menciutkan selaput lendir pada saluran
pencernaan dan di bagian kulit yang luka. Pada perawatan untuk luka bakar, tanin
dapat mempercepat pembentukan jaringan yang baru sekaligus dapat
melindunginya dari infeksi atau sebagai antiseptik. Tanin dapat diidentifikasi
dengan cara penambahan pereaksi ferri klorida, menghasilkan warna hijau
kehitaman atau biru kehitaman (Harborne, 1987).
31
2.7.4.3 Saponin
Saponin adalah glikosida triterpenoida dan sterol. Senyawa golongan ini
banyak terdapat pada tumbuhan tinggi, merupakan senyawa dengan rasa yang
pahit dan mampu membentuk larutan koloidal dalam air serta menghasilkan busa
jika dikocok dalam air. Pembentukan busa yang mantap sewaktu mengekstraksi
tumbuhan atau pada waktu memekatkan ekstrak tumbuhan merupakan bukti
terpercaya akan adanya saponin (Harborne, 1987).
2.7.4.4 Steroida/triterpenoida
Steroid adalah triterpena yang kerangka dasarnya sistem cincin
siklopentano perhidrofenantren dan merupakan senyawa organik yang berasal dari
hewan dan tumbuhan dan dengan struktur inti molekulnya C27, tetrasiklin dengan
susunan 3 cincin segi enam dan 1 cincin segi lima. Triterpenoid adalah senyawa
yang kerangka karbonnya berasal dari 6 satuan isopren dan secara biosintesis
diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik yaitu skualen (Harborne, 1987).
2.7.4.5 Glikosida
Glikosida adalah suatu senyawa yang jika dihidrolisis akan menghasilkan
bagian gula yang disebut glikon dan bagian bukan gula disebut aglikon. Gula yang
dihasilkan biasanya adalah glukosa, ramnosa dan lain sebagainya. Jika bagian
gulanya adalah glukosa maka disebut glukosida, sedangkan jika bagian gulanya
selain glukosa disebut glikosida (Harborne, 1987).
2.8 Ekstraksi
Ekstraksi adalah proses penarikan kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair. Senyawa
aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat digolongkan ke dalam
32
golongan minyak atsiri, alkaloida, flavonoid dan lain-lain. Setelah diketahui
senyawa aktif yang dikandung oleh simplisia akan memudahkan pemilihan pelarut
dan cara ekstraksi yang tepat (Depkes, 2000). Ekstraksi dengan menggunakan
pelarut terdiri dari 2 cara, yaitu
1. Cara dingin
a. Maserasi
Maserasi adalah proses ekstraksi simplisia dengan perendaman
menggunakan pelarut yang sesuai dengan sesekali pengadukan pada temperatur
ruangan (Depkes RI, 2000).
b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai terjadi
penyarian sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur kamar. Proses ini
terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahapan maserasi antara, tahap perkolasi
sebenarnya (penetesan/penampungan perkolat) (Depkes RI, 2000).
2. Cara Panas
a. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,
selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan
adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu
pertama 3-5 kali sehingga didapat proses ekstraksi sempurna (Depkes RI, 2000).
b. Sokletasi
Sokletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan
jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Depkes RI, 2000).
33
c. Dekoktasi
Dekoktasi adalah proses ekstraksi dengan pelarut air dengan waktu yang
lebih lama (≥30°C) dan temperatur sampai titik didih air (Depkes RI, 2000).
d. Infundasi
Infundasi adalah proses ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur
penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur
terukur (96-98 °C) selama waktu tertentu (15-20 menit), (Depkes RI, 2000).
e. Digesti
Digesti adalah proses maserasi dengan pengadukan kontinu pada
temperatur yang lebih tinggi dari temperatur ruangan, yaitu secara umum
dilakukan pada temperatur 40-50°C (Depkes RI, 2000).
2.9 Metode ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) atau penetapan kadar
immunosorben taut enzim merupakan uji serologis yang umum digunakan di
berbagai laboratotium imunologi. Uji ini memiliki beberapa keunggulan seperti
teknik pengerjaan yang relatif sederhana, ekonomis, dan memiliki sensitivitas yang
cukup tinggi (Lequin, 2005).
ELISA diperkenalkan pada tahun 1971 oleh Peter Perlmann dan Eva
Engvall untuk menganalisis adanya interaksi antigen dengan antibodi dalam suatu
sampel dengan menggunakan enzim. Penggunaan ELISA melibatkan setidaknya
suatu antibodi dengan spesifitas untuk antigen tertentu. Sampel dengan jumlah
antigen yang tidak diketahui dimobilisasi pada suatu permukaan solid (biasanya
berupa lempeng mikrotiter polistirene), baik yang nonspesifik (melalui penyerapan
pada permukaan) atau spesifik (melalui penengkapan oleh antibodi lain yang
spesifik untuk antigen yang sama) (Warsito dan Wuryastuti, 2014).
34
Tes ELISA memiliki 2 teknik dan 4 tipe, yaitu:
1. Teknik kualitatif adalah berdasarkan bahwa tiap antibodi berikatan pada
antigen yg spesifik.
2. Teknik kuantitatif berdasarkan jumlah ikatan antigen-antibodi yang
ditentukan dengan nilai absorbansi. Teknik ini menghubungkan spesifitas
antibodi dengan kepekaan uji enzimatis dengan spektrofotometer biasa
(Marfianti, 2009).
Tipe ELISA, sebagai berikut:
1. Direct ELISA, biasanya digunakan dengan kompetisi dan inhibisi ELISA
digunakan untuk deteksi antigen. Teknik ini mendeteksi dan mengukur
konsentrasi antigen tetapi metode ini mempunyai beberapa kelemahan,
yaitu immunoreaktifitas antibodi kemungkinan akan berkurang akibat
bertaut dengan enzim, penautan enzim signal ke setiap antibodi
menghabiskan waktu, tidak memiliki fleksibilitas dan pemilihan tautan
enzim, larutan yang mengandung antigen yang diinginkan harus
dimurnikan sebelum digunakan dan mahal.
2. Indirect ELISA, antigen terikat pada plate, digunakan untuk mendeteksi
antibodi. Enzim bertindak sebagai penanda, bahkan jika hanya sedikit
antibodi terikat enzim yang tetap terikat, molekul enzim akan
memproduksi berbagai molekul sinyal. Kerugian utama dari metode
indirect ELISA adalah metode imobilisasi antigennya nonspesifik,
sehingga setiap protein pada sampel akan menempel pada lubang plate
mikrotiter, sehingga konsentrasi analit yang kecil dalam sampel harus
berkompetisi dengan protein serum lain saat pengikatan pada permukaan
lubang.
35
3. Sandwich ELISA, antibodi terikat pada plate, digunakan untuk deteksi
antigen. Keuntungan utama dari metode sandwich ELISA adalah
kemampuan menguji sampel yang tidak murni, dan mampu mengikat
secara selektif antigen yang dikehendaki. Tanpa lapisan pertama antibodi
penangkap, semua jenis protein pada sampel (termasuk protein serum)
dapat diserap secara kompetitif oleh permukaan lempeng, menurunkan
kuantitas antigen yang termobilisasi.
4. Capture ELISA, antihuman antibodi terikat pada plate. Digunakan untuk
deteksi antibodi (Marfianti, 2009).
2.10 Imunohistokimia
Prinsip dari metoda imunohistokimia adalah perpaduan antara reaksi
imunologi dan kimiawi, di mana reaksi imunologi ditandai dengan adanya reaksi
antara antigen dengan antibodi, dan reaksi kimiawi ditandai dengan adanya enzim.
Enzim yang digunakan untuk melabel antibodi tersebut dapat berupa enzym
peroksidase, alkali fosfatase, dan β-galaktosidase. Apabila antibodi yang
digunakan di label dengan peroksidase, maka substrat yang digunakan adalah
peroksida. Apabila antibodi dilabel dengan alkalifosfatase, maka substrat yang
digunakan adalah alkalifosfat. Demikian juga halnya apabila antibodi di label
dengan β-galaktosidase maka substrat yang digunakan adalah β-galaktosa. Untuk
menandai adanya suatu reaksi enzimatik maka digunakan suatu indikator warna
(chromogen). Chromogen yang dapat digunakan antara lain α-naftol: berwarna
biru dan DAB: bewarna coklat (Sudiana, K., 2004).
Untuk spesimen uji imunohistokimia dapat digunakan jaringan atau organ
yang disimpan dalam keadaan beku pada suhu 80 ºC dan dibuat sediaan sentuh
36
ataupun apus darah dan jaringan. Jika dibuat sediaan histopatologis blok parafin
untuk uji imunohistokimia, maka hasil uji imunohistokimia akan terdistorsi oleh
artifact (kotoran) yang diinduksi oleh adanya kristal es. Jaringan atau organ yang
diblok parafin dipotong dengan mikrotom ketebalan ± 5µ yang merupakan
ketebalan optimal untuk sediaan jaringan histopatologis yang akan diuji
imunohistokimia (Warsito dan Wuryastuti, 2014).
2.11 Kerangka Teori Penelitian
Diabetes melitus (DM) adalah sekelompok gangguan metabolisme
lemak, karbohidrat dan protein yang disebabkan kurangnya sekresi insulin,
kurangnya sensitivitas insulin atau keduanya. Penderita DM yang tidak dapat
mengontrol gula darahnya akan memiliki potensi mengalami komplikasi diabetes
melitus. Salah satu alternatif pengobatan diabetes adalah dengan menggunakan
berbagai tumbuhan terutama yang mengandung senyawa tanin bertindak sebagai
penangkap radikal bebas dan mengaktifkan enzim antioksidan sehingga dapat
memperbaiki keadaan oksidatif patologis pada diabetes. Saponin bertindak sebagai
antioksidan dengan menangkap superoksida dan membentuk hidroksiperoksida
yang mencegah kerusakan biomolekuler yang diakibatkan radikal. Selain itu
senyawa polifenol terutama flavonoid. Flavonoid bersifat antioksidan dan mampu
melindungi sel β pankreas dari reaksi peroksidasi berantai yang disebabkan oleh
ROS, meningkatkan pelepasan insulin. Polifenol dapat mencegah pembentukan
Amadorin product HbA1c, AGEs sehingga dapat menghambat terjadinya
komplikasi diabetes. Kerangka teori penelitian dapat ditunjukkan pada Gambar
2.7.
37
NA Tikus STZ
EEDP & EEDP &

EEHP Kerusakan sel EEHP
β Pankreas
Tanin Flavonoid Sekresi Insulin ↓ Saponin
Hiperglikemia
SOD ↓ ROS ↑
Stress Oksidatif ↑
HbA1c ↑
AGEs ↑
Komplikasi
DM
Keterangan:
: memicu
: menghambat
Gambar 2.7 Kerangka teori penelitian (Menurut: Lavle et al., 2015, Khan et al.,
2012, Kumari dan Jain, 2012).
38
BAB III
METODE PENELITIAN
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode eksperimental
yaitu metode yang digunakan untuk mengamati hubungan variabel bebas dengan
variabel terikat. Penelitian meliputi pengumpulan dan pengolahan bahan tanaman,
pembuatan simplisia, pemeriksaan karakteristik simplisia, pembuatan ekstrak
etanol dari tanaman, skrining fitokimia, uji pengaruh pemberian ekstrak terhadap
penurunan kadar glukosa darah tikus yang telah diinduksi nicotinamida dan
streptozotosin, pengujian kadar SOD, HbA1c dan uji ekspresi insulin pada tikus
yang telah diinduksi NA dan STZ. Kemudian dilakukan analisis statistik dengan
menggunakan One Way ANOVA (Analysis of variance) dan dilanjutkan dengan
uji Tukey dengan program SPSS versi 22.0. Penelitian dilakukan di Laboratorium
Farmakognosi, Laboratorium Farmakologi, Laboratorium Patologi Klinik dan
Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada dan
Laboratorium Patologi Anatomi Rumah Sakit Murni Teguh.
3.1 Alat-alat
Alat-alat yang digunakan terdiri dari lemari pengering, blender
(Panasonik), oven (Memmert), penangas air, mortir dan stamfer, aluminium foil,
kaca objek, kaca penutup, kertas saring, rotary evaporator, desikator (Iaswerk
Werti), neraca listrik (Mettler Toledo), seperangkat alat destilasi, seperangkat alat
PK air, timbangan hewan, tanur, mikroskop (Olympus), mikrotube, microplate
reade, spuit, oral sonde, glukometer dan strip glukotes (Easy Touch® GCU),
sentrifuse, spatula, vial, pipet tetes, serta alat - alat gelas lainnya.
39
3.2 Bahan-bahan
Bahan yang digunakan terdiri dari nicotinamida (Brataco-Chem),
streptozotosin (Nacalai Tasque, Kyoto, Jepang), Na-CMC, tablet glibenklamid
(INDOFARMA), etanol 96%, akuades, akuabides, kalium iodida, iodium, bismut
(III) nitrat, raksa (II) klorida, besi (III) klorida, alfa naftol, asam nitrat pekat,
timbal (II) asetat, asam klorida pekat, natrium hidroksida, asam sulfat pekat, asam
asetat anhidrida, kloralhidrat, amil alkohol, HCl 2N, isopropanol, kloroform, asam
nitrat 0,5 N, serbuk magnesium, toluen, n-heksan, asam sitrat, natrium sitrat,
ketamin-hameln (PT. Combiphar) wash buffer, larutan biotin, larutan SABC dan
Kit fine test.
3.3 Pembuatan Pereaksi

3.3.1 Pereaksi Bouchardat
Sebanyak 4 g kalium iodida P dilarutkan dalam air suling secukupnya
kemudian ditambahkan 2 g iodida sedikit demi sedikit, cukupkan dengan air suling
sampai 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.3.2 Pereaksi Dragendorff
Larutan bismut (III) nitrat P 40% b/v dalam asam nitrat P sebanyak 20 mL
kemudian dicampurkan dengan 50 mL larutan kalium iodida P 54,4% b/v,
didiamkan sampai memisah sempurna. Larutan jernih diambil dan diencerkan
dengan air suling secukupnya hingga 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.3.3 Pereaksi Mayer
Larutan raksa (II) klorida P 2,266% b/v sebanyak 60 mL dicampur dengan
10 mL larutan kalium iodida P 50% b/v. Kedua larutan dicampurkan dan
ditambahkan air suling hingga diperoleh larutan 100 mL (Depkes RI, 1995).
40
3.3.4 Pereaksi Besi (III) Klorida 1% b/v
Sebanyak 1 g besi (III) klorida dilarutkan dalam air suling sampai 100 mL
(Depkes RI, 1995).
3.3.5 Pereaksi Molisch
Sebanyak 3 g α-naftol P dilarutkan dalam asam nitrat 0,5 N hingga
diperoleh larutan 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.3.6 Pereaksi Timbal (II) Asetat 0,4 M
Timbal (II) asetat sebanyak 15,17 g dilarutkan dalam air suling bebas CO2
hingga 100 mL (Depkes RI, 1995)
3.3.7 Pereaksi Asam Klorida 2 N
Sebanyak 17 mL asam klorida pekat diencerkan dengan air suling sampai
100 mL (Depkes RI, 1995).
3.3.8 Pereaksi Natrium Hidroksida 2 N
Sebanyak 8,001 g pellet natrium hidroksida ditimbang, kemudian
dilarutkan dalam air suling hingga 100 mL (Depkes RI, 1995).
3.3.9 Pereaksi Asam Sulfat 2 N
Larutan asam sulfat pekat sebanyak 9,8 mL ditambahkan air suling sampai
100 mL (Depkes RI, 1995).
3.3.10 Pereaksi Liebermann-Burchard
Campurkan 5 mL asam sulfat pekat dengan 50 mL etanol. Ditambahkan 5
mL asam asetat anhidrida ke dalam campuran tersebut (Depkes RI, 1995).
3.3.11 Larutan Kloralhidrat
Sebanyak 50 g kloralhidrat ditimbang lalu dilarutkan dalam 20 mL air
suling (Depkes RI, 1995).
41
3.3.12 Buffer Formalin
Sebanyak 4 g sodium hydrogen fosfat mono basik dan 6,5 g sodium
hydrogen fosfat dibasik dilarutkan dalam 900 mL aquades, setelah larut kemudian
tambahkan dengan formalin 10 % sebanyak 100 mL (Sudiana, 2004).
3.4 Penyiapan Sampel
3.4.1 Pengumpulan Bahan Tumbuhan
Metode pengumpulan bahan tumbuhan dilakukan secara purposif yaitu
mengambil sampel tumbuhan dengan sengaja dari satu tempat tanpa
membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan yang
digunakan adalah Pirdot (Saurauia vulcani Korth.) diambil dari desa Sipangan
Bolon, Kecamatan Girsang Sipangan Bolon, Kabupaten Tapanuli Utara, Provinsi
Sumatera Utara. Bagian tanaman yang digunakan adalah daun Poguntano (Picria
fel-terrae Lour.) yang diambil dari Desa Tiga Lingga, Kabupaten Dairi, Provinsi
Sumatera Utara. Bagian tanaman yang digunakan adalah herba.
3.4.2 Identifikasi Tumbuhan
Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Medanense (MEDAN),
Universitas Sumatera Utara, JL. Bioteknologi No. 1 Kampus USU, Medan dan
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Jl. Raya Jakarta – Bogor Km. 46
Cibinong 16911 Bogor – Indonesia.
3.4.3 Pembuatan Simplisia
Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah daun pirdot (Saurauia
vulcani Korth) dan herba poguntano (Picria fel-terrae Lour.) yang masih segar.
Daun pirdot (Saurauia vulcani Korth.) dan herba poguntano (Picria fel-
terrae Lour.) disortasi, dicuci hingga bersih, ditiriskan, kemudian dikeringkan
42
dengan cara diangin-anginkan, selanjutnya ditimbang sebagai berat basah.
Selanjutnya dikeringkan dalam lemari pengering pada temperatur ± 40°C sampai
kering (ditandai bila diremas rapuh), kemudian ditimbang sebagai berat kering.
Simplisia yang telah kering diblender menjadi serbuk lalu disimpan dalam wadah
tertutup rapat pada suhu kamar.
3.5 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik dan
organoleptik, mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut dalam
air, penetapan kadar sari larut dalam etanol, penetapan kadar abu total, penetapan
kadar abu tidak larut dalam asam.
3.5.1 Pemeriksaan Makroskopik dan Organoleptik
Pemeriksaan makroskopik dilakukan dengan mengamati bentuk, tekstur
dan ukuran serta pemeriksaan organoleptik dengan mengamati warna, rasa dan bau
dari tumbuhan segar, simplisia dan serbuk simplisia daun pirdot dan herba
poguntano (Picria fel-terrae Lour.)
3.5.2 Pemeriksaan Mikroskopik
Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun pirdot
(Saurauia vulcani Korth.) dan herba Poguntano (Picria fel-terrae Lour). Serbuk
simplisia ditaburkan pada objek glass yang telah ditetesi larutan kloralhidrat
kemudian ditutup dengan kaca penutup, lalu diamati dibawah mikroskop.
3.5.3 Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air dilakukan menurut metode Azeotropi. Sebanyak 200
mL toluen dimasukkan ke dalam labu alas bulat, lalu ditambahkan 2 mL air suling,
setelah alat dipasang, kemudian didestilasi selama 2 jam. Destilasi dihentikan dan
43
dibiarkan dingin selama ± 30 menit, kemudian volume air dalam tabung penerima
dibaca dengan ketelitian 0,05 mL.
Ke dalam labu berisi toluen tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang
telah ditimbang seksama lalu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluen
mendidih, kecepatan toluen diatur 2 tetes per detik sampai sebagian besar air
terdestilasi, kemudian kecepatan destilasi dinaikkan sampai 4 tetes per detik.
Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluen.
Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, tabung penerima dibiarkan mendingin pada
suhu kamar. Setelah air dan toluen memisah sempurna, volume air dibaca dengan
ketelitian 0,05 mL. Selisih kedua volume air, dibaca sesuai dengan kadar air yang
terdapat dalam bahan yang diperiksa, kadar air dihitung dalam persen (WHO,
2011).
3.5.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dengan 100 mL
air-kloroform (2,5 mL kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu
bersumbat, dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18
jam, kemudian disaring. Sejumlah 20 mL filtrat pertama diuapkan sampai kering
dalam cawan penguap yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada
suhu 105ºC sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam air
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.5.5 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol
Sebanyak 5 g serbuk simplisia dimaserasi selama 24 jam dalam 100 mL
etanol 96% di dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam
pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam, setelah itu disaring cepat untuk
menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20 mL filtrat diuapkan dalam cawan
44
penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara sampai kering. Sisa
yang diperoleh dipanaskan pada suhu 105ºC sampai bobot tetap. Kadar dalam
persen sari yang larut dalam etanol 96% dihitung terhadap bahan yang telah
dikeringkan (Depkes RI, 1995).
3.5.6 Penetapan Kadar Abu Total
Sebanyak 2 g serbuk yang telah digerus dimasukkan ke dalam krus porselin
yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus porselin dipijar perlahan-
lahan sampai arang habis, pemijaran dilakukan pada suhu 500-600°C selama 3 jam
kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu
dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (WHO, 2011).
3.5.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
Abu yang telah diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam
25lmL asam klorida encer selama 5 menit. Bagian yang tidak larut asam
dikumpulkan, disaring melalui kertas saring dan dipijar sampai bobot tetap,
kemudian didinginkan dan ditimbang. Kadar abu yang tidak larut dalam asam
(WHO, 2011).
3.6 Skrining Fitokimia Simplisia
Skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak meliputi pemeriksaan
senyawa golongan flavonoid, alkaloid, saponin, tannin, glikosida, dan
steroid/triterpenoid.
3.6.1 Pemeriksaan Flavonoid
Larutan Percobaan:
Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia disari dengan 10 mL metanol lalu
direfluks selama 10 menit, disaring panas-panas melalui kertas saring berlipat,
45
filtrat diencerkan dengan 10 mL air suling. Setelah dingin ditambah 5 mL eter
minyak tanah, dikocok hati-hati, didiamkan. Lapisan metanol diambil, diuapkan
pada temperatur 40oC. Sisa dilarutkan dalam 5 mL etil asetat, disaring.
Cara Percobaan :
i. 1 mL larutan percobaan diuapkan hingga kering, sisanya dilarutkan dalam 1-2
mL etanol 96%, ditambahkan 0,5 g serbuk seng dan 2 mL asam klorida 2 N,
didiamkan selama satu menit. Ditambahkan 10 mL asam klorida pekat, jika
dalam waktu 2-5 menit terjadi warna merah intensif menunjukkan adanya
flavonoida (glikosida-3-flavonol).
ii. 1 mL larutan percobaan diuapkan hingga kering, sisanya dilarutkan dalam 1
mL etanol 96%, ditambahkan 0,1 g magnesium dan 10 mL asam klorida pekat,
terjadi warna merah jingga sampai merah ungu menunjukkan adanya
flavonoida (Depkes RI, 1995).
3.6.2 Pemeriksaan Alkaloida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 mL
asam klorida 2 N dan 9 mL air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2
menit, didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk uji alkaloida:
diambil 3 tabung reaksi, lalu ke dalamnya dimasukkan 0,5 mL filtrat.
a. filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes larutan pereaksi mayer, terbentuk endapan
menggumpal berwarna putih atau kuning
b. filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes larutan pereaksi bouchardat, terbentuk
endapan coklat sampai hitam
c. filtrat 3 tetes ditambah 2 tetes larutan pereaksi dragendorff terbentuk warna
merah atau jingga
46
Alkaloida positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada paling sedikit
dua dari tiga percobaan di atas (Depkes RI, 1995).
3.6.3 Pemeriksaan Saponin
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukkan ke dalam
tabung reaksi, lalu ditambahkan 10 mL air panas, didinginkan kemudian dikocok
kuat-kuat selama 10 detik. Jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak
kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2N
menunjukkan adanya saponin (Depkes RI, 1995).
3.6.4 Pemeriksaan Tanin
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g, dididihkan selama 2 menit
dalam 10 mL air suling lalu didinginkan dan disaring. Pada filtrat ditambahkan 1-2
tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru kehitaman atau hijau
kehitaman menunjukkan adanya tanin (Depkes RI, 1989).
3.6.5 Pemeriksaan Glikosida
Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 2 g, lalu disari dengan 20 mL
campuran etanol 95% dengan air (7:2) dan 10 mL asam klorida 2N, direfluks
selama 2 jam, didinginkan dan disaring. Diambil 20 mL filtrat ditambahkan 25 mL
air suling dan 25 mL timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan 5 menit lalu
disaring. Filtrat disari dengan 20 mL campuran isopropanol dan kloroform (2:2),
dilakukan berulang kali sebanyak 2 kali. Sari air dikumpulkan dan diuapkan pada
temperatur tidak lebih dari 500 . Sisanya dilarutkan dalam 2 mL metanol. Larutan
sisa digunakan untuk percobaan berikut: 0,1 mL larutan percobaan dimasukkan
dalam tabung reaksi dan diuapkan di atas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2
mL air dan 5 tetes pereaksi Molisch. Kemudian secara perlahan-lahan
47
ditambahkan 2 mL asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuknya cincin
berwarna ungu pada batas kedua cairan menunjukkan glikosida (Depkes RI, 1995).
3.6.6 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid
Sebanyak 1 g serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 mL n- selama 2 jam,
lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa ditambahkan
beberapa tetes pereaksi Liebermann-Burchard. Terbentuk warna biru atau biru
hijau menunjukkan adanya steroid sedangkan warna merah, merah muda atau ungu
menunjukkan adanya triterpenoid (Harborne, 1987).
3.7 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Pirdot (EEDP) dan Ekstrak Etanol
Herba Poguntano (EEHP)
Sebanyak 500 g masing-masing serbuk simplisia daun pirdot dan herba
poguntano dimasukkan ke dalam bejana kemudian ditambahkan pelarut etanol
sampai serbuk simplisia terendam dengan 10 bagian pelarut etanol, ditutup dan
direndam selama 6 jam pertama, kemudian didiamkan selama 18 jam. Dipisahkan
maserat dengan cara disaring. Diulangi proses penyarian sebanyak tiga kali dengan
setengah kali jumlah volume pelarut pada penyarian pertama. Pemekatan ekstrak
dilakukan menggunakan alat rotary evaporator pada temperatur ± 40oC sampai
diperoleh ekstrak kental (Depkes RI, 2013).
3.8 Pembuatan Sediaan Uji
3.8.1 Sediaan Suspensi Na-CMC 0,5%
Lumpang dan alu dipanaskan. Ditimbang Na-CMC sebanyak 0,5 g.
Masukkan 20 bagian air panas kedalam lumpang, taburkan Na-CMC diatasnya dan
diamkan selama 15 menit hingga diperoleh massa yang transparan, lalu digerus
48
sampai homogen, diencerkan dengan air suling, kemudian dihomogenkan,
dimasukkan kedalam labu tentukur, dicukupkan dengan air suling hingga 100 mL.
3.8.2 Pembuatan Suspensi Glibenklamid
Dosis glibenklamid untuk manusia 5 mg per hari, maka dosis untuk tikus
berat 200 g dikonversikan = 0,018 x 5 mg = 0,09 mg. Dosis per kg berat badan=
1000/200 x 0,09 mg = 0,45 mg/kg bb. Timbang tablet glibenklamid setara 0,45 mg
masukkan dalam lumpang ditambahkan Na-CMC 0,5% gerus sampai homogen
kemudian cukupkan volumenya 10 mL.
3.8.3 Pembuatan Larutan Nicotinamida (NA)
Sebanyak 230 mg nicotinamida dilarutkan dalam 10 mL larutan NaCl 0,9
% (Masiello, 1998).
3.8.4 Pembuatan Larutan Streptozotosin (STZ)
Sebanyak 65 mg STZ dilarutkan dalam 10 mL larutan NaCl 0,9 %
(Masiello, 1998).
3.8.5 Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Pirdot (EEDP) dan Ektrak
Etanol Herba Poguntano (EEHP)
Ditimbang masing-masing EEDP dan EEHP dosis 100 mg/kg bb dengan
gelas arloji kemudian dimasukkan ke dalam lumpang dan ditambahkan suspensi
Na-CMC 0,5% sedikit demi sedikit sambil digerus sampai homogen lalu
dimasukkan ke dalam labu tentukur 10 mL. Volume dicukupkan dengan suspensi
Na-CMC 0,5% sampai garis tanda.
3.9 Penyiapan Hewan Uji
Hewan yang digunakan adalah tikus putih jantan dengan berat badan 180-
200 gram dibagi 8 kelompok, setiap kelompok terdiri dari 4 ekor. Sebelum
percobaaan, terlebih dahulu diaklimatisasi selama 2 minggu.
49
Penentuan besar sampel dihitung dengan rumus Federer sebagai berikut :
(t 1) (n 1) 15
Keterangan :
t = jumlah kelompok perlakuan
n = besar sampel tiap kelompok
3.10 Pengujian Efek Antidiabetes Ekstrak Etanol Daun Pirdot (EEDP) dan
Ektrak Etanol Herba Poguntano (EEHP)
3.10.1 Pengukuran Kadar Glukosa Darah (KGD)
Darah tikus diambil dari ujung ekor, ekor dibersihkan dengan alkohol 70%
kemudian disayat dengan pisau silet dan darah yang keluar ditempelkan pada
kertas strip glukometer yang sudah terpasang pada alatnya kemudian angka yang
tertera dilayar alat tersebut dicatat, bekas luka ujung ekor tikus diberi alkohol 70%.
3.10.2 Penginduksian Hewan Uji
Tikus jantan sebanyak 32 ekor dengan berat badan 180-200 g yang telah
dipuasakan selama 18 jam, ditimbang berat badannya, ditentukan KGD puasa,
diinduksi dengan larutan nicotinamida 230 mg/kg bb secara intraperitonial, setelah
15 menit kemudian diinduksikan larutan streptozotosin 65 mg/kg secara
intraperitonial (Masiello et al., 1998). Tikus diukur kadar glukosa darahnya pada
hari ke-5 (Szkudelski, 2012). Tikus dianggap diabetes apabila kadar glukosa darah
puasa ≥ 200 mg/dL dan dapat digunakan untuk pengujian.
3.11 Uji Aktivitas Antidiabetes Kombinasi EEDP dan EEHP
Uji aktivitas antidiabetes menggunakan kombinasi EEDP dan EEHP yang
diberikan peroral satu kali pemberian setiap harinya. Hewan uji yang digunakan
50
dalam percobaan ini tikus putih galur wistar yang sudah diinduksi nicotinamida
dan streptozotosin dibagi dalam 8 kelompok dan masing-masing kelompok terdiri
dari 4 ekor, yaitu:
Kelompok 1 : suspensi Na-CMC
Kelompok 2 : EEDP dosis 100 mg/kg bb.
Kelompok 3 : EEHP dosis 100 mg/kg bb.
Kelompok 4 : kombinasi EEDP dan EEHP dosis 25:75 mg/kg bb.
Kelompok 7 : glibenklamid dosis 0,45 mg/kg bb sebagai kontrol positif.
Kelompok 8 : normal (tanpa perlakuan)
Masing-masing kelompok diberi sediaan uji secara oral, kemudian
dilakukan pengukuran kadar glukosa darah pada hari ke-4, 8, 12, 16, 20, 24, 28
(Krishnasamy, 2016). Pada hari ke-28 hewan uji dianestesi terlebih dahulu
menggunakan ketamin kemudian dibedah, diambil darah 3 - 3,5 mL dari jantung
untuk memperoleh plasma yang digunakan untuk penetapan kadar SOD, HbA1c.
Organ pankreas tikus diambil untuk pemeriksaan ekspresi insulin.
3.12 Penetapan Kadar SOD dan HbA1c
3.12.1 Pengambilan Plasma Darah Tikus
Darah yang didapat disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 3000-
4000 rpm hingga terpisah antara supernatan dan endapannya. Lapisan supernatan
diambil dengan menggunakan spuit dan ditampung didalam mikrotube.
51
3.12.2 Pembuatan Larutan Uji
3.12.2.1 Pembuatan larutan wash buffer
Sebanyak 30 mL wash buffer pekat diencerkan dengan 750 mL akuades
(1:25), kemudian diaduk sampai homogen (Wuhan Fine BioTech, 2013).
3.12.2.2 Pembuatan larutan standar
Sebanyak 1 mL larutan buffer standar dimasukkan ke dalam mikro tube
untuk menghasilkan 1000 pg/mL, 500 pg/mL, 250 pg/mL, 125 pg/mL, 62,5
pg/mL, 31,25 pg/mL dan 15,6 pg/mL larutan standar SOD dan 100 ng/mL, 50
ng/mL, 25 ng/mL, 12,5 ng/mL, 6,25 ng/mL, 3,125 ng/mL dan 1,56 ng/mL larutan
standar HbA1c (Wuhan Fine BioTech, 2013).
3.12.2.3 Pembuatan larutan antibodi biotin
Preparasi 1 jam sebelum pengujian kemudian dihitung volume yang
dibutuhkan untuk larutan pengujian: 0,1 mL/sumur x jumlah sumur (volume total
± 0,1 – 0,2 mL). Dilarutkan larutan deteksi antibodi biotin dengan larutan buffer
antibodi 1:100 dan aduk homogen (Wuhan Fine BioTech, 2013).
3.12.2.4 Pembuatan larutan Horseradish Peroxidase (HRP)-Streptavidin

Conjugate (SABC)
Preparasi 30 menit sebelum pengujian dihitung total volume yang
dibutuhkan untuk larutan pengujian 0,1 mL/sumur x jumlah sumur (volume total
±0,1 – 0,2 mL). Dilarutkan larutan SABC dengan larutan buffer SABC 1:100 dan
aduk homogen (Wuhan Fine BioTech, 2013).
3.12.3 Pengukuran Kadar SOD dan HbA1c dengan Metode ELISA
Disiapkan alat dan bahan, dicuci plate dengan wash buffer 2 kali,
ditambahkan 100 μl standar, sampel dan kontrol nol kedalam masing-masing
sumur, ditutup dan diinkubasi selama 90 menit pada suhu 37°C. Dicuci Plate
52
dengan wash buffer 2 kali tambahkan 100 µl biotin solution kedalam masing –
masing sumur dan diinkubasikan selama 60 menit pada suhu 370C. Dicuci plate
dengan wash buffer 3 kali kemudian ditambahkan 100 µl larutan SABC masukkan
kedalam sumur dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu 370 terlindung dari
cahaya. Dicuci plate dengan menggunakan wash buffer 5 kali tambahkan 90 µl
TMB substrat pada masing – masing sumur dan diinkubasikan 15–30 menit pada
suhu 37oC, terlindung dari cahaya. Diamati perubahan warna (beberapa larutan
dalam sumur akan berubah menjadi warna biru sesuai dengan konsentrasi).
Ditambahkan 50 µl stop solution pada masing- masing sumur dan diamati
perubahan warna yang munculnya warna kuning. Dibaca serapan dengan
microplate reader pada panjang gelombang 450 nm dan dihitung kadarnya
(Wuhan Fine BioTech, 2013).
3.13 Pengujian Ekspresi Insulin dengan Metode Imunohistokimia
Pengujian ekspresi insulin dengan metode Imunohistokimia, dengan
mengamati dan menghitung ekspresi insulin dengan menggunakan mikroskop.
Prosedur pulasan immunohistokimia insulin di Laboratorium Patologi Anatomi
Rumah Sakit Murni Teguh:
a. Fiksasi, pankreas yang sudah diambil melalui pembedahan difiksasi dalam
larutan buffer formalin 10%.
b. Dehidrasi dilakukan secara bertahap. Pertama dilakukan dehidrasi dalam
larutan alkohol 50%, 70%, 80%, 95%, 100% dengan lama waktu yang sama
untuk setiap kadar alkohol yaitu 90 menit sebanyak 2 kali.
c. Clearing, pankreas dimasukkan kedalam larutan yang berisi xylol selama 90

menit.
53
d. Infiltrasi, dilakukan dengan memasukkan pankreas kedalam larutan parafin
90 menit dan dilakukan sebanyak 2 kali. Infiltrasi dilakukan di dalam oven
dengan suhu 60°C.
e. Embedding, pankreas dan larutan paraffin dimasukkan kedalam cetakan blok
paraffin dan dibiarkan selama ± 3 jam atau sampai paraffin membeku.
f. Sectioning, blok paraffin yang sudah terbentuk dilakukan pemotongan
dengan rotary microtom. Jaringan dipotong dengan ketebalan 3-4 µm dan
diletakkan diatas objek glass poly-L-lysine, kemudian dibiarkan di inkubator
selama semalam pada suhu 40°C.
g. Deparafinisasi, secara berurutan dimasukkan kedalam larutan xylol, alkohol
100%, alkohol 95%, alkohol 80%, alkohol 70%, alkohol 50%, selama
masing masing 90 menit sebanyak 2 kali.
h. Peroxidase blocking dengan 0,3% H2O2 dalam methanol selama 20 menit
i. Preparat dicuci dengan Phosphat Buffer Saline (PBS) 10% sebanyak 3x 5
menit
j. Kemudian dilakukan nonspesifik blocking dengan 10% serum normal
selama 30 menit.
k. Diinkubasi dengan antibodi primer di suhu 4°C selama 18–22 jam
l. Preparat dicuci dengan Phosphat Buffer Saline (PBS) 10% sebanyak 3x
selama 5 menit.
m. Ditetesi dengan antibodi sekunder (universal antibodi) selama 30 menit
n. Kemudian preparat dicuci dengan Phosphat Buffer Saline (PBS) 10%
sebanyak 3x selama 5 menit.
o. Ditetesi dengan Chromogen 3,3-diaminobenzedine selama 5-10 detik.
54
p. Dicuci dengan aquades, diberi counterstain dengan Hematoxylin Mayer 5-10
detik dilanjutkan cuci dengan air kran mengalir 10-15 menit
q. Dehidrasi dengan dimasukkan kedalam alkohol 80%, alkohol 95%, xylol
sebanyak 2 kali
r. Mounting dengan menggunakan E. Z mount (Lab Vision, Cat#MS-1378-
PO).
Dikatakan mengekspresikan jika memberikan warna coklat tua, coklat
sedang dan coklat muda keunguan, sedangkan yang tidak mengekpresikan
berwarna ungu. Analisis kuantitatif dilakukan dengan menghitung ekspresi pada
200 sel yang diamati. Pengamatan preparat dilakukan sebanyak lima lapang
pandang yang berbeda untuk tiap preparat (Suarsana et al., 2016).
3.14 Analisis Data
Data hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan program SPSS versi
22.0. Data dianalisis dengan menggunakan metode Kolmogorov Smirnov untuk
menentukan homogenitas dan normalitasnya. Kemudian dilanjutkan menggunakan
metode One Way ANOVA untuk menentukan perbedaan rata-rata di antara
kelompok. Jika terdapat perbedaan dilanjutkan dengan uji Tukey HSD untuk
melihat perbedaan nyata antar perlakuan.
55
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Identifikasi Tumbuhan
Hasil identifikasi tumbuhan yang dilakukan di Herbarium Medanense,
Universitas Sumatera Utara dan Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI)
Bogor - Pusat Penelitian Biologi menyebutkan bahwa sampel yang digunakan
adalah daun pirdot (Saurauia vulcani Korth.) suku Actinidiaceae dan herba
poguntano (Picria fel-terrae Lour.) suku Linderniaceae. Hasil pemeriksaan dapat
dilihat pada Lampiran 2 halaman 104-105.
4.2 Karakterisasi Simplisia
4.2.1 Hasil Karakterisasi Simplisia Daun Pirdot (Saurauia vulcani Korth.)
Hasil pemeriksaan makroskopik daun pirdot adalah daunnya berukuran
lebar dengan ukuran 14,5 x 32,3 cm bentuk daun menyirip dan memiliki dua sisi
warna yang berbeda, sisi daun bagian atas berwarna hijau dan sisi daun bagian
bawah berwarna kecoklatan. Hasil pemeriksaan makroskopik dapat dilihat pada
Lampiran 3 halaman 106-108.
Hasil pemeriksaan mikroskopik simplisia daun pirdot dapat dilihat pada
Lampiran 6 halaman 110. Daun pirdot memiliki fragmen pengenal seperti berkas
pembuluh xylem bentuk spiral, kristal kalsium oksalat bentuk raphida, dan stomata
dengan tipe parasitik. Hasil karakterisasi simplisia daun pirdot meliputi penetapan
kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol, kadar abu total dan kadar abu
yang tidak larut asam yang dapat dilihat pada Tabel 4.1.
56
Tabel 4.1 Hasil karakterisasi simplisia daun pirdot
No Parameter Hasil (%)

1 Penetapan kadar air 6,12
2 Penetapan kadar sari larut air 10,50
3 Penetapan kadar sari larut etanol 14,77
4 Penetapan kadar abu total 7,05
5 Penetapan kadar abu tidak larut asam 0,48
Hasil penetapan kadar air dari simplisia daun pirdot diperoleh 6,12%, hal
ini sesuai dengan standarisasi kadar air simplisia secara umum dengan syarat yaitu
tidak lebih dari 10% (Depkes RI, 1995). Kadar air berhubungan dengan proses
pengeringan, kadar air ditentukan untuk mengetahui bahwa simplisia yang
digunakan tidak ditumbuhi jamur dan aman digunakan.
Penetapan kadar abu dimaksudkan untuk mengetahui jumlah material yang
tersisa setelah pembakaran, dari hasil penelitian diketahui bahwa kadar abu total
dan kadar abu tidak larut asam pada simplisia daun pirdot adalah 7,05% dan
0,48%. Abu total terbagi dua yang pertama abu fisiologis adalah abu yang berasal
dari jaringan tumbuhan itu sendiri dan abu non fisiologis adalah sisa setelah
pembakaran yang berasal dari bahan – bahan dari luar (seperti pasir dan tanah)
yang terdapat pada permukaan simplisia. Kadar abu tidak larut asam untuk
menentukan jumlah silika, khususnya pasir yang ada pada simplisia dengan cara
melarutkan abu total dalam asam klorida (WHO, 1992).
Penentuan kadar sari larut air untuk mengetahui kadar senyawa kimia
bersifat polar yang terkandung di dalam simplisia daun pirdot yang hasilnya
diperoleh 10,50%, sedangkan kadar sari larut etanol digunakan dilakukan untuk
mengetahui kadar senyawa larut dalam etanol, baik senyawa polar maupun non
polar hasilnya adalah 14,77%. Perhitungan karakterisasi dapat dilihat pada
Lampiran 8 halaman 112-116.
57
4.2.2 Hasil Karakterisasi Simplisia Herba Poguntano
Hasil pemeriksaan makroskopik herba puguntano (Picria fel-terrae Lour.)
adalah daun berwarna hijau muda sampai hijau tua, berbentuk bulat telur, tepi
daun beringgit, ukuran daun 2x4 cm, dengan tekstur permukaan daun kasar,
berkerut-kerut dan berbulu, dengan batang berwarna coklat muda hingga coklat
tua, ukuran batang 20-30 cm serta batang bercabang tunggal. Hasil pemeriksaan
makroskopik dan mikroskopik dapat dilihat pada Lampiran 5 dan 7 halaman 109,
111. Hasil karakterisasi simplisia herba poguntano dapat dilihat pada Tabel 4.2.
Tabel 4.2 Hasil karakterisasi simplisia herba poguntano
No. Parameter Hasil (%)

1 Penetapan kadar air 5,09
2 Penetapan kadar sari larut air 18,45
3 Penetapan kadar sari larut etanol 13,20
4 Penetapan kadar abu total 8,43
5 Penetapan kadar abu tidak larut asam 0,55
Standarisasi simplisia menurut Depkes RI (2000) adalah pemenuhan
terhadap persyaratan sebagai bahan obat dan menjadi penetapan nilai untuk
berbagai parameter produk sehingga dapat terjamin mutu dalam penyimpanan.
Terpenuhinya standar mutu bahan ekstrak tidak terlepas dari pengendalian proses,
artinya bahwa proses yang terstandar dapat menjamin produk terstandar.
Penelitian ini hanya melakukan karakterisasi pada simplisia saja sedangkan
ekstrak tidak dilakukan, dimana dengan bahan baku terstandar dan proses yang
terkendali/terstandar, maka akan diperoleh produk/bahan ekstrak terstandar tanpa
penerapan pengujian atau pemeriksaan. Namun hal tersebut tidak dapat dibiarkan
untuk masa depan era globalisasi. Pengujian atau pemeriksaan persyaratan
parameter standar umum ekstrak mutlak harus dilakukan dengan berpegang pada
manajemen pengendalian mutu eksternal oleh badan formal atau/dan badan
58
independen (Depkes RI, 2000). Perhitungan hasil karakterisasi simplisia dapat
dilihat pada Lampiran 8 halaman 118-122.
4.3 Hasil Ekstraksi
Hasil ekstraksi dari simplisia daun pirdot sebanyak 500 gr yang dimaserasi
dengan pelarut etanol 96% diperoleh hasil ekstrak kental 82,597 g. Hasil ekstraksi
dari simplisia herba poguntano sebanyak 500 gr yang dimaserasi dengan pelarut
etanol 96% diperoleh hasil ekstrak kental 94,385 g.
4.4 Hasil Skrining Fitokimia
4.4.1 Hasil Skrining Fitokimia Daun Pirdot
Hasil skrining fitokimia terhadap serbuk simplisia daun pirdot (Saurauia
vulcani Korth.) dilakukan untuk mendapatkan informasi golongan senyawa
metabolit sekunder yang terdapat di dalamnya. Hasil skrining fitokimia dapat
dilihat pada Tabel 4.3.
Tabel 4.3 Hasil skrining fitokimia simplisia dan EEDP
No Pemeriksaan Simplisia EEDP

1 Alkaloid - -
2 Flavonoid + +
3 Glikosida + +
4 Saponin + +
5 Tanin + +
6 Steroida/triterpenoid + +
Keterangan: (+) positif : mengandung golongan senyawa
(-) negatif : tidak mengandung golongan senyawa
Pemeriksaan golongan senyawa flavonoida dengan penambahan serbuk
magnesium dan asam klorida pekat menghasilkan larutan yang berwarna merah
(Depkes RI, 1995). Penambahan FeCl3 memberikan warna hijau kehitaman yang
59
menunjukkan adanya golongan senyawa tanin (Depkes RI, 1989). Sampel dengan
penambahan akuades panas dan dikocok kuat menghasilkan busa yang stabil
kemudian ditambah HCl 2 N, menunjukkan adanya golongan senyawa saponin
(Depkes RI, 1995). Pemeriksaan golongan senyawa glikosida dengan penambahan
pereaksi Molisch dan asam sulfat pekat membentuk cincin ungu (Depkes RI,
1995). Pemeriksaan golongan senyawa triterpenoida/steroida dengan penambahan
beberapa tetes pereaksi Liebermann-Burchard menghasilkan warna merah muda
atau ungu yang menunjukkan golongan senyawa triterpenoida (Harborne, 1987).
4.4.2 Hasil Skrining Fitokimia Herba Poguntano
Hasil skrining dari simplisia dan ekstrak etanol herba puguntano dapat
dilihat pada tabel 4.4 dibawah ini.
Tabel 4.4 Hasil skrining fitokimia simplisia dan EEHP
No Pemeriksaan Simplisia EEHP

1 Alkaloid - -
2 Flavonoid + +
3 Glikosida + +
4 Saponin + +
5 Tanin + +
6 Steroida/triterpenoid + +
Keterangan: (+) positif: mengandung golongan senyawa
(-) negatif: tidak mengandung golongan senyawa
4.5 Hasil Pengujian Aktivitas Antidiabetes Kombinasi EEDP dan EEHP
Pengukuran rata-rata KGD dilakukan pada tikus yang sebelumnya sudah
dipuasakan selama 18 jam, selanjutnya KGD hasil pengukuran disebut dengan
rata-rata KGD normal atau rata-rata KGD sebelum diinduksi NA dan STZ. Hasil
uji normalitas diperoleh nilai signifikan 0,200 pada α = 0,05 yang menunjukkan
tidak terdapat perbedaan yang signifikan di antara kelompok kontrol, kelompok uji
dan kelompok pembanding. Hal ini menunjukkan bahwa hewan coba yang
60
digunakan dalam kondisi fisiologis yang homogen, yakni dalam kadar glukosa
darah normal sehingga dapat digunakan sebagai hewan uji. Hasil pengukuran
KGD dapat dilihat pada Tabel 4.5.
Tabel 4.5 Hasil pengukuran KGD puasa rata-rata tikus dan KGD setelah diinduksi
NA dan STZ
KGD puasa KGD setelah

(mg/dL) diinduksi NA &STZ
No. Kelompok Perlakuan
Mean ± SEM, (mg/dL)
n=4 Mean ± SEM, n=4
1. Na-CMC 0,5 % 78,75 ± 0,750 333,00 ± 1,780
2. EEDP 100 mg/kg bb 77,75 ± 1,652 341,50 ± 4,573
3. EEHP 100 mg/kg bb 80,75 ± 1,377 347,50 ± 1,323
4. EEDP:EEHP (25:75) mg/kg bb 78,75 ± 1,109 340,50 ± 1,708
5. EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb 78,75 ± 1,109 335,00 ± 2,799
6. EEDP:EEHP (75:25) mg/kg bb 79,00 ± 1,080 333,50 ± 2,754
7. Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 78,00 ± 1,581 336,75 ± 2,689
Tikus diinduksi larutan nikotinamida 230 mg/kg BB dan STZ dosis 65
mg/kg bb secara intraperitoneal, diukur KGD pada hari ke-4 hingga hari ke-28.
Tikus yang telah memiliki KGD ≥ 200 mg/dL selanjutnya disebut tikus diabetes
(hari ke-0) yang ditunjukkan pada Gambar 4.1.
Gambar 4.1 Grafik KGD tikus pada hari ke-0
61
Berdasarkan Gambar 4.1 terlihat bahwa rata-rata KGD setelah diinduksi
nicotinamida 230 mg/kg BB dan STZ dosis 65 mg/kg bb untuk semua hewan
percobaan menghasilkan KGD ≥ 200 mg/dL. Hal ini menunjukkan bahwa tikus
yang digunakan untuk percobaan dalam keadaan hiperglikemia. Hasil tes
homogenitas diperoleh p = 0,200 pada α = 0,05 yang menunjukkan data normal
dan tidak terdapat perbedaan yang signifikan di antara kelompok kontrol,
kelompok uji, dan kelompok kontrol pembanding (Lampiran 10 halaman 120). Hal
ini menunjukkan bahwa hewan coba yang digunakan dalam kondisi fisiologis yang
homogen, yakni tikus sudah dalam kondisi diabetes sehingga dapat digunakan
sebagai hewan uji.
Pemberian perlakuan dimulai setelah tikus positif diabetes (hari ke-0),
kemudian setiap hari diberi sediaan uji pada masing-masing kelompok uji selama
27 hari, dan dilakukan pengukuran KGD pada hari ke- 4, 8, 12, 16, 20, 24 dan 28.
Data KGD (mg/dL) masing-masing kelompok tikus, dihitung rata-rata KGD antar
individu, kemudian dianalisis secara statistik menggunakan ANOVA dan
dilanjutkan uji Post Hoc Tukey HSD untuk melihat beda signifikan antar
perlakuan. Hasil pengukuran KGD rata-rata hari ke-4 sampai ke-28 dapat dilihat
dibawah ini:
a. Pengamatan Hari ke 4
Data kelompok hari ke-4 menunjukkan penurunan KGD jika dibandingkan
dengan KGD pada hari ke-0, kecuali kontrol negatif terjadi kenaikan KGD.
Suspensi EEDP 100 mg/kg bb terjadi penurunan KGD menjadi 310,75 mg/dL;
EEHP 100 mg/kg bb menjadi 324,25 mg/dL; sedangkan kombinasi suspensi EEDP
dan EEHP (25:75) mg/kg bb memberikan penurunan KGD menjadi 340,5 mg/dL;
EEDP dan EEHP (50:50) mg/kg bb menjadi 296 mg/dL; EEDP dan EEHP (75:25)
62
mg/kg bb menjadi 293 mg/dL; suspensi glibenklamid menjadi 295,75 mg/dL;
sedangkan pada kelompok normal (tanpa perlakuan) menunjukkan KGD dalam
kisaran normal yaitu 85 mg/dL. Penurunan KGD rerata terbesar terjadi pada EEDP
dan EEHP (75:25) mg/kg bb, kemudian glibenklamid 0,45 mg/kg bb, sedangkan
yang terkecil pada Na-CMC, yang ditunjukkan pada Gambar 4.2.
Berdasarkan perhitungan statistik pada hari ke-4 pada Tabel 4.6, kelompok
hewan uji yang diberikan suspensi EEDP 100 mg/kg bb, EEHP 100 mg/kg bb,
EEDP:EEHP (25:75) mg/kg bb, EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb, EEDP:EEHP
(75:25) mg/kg bb, memiliki nilai signifikan < 0,05 jika dibandingkan dengan
kelompok hewan uji yang diberikan Na-CMC dan kelompok normal. Hal ini
menunjukkan bahwa pemberian kelima suspensi tersebut, memberikan efek yang
berbeda nyata/signifikan jika dibandingkan dengan kelompok kontrol Na-CMC
dan kelompok normal. Pemberian EEDP:EEHP (25:75) mg/kg bb,EEDP:EEHP
(50:50) mg/kg bb, EEDP:EEHP (75:25) mg/kg bb memiliki nilai signifikan > 0,05
jika dibandingkan dengan kelompok pembanding glibenklamid. Hal ini
63
menyatakan bahwa tidak terdapat perbedaan yang nyata antara ketiga kelompok
tersebut terhadap kelompok glibenklamid.
Tabel 4.6 Hasil KGD rata-rata dan uji beda variasi perlakuan tikus hari ke-4
KGD rata-rata setelah perlakuan (mg/dL) ±

Kelompok Perlakuan SEM
Hari ke-4 P
Kontrol Na-CMC 0,5 % 337,00 ± 1,581 -
0,000b
0,000c
EEDP 100 mg/kg bb 310,75 ± 3,728 0,000a
0,131b
0,000c
EEHP 100 mg/kg bb 324,25 ± 1,750 0,049a
0,000b
0,000c
EEDP:EEHP (25:75) mg/kg bb 308,25 ± 3,473 0,000a
0,057
0,000c
1,000
0,000c
0,996
0,000c
Glibenklamid0,45 mg/kg bb 295,75 ± 2,955 0,000a
-
0,000c
Normal (Tanpa Perlakuan) 85,00 ± 0,913 0,000a
0,000b
-
Keterangan :
a
berbeda signifikan dengan kelompok kontrol Na-CMC
b
berbeda signifikan dengan kelompok pembanding glibenklamid
c
berbeda signifikan dengan kelompok normal
b. Pengamatan Hari ke 8
Dibandingkan hari ke-4, hari ke-8 terjadi perubahan KGD rata-rata sebagai
berikut: kontrol negatif terjadi peningkatan KGD menjadi 340,75; EEDP 100
mg/kg bb terjadi penurunan KGD menjadi 282,75 mg/dL; EEHP 100 mg/kg bb
menjadi 294,25 mg/dL; kombinasi suspensi EEDP dan EEHP (25:75) mg/kg bb
64
memberikan penurunan KGD menjadi 285,00 mg/dL; EEDP dan EEHP (50:50)
mg/kg bb menjadi 258,75 mg/dL; EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb menjadi
252,00 mg/dL; glibenklamid menjadi 256,25 mg/dL; sedangkan pada kelompok
normal (tanpa perlakuan) menunjukkan KGD dalam kisaran normal yaitu 85,75
mg/dL. Perbedaan penurunan KGD terbesar terjadi pada EEDP dan EEHP (75:25)
mg/kg bb; glibenklamid 0,45 mg/kg bb, sedangkan yang terkecil kontrol negatif
yang dapat dilihat pada Gambar 4.3.
Berdasarkan perhitungan statistik pada hari ke-8 pada Tabel 4.7, kelompok
hewan uji yang diberikan suspensi EEDP 100 mg/kg bb, EEHP 100 mg/kg bb,
(75:25) mg/kg bb, memiliki nilai signifikan < 0,05 jika dibandingkan dengan
kelompok hewan uji yang diberikan Na-CMC dan kelompok normal. Hal ini
menunjukkan bahwa tiap kelompok perlakuan tersebut memiliki efek yang
berbeda signifikan menurut statistik jika dibandingkan dengan kelompok kontrol
Na-CMC dan kelompok normal.
65

Hari ke-8 P
Kontrol Na-CMC 0,5 % 340,75 ± 1,377 -
0,000b
0,000c
EEDP 100 mg/kg bb 282,75 ± 3,425 0,000a
0,000b
0,000c
EEHP 100 mg/kg bb 294,25 ± 1,493 0,000a
0,000b
0,000c
0,000b
0,000c
0,998
0,000c
0,964
0,000c
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 256,25 ± 3,301 0,000a
-
0,000c
0,000b
-
Keterangan :
a
b
c
Pemberian EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb, EEDP:EEHP (75:25) mg/kg
bbmemiliki nilai signifikan > 0,05 jika dibandingkan dengan kelompok
pembanding glibenklamid. Hal ini menyatakan bahwa tidak terdapat perbedaan
yang nyata antara tiap kelompok perlakuan tersebut dengan kelompok
glibenklamid. Kelompok glibenklamid belum menyamai kelompok normal dengan
nilai signifikan < 0,05 yang berarti terdapat perbedaan yang nyata antara kelompok
glibenklamid dan kelompok normal.
66
c. Pengamatan Hari ke 12
Data KGD pada hari ke-12 menunjukkan penurunan dibandingkan hari ke-
8 sebagai berikut: kontrol negatif terjadi kenaikan KGD menjadi 345,25; EEDP
100 mg/kg bb terjadi penurunan KGD menjadi 250,25 mg/dL; EEHP 100 mg/kg
bb menjadi 259,25 mg/dL; kombinasi suspensi EEDP dan EEHP (25:75) mg/kg bb
memberikan penurunan KGD menjadi 251,50 mg/dL; EEDP dan EEHP (50:50)
214,50 mg/dL; glibenklamid menjadi 218,50 mg/dL; sedangkan pada kelompok
normal (tanpa perlakuan) menunjukkan KGD dalam kisaran normal yaitu 85,75
mg/dL. Penurunan KGD terbesar terjadi pada EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb
dan glibenklamid 0,45 mg/kg bb, sedangkan yang terkecil adalah kontrol negatif.
Berdasarkan perhitungan statistik menunjukkan bahwa pemberian EEDP
100 mg/kg bb, EEHP 100 mg/kg bb, EEDP:EEHP (25:75) mg/kg bb, EEDP:EEHP
(50:50) mg/kg bb, EEDP:EEHP (75:25) mg/kg bb, memiliki nilai signifikan < 0,05
jika dibandingkan dengan kelompok Na-CMC dan kelompok normal. Hal ini
67
menunjukkan bahwa tiap kelompok perlakuan tersebut memiliki perbedaan yang
signifikan terhadap kelompok kontrol Na-CMC dan kelompok normal yang dapat
dilihat pada Tabel 4.8.

Hari ke-12 P
Kontrol Na-CMC 0,5 % 345,25 ± 0,946 -
0,000b
0,000c
EEDP 100 mg/kg bb 250,25 ± 3,038 0,000a
0,000b
0,000c
EEHP 100 mg/kg bb 259,25 ± 1,652 0,000a
0,000b
0,000c
0,000b
0,000c
0,917
0,000c
0,965
0,000c
-
0,000c
0,000b
-
Keterangan :
a
b
c
Pemberian EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb dan EEDP:EEHP (75:25) mg/kg
bb memiliki nilai signifikan > 0,05 terhadap kelompok pembanding glibenklamid.
Hal ini menyatakan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan terhadap
kelompok glibenklamid.
68
d. Pengamatan Hari ke 16
Penurunan KGD rerata hari ke-16, kontrol negatif terjadi kenaikan KGD
menjadi 350,00 mg/dL; EEDP 100 mg/kg bb terjadi penurunan KGD menjadi
217,25 mg/dL; EEHP 100 mg/kg bb menjadi 228,50 mg/dL; kombinasi suspensi
EEDP dan EEHP (25:75) mg/kg bb memberikan penurunan KGD menjadi 216,00
mg/dL; EEDP dan EEHP (50:50) mg/kg bb menjadi 186,25 mg/dL; EEDP dan
EEHP (75:25) mg/kg bb menjadi 175,00 mg/dL; glibenklamid menjadi 178,50
mg/dL; sedangkan pada kelompok normal menunjukkan KGD dalam kisaran
normal yaitu 88,00 mg/dL. Penurunan KGD terbesar terjadi pada kelompok
kombinasi EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb dan glibenklamid 0,45 mg/kg bb,
sedangkan yang terkecil pada kontrol negatif yang dapat dilihat pada Gambar 4.5.
Berdasarkan perhitungan statistik menunjukkan bahwa pemberian EEDP
100 mg/kg bb, EEHP 100 mg/kg bb, EEDP:EEHP (25:75) mg/kg bb, EEDP:EEHP
(50:50) mg/kg bb, EEDP:EEHP (75:25) mg/kg bb memiliki nilai signifikan < 0,05
jika dibandingkan dengan kelompok hewan uji yang diberikan Na-CMC dan
69
kelompok normal. Hal ini menunjukkan bahwa tiap kelompok perlakuan tersebut
menunjukkan perbedaan yang signifikan terhadap kelompok kontrol Na-CMC dan
normal. Data statistik dapat dilihat pada Tabel 4.9.

Hari ke-16 P
Kontrol Na-CMC 0,5 % 350,00 ± 0,707 -
0,000b
0,000c
EEDP 100 mg/kg bb 217,25 ± 3,838 0,000a
0,000b
0,000c
EEHP 100 mg/kg bb 228,50 ± 1,041 0,000a
0,000b
0,000c
0,000b
0,000c
0,532
0,000c
0,985
0,000c
-
0,000c
0,000b
-
Keterangan :
a
b
c
Pemberian EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb dan EEDP:EEHP (75:25) mg/kg
bb memiliki nilai signifikan > 0,05 terhadap kelompok pembanding glibenklamid.
Hal ini menyatakan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan terhadap
kelompok glibenklamid.
70
e. Pengamatan Hari ke 20
Hasil penurunan KGD rerata hari ke-20 yang ditunjukkan pada Gambar
4.6, kontrol negatif terjadi penurunan KGD menjadi 345,75 mg/dL; pemberian
suspensi EEDP 100 mg/kg bb terjadi penurunan KGD menjadi 181,50 mg/dL;
EEHP 100 mg/kg bb menjadi 191,50 mg/dL; kombinasi suspensi EEDP dan EEHP
(25:75) mg/kg bb memberikan penurunan KGD menjadi 182,50 mg/dL; EEDP dan
EEHP (50:50) mg/kg bb turun menjadi 153,00 mg/dL; EEDP dan EEHP (75:25)
mg/kg bb turun menjadi 137,75 mg/dL; glibenklamid menjadi 141,25 mg/dL;
sedangkan pada kelompok normal (tanpa perlakuan) menunjukkan KGD dalam
kisaran normal yaitu 84,50 mg/dL. Penurunan KGD terbesar terjadi pada
kelompok kombinasi EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb dan glibenklamid 0,45
mg/kg bb.
Perhitungan statistik pada Tabel 4.10 menunjukkan bahwa pemberian
EEDP 100 mg/kg bb, EEHP 100 mg/kg bb, EEDP:EEHP (25:75) mg/kg bb,
EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb, EEDP:EEHP (75:25) mg/kg bb menunjukkan
71
perbedaan yang nyata terhadap kelompok kontrol Na-CMC dan kelompok normal.
Pemberian suspensi EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb dan EEDP:EEHP (75:25)
mg/kg bb memiliki nilai signifikan > 0,05 terhadap kelompok pembanding
glibenklamid. Hal ini menyatakan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan
terhadap kelompok glibenklamid.

Hari ke-20 P
Kontrol Na-CMC 0,5 % 345,75 ± 0,854 -
0,000b
0,000c
EEDP 100 mg/kg bb 181,50 ± 3,379 0,000a
0,003b
0,000c
EEHP 100 mg/kg bb 191,50 ± 1,443 0,000a
0,000b
0,000c
0,002b
0,000c
0,0126
0,000c
0,988
0,000c
-
0,000c
0,000b
-
Keterangan :
a
b
c
72
f. Pengamatan Hari ke 24
Penurunan KGD rerata hari ke-24, kontrol negatif terjadi kenaikan KGD menjadi
349,00 mg/dL; pemberian suspensi EEDP 100 mg/kg bb terjadi penurunan KGD
menjadi 145,75 mg/dL; EEHP 100 mg/kg bb menjadi 154,00 mg/dL; kombinasi
suspensi EEDP dan EEHP (25:75) mg/kg bb memberikan penurunan KGD
menjadi 146,50 mg/dL; EEDP dan EEHP (50:50) mg/kg bb menjadi 123,50
mg/dL; EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb menjadi 105,75 mg/dL; glibenklamid
menjadi 111,75 mg/dL; kelompok normal (tanpa perlakuan) menunjukkan KGD
dalam kisaran normal yaitu 84,50 mg/dL. Penurunan KGD terbesar terjadi pada
kelompok kombinasi EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb dan kelompok
glibenklamid 0,45 mg/kg bb yang ditunjukkan pada Gambar 4.7.
Berdasarkan perhitungan statistik terhadap uji beda variasi perlakuan
tampak bahwa pemberian EEDP 100 mg/kg bb, EEHP 100 mg/kg bb,
73
(75:25) mg/kg bb menunjukkan perbedaan yang signifikan terhadap kelompok
kontrol Na-CMC dan kelompok normal. Pemberian EEDP:EEHP (50:50) mg/kg
bb dan EEDP:EEHP (75:25) mg/kg bb menunjukkan bahwa tidak terdapat
perbedaan yang signifikan terhadap kelompok glibenklamid. Hasil statistika
terhadap uji beda variasi perlakuan dapat dilihat pada Tabel 4.11 berikut ini.

Hari ke-24 P
Kontrol Na-CMC 0,5 % 349,00 ± 0,707 -
0,000b
0,000c
EEDP 100 mg/kg bb 145,75 ± 2,926 0,000a
0,025b
0,000c
EEHP 100 mg/kg bb 154,00 ± 1,683 0,000a
0,000b
0,000c
0,000b
0,000c
0,091
0,000c
0,776
0,000c
-
0,000c
0,000b
-
Keterangan :
a
b
c
74
g. Pengamatan Hari ke 28
Hari ke-28, terjadi penurunan kembali KGD pada kelompok Na-CMC
(kontrol negatif) menjadi 346,25 mg/dL; EEDP 100 mg/kg bb menjadi 104,25
mg/dL; EEHP 100 mg/kg bb menjadi 112,75 mg/dL; kombinasi suspensi EEDP
dan EEHP (25:75) mg/kg bb menjadi 103,00 mg/dL; EEDP dan EEHP (50:50)
75,25 mg/dL; glibenklamid menjadi 80,50 mg/dL; kelompok normal (tanpa
perlakuan) menunjukkan KGD dalam kisaran normal yaitu 85,00 mg/dL.
Penurunan KGD terbesar terjadi pada kelompok kombinasi EEDP dan EEHP
(75:25) mg/kg bb glibenklamid 0,45 mg/kg bb (kontrol positif) yang ditunjukkan
pada Gambar 4.8.
Berdasarkan perhitungan statistik pada Tabel 4.12. pada hari ke-28
pemberian suspensi EEDP 100 mg/kg bb, EEHP 100 mg/kg bb, kombinasi
75
(75:25) mg/kg bb menunjukkan perbedaan yang sangat signifikan terhadap
kelompok kontrol Na-CMC.

Hari ke-28 P
Kontrol Na-CMC 0,5 % 346,25 ± 2,594 -
0,000b
0,000c
EEDP 100 mg/kg bb 104,25 ± 2,562 0,000a
0,000b
0,000c
EEHP 100 mg/kg bb 112,75 ± 1,887 0,000a
0,000b
0,000c
0,000b
0,001c
0,028b
0,252
0,829
0,178
-
0,913
0,913
-
Keterangan :
a
b
c
Pemberian EEDP 100 mg/kg bb, EEHP 100 mg/kg bb, kombinasi
EEDP:EEHP (25:75) mg/kg bb menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang
signifikan terhadap kelompok glibenklamid dan kelompok normal, tetapi
EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb hanya memiliki perbedaan yang signifikan
terhadap kelompok normal. Kelompok hewan coba yang diberi kombinasi
76
EEDP:EEHP (75:25) mg/kg bb memiliki nilai signifikan > 0,05 terhadap
kelompok pembanding glibenklamid dan kelompok normal. Hal ini menyatakan
bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan terhadap kelompok glibenklamid
dan normal. Grafik penurunan KGD dapat dilihat pada Gambar 4.9.
Gambar 4.9 Grafik penurunan KGD
Setelah dihitung penurunan KGD dari kelima kelompok tersebut dari awal
perlakuan hingga hari ke-28 diperoleh bahwa EEDP 100 mg/kg bb turun sebesar
237,25 mg/dL, EEHP 100 mg/kg bb turun sebesar 234,75 mg/dL; kombinasi
suspensi EEDP dan EEHP (25:75) mg/kg bb turun sebesar 237,50 mg/dL; EEDP
dan EEHP (50:50) mg/kg bb turun sebesar 241,50 mg/dL; EEDP dan EEHP
(75:25) mg/kg bb turun sebesar 258,25 mg/dL; glibenklamid turun sebesar 256,25
mg/dL, dapat disimpulkan bahwa yang memberikan penurunan KGD dari paling
besar adalah EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb > glibenklamid > EEDP dan
EEHP (50:50) mg/kg > EEDP dan EEHP (25:75) mg/kg bb > EEDP 100 mg/kg >
EEHP 100 mg/kg bb. Suspensi kombinasi EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb
77
yang paling mendekati kekuatan efek glibenklamid 0,45 mg/kg BB dan
menurunkan KGD lebih optimal.
Pada hari ke-28 beberapa kelompok perlakuan telah mencapai penurunan
KGD normal (p>0,05), kecuali kelompok kontrol negatif yang tidak mencapai
KGD ke level normal (p<0,05). Hal ini disebabkan karena penginduksian STZ,
STZ merupakan senyawa kimia yang bersifat diabetogenik yang merusak sel β
pankreas secara langsung. Sitotoksisitas STZ menyebabkan pelepasan radikal
bebas yang memicu stres oksidatif intraseluler. STZ menembus sel β Langerhans
melalui transporter glukosa GLUT 2. Aksi STZ intraseluler menghasilkan
perubahan DNA sel β pankreas (Goud, dkk., 2015).
Alkilasi DNA Alkilasi atau masuknyagugus metil dari streptozotosin ke
dalam molekul DNA ini akan menyebabkan kerusakan fragmentasi DNA.
Kerusakan DNA tersebut nantinya akan mengaktifkan poly adenosine diphosphate
(ADP)-ribosylation. Proses ini akan mengakibatkan penghabisan Nicotinamide
adenine dinucleotide (NAD+) seluler, lebih lanjut akan terjadi pengurangan
adenosine triphosphate (ATP) dan akhirnya akan menghambat sekresi dan sintesis
insulin. Nicotinamida yang merupakan prekusor langsung dari NAD+ dan sebagai
inhibitor poly ADP ribose, akan menghambat kerusakan fragmentasi DNA
berlebih yang dapat menyebabkan hepatotoksik sehingga tikus hanya akan menjadi
diabetes melitus tipe 2 (Szkudelski, 2012).
Menurut Robertus (2016) kandungan ekstrak etanol daun pirdot seperti
flavonoid golongan isoflavon memiliki aktivitas antidiabetes. Senyawa flavonoid
golongan isoflavon diduga menurunkan glukosa darah dengan menginhibisi enzim
α-glukosidase sehingga mengurangi penyerapan glukosa, mengatur aktivitas enzim
yang terlibat dalam metabolisme karbohidrat, dan menghambat penguraian
78
polisakarida menjadi monosakarida (Oishi et al., 2007). Senyawa saponin
memiliki potensi aktivitas antidiabetes terhadap sekresi insulin yang disebabkan
modulasi saluran kalsium dan peremajaan sel-β pankreas. Selain itu EEDP dan
EEHP juga memiliki kandungan metabolit sekunder lain seperti tanin, dan
saponin, senyawa-senyawa tersebut kemungkinan berperan terhadap penurunan
KGD tikus. Menurut El Barky, et al. (2017) dan Lavle, et al. (2016) saponin
terbukti memiliki potensi sebagai obat alternatif dalam menurunkan kadar glukosa
darah pasien yang menderita diabetes dengan mengaktivasi sintesis glikogen,
menekan aktivitas disakarida, memodulasi sinyal insulin, meregenerasi kerja
insulin, meningkatkan pelepaskan insulin dari sel beta, menghambat
glukoneogenesis, menghambat aktivitas α-glucosidase, dan meningkatkan ekspresi
GLUT 4. Tanin memiliki sifat astrigen yang dapat menghambat penyerapan gula
pada permukaan usus halus sehingga dengan demikian dapat menurunkan kadar
gula darah (Nasi, dkk., 2015).
Poguntano juga diketahui mengandung senyawa kimia berupa flavonoid,
tannin, glikosida (Sitorus, 2014; Harahap, 2013) dimana senyawa-senyawa
tersebut diketahui memiliki efek dalam menurunkan gula darah. Golongan
cucurbitacin dalam glikosida berperan menurunkan kadar gula darah dengan
menghambat glukoneogenesis di hati. (Pan, 2017). Flavonoid bekerja dengan
menurunkan aldoctase-reductase, regenerasi sel pankreas, meningkatkan
pelepasan insulin dan meningkatkan uptake ion Ca2+ (Mohan, 2013). Selain
flavonoid menginhibisi enzim α-glukosidase atau pencegahan absorpsi glukosa
dan memperbaiki toleransi glukosa (Brahmachari, 2011). Tanin meningkatkan
penyerapan glukosa melalui mediator dari jalur signaling insulin dan translokasi
GLUT 4, menghambat adipogenesis dan meningkatkan aktivitas insulin, inhibitor
79
alami α-amilase dan α-glucosidase, sehingga mencegah hiperglikemia postprandial
(Kumari, 2012).
4.6 Pengaruh Kombinasi EEDP dan EEHP terhadap kadar SOD pada tikus
Pemeriksaan pengaruh ekstrak kombinasi EEDP dan EEHP terhadap kadar
SOD dilakukan secara kuantitatif dengan metode ELISA yang dibaca absorbansi
dengan microplate reader pada panjang gelombang 450 nm. Metode ini
berdasarkan pada prinsip pengukuran antigen atau antibodi yang baik secara relatif
maupun kuantitatif. Kadar SOD terhadap perlakuan EEDP 100 mg/kg bb, EEHP
100 mg/kg bb, EEDP:EEHP (25:75) mg/kg bb, EEDP:EEHP (50:50) mg/kg bb,
EEDP:EEHP (75:25) mg/kg bb diperoleh hasil dengan pengukuran absorbansi
dengan adanya penambahan larutan standar 1000 pg/ml; 500 pg/ml; 250 pg/ml;
125 pg/ml; 62,5 pg/ml; 31,25 pg/ml; 15,625 pg/ml. Nilai absorban setiap
konsentrasi dapat dilihat pada Tabel 4.13.
Tabel 4.13 Absorbansi standar SOD
Konsentrasi Standar SOD (pg/ml) Absorbansi (450 nm)

15,625 0,007
31,25 0,076
62,5 0,268
125 0,797
250 1,465
500 1,904
1000 2,535
Berdasarkan tabel tersebut diperoleh kurva standar seperti ditunjukkan pada
Gambar 4.10. Kurva standar didapat dari hubungan berbagai konsentrasi standar
dengan absorbansi yang terbentuk. Dari kurva kalibrasi ini diperoleh nilai r2. Nilai
r2 berkisar antara 0 sampai 1 yang menunjukkan seberapa dekat nilai perkiraan
80
untuk analisis regresi yang mewakili data yang sebenarnya. Dari kurva standar
diperoleh persamaan garis regresi y = 0,6408 ln(x) – 2,0866 dengan nilai r2 =
0,951.
Gambar 4.10 Kurva standar SOD
Aktivitas SOD dihitung dengan mensubstitusikan nilai absorban (y) sampel
pada panjang gelombang 450 nm ke dalam persamaan garis regresi logaritma y = a
ln(x) + b, yang diperoleh dari kurva standar SOD sehingga diperoleh nilai kadar
SODnya (x). Perhitungan dapat dilihat pada Lampiran 12 halaman 127.
Tabel 4.14 Konsentrasi SOD pada darah tikus
Kelompok Perlakuan Rata-rata konsentrasi SOD

(pg/ml)
Na-CMC 41,30 ± 0,285bc
EEDP 100 mg/kg bb 60,64 ± 0,740ac
EEHP 100 mg/kg bb 57,83 ± 1.687abc
EEDP&EEHP (25:75) mg/kg bb 61,14 ± 0.753ac
EEDP&EEHP (50:50) mg/kg bb 65,14 ± 0,428a
EEDP&EEHP (75:25) mg/kg bb 67,75 ± 3,339a
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 67,01 ± 0,938a
Normal 68,17 ± 1,267a
Keterangan :
81
a : Sig (p)<0,05 ada perbedaan yang signifikan dengan kelompok Na-CMC
b : Sig (p)<0,05 ada perbedaan yang signifikan dengan kelompok glibenklamid
c : Sig (p)<0,05 ada perbedaan yang signifikan dengan kelompok normal
Hasil aktivitas SOD kemudian dilakukan analisis statistika menggunakan
One Way Analysis of Variant (ANOVA) didapatkan perbedaan hasil pengukuran
yang signifikan (p) < 0,05 antar kelompok perlakuan. Hasil uji konsentrasi SOD
pada plasma darah tikus dapat dilihat pada Tabel 4.14.
Hasil analisis variansi (ANOVA) menunjukkan adanya perbedaan yang
signifikan antar kelompok perlakuan terhadap aktivitas SOD (pg/ml) dengan nilai
signifikansi (p) < 0,05. Hasil analisis variansi dapat dilihat pada Lampiran 13
halaman 128. Perbedaan rata-rata konsentrasi SOD pada setiap perlakuan dapat
dilihat pada Gambar 4.11.
Gambar 4.11 Pengaruh kelompok perlakuan terhadap konsentrasi SOD
Gambar 4.11 menunjukkan bahwa rata-rata nilai konsentrasi SOD pada
kelompok kontrol negatif (CMC Na) adalah 41,30 ± 0,285 pg/ml memiliki
konsentrasi SOD paling rendah dibandingkan kelompok lain. Hal ini menunjukkan
82
bahwa pemberian nicotinamida dan streptozotosin sebagai pemicu stres oksidatif
yang akan menurunkan daya tahan antioksidan dalam tubuh dengan menunjukkan
penurunan level SOD (Ghasemi et al., 2014). Pemberian nicotinamida
kemungkinan mempengaruhi terhadap kadar SOD yang diperiksa, dimana
nicotinamida merupakan prekusor langsung dari NAD+ dan sebagai inhibitor poly
ADP ribose, yang berdampak meningkatnya kadar ATP di dalam sel sehingga
mengurangi kerusakan sel. Pengukuran SOD berkaitan dengan hal tersebut karena
nicotinamida dapat memperbaiki kerusakan sel yang akan berdampak pada kadar
SOD.
Perlakuan pemberian EEDP dan EEHP memberikan pengaruh secara
signifikan terhadap peningkatan konsentrasi SOD yaitu kelompok EEDP 100
mg/kg bb (60,64 ± 0,740 pg/ml), EEDP&EEHP (25:75) mg/kg bb (61,14 ±0.753
pg/ml). Kedua kelompok tersebut menunjukkan perbedaan nyata (p) < 0,05 dengan
kelompok kontrol negatif dan kelompok normal, tetapi tidak berbeda nyata dengan
kelompok glibenklamid. Konsentrasi SOD tikus normal (non-diabetes) yaitu
sebesar 68,17± 1,267 pg/ml. Menurut Winarsi (2012), aktivitas tersebut lebih
tinggi bila dibandingkan dengan aktivitas tikus diabetes saat awal (kontrol).
Tingginya aktivitas SOD tikus normal dikarenakan kadar glukosa darahnya yang
normal sehingga tidak memicu produksi radikal bebas yang berlebih.
Konsentrasi SOD pada kelompok kombinasi EEDP dan EEHP (50:50)
mg/kg bb sebesar 65,14 ± 0,428 pg/ml, EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb 67,75
± 3,339 pg/ml menunjukkan tidak ada perbedaan nyata antara kelompok kontrol
normal dan glibenklamid. Glibenklamid merupakan obat diabetes generasi kedua
sulfunilurea yang dapat menurunkan kadar glukosa darah sehingga kondisi
hiperglikemia dapat dikendalikan. Mekanisme penurunan kadar glukosa darah
83
dilakukan dengan cara merangsang sekresi hormon insulin, meningkatkan
pengambilan glukosa dari darah ke jaringan, oksidasi glukosa, dan aktivasi sintesis
glikogen di hati dan jaringan adiposa. Sehingga, pemberian glibenklamid dapat
meningkatkan konsentrasi SOD tikus diabetes.
Peningkatan konsentrasi SOD secara signifikan pada kelompok perlakuan
EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg selama 28 hari membuktikan bahwa pemberian
ekstrak kombinasi tersebut mampu meningkatkan kadar SOD tikus diabetes.
Peningkatan konsentrasi tersebut berkaitan dengan hasil penelitiaan sebelumnya,
bahwa kandungan senyawa kimia dalam tumbuhan pirdot dan poguntano seperti
flavonoid, tanin, dan saponin, dari berbagai jenis tanaman diketahui memiliki efek
sebagai antioksidan. Dembinska-Kiec et al., 2008 menyatakan bahwa flavonoid
bekerja sebagai antioksidan dengan cara meningkatkan kadar SOD. Dilaporkan
pula bahwa flavonoid bekerja sebagai radical scavenger, untuk radikal oxygen
singlet dan lipid peroksidasi (Zhang et al., 2011). Tanin bertindak sebagai
penangkap radikal bebas dan mengaktifkan enzim antioksidan sehingga dapat
memperbaiki keadaan oksidatif patologis pada diabetes (Kumari, 2012). Saponin
bertindak sebagai antioksidan dengan menangkap superoksida dan membentuk
hidroksiperoksida yang mencegah kerusakan biomolekuler yang diakibatkan
radikal bebas (Khan, 2012).
4.7 Pengaruh Kombinasi EEDP dan EEHP terhadap kadar HbA1c pada tikus
Pengukuran HbA1c dilakukan menggunakan Rat HbA1c Kit dengan metode
ELISA, yang dibaca absorbansi dengan microplate reader pada panjang
gelombang 450 nm. Metode ini berdasarkan pada prinsip pengukuran antigen atau
antibodi yang baik secara relatif maupun kuantitatif. Kadar HbA1c diperoleh hasil
84
dengan pengukuran absorbansi dengan adanya penambahan larutan standar 100
ng/ml; 50 ng/ml; 25 ng/ml; 12,5 ng/ml; 6,25 ng/ml; 3,125 ng/ml; 1,562 ng/ml.
Nilai absorban setiap konsentrasi dapat dilihat pada Tabel 4.15 sebagai berikut.
Tabel 4.15 Absorbansi standar HbA1c
Konsentrasi Standar HbA1c (pg/ml) Absorbansi (450 nm)

1,562 0,123
3,125 0,223
6,25 0,355
12,5 0.500
25 0,808
50 1,290
100 2,123
Berdasarkan tabel tersebut diperoleh kurva standar seperti ditunjukkan

pada Gambar 4.12.
Gambar 4.12 Kurva standar HbA1c
Kadar HbA1c dihitung dengan mensubstitusikan nilai absorban (y) sampel
pada panjang gelombang 450 nm ke dalam persamaan garis regresi logaritma y =
ax+b, yang diperoleh dari kurva standar HbA1c sehingga diperoleh nilai
konsentrasi HbA1cnya (x) dapat dilihat pada Lampiran 15 halaman 130.
85
Hasil konsentrasi HbA1c kemudian dilakukan analisis statistika
menggunakan One Way Analysis of Variant (ANOVA) didapatkan perbedaan hasil
pengukuran yang signifikan (p<0,05) antar kelompok perlakuan. Hasil uji HbA1c
pada plasma darah tikus dapat dilihat pada Tabel 4.16.
Tabel 4.16 Konsentrasi HbA1c pada darah tikus
Kelompok Perlakuan Rata-rata konsentrasi HbA1c ± SEM

(ng/ml)
Na-CMC 68,52 ± 1,301bc
EEDP 100 mg/kg bb 32,53 ± 0,535abc
EEHP 100 mg/kg bb 38,87 ± 0,794abc
EEDP dan EEHP (25:75) mg/kg bb 31,49 ± 0,235abc
EEDP dan EEHP (50:50) mg/kg bb 25,87 ± 1,142a
EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb 26,76 ± 0,678a
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 26,08 ± 0,945a
Normal 25,73 ± 1,377a
Keterangan :
Hasil analisis variansi (ANOVA) menunjukkan adanya perbedaan yang
signifikan antar kelompok perlakuan terhadap konsentrasi HbA1c (ng/ml) dengan
nilai signifikansi p < 0,05. Rata-rata nilai konsentrasi HbA1c dapat dilihat pada
Gambar 4.13. Hasil menunjukkan bahwa kelompok kontrol negatif (CMC-Na)
adalah 68,52 ± 1,301 ng/ml menunjukkan peningkatan HbA1c dibandingkan
kelompok normal. Hal ini disebabkan oleh adanya efek diabetogenik dari STZ
yang menyebabkan nekrosis sel 𝛽-pankreas penyebab terjadinya hiperglikemia
(Ramachandran, 2013). Pada saat kadar gula darah tinggi, proses glikasi
nonenzimatik akan meningkat, dimana glikasi itu sendiri akan menyebabkan
konsentrasi radikal bebas juga meningkat yang memicu peningkatan kadar HbA1c
(Mali, 2017).
86
Gambar 4.13 Pengaruh kelompok perlakuan terhadap konsentrasi HbA1c
Pemberian secara oral EEDP 100 mg/kg bb, EEHP 100 mg/kg bb dan
EEDP&EEHP (25:75) mg/kg bb mampu menurunkan kadar HbA1c pada tikus
hiperglikemia, tetapi belum menyamai penurunan kadar HbA1c pada kelompok
glibenklamid. Kadar HbA1c pada kelompok kombinasi EEDP dan EEHP (50:50)
mg/kg bb sebesar 25,87 ± 1,142 ng/ml, EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb
sebesar 26,76 ± 0,678 ng/ml, glibenklamid sebesar 26,08 ± 0,945, ketiga kelompok
tersebut menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan nyata terhadap kelompok
glibenklamid dan kelompok normal. Hasil analisis variansi dapat dilihat pada
Lampiran 16, halaman 131. Maka, dapat disimpulkan bahwa yang memberikan
penurunan HbA1c dari paling besar adalah EEDP dan EEHP (50:50) mg/kg >
glibenklamid > EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb > EEDP dan EEHP (25:75)
mg/kg bb > EEDP 100 mg/kg > EEHP 100 mg/kg bb. Suspensi kombinasi EEDP
dan EEHP (75:25) mg/kg dan EEDP dan EEHP (50:50) mg/kg memiliki efek
penurunan HbA1c yang sama.
87
Penurunan HbA1c menunjukkan efek glukosa darah yang menurun dengan
meningkatnya sekresi insulin karena adanya regenerasi sel 𝛽-pankreas. Flavonoid
menurunkan kadar glukosa darah dengan cara menghambat enzim α-glukosidase
yang terdapat pada usus halus. Penghambatan pada enzim α-glukosidase
menyebabkan penurunan laju pencernaan karbohidrat menjadi monosakarida yang
dapat diserap oleh usus halus, sehingga menurunkan hiperglikemia. Penurunan
hiperglikemia berkontribusi pada menurunnya kadar HbA1c (Raydian, 2017).
Lindarto, dkk (2016) juga telah mengemukakan bahwa setelah pemberian ekstrak
poguntano (Curanga fel-terrae Lour.) dapat menurunkan kadar gula darah puasa,
HbA1c pada penderita DM tipe 2.
4.8 Ekspresi Insulin dengan Pewarnaan Imunohistokimia
Penelitian ini dilakukan pengamatan pulau langerhans serta sebaran sel β
pankreasnya dari preparat yang telah dibuat dengan menggunakan pewarnaan
imunohistokimia. Skor ekspresi insulin pada tikus dapat dilihat pada Tabel 4.17.
Tabel 4.17 Perhitungan skor ekspresi insulin tikus
Kelompok Perlakuan Rerata skor ekspresi dalam/

lapang pandang ± SEM
K1 Na-CMC 15,10 ± 0.920bc
K2 EEDP 100 mg/kg bb 62,00 ± 2,205abc
K3 EEHP 100 mg/kg bb 56,00 ± 1,825abc
K4 EEDP dan EEHP (25:75) mg/kg bb 67,00 ± 2,144abc
K5 EEDP dan EEHP (50:50) mg/kg bb 141,00 ± 3,374ac
K6 EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb 160,00 ± 2,683ab
K7 Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 133,00 ± 3,018abc
K8 Normal 170,00 ± 2,520ab
Keterangan :
88
Perhitungan skor ekspresi insulin pada tiap-tiap kelompok perlakuan
dilakukan menggunakan mikroskop cahaya dengan perbesaran 400 kali dan dibagi
menjadi 5 lapang pandang. Hasil pengamatan skor ekspresi insulin dari pewarnaan
imunohistokimia dengan menghitung persentase sel yang mengekspresikan insulin
(berwarna coklat) dari 200 sel yang diamati dengan bantuan aplikasi Image Raster
yang disajikan pada Tabel 4.18.
Tabel 4.18 Persentase skor ekspresi insulin pada Pulau Langerhans
Kelompok Perlakuan Rerata skor ekspresi

insulin (%)
K1 Na-CMC 7,55
K2 EEDP 100 mg/kg bb 31,00
K3 EEHP 100 mg/kg bb 28,00
K4 EEDP dan EEHP (25:75) mg/kg bb 33,50
K7 Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 66,62
K8 Normal 85,00
Tabel 4.18 menunjukkan bahwa skor ekspresi sel β Langerhans pankreas
yang imunoreaktif terhadap insulin antara ke delapan kelompok perlakuan
menunjukkan perbedaan yang signifikan (p) < 0,05 yang dapat dilihat pada
Lampiran 17, halaman 132. Penurunan ekspresi insulin dari sel beta Langerhans
pankreas yang imunoreaktif terhadap antibodi insulin menandakan berkurangnya
sintesis insulin oleh sel-sel tersebut, sehingga pemberian antibodi terhadap insulin
(pewarnaan imunohistokimia) hanya bereaksi dengan sel-sel yang masih
menghasilkan insulin. Pengamatan dengan teknik pewarnaan imunohistokimia
menghasilkan insulin dalam pulau Langerhans yang ditunjukkan dengan sel yang
sitoplasmanya terwarnai coklat yang tersebar diluar sel tersebut yang dapat dilihat
pada gambar 4.14.
89
K K
1 2
K K
3 4
K K
5 6
K K
7 8
Gambar 4.14. Gambaran histopatologi pankreas dengan pengecatan
Imunohistokimia. Ket: Perbesaran 10 x 40. K1=Na-CMC, K2=EEDP 100 mg/kg
bb, K3=EEHP 100 mg/kg bb, K4=EEDP&EEHP (25:75) mg/kg bb, K5=
EEDP&EEHP (50:50) mg/kg bb K6= EEDP&EEHP (75:25) mg/kg bb, K7=
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb, K8= Normal, (→) = menunjukkan reaksi positif Ag
terhadap Ab insulin pada sel beta yang berwarna coklat.
90
Hasil pengamatan preparat yang ditunjukkan pada Gambar 4.14 terhadap
potongan jaringan pankreas khususnya pada sel beta yang diwarnai dengan
imunohistokimia dilakukan secara deskriptif dengan melihat populasi dan tampilan
kadar reaksi Ag dan Ab sel beta yang mengalami perubahan.
Hasil uji menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna terhadap
perbaikan sel β pankreas pada tiap kelompok. Perlakuan kelompok K2, K3, dan
K4 mengalami peningkatan ekspresi insulin yang signifikan dibandingkan dengan
kelompok Na-CMC, tetapi belum mampu menyamai skor ekspresi insulin
kelompok normal dan glibenklamid. Kelompok K5 dan K6 menunjukkan
peningkatan ekspresi insulin yang signifikan dibandingkan dengan kelompok K1.
Secara statistik, ekspresi insulin pada kelompok K5 tidak menunjukkan perbedaan
yang signifikan (p) > 0,05 terhadap kelompok K7, tetapi kelompok K6
menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan kelompok K7, dimana persentase
skor ekspresi insulin pada kelompok K7 berjumlah 80,0 % lebih banyak
dibandingkan dengan kelompok kontrol K7 66,62 %. Hal tersebut menunjukkan
bahwa kerja glibenklamid lebih terfokus pada stimulasi hormon insulin untuk
menurunkan kadar glukosa darah pada tahap awal, tetapi pada kelompok perlakuan
kombinasi K6 menunjukkan ekspresi sel beta langerhans pankreas yang
imunoreaktif terhadap insulin sudah kembali meningkat, akibat regenerasi sel beta
langerhans pankreas (warna coklat lebih banyak). Sel beta langerhans pankreas
merupakan golongan sel stabil yang mampu berproliferasi sepanjang hidupnya,
sehingga sel beta Langerhans pankreas kembali mensintesis insulin (Erwin dkk,
2013).
Pemeriksaan ekspresi insulin pada sel β pankreas pada penelitian ini
menunjukkan perbedaan yang bermakna antara kelompok perlakuan yang
91
diberikan ekstrak dibandingkan dengan kontrol negatif. Perbedaan yang bermakna
pada kontrol negatif disebabkan sel β pada jaringan pankreas mengalami
kerusakan akibat induksi STZ. Kerusakan sel β yang tinggi dan sekresi insulin
menjadi sangat sedikit (Erwin dkk, 2013). Menurut Suarsana et al., (2010),
kerusakan sel β menyebabkan produksi insulin berkurang sehingga ketika hormon
insulin dideteksi pada sel β menggunakan pewarnaan imunohistokimia, sel β
jumlahnya sangat sedikit. Penurunan sintesis insulin menandakan kerusakan sel
beta Langerhans pankreas oleh induksi streptozotosin (Schnedl et al., 2006).
Perubahan-perubahan pada sejumlah sel yang ditimbulkan oleh zat yang
mempunyai efek sitotoksik yakni pengecilan pulau-pulau Langerhans pankreas,
pengurangan jumlah sel beta dan degranulasi. Salah satu mekanisme streptozotosin
menyebabkan terjadinya DM berkaitan dengan pembentukan radikal bebas
diantaranya NO, O2, dan H2O2 yang dapat menyebabkan fragmentasi DNA sel
akibat sitotoksik streptozotosin. Radikal bebas memiliki waktu paruh yang sangat
pendek hanya dalam satuan mikrodetik. Oleh karena itu, radikal bebas sangat
reaktif dan dapat menimbulkan kerusakan di berbagai bagian sel antara lain
kerusakan membran sel, protein, dan DNA (Utomo et al., 1991).
92
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan pembahasan dan hasil penelitian diperoleh kesimpulan :
a. Kombinasi EEDP dan EEHP mampu meningkatkan kadar SOD, dari hasil
pengujian EEDP dan EEHP (50:50) mg/kg bb dan (75:25) mg/kg
menunjukkan efek yang tidak berbeda secara signifikan terhadap kontrol
positif (p) > 0,05. Hal ini menunjukkan bahwa EEDP dan EEHP (50:50)
mg/kg bb dan (75:25) mg/kg memiliki potensi meningkatkan kadar SOD.
b. Kombinasi EEDP dan EEHP mampu menurunkan kadar HbA1c, dimana
pengujian kelompok EEDP dan EEHP (50:50) mg/kg menurunkan kadar
HbA1c paling tinggi sebesar 25,87 ng/mL yang menunjukkan tidak terdapat
perbedaan yang signifikan (p) > 0,05 dengan kelompok EEDP dan EEHP
(75:25) mg/kg bb dan kelompok normal. Hal ini menunjukkan bahwa EEDP
dan EEHP (50:50) mg/kg dan EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb memiliki
efek penurunan HbA1c yang sama.
c. Kombinasi EEDP dan EEHP dapat meningkatkan jumlah ekspresi insulin,
dengan persentase skor ekspresi insulin tertinggi pada pemberian kombinasi
EEDP dan EEHP (75:25) mg/kg bb sebesar 80,00 % dengan jumlah ekspresi
sebesar insulin 160 sel/lapang, menunjukkan bahwa EEDP dan EEHP
(75:25) mg/kg tidak memiliki perbedaan yang signifikan/ menyamai dengan
kelompok normal.
93
5.2 Saran
Dari kesimpulan penelitian ini, disarankan peneliti selanjutnya untuk:
a. Melakukan uji terhadap mekanisme kerja kedua ekstrak tersebut.
b. Melakukan uji lanjutan pengaruh induksi nicotinamida terhadap pemeriksaan
SOD.
94
DAFTAR PUSTAKA
Afonso, V., Champy R., Mitrovic, D., Collin P., Lomri, A. (2007). Reactive
Oxygen Species and Superoxide Dismutases: Role in Joint Diseases. Joint
Bone Spine. Vol. 74(4): 324-329.
Ahmed, M.A., Al-Barshomy, S., Al-Kobaty, S. (2016). Study of Malondialdehyde

as Oxidative Stress and Superoxide Dismutase as Enzymatic Antioxidant in
Type II Diabetes Mellitus Patients With and without Peripheral Neuritis.
International Journal of Advanced Research. Vol. 4(6): 788-793.
American Diabetes Association (ADA). (2012). Diagnosis and Classification of

Diabetes Mellitus. Diabetes Care Journal. Vol. 35(1): 64-71.
Anonim. (2009). Picria fel-terrae Lour. Diakses tanggal 20 Februari 2018.

http://www.proseanet.org/prohati2/browser.php?doosid=459.
Balitbang. (2017). Mengenal Pirdot Pohon Penghasil Obat dari Sumatera Utara.
LHK Aek Nauli. Diakses tanggal 20 Februari 2018.
http://aeknauli.org/mengenal-pirdot-pohon-penghasil-obat-dari-sumatera-
utara/.
Brahmachari, G. (2012). Bio-Flavonoids with Promising Antidiabetic Potentials: A

Critical Survey. Opportunity, Challenge and Scope of Natural Products in
Medicinal Chemistry. Research Signpost. Hal. 187-212.
Brownlee, M. (2001). Biochemistry And Molecular Cell Biology Of Diabetic

Complications. Nature 414. United State. Hal. 813.
Campbell, N.A., Reece, J.B., and Mitchell, L.G. (2004). Biologi. Penerjemah:
Manalu, W. Edisi Kelima, Jilid III. Jakarta: Erlangga. Hal. 18-19.
Dembinska-kiec, A., Mykkanen, D., Kiec-Wilk, B and Mykkanen, H. (2008).

Antioxidant Phytochemicals againts Type-2 Diabetes. British Journal of
Nutrition. 99(1):109–117.
Depkes RI. (1979). Farmakope Indonesia. Edisi III. Jakarta: Departemen

Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 28-30, 32-33, 840.
Depkes RI. (1995). Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Jakarta: Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Hal. 323-325.
Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Jakarta:
Departemen Kesehatan RI. Hal. 10-11, 16.
Depkes RI. (2013). Suplemen III Farmakope Herbal Indonesia Edisi I. Jakarta:
Kementerian Kesehatan. Republik Indonesia. Hal. 106-107.
95
Lindarto, D., Santi, S., Zein, U. and Saragih, A.(2016). The Effect of Dhalwasan -
1 (Curanga fel-terrae (Lour.) Extract Versus Metformin on the Metabolic
and Inflammatory Characteristic of Patients with Newly Diagnosed Type 2
Diabetes Mellitus. Asian Journal of Pharmaeutical and Clinical Research.
Vol. 9(1): 225-228.
El Barky, A.R., Hussein, S.A., Alm-Eldeen, A.E., Hafez, Y.A. and Mostafa, T.M
(2017). Saponin and theirs Potential Role in Diabetes Mellitus. Review
Diabetes Management. Vol. 7(1): 148-158.
Elsner, M., Guldbakke, B., Tiedge, M., Munday, R. and Lenzen, S. (2000).
Relative Importance of Transport and Alkylation for Pancreatic Beta-cell
Toxicity of Streptozotocin. Diabetalogia. 43: 1528-1533.
Emma, J.G. (2012). HbA1c (glycated haemoglobin). Ann Clin Biochemistry. Hal.
1, 9-10.
Etuk, E.U. (2010). Animal Models for Studying Diabetes Mellitus. Agriculture
and Biology Journal of North America. Vol. 1(2): 130-134.
Erwin, E., Etriwati, E., Muttaqien, M., Pangestiningsih, T. W., dan Widyarini, S.
(2013). Ekspresi Insulin Pada Pankreas Mencit (Mus Musculus) Yang
Diinduksi dengan Streptozotocin Berulang. Jurnal Kedokteran
Hewan, Vol. 7(2): 97-100.
Fang, H., Ning, D.S. and Liang, X.Y. (2009). Studies on Technology Optimization
for Extracting Triterpenoid Saponins from Picria fel-terrae by Multi-
Target Grading Method. J Chin Med Mater. Vol. 32(12): 1902-1905.
Farah, J., Rizvi, H.A., Aziz, F. and Akhtar, Y. (2013). Effect of Glycemic Control
on Lipid Profile, Platelet Indices and Antioxidant Enzymes (Catalase and
Superoxide dismutase) Activities in Type 2 Diabetics. International Journal
of Advanced Research. Vol. 1(7): 207-215.
Farid, I., Saidus, R., Akter, R., Bakar, M.A., Abdullah A.M and Ahmed, N.U.
(2012). Antidiabetic and Antioxidant Effect with Phytochemical Screening
of Ethanol Extract of Saurauia roxburghii. Pharma Science Monitor. Vol.
3(4): 2601-2612.
Ghasemi, A., Khalifi, S. and Jedi, S., (2014). Streptozotocin-Nicotinamide-

Induced Rat Model. Acta Physiologica Hungarica, 101(4): 408–420.
Krishnasamy, G., Muthusamy, K., Chellapan, R.D. and Subbiah, N. (2016).

Antidiabetic, Antihyperlipidaemic, and Antioxidant Activity of Syzygium
Densiflorum Fruits in Streptozotocin and Nicotinamide-Induced Diabetic
Rats. Pharmaceutical Biology. 54(9): 1716-1726.
Goud, B.J., Dwarakanath, V., dan Swamy, B.K. (2015). Streptozotocin-A

Diabetogenic Agent in Animal Models. Human Journals. 3(1): 253-269.
96
Haliwell, B. and Gutteridge, J.M.C. (1999). Free Radical in Biology and Medicine.
England: Oxford University Press. Ed 3. Hal. 105-220.
Harahap, U., Patilaya, P., Marianne, Yuliasmi, S., Hufsori, I.D., Prasetyo, E.B., et
al. (2013). Profil Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Puguntano [Curanga fel-
terrae (merr.) Lour.] yang Berpotensi sebagai Antiasma. Seminar Nasional
Sains & Teknologi V Lembaga Penelitian Universitas Lampung. Hal. 422-
426.
Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia. Penerjemah: Kosasih Padmawinata dan

Iwang Soediro. Bandung: Penerbit ITB. Hal. 6-7, 70-72, 74, 102.
Harfina, F., Bahri S. and Saragih, A. (2012). Pengaruh Serbuk Daun Puguntano
(Curanga fel-terraeMerr.) pada Pasien Diabetes Mellitus. Journal of
Pharmaceutics and Pharmacology. Vol. 1(2): 112 – 118.
Huang, Y., De Bruyne, T., Apers, S., Ma, Y., Pieters, L. and Vlietnck, A. (1999).
Flavonoids Glucuronides from Picria fel-terrae. Phytochemistry. Vol.
52(8): 1701-1703.
International Diabetes Federation (IDF). (2017). Diabetes. Diakses tanggal 10

Februari 2018. http://www.idf.org/.
Italy P.M. (2009). Advanced Glycation End Products (Ages) and their Receptors
(Rages) in Diabetic Vascular Disease. Medicographia. Vol. 31: 257–258.
Kangralkar, V.A., Patil S.D. and Bandivadekar, R. (2010). Oxidative Stress and
Diabetes: A Review. International Journal of Pharmaceutical
Applications. Vol 1, Issue 1. Hal. 38-45.
Katzung, B.G. (2001). Farmakologi Dasar Dan Klinis. Jakarta: Salemba Medika.
Hal. 671, 676.
Khan, A.A., Naqvi, T.S, and Naqvi. M.S. (2012). Indentification of Phytosaponin
as Novel Biodynamic Agents: An Updated Overview. Asian J.Exp. Biol.
Sci 3(3): 459-467.
Kim, S., Jun, S.S., Hyun, J.K., Fisher, K.C., Mi, J.M and Han, K.C. (2007).
Streptozotocin-Induced Diabetes Can be Reversed by Hepatic Oval Cell
Activation through Hepatic Transdifferentiation and Pancreatic Islet
Regeneration. Laboratory Investigation. Vol. 87: 702-712.
Kim, J.H., Kang, M.J., Choi, H.N., Jeong, S.M., Lee, Y.M., Kim, J.I. (2011).
Quercetin Attenuates Fasting and Postprandial Hyperglycemia in Animal
Models of Diabetes Mellitus. Nutr Res Pract. Vol. 5: 107–11.
Kumari, M. and Jain, S. (2012). Tannins: An Antinutrient with Positive Effect to

Manage Diabetes. Research Journal of Recent Sciences. Vol. 1(12): 70-73.
97
Kuzuya, T., Nakagawa, J.S., Kanazawa, Y., Yasuhito, I., Masachi, K., Kisihio, N.,
et al. (2002). Diabetes Research and Clinical Practice. Journal of the
International Diabetes Federation. Vol.55(1): 65-85.
Lab Vision, Cat#MS-1378-PO. Mouse antiinsulin. Immunohistochemistry product.

Thermo Fisher Scientific Inc, Kalamazo, MI 49008.
Lavle, N., Shukla, P., and Panchal, A. (2016). Role of Flavonoids and Saponins in
the Treatment of Diabetes Mellitus. J Pharm Sci Bioscienctific Res. 6(4):
535-541.
Lequin, R.M. (2005). Enzyme Immunoassay (EIA)/Enzyme-Linked

Immunosorbent Assay (ELISA). Clinical Chemistry. Vol. 51(12): 2415-
2418.
Lestari, P. (2013). Efek Kombinasi Ekstrak Aktif Daun Poguntano (Picria fel-
terrae Lour.) dengan Doxorubicin Terhadap Sel Kanker Payudara Secara
In Vitro. Tesis. Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Hal. 21.
Lindarto, D., Syafril S., Zein U., and Saragih, A., (2016). The Effect of
Dhawalsan-1 (Curanga fel-terrae [Lour.]) Extract Versus Metformin on the
Metabolic and Inflammatory Characteristics of Patients with Newly
Diagnosed Type 2 Diabetes Mellitus. Asian Journal of Pharmaceutical and
Clinical Research. Vol. 9: 225-228.
Mali, K.K., Dias, R.J., Havaldar, V.D., and Yadav, S.J. (2017). Antidiabetic Effect
of Garcinol on Streptozotocin-induced Diabetic Rats. Indian Journal of
Pharmaceutical Sciences. Hal: 467.
Manaf, A. (2010). Insulin: Mekanisme Sekresi dan Aspek Metabolisme. Editor:

Sudoyo, A.W., Setiyohadi, B., Alwi, I., Simadibrata, K.M., Setiati, S. Buku
Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Edisi keempat. Jilid ketiga. Jakarta: Fakultas
Kedokteran Universitas Indonesia. Hal. 1896.
Marfianti, E. (2009). Perbedaan Kadar Resistin Obesitas dengan Resistensi Insulin

dan Obesitas Tanpa Resistensi Insulin. Jurnal Kedokteran dan Kesehatan
Indonesia. Vol 1(1): 1-9.
Markham, K.R. (1988). Cara Mengidentifikasi Flavonoid. Bandung: ITB. Hal. 23,
47.
Marpaung, Natalia C. (2016). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun

Pirdot (Saurauia Vulcani Korth) Terhadap Staphylococcus Aureus dan
Escherichia Coli. Skripsi. Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.
Hal. 5.
Masiello, P., Broca, C., Gross, R., Roye, M., Manteghetti, M., Hillaire, B.D., et al.
(1998). Experimental NIDDM: Development of a New Model in Adult
98
Rats Administered Streptozotocin and Nicotinamide. Diabetes. Vol 47(2):
224.
Mohan, S. and Nandhakumar, L. (2013). Role of Various Flavonoids: Hypotheses

on Novel Approach to Treat Diabetes. J Med Hypotheses Ideas. Vol 8(1):
1-6.
Muraay, R.K., Graner, D.K., Rodwel, P.A. and Victoe, W. (2003). Biokimia
Harper. Jakarta: EG. Hal. 44.
Mycek, M.J., Harvey, R.A. dan Champe, C.C. (2001). Farmakologi Ulasan
Bergambar. Lippincottt’s Illustrated Reviews: Pharmacology. Penerjemah.
Azwar Agoes. Edisi kedua. Jakarta: Widya Medika. Hal. 259.
Niel, N. (2013). Khasiat Daun Pirdot. Diakses tanggal 20 Februari 2018.

http://www.parapatnews.com/2013/07/
Nolte, M. S. dan Karam, J. H. (2010). Hormon Pankreas & Obat Antidiabetes.

Editor: Katzung, B. G. Farmakologi Dasar dan Klinik. Jakarta: Penerbit
Buku kedokteran EGC. Hal: 704-709.
Oishi, Y., Sakamoto, T., and Udagawa, H. (2007). Inhibition of Increases in Blood
Glucose and Serum Neutral Fat By Momordica Charantia Saponin
Fraction. Biosci. Biotechnol. Biochem. 71(3): 735-740.
Pan Y.Z., Zhang, Y. (2017). Cucurbitacin Inhibits Hepatic Gluconeogenesis

through Activation of Stat3 Signaling. Int Journal Clin Exp Med. 10(2):
2582-2589.
Pandelaki, K. (2010). Retinopati Diabetik. Jakarta: Interna Publishing. Hal. 86-87.
Pandey, K.B. dan Rizvi, S.I. (2010). Markers of Oxidative Stress in Erythrocytes
and Plasma During Aging in Humans. Oxidative Medicine and Cellular
Longevity. 3(1): 2-12.
Patilaya, P. (2015). Aktivitas Antelmentik dari Ekstrak Etanol Daun Poguntano.
Universitas Sumatera Utara.
Perkeni. (2015). Konsensus Pengelolaan dan Pencegahan Diabetes Melitus Tipe 2

di Indonesia. Jakarta : PB PERKENI.
Pfeifer, M.A., Halter, J.B., Graf, R. and Porte, D.Jr. (1980). Potentiation of Insulin
Secretion to Non-Glucose Stimuli in Normal Man by Tolbutamide, Journal
of Diabetes. 29: 335–340.
Price, S.A. dan Wilson L.M. (2006). Patofisiologi, Konsep Klinis Proses-proses
Penyakit. Edisi IV. Buku 1. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal.
576, 582.
99
Ramachandran, S., Rajasekaran, A. and Adhirajan, N.(2013). In Vivo and In Vitro
Antidiabetic Activity of Terminalia paniculata Bark: An Evaluation of
Possible Phytoconstituents and Mechanisms for Blood Glucose Control in
Diabetes. Journal Hindawi Publishing. ISRN Pharmacology. Vol. 2(1): 1-
10.
Raydian, U.A., Kurniawaty, E., dan Ramkita, N. ( 2017). Efek Antihiperglikemik
pada Daun Sukun. Medula. Vol. 7(4): 118-122.
Robertus, Sormin. (2016). Isolasi Dan Karakterisasi Senyawa Flavonoid

Kandungan Daun Pirdot (Saurauia Vulcani Korth). Skripsi. Fakultas
Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Medan. Hal.
45.
Robinson, T. (1995). Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Penerjemah: Kosasih

Padmawinata. Edisi VI. Bandung: Penerbit ITB. Hal. 72, 157, 191.
Rustama, D.S., Subardja, D., Oentario, M.C., Yati, N.P., Satriono, dan Harjantien,
N. (2010). Diabetes Mellitus. Edisi I. Ikatan Dokter Anak Indonesia,
Jakarta. Hal. 125.
Schalkwijk, C.G. and Stehouer, C.D.A. (2005). Vascular Complications in Diaetes
Mellitus the role of endothelial disfunction. Rev. Clinical Science. 109:
143-159.
Schnedl, O. and Standl, E. (2006). Impaired Glucose Tolerance, Diabetic and

Cardiovascular Diseases. Endocrinology Practice. Vol. 12:16-19.
Sibagariang, E.H. (2017). Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Puguntano (Curanga

Fel-Terrae (Lour.) Merr.) Terhadap Kadar Superoxide Dismutase (SOD)
pada Penderita Diabetes Mellitus Tipe 2. Tesis. Fakultas Kedokteran
Universitas Sumatera Utara. Hal. 40
Singh, V.P., Bali, A., Singh, N., and Jaggi, A.S. (2014). Advanced Glycation End
Products and Diabetic Complications. J. Physiol Pharmacol Korean. Vol.
18: 1–14.
Sitorus, P., Harahap, U., and Pandapotan M. (2014). Isolation of β-sitosterol from
n-Hexane Extract of Picria fel-terrae Lour. Leave and Study of Its
Antidiabetic Effect in Alloxan Induced Diabetic Mice. International
Journalof PharmTech Research. Vol. 6(1): 137-141.
Sitorus, P. (2015). Characterization Simplisia and Ethanolic Extract of Pirdot

(Saurauia Vulcani, Korth) Leaves and Study of Antidiabetic Effect in
Alloxan Induced Diabetic Mice. International Journal of ChemTech
Research. Vol. 8(6):789-794.
100
Smeltzer., Suzanne, C. dan Bare, B.G. (2002). Buku Ajar Keperawatan Medikal
Bedah. Penerjemah: Agung Waluyo, dkk. Edisi 8, Vol. 1,2. Jakarta: EGC.
Hal. 25, 26.
Soegondo, S., Pradana, S., Slamet, S. dan Sarwono, W. (2002). Penatalaksanaan

Diabetes Melitus Terpadu. Jakarta: Penerbit Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia. Hal. 1-16.
Soemadji, D.W. (2009). Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Edisi 5 Jilid 3, Jakarta:
Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Hal. 1892.
Suarsana, I.N., Priosoeryanto, B.P., Bintang, M. dan Wresdiyati, T. (2010). Profil
Glukosa Darah dan Ultrastruktur Sel Beta Pankreas Tikus yang Diinduksi
Senyawa Aloksan. Jurnal Ilmu Ternak dan Veteriner. 15(2): 118-123.
Suarsana, N., Utama, I.H. dan Kardena, I.M. (2016). Immunohistochemical

Expression of Insulin and Glucagon, Superoxide Dismutase and Catalase
Activity in Pancreas in Hyperglycaemia Condition. Asian Journal of
Biochemistry, 11(4): 177-185.
Sudiana, Ketut. (2004). Teknologi Ilmu Jaringan dan Imunohistokimia. Jakarta:

CV. Sagung Seto. Hal.27.
Suryathi. (2015). Hemoglobin Glikosilat yang Tinggi Meningkatkan Prevalensi

Retinopati Diabetik Proliferatif. Disertasi. Bali: Universitas Udayana
Denpasar.
Suyono, S. (2009). Patofisiologi Diabetes Melitus, Dalam: Soegondo, S.,
Soewondo, P., dan Subekti, I. (Eds.), Penatalaksanaan Diabetes Melitus
Terpadu. Jakarta: FKUI. Hal. 148-153.
Syamsudin dan Darmono. (2011). Buku Ajar Farmakologi Eksperimental. Jakarta:
UI-Press. Hal. 76.
Szkudelski, T. (2012). Streptozotocin-Nicotinamide Induced Diabetes in the Rat.
Characteristics of the Experimental Model. Experimental Biology and
Medicine. Vol. 237(5): 481.
Tan, H.J. dan Rahardja, K. (2002). Obat-Obat Penting, Khasiat, Penggunaan dan
Efek Sampingnya. Edisi V. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo. Hal. 536,
568.
Thuan, N.D., Ha, D.T., Thuong, P.T., Na, M.K., Lee, J.P., Lee, J.H., et al. (2007).
A Phenylpropanoid Glycoside with Antioxidant Activity from Picria tel-
ferae. Archives of Pharmacal Research. Vol. 30(9): 1062-1066.
Tobing, A., Mahendra, Krisnatuti, D., dan Alting. (2008). Care Your Self Diabetes
Melitus. Jakarta: Gramedia PustakaUtama
101
Triplitt, C.L., Reasner, C.A., dan Isley, W.L. (2008). Diabetes Mellitus. Editor:
Dipiro, J.T., Talbert, R.L., Yee, G.C., Matzke G.R., Wells, B.G., dan
Posey, L.M. Pharmacotherapy: A Pathophysiologic Approach. Seventh
edition. United States of America: The McGraw-Hill Companies, Inc. Hal.
1205.
Utomo, H., Hanafiah, A.,Oen, L.H., Suyatna, F.D. dan Asikin, N. (1991). Radikal
Bebas, Peroxide Lipid dan Penyakit Jantung Koroner. Jurnal Medika.
5:373-379.
Wang, L.S., Li, S.H., Zou, J.M., Guo, Y.J. and Sun, H.D. (2006).Two New
Terpenoids from Picria fel-terrae. J Asian Nat Prod Res. 8(6):491-4.
Warsito, R. dan Wuryastuti, H. (2014). Antibodi & Immunohistokimia.

Yogyakarta: Rapha Publishing. Hal. 1-3, 69, 85.
Waspadji. (2002). Gambaran Klinis Diabetes Melitus. Dalam Buku Ajar Ilmu
Penyakit Dalam. Jakarta : Balai Penerbit FKUI. Hal. 7-8.
Wells, B. G., Dipiro, J. T., Schwinghammer, T. L., and Dipiro, C. V. (2015).
Pharmacotherapy Handbook Ninth Edition. United State: McGraw-Hill
Education. Hal. 161-170.
Winarsi, W. (2007). Antioksidan Alami dan Radikal Bebas. Yogyakarta: Kanisius.

Hal. 13-15.
Winarsi, H., Wijayanti, S.P.M. dan Purwanto, A., (2012). Aktivitas Enzim
Superoksida Dismutase, Katalase, dan Glutation. MKB. Volume 44 No. 1.
World Health Organization. (2011). Quality Control Methods For Medicinal Plant
Material. Switzherland: WHO. Hal. 19-25.
World Health Organization. (2011). Use of Glycated Haemoglobin (HbA1C) in the
Diagnosis of Diabetes Mellitus. Geneva: Abbreviated Report of a WHO
Consultation. Hal. 6.
Wresdiyati, T., Mamba, K., Adnyane, I.K.M., and Aisyah, U.S. (2002). The Effect
of Stress Condition on the Intracellular Antioxidant Copper, Zinc-
Superoxide DisMutase in the Rat Kidney: An Immunohistochemical Study.
Hayati. Vol. 9: 85-88.
Wuhan Fine Biotech. (2013). Rat HbA1c ELISA Kit. Fine Test. Eastlake High-
tech Development District, Wuhan, Hubei, China. ER1030.
Zhang, M., Cao, J., Chen, X., and Wang, Q. (2011). Flavonoid Contents and Free
Radical Scavenging Activity of Extract from Leaves, Stem, Rachis, and
Roots of Dryopteris Erithrosora. Iranian Journal of Pharmaceutical
Research. 11(3): 991–997.
Zou, J.M., Wang, L.S., Niu, X.M, Sun, H.D., Guo Y.J. (2005). Phenylethanoid
glycosides from Picria fel terrae Lour. J Integr Plant Biol. Vol. 47(5): 632-
636.
102
Lampiran 1. Surat rekomendasi persetujuan etik penelitian kesehatan
Lampiran 2. Surat hasil identifikasi tumbuhan
103
Lampiran 2. (lanjutan)
104
105
Lampiran 3. Gambar tumbuhan daun pidot
106
Lampiran 3. Lanjutan.
Permukaan atas daun pirdot
Permukaan bawah daun pirdot
107
Lampiran 4. Gambar simplisia dan serbuk simplisia daun pirdot
Simplisia daun pirdot
Serbuk simplisia daun pirdot
108
Lampiran 5. Gambar makroskopik herba poguntano
B C
Keterangan: A: herba puguntano segar, B: simplisia herba puguntano, C: serbuk
simplisia herba puguntano
109
Lampiran 6. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia pirdot
Gambar mikroskop simplisia daun pirdot

Keterangan :
Perbesaran 10 x 40
a. Stomata tipe parasitik
b. Berkas pembuluh xylem berbentuk spiral
c. Kristal kalsium oksalat berbentuk raphida
110
Lampiran 7. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia poguntano
Keterangan:
Perbesaran 10 x 40
a = Penebalan xylem bentuk spiral
b = Stomata tipe diasitik
c = Stomata tipe anomositik
d = Trikoma
e = Kristal Ca oksalat bentuk prisma
f = Kelenjar labiat
Sumber: Sitorus, 2014
111
Lampiran 8. Perhitungan pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia daun pirdot
dan herba puguntano
% = Kadar air simplisia = x 100%
1. Perhitungan kadar air serbuk simplisia

A. Perhitungan kadar air serbuk simplisia daun pirdot
No. Berat sampel (g) Volume awal (mL) Volume akhir (mL)
1. 5,0025 2,35 2,70
2. 5,0012 2,35 2,60
3. 5,0050 2,18 2,50
a. Kadar air = x 100% = 6,99%
b. Kadar air = x 100% = 4,99 %
c. Kadar air = x 100% = 6,38%
% Rerata kadar air = = 6,12%
B. Perhitungan kadar air serbuk simplisia herba poguntano
No. Berat sampel (g) Volume awal (mL) Volume akhir (mL)
1. 5,0009 2,40 2,65
2. 5,0025 2,10 2,40
3. 5,0030 2,28 2,50
a. Kadar air = x 100% = 4,99%
b. Kadar air = x 100% = 5,99 %
c. Kadar air = x 100% = 4,29%
% Rerata kadar air = = 5,09%
112
2. Perhitungan kadar sari larut air serbuk simplisia
% = Kadar sari larut dalam air = x x 100%
A. Perhitungan kadar sari larut air serbuk simplisia daun pirdot

Kadar sari larut dalam air
No. Berat sampel (g) Berat sari (g)
(%)
1. 5,0422 0,1123 11,13
2. 5,0542 0,0889 8,79
3. 5.0160 0,1161 11,58
a. Kadar sari larut dalam air = 100% = 11,13 %
b. Kadar sari larut dalam air = 100% = 8,79%
c. Kadar sari larut dalam air = 100% = 11,58%
% Rerata kadar sari larut dalam air = = 10,50%
B. Perhitungan kadar sari larut air serbuk simplisia herba poguntano

(%)
1. 5,0118 0,1935 19,30
2. 5,0129 0,1814 18,09
3. 5.0120 0,1800 17,96
a. Kadar sari larut dalam air = 100% = 19,30%
b. Kadar sari larut dalam air = 100% = 18,09%
c. Kadar sari larut dalam air = 100% = 17,96%
% Rerata kadar sari larut dalam air = = 18,45%
113
3. Perhitungan kadar sari larut etanol serbuk simplisia
% = Kadar sari larut dalam etanol = x x 100%
A. Perhitungan kadar sari larut etanol serbuk simplisia daun pirdot

(%)
1. 5,0110 0,1483 14,80
2. 5,0545 0,1511 14,95
3. 5,0013 0,1456 14,56
a. Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 14,80%
b. Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 14,95%
c. Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 14,56%
% Rerata kadar sari larut dalam etanol = = 14,77%
B. Perhitungan kadar sari larut etanol serbuk simplisia herba poguntano

(%)
1. 5,0180 0,1362 13,56
2. 5,0184 0,1314 13,10
3. 5,0180 0,1296 12,92
a. Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 13,58%
b. Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 13,10%
c. Kadar sari larut dalam etanol = 100% = 12,92%
% Rerata kadar sari larut dalam etanol = = 13,20%
114
4. Perhitungan kadar abu total
% Kadar abu total = 100%
A. Perhitungan kadar abu total serbuk simplisia daun pirdot

No. Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu total (%)
1. 2,0052 0,1437 7,17
2. 2,1035 0,1475 7,01
3. 2,0087 0,1400 6,97
a. Kadar abu total = 100% = 7,17%
b. Kadar abu total = 100% = 7,01%
c. Kadar abu total = 100% = 6,97%
% Rerata kadar abu total = = 7,05%
B. Perhitungan kadar abu total serbuk simplisia herba poguntano

No. Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu total (%)
1. 2,0221 0,1791 8,86
2. 2,0025 0,1610 8,04
3. 2,0056 0,1682 8,39
a. Kadar abu total = 100% = 8,86%
b. Kadar abu total = 100% = 8,04%
c. Kadar abu total = 100% = 8,39%
% Rerata kadar abu total = = 8,43%
115
5. Perhitungan kadar abu tidak larut asam serbuk simplisia
% Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100%
A. Perhitungan kadar abu tidak larut asam serbuk simplisia daun pirdot
No. Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu tidak larut asam (%)
1. 2,0056 0,0090 0,40
2. 2,0371 0,0091 0,45
3. 2,0282 0,0119 0,59
a. Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% = 0,40%
b. Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% = 0,45%
c. Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% = 0,59%
% Rerata = = 0,48%
B. Perhitungan kadar abu tidak larut asam serbuk simplisia herba poguntano
No. Berat sampel (g) Berat abu (g) Kadar abu tidak larut asam (%)
1. 2,0221 0,0088 0,44
2. 2,0056 0,0128 0,64
3. 2,0025 0,0112 0,56
a. Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% = 0,44%
b. Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% = 0,64%
c. Kadar abu tidak larut dalam asam = x 100% = 0,56%
% Rerata = = 0,55%
116
Lampiran 9. Contoh perhitungan dosis
Tabel konversi dosis antara jenis hewan dengan manusia
Dosis pada hewan yang dicari

Dosis
yang Mencit Tikus Marmot Kelinci Kucing Kera Anjing Manusia
diket
20 g 200 g 400 g 1,5 kg 2,0 kg 4 kg 12 kg 70 kg
Mencit 1,0 7,0 12,25 27,8 29,7 64,1 124,2 387,9
Tikus 0,14 1,0 1,74 3,3 4,2 9,21 17,8 56,0
Marmot 0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5
Kelinci 0,04 0,25 0,44 1,0 1,06 2,4 4,5 14,2
Kucing 0,03 0,23 0,41 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0
Kera 0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1
Manusia 0,0026 0,018 0,031 0,07 0,076 0,16 0,32 1,0
(Syamsudin dan Darmono, 2011)
1. Contoh perhitungan volume larutan nicotinamida
- Dosis pemberian secara intraperitonial: 230 mg/kg BB
- Konsentrasi larutan nicotinamida yang dibuat = 230 mg/10 mL = 23 mg/mL
- Jumlah nicotinamida yang diberikan untuk tikus (misal BB tikus= 200 g)
adalah= x 200 = 46 mg
- Volume larutan nicotinamida yang diberikan untuk tikus adalah
= x 1 mL = 2 mL
2. Contoh perhitungan volume larutan streptozotosin
- Dosis pemberian secara intraperitonial: 65 mg/kg BB
- Konsentrasi larutan STZ yang dibuat = 65 mg/10 mL = 6,5 mg/mL
- Jumlah STZ yang diberikan untuk tikus (misal BB tikus= 200 g) adalah
x 200 g = 13 mg
117
- Volume larutan STZ yang diberikan untuk tikus adalah
= x 1 mL = 2 mL
3. Contoh perhitungan volume suspensi glibenklamid
- Dosis Manusia = 5 mg
- Nilai konversi dosis manusia ke dosis tikus = 0,018
- Dosis untuk tikus dikonversikan = 0,018 x 5 mg = 0,09 mg
- Maka, dosis untuk 200 gram tikus = 0,09 x = 0,45 mg
- Menurut FI edisi III keseragaman bobot = 20 tablet, maka diambil 20 tablet
glibenklamid, ditimbang berat totalnya = 4.010 mg kemudian digerus.
- Berat bahan aktif glibenklamid dalam 20 tablet glibenklamid adalah 5
mg/tab x 20 tab = 100 mg
- Serbuk tablet glibenklamid yang digunakan :
= x 4010 mg
= 18,045 mg ≈ 18 mg
- Cara pembuatan suspensi glibenklamid :
Ditimbang 18 mg serbuk tablet glibenklamid dimasukkan ke dalam lumpang dan
ditambahkan larutan Na CMC 0,5% b/v sedikit demi sedikit sambil digerus sampai
homogen, volume dicukupkan hingga 10 mL.
- Suspensi glibenklamid yang diberikan untuk tikus 200 g adalah:
= x 10 mL = 2 mL
118
4. Contoh perhitungan dosis kombinasi EEDP dan EEHP
- Dosis suspensi ekstrak kombinasi EEDP dan EEHP yang akan dibuat adalah
50:50 mg/kg bb:
- Ditimbang masing-masing esktrak sebanyak 100 mg, kemudian masing-
masing ekstrak dilarutkan dalam 10 mL larutan Na-CMC 0,5%
- Dosis dan volume suspensi yang diberikan untuk tikus 200 g adalah
EEDP = x 200 gr = 20 mg
EEHP =
Volume pemberian = x 10 mL = 2 mL (diberikan 1 ml EEDP dan 1
ml EEHP).
119
Lampiran 10. Hasil analisis data statistik pengukuran KGD
1. Uji Deskriptif
95% Confidence
Std. Interval for Mean
N Mean Std. Error Minimum Maximum
Deviation Lower Upper
Bound Bound
Na-CMC 0,5% 4 333.00 3.559 1.780 327.34 338.66 328 336
EEDP 100 mg/kg bb 4 341.50 9.147 4.573 326.95 356.05 330 352
EEHP 100 mg/kg bb 4 347.50 2.646 1.323 343.29 351.71 344 350
EEDP&EEHP (25:75) 4 340.50 3.416 1.708 335.06 345.94 337 345
KGD awal EEDP&EEHP (50:50) 4 335.00 5.598 2.799 326.09 343.91 330 342
EEDP&EEHP (75:25) 4 333.50 5.508 2.754 324.74 342.26 328 340
Glibenklamid 4 336.75 5.377 2.689 328.19 345.31 330 343
Normal 4 83.25 2.630 1.315 79.07 87.43 81 86
Total 32 306.38 85.926 15.190 275.40 337.35 81 352
Na-CMC 0,5% 4 337.00 3.162 1.581 331.97 342.03 333 340
EEDP 100 mg/kg bb 4 310.75 7.455 3.728 298.89 322.61 302 320
EEHP 100 mg/kg bb 4 324.25 3.500 1.750 318.68 329.82 320 328
EEDP&EEHP (25:75) 4 308.25 6.946 3.473 297.20 319.30 301 316
Hari ke-4 EEDP&EEHP (50:50) 4 296.00 4.690 2.345 288.54 303.46 292 301
EEDP&EEHP (75:25) 4 293.00 7.071 3.536 281.75 304.25 286 302
Glibenklamid 4 295.75 5.909 2.955 286.35 305.15 288 302
Normal 4 85.00 1.826 .913 82.09 87.91 83 87
Total 32 281.25 76.886 13.592 253.53 308.97 83 340
Na-CMC 0,5% 4 340.75 2.754 1.377 336.37 345.13 338 344
EEDP 100 mg/kg bb 4 282.75 6.850 3.425 271.85 293.65 275 291
EEHP 100 mg/kg bb 4 294.25 2.986 1.493 289.50 299.00 291 298
EEDP&EEHP (25:75) 4 285.00 3.742 1.871 279.05 290.95 281 290
Hari ke-8 EEDP&EEHP (50:50) 4 258.75 8.770 4.385 244.79 272.71 250 270
EEDP&EEHP (75:25) 4 252.00 6.831 3.416 241.13 262.87 245 261
Glibenklamid 4 256.25 6.602 3.301 245.75 266.75 249 265
Normal 4 85.75 4.992 2.496 77.81 93.69 79 91
Total 32 256.94 71.307 12.605 231.23 282.65 79 344
Na-CMC 0,5% 4 345.25 1.893 .946 342.24 348.26 344 348
EEDP 100 mg/kg bb 4 250.25 6.076 3.038 240.58 259.92 243 257
EEHP 100 mg/kg bb 4 259.25 3.304 1.652 253.99 264.51 255 263
EEDP&EEHP (25:75) 4 251.50 3.109 1.555 246.55 256.45 249 256
Hari ke-12 EEDP&EEHP (50:50) 4 223.25 8.539 4.270 209.66 236.84 215 234
EEDP&EEHP (75:25) 4 214.50 7.326 3.663 202.84 226.16 207 224
Glibenklamid 4 218.50 5.745 2.872 209.36 227.64 212 226
Normal 4 85.75 4.573 2.287 78.47 93.03 81 91
Total 32 231.03 68.542 12.117 206.32 255.74 81 348
Na-CMC 0,5% 4 350.00 1.414 .707 347.75 352.25 349 352
EEDP 100 mg/kg bb 4 217.25 7.676 3.838 205.04 229.46 209 226
EEHP 100 mg/kg bb 4 228.50 2.082 1.041 225.19 231.81 226 231
EEDP&EEHP (25:75) 4 216.00 4.320 2.160 209.13 222.87 212 222
Hari ke-16 EEDP&EEHP (50:50) 4 186.25 8.995 4.498 171.94 200.56 177 197
EEDP&EEHP (75:25) 4 175.00 7.257 3.629 163.45 186.55 168 185
Glibenklamid 4 178.50 5.196 2.598 170.23 186.77 173 185
Normal 4 88.00 2.828 1.414 83.50 92.50 84 90
Total 32 204.94 69.728 12.326 179.80 230.08 84 352
120
Lampiran 10. (Lanjutan)
95% Confidence
Bound Bound
Na-CMC 0,5% 4 345.75 2.217 1.109 342.22 349.28 344 349
EEDP 100 mg/kg bb 4 181.50 6.758 3.379 170.75 192.25 174 189
EEHP 100 mg/kg bb 4 191.50 2.887 1.443 186.91 196.09 188 195
EEDP&EEHP (25:75) 4 182.50 3.873 1.936 176.34 188.66 179 188
Hari ke-20 EEDP&EEHP (50:50) 4 153.00 10.100 5.050 136.93 169.07 142 165
EEDP&EEHP (75:25) 4 137.75 7.632 3.816 125.61 149.89 131 148
Glibenklamid 4 141.25 5.439 2.720 132.60 149.90 137 149
Normal 4 84.50 2.887 1.443 79.91 89.09 81 88
Total 32 178.34 75.344 13.319 151.18 205.51 81 357
Na-CMC 0,5% 4 349.00 4.163 2.082 342.38 355.62 344 354
EEDP 100 mg/kg bb 4 145.75 5.852 2.926 136.44 155.06 139 152
EEHP 100 mg/kg bb 4 154.00 3.367 1.683 148.64 159.36 150 158
EEDP&EEHP (25:75) 4 146.50 4.435 2.217 139.44 153.56 143 153
Hari ke-24 EEDP&EEHP (50:50) 4 123.50 9.747 4.873 107.99 139.01 114 135
EEDP&EEHP (75:25) 4 105.75 6.238 3.119 95.82 115.68 99 112
Glibenklamid 4 111.75 3.202 1.601 106.66 116.84 109 115
Normal 4 84.50 5.447 2.723 75.83 93.17 77 90
Total 32 153.84 82.073 14.509 124.25 183.43 77 360
Na-CMC 0,5% 4 346.25 5.188 2.594 337.99 354.51 340 351
EEDP 100 mg/kg bb 4 104.25 5.123 2.562 96.10 112.40 99 110
EEHP 100 mg/kg bb 4 112.75 3.775 1.887 106.74 118.76 108 117
EEDP&EEHP (25:75) 4 103.00 4.082 2.041 96.50 109.50 100 109
Hari ke-28 EEDP&EEHP (50:50) 4 93.50 8.813 4.406 79.48 107.52 83 103
EEDP&EEHP (75:25) 4 75.25 5.679 2.839 66.21 84.29 69 81
Glibenklamid 4 80.50 2.646 1.323 76.29 84.71 78 84
Normal 4 85.00 3.367 1.683 79.64 90.36 83 90
Total 32 127.31 91.898 16.245 94.18 160.45 69 366
Na-CMC 0,5% 4 78.75 1.500 .750 76.36 81.14 77 80
EEDP 100 mg/kg bb 4 77.75 3.304 1.652 72.49 83.01 74 81
EEHP 100 mg/kg bb 4 80.75 2.754 1.377 76.37 85.13 78 84
EEDP&EEHP (25:75) 4 78.75 2.217 1.109 75.22 82.28 76 81
Normal EEDP&EEHP (50:50) 4 78.75 2.217 1.109 75.22 82.28 76 81
EEDP&EEHP (75:25) 4 79.00 2.160 1.080 75.56 82.44 76 81
Glibenklamid 4 78.00 3.162 1.581 72.97 83.03 74 81
Normal 4 85.00 3.651 1.826 79.19 90.81 81 89
Total 32 79.59 3.271 .578 78.41 80.77 74 89
121
2. Uji Homogenitas
Test of Homogeneity of Variances

Levene Statistic df1 df2 Sig.
KGD Awal 1.409 7 24 0.248
Hari ke-4 1.605 7 24 0.182
Hari ke-8 1.142 7 24 .371
Hari ke-12 1.863 7 24 .121
Hari ke-16 1.605 7 24 .182
Hari ke 20 2.875 7 24 .025
Hari ke 24 2.605 7 24 .038
Hari ke-28 2.524 7 24 .043
Normal 1.535 7 24 .203
3. Uji ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 228244.000 7 32606.286 1227.531 .000
KGD awal Within Groups 637.500 24 26.563
Total 228881.500 31
Between Groups 182545.000 7 26077.857 882.748 .000
Hari ke-4 Within Groups 709.000 24 29.542
Total 183254.000 31
Between Groups 156815.375 7 22402.196 665.000 .000
Total 157623.875 31
Between Groups 144912.219 7 20701.746 685.536 .000
Total 145636.969 31
Between Groups 182545.000 7 26077.857 882.748 .000
Total 183254.000 31
Between Groups 162751.219 7 23250.174 683.619 .000
Total 163567.469 31
Between Groups 192028.469 7 27432.638 855.877 .000
Total 192797.719 31
Between Groups 228254.875 7 32607.839 1228.553 .000
Total 228891.875 31
Between Groups 155.969 7 22.281 3.043 .019
Normal Within Groups 175.750 24 7.323
Total 331.719 31
122
4. Uji Tukey
KGD awal
a
Tukey HSD
Subset for alpha = 0.05
PERLAKUAN N 1 2 3
Normal 4 83.25
Na-CMC 0,5% 4 333.00
EEDP&EEHP (75:25) 4 333.50
EEDP&EEHP (50:50) 4 335.00
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 4 336.75 336.75
EEDP&EEHP (25:75) 4 340.50 340.50
EEDP 100 mg/kg bb 4 341.50 341.50
EEHP 100 mg/kg bb 4 347.50
Sig. 1.000 .317 .106
Hari ke-4
a
Tukey HSD
PERLAKUAN N 1 2 3 4 5 6
Normal 4 85.00
EEDP&EEHP (75:25) 4 293.00
EEDP&EEHP (50:50) 4 296.00 296.00
EEDP&EEHP (25:75) 4 308.25 308.25
EEDP 100 mg/kg bb 4 310.75
EEHP 100 mg/kg bb 4 324.25
Na-CMC 0,5% 4 337.00
Sig. 1.000 .993 .057 .998 1.000 1.000
Hari ke-8
a
Tukey HSD
PERLAKUAN N 1 2 3 4
Normal 4 85.75
EEDP&EEHP (75:25) 4 252.00
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 4 256.25
EEDP&EEHP (50:50) 4 258.75
EEDP 100 mg/kg bb 4 282.75
EEDP&EEHP (25:75) 4 285.00
EEHP 100 mg/kg bb 4 294.25
Na-CMC 0,5% 4 340.75
Sig. 1.000 .720 .141 1.000
123
Hari ke-12
a
Tukey HSD
PERLAKUAN N 1 2 3 4
Normal 4 85.75
EEDP&EEHP (75:25) 4 214.50
EEDP&EEHP (50:50) 4 223.25
EEDP 100 mg/kg bb 4 250.25
EEDP&EEHP (25:75) 4 251.50
EEHP 100 mg/kg bb 4 259.25
Na-CMC 0,5% 4 345.25
Sig. 1.000 .358 .325 1.000
Hari ke-16
a
Tukey HSD
PERLAKUAN N 1 2 3 4 5 6
Normal 4 85.00
EEDP&EEHP (75:25) 4 293.00
EEDP&EEHP (50:50) 4 296.00 296.00
EEDP&EEHP (25:75) 4 308.25 308.25
EEDP 100 mg/kg bb 4 310.75
EEHP 100 mg/kg bb 4 324.25
Na-CMC 0,5% 4 337.00
Sig. 1.000 .993 .057 .998 1.000 1.000
Hari ke-20
a
Tukey HSD
PERLAKUAN N
1 2 3 4 5
Normal 4 84.50
EEDP&EEHP (75:25) 4 137.75
EEDP&EEHP (50:50) 4 153.00
EEDP 100 mg/kg bb 4 181.50
EEDP&EEHP (25:75) 4 182.50
EEHP 100 mg/kg bb 4 191.50
Na-CMC 0,5% 4 345.75
Sig. 1.000 .988 .129 .274 1.000
124
Hari ke-24
a
Tukey HSD
PERLAKUAN N
1 2 3 4 5
Normal 4 84.50
EEDP&EEHP (75:25) 4 105.75
EEDP&EEHP (50:50) 4 123.50
EEDP 100 mg/kg bb 4 145.75
EEDP&EEHP (25:75) 4 146.50
EEHP 100 mg/kg bb 4 154.00
Na-CMC 0,5% 4 349.00
Sig. 1.000 .801 .109 .466 1.000
Hari ke-28
Tukey HSD a
PERLAKUAN N
1 2 3 4 5
EEDP&EEHP (75:25) 4 75.25
Normal 4 85.00 85.00
EEDP&EEHP (50:50) 4 93.50 93.50
EEDP&EEHP (25:75) 4 103.00 103.00
EEDP 100 mg/kg bb 4 104.25 104.25
EEHP 100 mg/kg bb 4 112.75
Na-CMC 0,5% 4 346.25
Sig. .178 .317 .106 .178 1.000
KGD normal
a
Tukey HSD
PERLAKUAN
N 1 2
EEDP 100 mg/kg bb 4 77.75
Na-CMC 0,5% 4 78.75 78.75
EEDP&EEHP (25:75) 4 78.75 78.75
EEDP&EEHP (50:50) 4 78.75 78.75
EEDP&EEHP (75:25) 4 79.00 79.00
EEHP 100 mg/kg bb 4 80.75 80.75
Normal 4 85.00
Sig. .764 .055
125
Lampiran 11. Gambar alat microplate reader dan reagen SOD
Gambar microplate reader
Gambar reagen SOD
126
Lampiran 12. Data hasil pengukuran konsentrasi SOD sampel
∆OD
Perlakuan OD1 OD2 Rerata OD Koreksi Kadar (pg/ml)
(Rerata OD-Koreksi)
Na-CMC 0.539 0.297 0.418 0.108 0.31 42.10
Na-CMC 0.455 0.357 0.406 0.108 0.298 41.32
Na-CMC 0.539 0.257 0.398 0.108 0.29 40.80
Na-CMC 0.434 0.368 0.401 0.108 0.293 41.00
EEDP 100 mg/kg bb 0.692 0.624 0.658 0.108 0.55 61.22
EEDP 100 mg/kg bb 0.675 0.593 0.634 0.108 0.526 58.97
EEDP 100 mg/kg bb 0.671 0.619 0.645 0.108 0.537 59.99
EEDP 100 mg/kg bb 0.665 0.675 0.67 0.108 0.562 62.38
EEHP 100 mg/kg bb 0.672 0.66 0.666 0.108 0.558 61.99
EEHP 100 mg/kg bb 0.598 0.576 0.587 0.108 0.479 54.80
EEHP 100 mg/kg bb 0.562 0.626 0.594 0.108 0.486 55.40
EEHP 100 mg/kg bb 0.611 0.661 0.636 0.108 0.528 59.16
EEDP & EEHP (25:75) mg/kg bb 0.627 0.685 0.656 0.108 0.548 61.03
EEDP & EEHP (25:75) mg/kg bb 0.691 0.657 0.674 0.108 0.566 62.77
EEDP & EEHP (25:75) mg/kg bb 0.67 0.654 0.662 0.108 0.554 61.61
EEDP & EEHP (25:75) mg/kg bb 0.612 0.66 0.636 0.108 0.528 59.16
EEDP & EEHP (50:50) mg/kg bb 0.692 0.716 0.704 0.108 0.596 65.78
EEDP & EEHP (50:50) mg/kg bb 0.701 0.673 0.687 0.108 0.579 64.06
EEDP & EEHP (50:50) mg/kg bb 0.727 0.683 0.705 0.108 0.597 65.88
EEDP & EEHP (50:50) mg/kg bb 0.702 0.688 0.695 0.108 0.587 64.86
EEDP & EEHP (75:25) mg/kg bb 0.688 0.7 0.694 0.108 0.586 64.76
EEDP & EEHP (75:25) mg/kg bb 0.796 0.824 0.81 0.108 0.702 77.61
EEDP & EEHP (75:25) mg/kg bb 0.705 0.703 0.704 0.108 0.596 65.78
EEDP & EEHP (75:25) mg/kg bb 0.787 0.563 0.675 0.108 0.567 62.87
Glibenklamid 0.701 0.727 0.714 0.108 0.606 66.82
Glibenklamid 0.736 0.708 0.722 0.108 0.614 67.65
Glibenklamid 0.703 0.681 0.692 0.108 0.584 64.56
Glibenklamid 0.728 0.742 0.735 0.108 0.627 69.04
Normal 0.708 0.786 0.747 0.108 0.639 70.35
Normal 0.745 0.713 0.729 0.108 0.621 68.40
Normal 0.756 0.72 0.738 0.108 0.63 69.37
Normal 0.734 0.65 0.692 0.108 0.584 64.56
Contoh perhitungan kadar SOD :

• Kelompok Na-CMC
ΔOD = Rerata OD– Koreksi

= 0,418 - 0,108
= 0,310
kadar SOD : y = 0,6408 ln(x) – 2,0866
0,6408 ln (x) = 0,310 + 2,0866
ln (x) = 3,7400
x = 42,10 pg/ml
127
Lampiran 13. Hasil analisis data statistik pengukuran konsentrasi SOD
1. Uji Deskriptif
95% Confidence
Bound Bound
Na-CMC 0,5% 4 41.30500 .571635 .285818 40.39540 42.21460 40.800 42.100
EEDP 100 mg/kg bb 4 60.64000 1.480473 .740236 58.28424 62.99576 58.970 62.380
EEHP 100 mg/kg bb 4 57.83750 3.374417 1.687209 52.46805 63.20695 54.800 61.990
EEDP&EEHP (25:75) 4 61.14250 1.506682 .753341 58.74503 63.53997 59.160 62.770
EEDP&EEHP (50:50) 4 65.14500 .856719 .428359 63.78177 66.50823 64.060 65.880
EEDP&EEHP (75:25) 4 67.75500 6.679693 3.339847 57.12612 78.38388 62.870 77.610
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 4 67.01750 1.876955 .938477 64.03085 70.00415 64.560 69.040
Normal 4 68.17000 2.534916 1.267458 64.13638 72.20362 64.560 70.350
Total 32 61.12656 8.813141 1.557958 57.94909 64.30404 40.800 77.610
2. Homogenitas

3.753 7 24 .007
3. Uji ANOVA
Sum of Mean
df F Sig.
Squares Square
Between Groups 2193.386 7 313.341 35.071 .000
Within Groups 214.429 24 8.935
Total 2407.815 31
4. Tukey

PERLAKUAN N
1 2 3 4 5
Na-CMC 0,5% 4 41.30500
EEHP 100 mg/kg bb 4 57.83750
EEDP 100 mg/kg bb 4 60.64000 60.64000
EEDP&EEHP (25:75) 4 61.14250 61.14250 61.14250
EEDP&EEHP (50:50) 4 65.14500 65.14500 65.14500
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 4 67.01750 67.01750 67.01750
EEDP&EEHP (75:25) 4 67.75500 67.75500
Normal 4 68.17000
Sig. 1.000 .766 .093 .074 .834
128
Lampiran 14. Gambar kit HbA1c dan reagen HbA1c
Gambar kit HbA1c
Gambar reagen HbA1c
129
Lampiran 15. Data hasil pengukuran HbA1c sampel
Perlakuan OD1 OD2 Rerata OD Koreksi ∆OD Kadar (ng/mL)
Na-CMC 1.329 1.423 1.376 0.096 1.280 65.889
Na-CMC 1.527 1.445 1.486 0.096 1.390 72.086
Na-CMC 1.328 1.402 1.421 0.096 1.325 68.424
Na-CMC 1.498 1.412 1.408 0.096 1.312 67.692
EEDP 100 mg/kg bb 0.812 0.721 0.767 0.096 0.671 31.562
EEDP 100 mg/kg bb 0.786 0.782 0.784 0.096 0.688 32.537
EEDP 100 mg/kg bb 0.771 0.579 0.811 0.096 0.715 34.030
EEDP 100 mg/kg bb 0.685 0.865 0.775 0.096 0.679 32.023
EEHP 100 mg/kg bb 0.908 0.932 0.920 0.096 0.824 40.199
EEHP 100 mg/kg bb 0.965 0.835 0.900 0.096 0.804 39.072
EEHP 100 mg/kg bb 0.861 0.851 0.856 0.096 0.760 36.593
EEHP 100 mg/kg bb 0.898 0.922 0.910 0.096 0.814 39.635
EEDP & EEHP (25:75) mg/kg bb 0.752 0.780 0.766 0.096 0.670 31.523
EEDP & EEHP (25:75) mg/kg bb 0.736 0.786 0.761 0.096 0.665 31.241
EEDP & EEHP (25:75) mg/kg bb 0.796 0.758 0.777 0.096 0.681 32.143
EEDP & EEHP (25:75) mg/kg bb 0.801 0.715 0.758 0.096 0.662 31.072
EEDP & EEHP (50:50) mg/kg bb 0.586 0.746 0.666 0.096 0.570 25.889
EEDP & EEHP (50:50) mg/kg bb 0.648 0.654 0.651 0.096 0.555 25.044
EEDP & EEHP (50:50) mg/kg bb 0.695 0.747 0.721 0.096 0.625 28.988
EEDP & EEHP (50:50) mg/kg bb 0.649 0.601 0.625 0.096 0.529 23.579
EEDP & EEHP (75:25) mg/kg bb 0.594 0.830 0.712 0.096 0.616 28.481
EEDP & EEHP (75:25) mg/kg bb 0.682 0.668 0.675 0.096 0.579 26.396
EEDP & EEHP (75:25) mg/kg bb 0.667 0.703 0.685 0.096 0.589 26.959
EEDP & EEHP (75:25) mg/kg bb 0.651 0.657 0.654 0.096 0.558 25.213
Glibenklamid 0.665 0.679 0.672 0.096 0.576 26.227
Glibenklamid 0.696 0.626 0.661 0.096 0.565 25.607
Glibenklamid 0.691 0.735 0.713 0.096 0.617 28.537
Glibenklamid 0.622 0.642 0.632 0.096 0.536 23.974
Normal 0.621 0.635 0.628 0.096 0.532 23.748
Normal 0.554 0.794 0.674 0.096 0.578 26.340
Normal 0.675 0.571 0.623 0.096 0.527 23.466
Normal 0.672 0.784 0.728 0.096 0.632 29.382
Contoh perhitungan kadar HbA1c :

• Kelompok Na-CMC
ΔOD = Rerata OD– Koreksi

= 1,693 - 0,096
= 1,280
kadar HbA1c : y = 0,01775(x) + 0,11047
1,280 = 0,01775(x) + 0,11047
x =
x = 65,889 ng/ml
130
Lampiran 16. Hasil analisis data statistik pengukuran HbA1c
1. Uji Deskriptif
95% Confidence
Bound Bound
Na-CMC 0,5% 4 68.52275 2.603414 1.301707 64.38014 72.66536 65.889 72.086
EEDP 100 mg/kg bb 4 32.53800 1.071427 .535713 30.83312 34.24288 31.562 34.030
EEHP 100 mg/kg bb 4 38.87475 1.589225 .794613 36.34594 41.40356 36.593 40.199
EEDP&EEHP (25:75) 4 31.49475 .470508 .235254 30.74607 32.24343 31.072 32.143
EEDP&EEHP (50:50) 4 25.87500 2.284232 1.142116 22.24028 29.50972 23.579 28.988
EEDP&EEHP (75:25) 4 26.76225 1.357341 .678671 24.60242 28.92208 25.213 28.481
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb 4 26.08625 1.890085 .945043 23.07870 29.09380 23.974 28.537
Normal 4 25.73400 2.754582 1.377291 21.35085 30.11715 23.466 29.382
Total 32 34.48597 13.880283 2.453711 29.48159 39.49034 23.466 72.086
2. Homogenitas

1.150 7 24 .366
3. Uji ANOVA
Sum of Mean
df F Sig.
Squares Square
Between Groups 5885.851 7 840.836 232.814 .000
Within Groups 86.679 24 3.612
Total 5972.530 31
4. Tukey

PERLAKUAN N
1 2 3 4
Normal 4 25.73400
EEDP&EEHP (50:50) 4 25.87500
EEDP&EEHP (75:25) 4 26.76225
EEDP&EEHP (25:75) 4 31.49475
EEDP 100 mg/kg bb 4 32.53800
EEHP 100 mg/kg bb 4 38.87475
Na-CMC 0,5% 4 68.52275
Sig. .993 .993 1.000 1.000
Lampiran 17. Hasil analisis data statistik ekspresi insulin
131
1. Uji Deskriptif
95% Confidence
Interval for Mean
Std. Lower Upper
N Mean Deviation Std. Error Bound Bound Minimum Maximum
Na-CMC 0,5% 20 15.10000 4.115439 .920240 13.17392 17.02608 10.000 24.000
EEDP 100 mg/kg bb 20 62.00000 9.862209 2.205257 57.38434 66.61566 41.000 78.000
EEHP 100 mg/kg bb 20 56.00000 8.162817 1.825261 52.17968 59.82032 39.000 68.000
EEDP&EEHP (25:75) 20 67.00000 9.591663 2.144761 62.51096 71.48904 48.000 85.000
EEDP&EEHP (50:50) 20 141.00000 15.092696 3.374829 133.93640 148.06360 113.000 168.000
EEDP&EEHP (75:25) 20 160.00000 12.000000 2.683282 154.38383 165.61617 137.000 181.000
Glibenklamid 0,45 mg/kg bb
20 133.00000 13.498538 3.018365 126.68249 139.31751 110.000 158.000
Normal 20 170.00000 11.271763 2.520443 164.72465 175.27535 153.000 188.000

Total 160 100.51250 54.773517 4.330227 91.96032 109.06468 10.000 188.000
2. Homogenitas
4.171 7 152 .000
3. Uji ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 458898.175 7 65556.882 549.810 .000
Within Groups 18123.800 152 119.236
Total 477021.975 159
4. Uji Tukey
PERLAKUAN N 1 2 3 4 5
Na-CMC 0,5% 20 15.10000
EEHP 100 mg/kg bb 20 56.00000
EEDP 100 mg/kg bb 20 62.00000 62.00000
EEDP&EEHP (25:75) 20 67.00000
EEDP&EEHP (50:50) 20 141.00000
EEDP&EEHP (75:25) 20 160.00000
Normal 20 170.00000
Sig. 1.000 .663 .833 .291 .081
132

Metode Pemeriksaan HbA1c

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Metode Pemeriksaan HbA1c

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

TESIS

PENGARUH KOMBINASI EKSTRAK DAUN PIRDOT

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh

PROGRAM STUDI MAGISTER FARMASI

PENGARUH KOMBINASI EKSTRAK DAUN PIRDOT

Medan, 22 Januari 2019

Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt.

Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.

Mengetahui: Disahkan oleh:

Nama Mahasiswa : Chemayanti Surbakti

Nomor Induk Mahasiswa : 167014007

Program Studi : Magister Farmasi

Judul Tesis : Pengaruh Kombinasi Ekstrak Daun Pirdot

Komisi Penguji Tesis

Ketua Komisi Penguji : Dr. Panal Sitorus, M.Si., Apt.

Sekretaris Komisi Penguji : Prof. Dr. Rosidah, M.Si., Apt.

Anggota Komisi Penguji : Dr. Poppy Anjelisa Z. Hasibuan, M.Si., Apt.

Dr. Marline Nainggolan, M.S., Apt

Saya yang bertanda tangan dibawah ini:

Nama Mahasiswa : Chemayanti Surbakti

Nomor Induk Mahasiswa : 167014007

Program Studi : Magister Farmasi

Judul Tesis : Pengaruh Kombinasi Ekstrak Daun Pirdot

menuntut pihak manapun atas perbuatan saya tersebut.

Medan, 22 Januari 2019

“PENGARUH KOMBINASI EKSTRAK DAUN PIRDOT (Saurauia vulcani

Korth.) DAN HERBA POGUNTANO (Picria fel-terrae Lour.) TERHADAP

KADAR SOD, HbA1c, EKSPRESI INSULIN PADA TIKUS

HIPERGLIKEMIA”. Tesis ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk

memperoleh gelar Magister Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sumatera

Sumatera Utara, yang telah memberikan kesempatan dan fasilitas kepada

penulis untuk mengikuti dan menyelesaikan Program Studi Magister.

Sumatera Utara, yang telah menyediakan fasilitas kepada penulis untuk

mengikuti dan menyelesaikan Program Studi Magister di Fakultas Farmasi.

Studi Magister Farmasi yang telah banyak memberikan motivasi dan

bimbingan sehingga penulis dapat menyelesaikan pendidikan ini.

menyelesaikan tesis ini.

bimbingannya selama penulis menjalani pendidikan.

semangat kepada penulis dalam menjalani pendidikan, penelitian dan

penyelesaian tesis ini.

8. Rekan-rekan Program Studi Magister Farmasi atas kerjasama, bantuan, doa

dan kekompakannya selama pendidikan dan seluruh teman-teman yang tidak

dapat penulis sebutkan satu persatu.

adanya kritik dan saran membangun demi kesempurnaan tesis ini.

Medan, 22 Januari 2019

Diabetes melitus (DM) adalah penyakit kronis yang disebabkan oleh

Diabetes mellitus (DM) is a chronic disease caused by the body inability

LEMBAR PERSETUJUAN TESIS ........................................................... iii

LEMBAR PENGESAHAN TESIS ............................................................ iv

SURAT PERNYATAAN ........................................................................... v

KATA PENGANTAR ............................................................................... vi

ABSTRAK ................................................................................................. viii

DAFTAR ISI .............................................................................................. x

DAFTAR TABEL ...................................................................................... xvi

DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xviii

DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................. xx

DAFTAR SINGKATAN ........................................................................... xxi

BAB I PENDAHULUAN ....................................................................... 1

1.1 Latar Belakang .................................................................... 1

1.2 Perumusan Masalah ............................................................ 6

1.3 Hipotesis ............................................................................. 6

1.4 Tujuan Penelitian ................................................................. 7